PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA

Vista previa del material en texto

DANNA JULIETH PATERNINA MAUSSA 
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA 
 
SUSCEPTIBILIDAD A LA OPTOQUINA (HIDROXICUPRINA) 
La prueba de la Optoquina se utiliza para la diferenciación de Streptococcus pneumoniae (sensible) de otros 
estreptococos α- hemolíticos 
La sensibilidad de la optoquina es una medida de la fragilidad de la membrana celular bacteriana. La optoquina 
(clorhidrato de etilhidrocupremia) se utiliza en una solución acuosa de 1/4000 para impregnar los discos quedando 
al final en ellos 5µg de optoquina. 
FUNDAMENTO 
Streptococcus pneumoniae y Stretococcus viridans Son cocos Gram positivos que en agar sangre presentan colonias 
α-hemolíticas. La optoquina inhibe el crecimiento de Streptococcus pneumoniae, mientras que otros estreptococos 
o no son inhibidos o bien presentan una zona pequeña de inhibición alrededor del disco. 
SENSIBLE < 14 mm 
RESISTENTE ≥ 14 mm 
 
 
 
 
Resistente a la optoquina (NEGATIVO) 
 
 
 
 
Sensible a la optoquina (POSITIVO) 
 
DANNA JULIETH PATERNINA MAUSSA 
CRECIMIENTO EN BILIS ESCULINA 
El agar bilis esculina es un medio de cultivo sólido selectivo y diferencial. Es utilizado como prueba diagnóstica para 
determinar la capacidad que posee un determinado microorganismo de crecer en un medio que contiene bilis y 
además descomponer el glucósido esculina en esculetina y glucosa. Esta prueba diagnóstica se usa para diferenciar 
especies del género Streptococcus pertenecientes al grupo D (bilis esculina positiva), de otros grupos de 
Streptococcus que reaccionan negativamente frente a esta prueba. 
FUNDAMENTO 
El medio bilis esculina contiene peptonas y extracto de carne, ambos compuestos proporcionan las sustancias 
nutritivas necesarias para el crecimiento de los microorganismos. También contiene esculina; este compuesto es un 
glucósido formado por la unión de un monosacárido simple (glucosa) con un compuesto denominado 6,7-
dihidroxicumarina o esculetina (aglucona), unido por un enlace acetal o glucosídico. 
La prueba se basa en demostrar si la bacteria es capaz de hidrolizar a la esculina. Si esto ocurre la esculina se 
descompone en esculetina y glucosa. La esculetina reacciona con el hierro presente en el medio, formando un 
compuesto marrón oscuro, casi negro. Esto quiere decir que el citrato férrico actúa como un revelador de la reacción. 
Esta característica hace que el agar bilis esculina sea un medio diferencial. 
Por su parte, la bilis es un inhibidor que impide el crecimiento de algunos microorganismos, por tanto, la bacteria 
antes de desdoblar la esculina tiene que ser capaz de crecer en presencia de la bilis. Por ello, este medio se considera 
 
 
POSITIVO NEGATIVO 
 
 
DANNA JULIETH PATERNINA MAUSSA 
SOLUBILIDAD EN BILIS 
Se basa en la capacidad de determinadas especies bacterianas de lisarse en presencia de sales biliares, las más 
utilizadas de las cuales son: el taurocolato y el desoxicolato de sodio. Ambas provocan un descenso de la tensión 
superficial, que, unido a la actuación de enzimas autolíticos, destruyen la célula. El efecto de esta enzima autolítica 
se pone de manifiesto también sobre las colonias viejas de Streptococcus pneumoniae crecidas en medios sólidos, 
en las que se aprecia una umbilicación central. 
FUNDAMENTO 
Las sales de bilis específicamente el desoxicolato y el taurocolato de sodio tienen la capacidad de lisar S. pneumonia 
suspensión realizada a partir de un cultivo fresco de S. pneumoniae de 18-24 horas en agar sangre ovina al 5%. 
S. pneumoniae produce enzimas autolíticas que son las responsables de la característica umbilicada de la colonia en 
cultivos viejos. La adición de la solución de sales de bilis a la suspensión de la bacteria, acelera el proceso de lisis; 
proceso asociado con la disminución de la tensión superficial entre el medio y la membrana celular bacteriana. 
La prueba de solubilidad en bilis se puede realizar a partir de cultivos en caldo o en agar sangre ovina al 5%. Dado 
que la solución de desoxicolato de sodio puede precipitarse a pH de 6,5 o menor, cuando se realiza la prueba de 
solubilidad en bilis a partir de cultivos en caldo, el medio debe alcalinizarse para evitar una reacción falsa negativa. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Se observa 
transparencia indica 
que las células han 
desaparecido 
Se observa turbidez 
DANNA JULIETH PATERNINA MAUSSA 
CRECIMIENTO EN 𝑁𝑎𝐶𝑙 6,5% 
Medio utilizado para evaluar la tolerancia a la sal del género Streptococcus y de otros cocos Gram positivos. 
Permite diferenciar, los estreptococos del grupo D enterococos, de los estreptococos grupo D no enterococos. 
FUNDAMENTO 
Un medio de cultivo conteniendo 6,5% de cloruro de sodio se usa para identificar los enterococos determinando la 
tolerancia salina de los estreptococos bilis esculina positivos. Ambas pruebas confirman la presencia de 
enterococos. El crecimiento de las especies de enterococos (E. faecalis, E. faecium, E. durans, E. avium) se 
diferencian fácilmente de las especies no enterococos (S. bovis, S. equinus) 
Inocular dos o tres colonias de estreptococos en un tubo con medio de cultivo. 
 
