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FASE PRE ANALÍTICA Información del paciente FECHA: 12-10-21 PACIENTE: María Luisa Neri Carbajal . Nombres Apellido Paterno Apellido Materno FECHA DE NACIMIENTO: 12-06-00 EDAD: 21 SEXO: F X M EMBARAZO: SI NO X MÉDICO SOLICITANTE: Maricielo Contreras Reynoso HORA DE EXTRACCIÓN: 07:40 h AYUNAS: SI X NO EMAIL: marialu@gmail.com TEL: 722-456-893-4 PERFIL LIPÍDICO CT |x| Colesterol Total HDL |x| Llpoproteína de alta densidad LDL |x| Lipoproteína de baja densidad TRL |x| Triglicéridos APO-A1 |x| Apolipoproteína A-1 APO-B |x| Apolipoproteína B Condiciones del paciente Paciente: María Luisa Neri Carbajal Nombre (s) Apellido Paterno Apellido Materno Fecha: 21-09-21 Tipo de estudio: Perfíl Lipídico ● El paciente debe mantener su dieta habitual. ● El día del examen no debe realizar deporte antes de tomar la muestra. ● Evitar el estrés antes y después de la toma de la muestra. ● Debe tener un ayuno estricto de ocho a 12 horas. ● No ingerir alimentos ni fumar después de las 10:00 p.m. la noche anterior al examen. ● No tomar licor durante 24 horas antes del examen. ● De preferencia presentarse en el Laboratorio clínico de 7:00 a 9:00 a.m. ● Informar sobre los cambios bruscos de peso, ya que puede interferir con los resultados. ● No utilizar los contrastes yodados antes de la prueba. Toma de muestra Muestra sanguínea 1. Recibir al paciente. 2. Llevar al paciente a la zona de toma de muestra. 3. Sentar al paciente en una silla para empezar con el proceso. 4. Pedir permiso al paciente para poder inspeccionar los brazos para determinar cuál es la mejor vena para sacar la sangre. 5. Una vez identificado el brazo y por ende la vena, limpiar la zona ejerciendo un poco de presión con una torunda con alcohol. 6. Colocar el torniquete alrededor de la parte superior del brazo con el fin de aplicar presión en la zona y permitir que la vena se llene de sangre. 7. Introducir la aguja en la vena en un ángulo aproximado de 25°. 8. Colocar los tubos de tapón rojo para empezar a extraer la sangre y retirar el torniquete inmediatamente. En caso de ser con jeringa, extraer la cantidad de sangre necesaria y retirar el torniquete. 9. Una vez obtenida la cantidad de muestra necesaria en los tubos, colocar una torunda en la zona en donde está la aguja y retirar la misma. 10.Pedir al paciente que ejerza un poco de presión con la torunda para que la sangre deje de salir. 11. Colocar un curita en la zona donde se introdujo la aguja. 12.Agradecer al paciente y guiarlo a la recepción. 13.Llevar la muestra a la zona de análisis. *NOTA: Es importante verificar que el paciente se sienta bien al momento de estar realizando la extracción, en caso de que presente mareos detener la toma de muestra, retirar la aguja, brindarle una torunda con alcohol, esperar a que el paciente se recupere y proceder a tomar la muestra en otro brazo o en otra vena* FASE ANALÍTICA Solicitud del paciente FECHA DE RECEPCIÓN: 12-10-21 FECHA ESTIMADA DE ENTREGA DE RESULTADOS : 14-10-21 NOMBRE DE QUIEN LA RECEPCIONA: Sabrina Polo Contreras PACIENTE: María Luisa Neri Carbajal___ Nombres Apellido Paterno Apellido Materno CONTACTO EMAIL: marialu@gmail.com TEL: 722-456-893-4 TIPO DE ENSAYO: Perfíl Lipídico TIPO DE MUESTRA CÓDIGO DE MUESTRA NO. DE MUESTRAS FECHA DE TOMA DE MUESTRA ALMACENAMIENTO T ° SANGRE LIP-01 1 12-10-21 Centrifugar y separar el suero. Temperatura ambiente por 24 h y posteriorment e 2 - 8°C OBSERVACIONES: __________________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________________ PERFIL LIPÍDICO Un perfil lipídico, también conocido como "panel de lípidos", mide las concentraciones de distintos tipos de grasas en la sangre. Se realiza para establecer el riesgo de desarrollar una