BACTERIAS - Tamara Del Riego

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2-¿Para qué se utiliza la Tinción de Gram?¿Qué inferencia tienen los colorantes en la identificación de bacterias?
Es uno de los procedimientos de tinción más útiles porque permite clasificar las bacterias en dos grandes grupos: grampositivas y gramnegativas.
Un extendido fijado con calor se cubre con un colorante violeta básico, por lo general violeta de genciana. Como el colorante violeta imparte su color a todas las células, se lo denomina colorante primario.
Después de un breve lapso, se escurre el colorante violeta, se lava el extendido y se lo cubre con yodo, un mordiente. Cuando se lava el yodo, tanto las bacterias grampositivas como las gramnegativas aparecen de color violeta oscuro o púrpura.
A continuación se lava el portaobjetos con alcohol o con una solución de alcohol-acetona. Esta solución es un agente decolorante que elimina el color violeta de las células de algunas especies pero no de otras.
Se elimina el alcohol con agua y se tiñe el portaobjetos con safranina, un colorante básico. Luego se vuelve a lavar el extendido, se lo seca con papel absorbente y se lo examina con el microscopio.
El colorante violeta y el yodo se combinan en el citoplasma de cada bacteria y lo colorean de violeta oscuro o púrpura. Las bacterias que conservan este color después de haberles agregado el alcohol para decolorarlas se clasifican como grampositivas; las bacterias que pierden el color violeta oscuro después de la decoloración se clasifican como gramnegativas. Como las bacterias gramnegativas son incoloras después del lavado con alcohol, dejan de ser visibles. Por ese motivo se les aplica el colorante básico safranina, que las convierte en rosadas. Los colorantes como la safranina que tienen un color que contrasta con el colorante primario se denominan colorantes de contraste. Dado que las bacterias grampositivas conservan el colorante violeta original, no son afectadas por el colorante de contraste safranina
Como casi todos los microorganismos son casi incoloros cuando se los observa a través de un microscopio óptico estándar, a menudo es preciso prepararlos para la observación y una de las maneras de hacerlo consiste en someterlos a tinción (coloración). El término tinción significa simplemente colorear los microorganismos con un colorante que destaque ciertas estructuras. Antes de teñir los microorganismos se los debe fijar (adherir) al portaobjetos.
Cuando se debe fijar una muestra se extiende una película delgada del material que contiene los microorganismos sobre la superficie del portaobjetos. Esta película, denominada extendido, se deja secar al aire. A continuación en la mayor parte de los procedimientos de tinción el portaobjetos se fija pasándolo varias veces a través de la llama de un mechero Bunsen con el lado del extendido hacia arriba o cubriéndolo con alcohol metílico durante 1 minuto. Se aplica el colorante, se lo lava con agua y se lo seca con papel absorbente. Si no se realizara la fijación el colorante podría arrastrar los microorganismos del portaobjetos. Una vez efectuado el procedimiento descrito los microorganismos están listos para la observación microscópica. 
Los colorantes son sales compuestas por un ión positivo y un ión negativo, uno de los cuales está coloreado y se conoce como cromóforo. El color de los denominados colorantes básicos está en el ión positivo; en los colorantes ácidos, está en el ión negativo. En un pH de 7 las bacterias presentan una carga levemente negativa. Por lo tanto, el ión positivo coloreado