 
 
 
 
 
PRUEBA PYR 
Prueba rápida y simple utilizada fundamentalmente para la identificación de Streptococcus pyogenes y 
Enterococcus spp. Permite la caracterización preliminar de Streptococcus, Enterococcus y de microorganismos 
símil estreptococos. 
FUNDAMENTO 
La prueba del “PYR” permite la identificación presuntiva de ciertas bacterias en base a la actividad enzimática l-
pirrolidonilarilamidasa (PYRasa). Los microorganismos que contienen esta enzima hidrolizan en forma rápida el 
Crecimiento en NaCl 6,5% 
(Turbio) 
Sin crecimiento 
(Transparente) 
DANNA JULIETH PATERNINA MAUSSA 
sustrato presente en los discos y liberan un grupo pirrólico que reacciona con el reactivo cinamaldehído 
originándose un compuesto de color rosado-rojizo. 
Constituye una prueba altamente sensible y de utilidad como los discos de Bacitracina 0.04 U y la prueba de 
tolerancia a la sal (REF Enterococos Medio Hipertónico). También se la utiliza junto con la prueba de 
leucinoaminopeptidasa y los discos de Vancomicina 30 µg para la identificación de cocos Gram positivos catalasa 
negativa no productores de beta hemólisis. 
 
NEGATIVO POSITIVO 
 
SUSCEPTIBILIDAD A LA BACITROCINA 
Esta prueba puede utilizarse como diagnóstico presuntivo en la identificación de los Streptococcus betahemolíticos 
del grupo A de Lancefield, ya que, a diferencia de la mayoría de los Streptococcus, suelen ser sensibles a bajas 
concentraciones de bacitracina. 
FUNDAMENTO 
La bacitracina es un antibiótico que inhibe la síntesis de pared celular bacteriana, y a la concentración que se 
encuentra en los discos (0,04 U) inhibe el crecimiento de los estreptococos beta hemolíticos del grupo A de 
Lancefield, pero no inhibe el desarrollo de otros estreptococos beta hemolíticos. 
Los micrococcus y los estomatococcus también son inhibidos por la bacitracina, mientras que los estafilococos 
coagulasa negativa son resistentes. 
Un resultado sensible a la bacitracina 0,04 U es presuntivo de la presencia de estreptococo grupo A, y se puede 
incrementar además el valor diagnóstico y facilitar la identificación de la cepa bacteriana en cuestión mediante la 
utilización de los discos de PYR-A Enterococos. 
Presencia de halo de inhibición 
(independientemente del diámetro) del 
desarrollo alrededor del disco. 
SENSIBLE 
Ausencia de halo de inhibición del desarrollo 
alrededor del disco. 
RESISTENTE 
DANNA JULIETH PATERNINA MAUSSA 
 
 
HIDROLISIS DE HIPURATO 
El hipurato es un compuesto orgánico aromático que puede ser hidrolizado enzimáticamente originando benzoato 
y glicina. Este testse usa a menudo para diferenciar especies de Streptococcus. 
FUNDAMENTO 
El hipurato es un compuesto orgánico aromático que puede ser hidrolizado enzimáticamente originando benzoato 
y glicina. Este test se usa a menudo para diferenciar especies de Streptococcus. 
 
 
 
POSITIVO 
NEGATIVO 
DANNA JULIETH PATERNINA MAUSSA 
PRUEBA DE CAMP 
Es una prueba presuntiva de identificación de los Streptococcus del grupo B, descrita por Christie, Atkins y Munch-
Petersen. Está basada en la potenciación de la zona de lisis formada por Staphylococcus aureus productores de 
beta-lisina, por una sustancia denominada CAMP-factor, elaborada por los Streptococcus del grupo B. 
FUNDAMENTO 
Se basa en que los estreptococos del grupo B producen un factor llamado CAMP (factor de monofosfato de 
adenina cíclica) que aumenta la zona de hemólisis producida por un estafilococo productor de ßlisina. 
 
 
 
 
 
MUESTRAS CLINICAS 
Para S. Pneumoniae, S. Pyogenes, S. Agalactiae se pueden tomar muestras clínicas: 
 Nasofaríngeas 
 Cutáneas 
 Gastrointestinales 
POSITIVO= Formación de una flecha entre 
la estría del estreptococo y la estría de 
Staphylococcus Aureus. 
NEGATIVO= No formación de flecha. 
	PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA
	SUSCEPTIBILIDAD A LA OPTOQUINA (HIDROXICUPRINA)
	CRECIMIENTO EN BILIS ESCULINA
	SOLUBILIDAD EN BILIS
	CRECIMIENTO EN 𝑁𝑎𝐶𝑙 6,5%
	PRUEBA PYR
	SUSCEPTIBILIDAD A LA BACITROCINA
	HIDROLISIS DE HIPURATO
	PRUEBA DE CAMP
	MUESTRAS CLINICAS