Valoración de bilirrubina clínica

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Valoración de la actividad del hígado:
Determinación de bilirrubina total y directa.
FASE PRE ANALÍTICA
1. Recibir al paciente.
2. Llevar al paciente a la zona de toma de muestra.
3. Sentar al paciente en una silla para empezar con el proceso.
4. Pedir permiso al paciente para poder inspeccionar los brazos para determinar cuál
es la mejor vena para sacar la sangre.
5. Una vez identificado el brazo y por ende la vena, limpiar la zona ejerciendo
un poco de presión con una torunda con alcohol.
6. Colocar el torniquete alrededor de la parte superior del brazo con el fin de
aplicar presión en la zona y permitir que la vena se llene de sangre.
7. Introducir la aguja en la vena en un ángulo aproximado de 25°.
8. Colocar los tubos de tapón rojo para empezar a extraer la sangre y retirar el
torniquete inmediatamente. En caso de ser con jeringa, extraer la cantidad de
sangre necesaria y retirar el torniquete.
9. Una vez obtenida la cantidad de muestra necesaria en los tubos, colocar una
torunda en la zona en donde está la aguja y retirar la misma.
10. Pedir al paciente que ejerza un poco de presión con la torunda para que la
sangre deje de salir.
11. Colocar un curita en la zona donde se introdujo la aguja.
12. Agradecer al paciente y guiarlo a la recepción.
13. Llevar la muestra a la zona de análisis.
*NOTA: Es importante verificar que el paciente se sienta bien al momento de estar
realizando la extracción, en caso de que presente mareos detener la toma de muestra,
retirar la aguja, brindarle una torunda con alcohol, esperar a que el paciente se recupere y
proceder a tomar la muestra en otro brazo o en otra vena*
FASE ANALÍTICA
La bilirrubina es un pigmento amarillento que se genera durante la descomposición normal
de los glóbulos rojos. Pasa a través del hígado y se expulsa del cuerpo.
La bilirrubina total es la suma de la bilirrubina directa y la bilirrubina indirecta. Cuando el
hígado funciona normalmente, elimina la mayoría de la bilirrubina del cuerpo. Si el hígado
está dañado, la bilirrubina puede salir del hígado y pasar a la sangre.
(MedlinePlus, 2020).
1. EVELYN-MALLOY
Determinación de bilirrubina total y directa por el método del ácido sulfanílico.
Principio del método
La reacción entre la bilirrubina y el ácido sulfanílico diazotado que conduce a un compuesto,
la azobilirrubina, coloreado en medio muy ácido o básico.
Principio de Malloy-Evelyn: En solución acuosa, sólo la BD reacciona. Para determinar la BT
es necesario romper la relación entre la bilirrubina indirecta y la albúmina. Esta etapa es
realizada por la adición de dimetilsulfóxido. (DMSO).
La absorbancia de la azobilirrubina así producida es proporcional a la concentración en
bilirrubina y es medida a 550 nm.
Reactivos
R1 Bilirrubina Total
Ácido sulfanílico → 30 mmol/L
DMSO → 7 mol/L
Ácido clorhídrico → 130 mmol/L
R2 Bilirrubina Directa
Ácido sulfanílico → 30 mmol/L
Ácido clorhídrico → 130 mmol/L
R3 Bilirrubina Total y Directa
Nitrito de sodio → 0.74 mmol/L
Equipo
● Espectrofotómetro.
Procedimiento
1. Ajustar el espectro a cero y escurrir la celda.
2. Leer todos los los blancos de una serie y todas las pruebas vaciando bien la celda
entre cada tubo pero sin enjuagar con agua.
3. Mezclar bien y poner en marcha un cronómetro en el momento de la adición de la
muestra.
4. Leer las absorbancias a 550 nm contra los blancos
Prueba Blanco
Reactivo R1 (BT) o R2 (BD) 1000 μL 1000 μL
Agua destilada 50 μL
Reactivo R3 50 μL
Mezclar y añadir
Standard, Control, Muestra 100 μL 100 μL
NOTA
BT: >3 minutos a 37°C o >5 min a T ambiente.