enfermedad cardiovascular; para el seguimiento del tratamiento de las concentraciones inadecuadas de lípidos. Los dos lípidos principales del organismo, el colesterol y los triglicéridos, son transportados por la sangre mediante unas partículas conocidas como lipoproteínas. Cada tipo de lipoproteína está constituida por una combinación de proteína, colesterol, triglicéridos y fosfolípidos. Las partículas que se evalúan en un perfil lipídico se clasifican en lipoproteínas de alta densidad (HDL), lipoproteínas de baja densidad (LDL) y lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL). Un perfil lipídico suele incluir: ● Colesterol total: mide el colesterol presente en todas las partículas lipídicas. ● Colesterol HDL (C-HDL): mide el colesterol transportado por las partículas HDL; a menudo conocido como "colesterol bueno", ya que las HDL transportan el exceso de colesterol hacia el hígado para que se elimine. ● Colesterol LDL (C-LDL): mide o calcula el colesterol transportado por las partículas LDL. También se le conoce como "colesterol malo" porque hace que el exceso de colesterol se deposite en las paredes de los vasos sanguíneos, contribuyendo a la aterosclerosis. Normalmente, la cantidad de C-LDL se calcula a partir del colesterol total, del C-HDL y de los triglicéridos ● Triglicéridos: mide la cantidad total de triglicéridos en todas las partículas lipoproteicas. (LabTest, 2020) Determinación de colesterol total Para la determinación de colesterol total se utilizan reactivos comerciales que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificación de todas las formas de colesterol presentes en el suero. Las reacciones que tienen lugar son: 1. Una colesterol esterasa (CHE) hidroliza los ésteres de colesterol a colesterol más ácidos grasos libres. 2. A continuación una colesterol oxidasa (CHOD) oxida todo el colesterol a colestenona y peróxido de hidrógeno. 3. El peróxido de hidrógeno es sustrato de una peroxidasa (POD) que junto con 4-amino fenazona (4-AP) da lugar a la formación de una quinona roja. La quinona formada es proporcional a la concentración de colesterol en la muestra. Técnica Pipetear los componentes indicados en la Tabla I, añadiendo en último lugar el reactivo de trabajo de colesterol. Tabla I. Protocolo para la cuantificación de colesterol total ● Mezclar e Incubar 5 min a 37ºC (ó 10 min a temperatura ambiente). ● Leer la absorbancia a 505 nm. ● Calcular la concentración de colesterol total de cada una de las muestras: (Túnez & Galván, s.f) Determinación de LDL Determinación directa del LDLc (colesterol de lipoproteínas de baja densidad) sin necesidad de pretratamiento o centrifugado de la muestra. La determinación se realiza en dos pasos: Técnica ● Pipetear los componentes indicados en la Tabla 2.. Tabla 2. Protocolo para la cuantificación de LDL ● Mezclar e Incubar 5 min a 37ºC (ó 10 min a temperatura ambiente). ● Leer la absorbancia a 600 (590-700) nm. ● Calcular la concentración de LDL en las muestras: Valores de referencia (Spinreact, 2019) Determinación de HDL Este método es por reactivo precipitante. Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y baja densidad (LDL) del suero o plasma, se precipitan con fosfotungstato en presencia de iones magnesio. Tras la centrifugación, el sobrenadante contiene lipoproteínas de alta densidad (HDL). La fracción de HDL colesterol se determina utilizando el reactivo enzimático de colesterol total. Técnica ● Dosificar en tubos de centrífuga: ● Mezclar y dejar reposar 10 minutos a temperatura ambiente. ● Centrifugar 20 min a 4000 r.p.m. ó 2 min a 12000 r.p.m. ● Recoger el sobrenadante y procesarlo como muestra en la determinación de colesterol total. ● Calcular con: Valores de referencia (Spinreact, 