BD: exactamente 3 min a 37 °C o 5 min a T ambiente.
En muestras pediátricas: dividir el volumen muestra por 5.
Cálculo
𝑅𝑒𝑠𝑢𝑙𝑡𝑎𝑑𝑜 = 𝐴𝐵𝑆 (𝐸𝑛𝑠𝑎𝑦𝑜−𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜) 𝑑𝑒𝑡𝑒𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑐𝑖ó𝑛𝐴𝐵𝑆 (𝐸𝑛𝑠𝑎𝑦𝑜−𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜) 𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑑𝑜𝑟 𝑥 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑑𝑜𝑟.
Con factor:
𝑚𝑔/𝑑𝐿 = [𝐴𝐵𝑆 𝑒𝑛𝑠𝑎𝑦𝑜 − 𝐴𝐵𝑆 𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜] 𝑥 11. 4
µ𝑚𝑜𝑙/𝐿 = [𝐴𝐵𝑆 𝑒𝑛𝑠𝑎𝑦𝑜 − 𝐴𝐵𝑆 𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜] 𝑥 195
Método pediátrico: multiplicar el factor por 5 (volumen muestra)
Intervalos de referencia
Bilirrubina
total
(mg/dL) [μmol/L]
Recién nacido Prematuro A término Prematuro A término
En el cordón <2.0 <2.0 [<34] [<34]
0-1 día <8.0 1.4-8.7 [<137] [24-149]
1-2 días <12.0 3.4-11.5 [<205] [58-197]
3-5 días <16.0 1.5-12.0 [<274] [26-205]
Adulto (y niño
>5 días)
Bilirrubina total Bilirrubina directa
mg/dL [μmol/L] mg/dL [μmol/L]
>5 días-60 años 0.3-1.2 [5-21] <0.2 [<3.4]
60-90 años 0.2-1.1 [3-19] <0.2 [<3.4]
> 90 años 0.2-0.9 [3-15] <0.2 [<3.4]
2. JENDRASSIK-GROF
Uso
Determinación In Vitro de bilirrubina directa y total en equipos fotométricos.
Principio del método
La bilirrubina en suero y plasma se determina según Jendrassik-Grof mediante la reacción
con ácido sulfanílico diazotada después de añadir Cafeína como acelerador, Benzoato de
sodio y Acetato de sodio.
Con la solución Fehling-II alcalica se produce una azobilirrubina azul, cuya concentración
también se puede determinar en presencia de productos laterales ámarillos con una longitud
de onda de Hg 578 nm.
La bilirrubina directa se mide sin añadir reactivos alcálicos con Hg 546 nm.
La bilirrubina indirecta se calcula de la diferencia entre Bilirrubina total y la Bilirrubina
directa.
Reactivos
R1: Ácido sulfanílico diazotado (DSA) 29 mmol/L
HCl 170 mmol/L
R2: Nitrito de Sodio 29 mmol/L
R3: Cafeína 130 mmol/L
Benzoato de Sodio 156 mmol/L
Acetato de Sodio 460 mmol/L
R4: Solución de Fehling-II:
Tartrato de Sodio/Potassio 930 mmol/L
Hidróxido de Sodio 1.9 mol/L.
Equipo:
Espectrofotómetro.
Condiciones del ensayo:
● Paso óptico: 1 cm
● Temperatura: entre 15 y 25 °C
● Método de medida: Respecto blanco de muestra
Procedimiento
● Determinación de Bilirrubina total.
Longitud de onda: Hg 578 nm.
Blanco de muestra Muestra
Reactivo 2 - 50 µL
Reactivo 1 200 µL 200 µL
Reactivo 3 1000 µL 1000 µL
Muestra
Mezclar; incubar de 10- 60 min entre
15 y 25 °C, después añadir reactivo
4.
200 µL 200 µL
Reactivo 4 1000 µL 1000 µL
Después de añadir el reactivo 4; se mezcla y después de 5 a 30 minutos, medir la
absorbancia de la prueba contra el blando de muestra.
Cálculo.
Concentración de Bilirrubina total: [mg/dL] = ∆A x 10.5
[µmol/L] = ∆A x 180
● Determinación de bilirrubina directa
Blanco de
muestra
Muestra
Reactivo 2 - 50 µL
Reactivo 1 200 µL 200 µL
Soln. NaCI 2000 µL 2000 µL
Muestra 20 µL 200
Se deben mezclar y luego medir su absorbancia a 546 nanómetros exactamente después
de 5 min de 15- 25 °C contra el blanco del reactivo.
Cálculo.
Concentración de Bilirrubina directa: [mg/dL] = ∆A x 14.0
[µmol/L] = ∆A x 240
Sensibilidad
El límite inferior de prueba es de 0.03 mg/dL.
Valores de referencia
BILIRRUBINA TOTAL
● Recién nacidos 24 hrs < 8.8 mg /dL <150 µmol
2 días 1.3 - 11.3 mg /dL 22 - 193 µmol
3 días 0.7 - 12.7 mg /dL 12 - 217 µmol
4- 6 días 0.1 - 12.6 mg /dL 1.7 - 216 µmol
● Niños > 1 mes 0.2 - 1.0 mg /dL 3.4 - 17 µmol
● Adultos 0.1 - 1.2 mg /dL 1.7 - 21 µmol
BILIRRUBINA DIRECTA
● Adultos y niños 0.2 mg/ dL≤ 3.4 µmol/ L
Valores elevados
La elevación de la bilirrubina en sangre no es una enfermedad, es una manifestación de una
enfermedad, que puede ser de origen hepático o de vesícula biliar.
Uno de los indicios que indica la posibilidad de bilirrubina alta es la ictericia.
Las alteraciones en el proceso de eliminación de hemoglobina pueden provocar un aumento
de los niveles de bilirrubina en sangre. Algunas de las causas son:
- Obstrucción en el hígado que impide la eliminación normal con la bilis: linfoma,
tuberculosis, fármacos, toxinas, hepatitis alcohólica, hepatitis viral.
- Obstrucción fuera del hígado: por un cálculo en el conducto colédoco o compresión
sobre el mismo por el páncreas.
- Enfermedades del hígado con disfunción de los hepatocitos: fármacos, tóxicos,
alcohol, hepatitis vírica.
- Aumento de la producción de hemoglobina: ruptura masiva de los hematíes con gran
liberación de bilirrubina (anemia hemolítica), reabsorciónde grandes hematomas.
- Enfermedades hereditarias como síndrome de Dubin-Johnson, síndrome de Rotor,
síndrome de Gilbert.
Referencias
Anónimo. (2018). Bilirrubina Jendrassik-Grof FS- Ficha técnica. Consultado el 07 de
septiembre de 2021. Recuperado de
https://www.red-gdl.com/wp-content/uploads/2014/06/Bilirrubina-Jendrassik-Gr%C3%B3f.pdf
BIOLABO. (s.f). Bilirrubina total y directa. Método ácido sulfanílico. Consultado el 07 de
septiembre de 2021. Recuperado de:
http://www.biolabo.fr/biolabo/pdfs/noticesSP/biochimieSP/ES-80403.pdf
MedlinePlus. (2020). Examen de bilirrubina en sangre. Consultado el 07 de septiembre de
2021. Recuperado de:
https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/examen-de-bilirrubina-en-sangre/
Ormaechea, E. (2021). ¿Qué significa tener la bilirrubina alta?. Consultado el 07 de
septiembre de 2021. Recuperado de:
https://www.salud.mapfre.es/enfermedades/digestivas/bilirrubina-alta-significado/
https://www.red-gdl.com/wp-content/uploads/2014/06/Bilirrubina-Jendrassik-Gr%C3%B3f.pdf
http://www.biolabo.fr/biolabo/pdfs/noticesSP/biochimieSP/ES-80403.pdf
https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/examen-de-bilirrubina-en-sangre/
https://www.salud.mapfre.es/enfermedades/digestivas/bilirrubina-alta-significado/