2016) Determinación de triglicéridos Fundamento La enzima lipoproteinlipasa hidroliza triglicéridos a glicerol y ácidos grasos, este gliceroltras la acción de la glicerol quinasa se convierte en glicerol 3-fosfato que se oxida a dihidroxiacetona y peróxido de hidrogeno en presencia de la glicerol fosfato oxidasa. En presencia de peroxidasa el peróxido de hidrogeno oxida al cromógeno a un compuesto de color que es leído espectrofotométricamente. Técnica Es un método enzimático y colorimétrico, que utiliza como muestra suero. Preparación de los reactivos 1. Disolver el reactivo de trabajo: el contenido de un vial de R2 en un frasco de R1. 2. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver todo el contenido. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 505 (490-550) nm Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC 1. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. 2. Pipetear en una cubeta. 3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC o 10 min a temperatura ambiente. 4. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frente al blanco de reactivo (el color es estable como mínimo 30 min). Cálculos Factor de conversión: mg/dL x 0.0113 = mmol/L. Valores de referencia Hombres: 40 – 160 mg/dL Mujeres: 35 – 135 mg/dL (Spinreact, 2018) Apolipoproteína B (Apo -B) Fundamento La Apo B reacciona con el anticuerpo específico formando inmunocomplejos insolubles. La turbidez causada por estos inmunocomplejos es proporcional a la concentración de Apo B en la muestra y puede ser medida espectrofotométricamente. Técnica Reactivos ● Reactivo A: buffer fosfato, pH 7.4. ● Reactivo B: anticuerpos policlonales anti-Apo B humana (cabra) en buffer fosfato, pH 7.4. Condiciones del ensayo ● Longitud de onda: 340 nm ● Temperatura de reacción: entre 22 y 30° C. ● Tiempo de reacción: 15 min. ● Volumen de muestra: 10 ul. ● Volumen final de reacción: 1810 ul. ***Los volúmenes de muestra y reactivos pueden variar proporcionalmente, sin que se alteren los factores de cálculo. Procedimiento: ● Homogeneizar y leer la absorbancia de cada dilución a 340 nm (DO1 ) llevando a cero con agua destilada. Luego agregar: Reactivo B 300 ul ● Mezclar e incubar 15 minutos a temperatura ambiente. ● Leer la absorbancia a 340 nm (DO2 ), llevando a cero con agua destilada. ● Calcular la diferencia de absorbancia (∆A = DO2 - DO1 ) para cada dilución del calibrador, incluyendo el punto cero. Cálculo de resultados ● Calcular la diferencia de absorbancia (∆A = DO2 - DO1 ) correspondiente a cada muestra analizada. ● Interpolar esta ∆A en la curva de calibración para determinar la concentración en mg/dl (g/l) correspondiente a la muestra estudiada. ***Las muestras con absorbancias superiores a la del Apo Calibrator Turbitest AA deben ser diluidas con solución fisiológica y procesadas nuevamente. ● Multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución. Valores de referencia Hombres: 79 - 127 mg/dl (0,79 - 1,27 g/l) Mujeres: 70 - 122 mg/dl (0,70 - 1,22 g/l) Apolipoproteína A-I (Apo A-I) La Apo A-I reacciona con el anticuerpo específico formando inmunocomplejos insolubles. La turbidez causada por estos inmunocomplejos es proporcional a la concentración de Apo A-I en la muestra y puede ser medida espectrofotométricamente. Reactivos ● Reactivo A: buffer fosfato, pH 7.4. ● Reactivo B: anticuerpos policlonales anti-Apo A-I humana (cabra) en buffer fosfato, pH 7.4. Condiciones del ensayo ● Longitud de onda: 340 nm ● Temperatura de reacción: temperatura ambiente (25° C). El control de la temperatura no es crítico, pudiendo oscilar entre 22 y 30° C. ● Tiempo de reacción: 15 minutos ● Volumen de muestra: 10 ul ● Volumen final de reacción: 1810 ul ***Los volúmenes de muestra y reactivos pueden variarse proporcionalmente, sin que se alteren los factores de cálculo Procedimiento ● Homogeneizar y leer la absorbancia de cada dilución a 340 nm (DO1) llevando a cero con agua destilada. Luego agregar: Reactivo B 300 ul ● Mezclar e incubar 15 minutos a temperatura ambiente. ● Leer la absorbancia a 340 nm (DO2 ), llevando a cero con agua destilada. ● Calcular la diferencia de absorbancia (∆A = DO2 - DO1) para cada dilución del calibrador, incluyendo el punto cero. ● Representar en papel milimetrado las diferencias de absorbancia (∆A) en función de la concentración en mg/dl del calibrador. Cálculo de resultados ● Calcular la diferencia de absorbancia (∆A = DO2 - DO1 ) correspondiente a cada muestra analizada. ● Interpolar esta ∆A en la curva de calibración para determinar la concentración en mg/dl (g/l) correspondiente a la muestra estudiada ● Multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución. Valores de referencia ● Hombres: 111 - 157 mg/dl (1.11 - 1.57 g/l) ● Mujeres: 126 - 182 mg/dl (1.26 - 1.82 g/l) (Wiener-lab, 200) Referencias LabTest. (2020). Perfíl Lipídico. Consultado el 12 de octubre de 2021. Recuperado de: https://labtestsonline.es/tests/perfil-lipidico Hospital Departamental Universitario. Santa Sofía. (2016). Protocolos Clínicos. Preparación del paciente para toma de lípidos (colesterol, HDL, triglicéridos). Consultado el 12 de octubre de 2021. Recuperado de: https://www.santasofia.com.co/ss/phocadownload/Guia-Paciente/DT110-R5-P16-Preparacio n-de-Pacientes-para-Examenes-de-Laboratorio.pdf Spinreact. (2016). HDL Colesterol P. Consultado el 12 de octubre de 2021. Recuperado de: https://www.spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIQUIDOS/1001095 %20HDLcP.pdf Spinreact. (2019). LDL Colesterol D. Consultado el 12 de octubre de 2021. Recuperado de: https://www.spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIQUIDOS/41023%2 0LDLc-D.pdf Spinreact. (2018). Triglicéridos. Consultado el 12 de octubre de 2021. Recuperado de https://spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIOFILIZADOS/1001310. 11.12.13.14%20TRIG.pdf. Túnez, I & Galván, A. (s.f). Perfil lipídico. Consultado el 12 de octubre de 2021. Recuperado de: https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/25%20PERFIL%20LIPIDICO.pdf Wiener-lab. (2000). Apo A-I. Consultado el 12 de octubre de 2021. Recuperado de: https://www.wiener-lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/apo_a1_t urbitest_aa_sp.pdf FASE POST ANALÍTICA Resultados e interpretación https://labtestsonline.es/tests/perfil-lipidico https://www.santasofia.com.co/ss/phocadownload/Guia-Paciente/DT110-R5-P16-Preparacion-de-Pacientes-para-Examenes-de-Laboratorio.pdf https://www.santasofia.com.co/ss/phocadownload/Guia-Paciente/DT110-R5-P16-Preparacion-de-Pacientes-para-Examenes-de-Laboratorio.pdf https://www.spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIQUIDOS/1001095%20HDLcP.pdf https://www.spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIQUIDOS/1001095%20HDLcP.pdf https://www.spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIQUIDOS/41023%20LDLc-D.pdf https://www.spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIQUIDOS/41023%20LDLc-D.pdf https://spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIOFILIZADOS/1001310.11.12.13.14%20TRIG.pdf https://spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIOFILIZADOS/1001310.11.12.13.14%20TRIG.pdf https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/25%20PERFIL%20LIPIDICO.pdf https://www.wiener-lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/apo_a1_turbitest_aa_sp.pdf https://www.wiener-lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/apo_a1_turbitest_aa_sp.pdf
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