Práctica 6b-Determinación del perfil lipídico(1) (2)

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Bioenergética y metabolismo de glúcidos, lípidos, aminoácidos, proteínas y nucleótidos
Segunda Unidad
PRACTICA N°06b
 - DETERMINACION DEL PERFIL LIPIDICO --
INTRODUCCION:
La determinación del perfil lipídico incluye la medición sérica de colesterol total, triglicéridos, HDL colesterol y LDL colesterol. Estas pruebas tienen utilidad para el despistaje, diagnóstico y monitoreo de las dislipidemias; las que se definen como alteraciones del perfil lipídico ya sea en aumento o disminución de alguno de sus componentes. La etiología para estas alteraciones puede ser primarias (como la hipercolesterolemia familiar, hiperlipidemia familiar combinada, etc) o secundarias a obesidad, diabetes, etc. La hipercolesterolemia, la hipertrigliceridemia, el aumento de LDL y la disminución de HDL se asocian a mayor riesgo coronario. 
COMPETENCIA A LOGRAR POR EL ESTUDIANTE:
Determina el perfil lipídico humano, cuantificando de manera responsable la concentración sérica de colesterol, triglicéridos, colesterol-LDL y colesterol-HDL mediante el método enzimático, previa precipitación de las otras lipoproteínas en el caso de LDL y HDL.
MATERIAL Y EQUIPOS
· Material de vidrio: tubos de ensayo, pipetas milimétricas.
· Equipo de extracción de muestra: guantes, alcohol, algodón, agujas N° 20, jeringas x 5 cc.
· Equipos: centrífuga, micropipetas x 10 ul, baño maría, espectrofotómetro.
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
INTRODUCCIÓN:
El colesterol es una molécula lipídica, base de síntesis de los demás esteroides como las hormonas masculinas, femeninas, gluco y mineralocorticoides, así como las sales biliares y la vitamina D, con ellas comparte el núcleo ciclopentano perhidrofenantreno. Forma parte de las biomembranas regulando su fluidez. Tiene origen endógeno por síntesis a nivel hepático, intestino y otros tejidos; y exógeno de la dieta (de origen animal como la yema de huevo, carnes etc.). Se considera importante su participación en la aterogénesis unida a la Lipoproteína de baja densidad o LDL, por ello su determinación aislada o como parte del perfil lipídico es muy importante para evaluar el riesgo coronario.
El fundamento de la técnica para la determinación de colesterol en sangre se basa en la siguiente secuencia de recciones:
Colesterol 
oxidasa
Colesterol 
esterasa
Esteres de Colesterol		 Colesterol + ácidos grasos; Colesterol + O2		Colesten-3-ona + H2O2
POD
H2O2 + 4-AF + aceptor	 	 quinonimina roja
MUESTRA Y REACTIVOS A EMPLEAR:
· Muestra: suero sanguíneo.
· Estándar (S): solución de colesterol = 200 mg/dl (2 g/l).
· Reactivo A: solución conteniendo colesterol esterasa (CHE), colesterol oxidasa (CHOD), peroxidasa (POD), 4-aminofenazona (4-AF) y buffer Good (conteniendo fenol y colato de sodio).
PROCEDIMIENTO:
1) Obtención de la muestra:
Desinfectar la zona con alcohol y extraer de 3 a 5 mL de sangre de la vena de la flexura del codo utilizando una jeringa de 5ml y aguja hipodérmica N°21G x 1 ½, de dos pacientes en ayunas. Dejar en reposo por 10 minutos para la coagulación de la sangre, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugar a 2,500-3,000 rpm durante 10 minutos. Separar el suero con una pipeta serológica de plástico descartable.
Si la muestra a utilizar fuese plasma extraer la sangre con un anticoagulante común (se recomienda el uso de heparina).
2) Sistema de incubación para la determinación de colesterol total: Preparar el siguiente sistema agregando lo que se indica en 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) y D (Desconocido o Problema).
	COMPONENTES
	TUBOS DE ENSAYO
	
	B
	S
	D
	Muestra (suero / µl)
	--
	--
	10
	Estándar (µl)
	--
	10
	--
	Reactivo A (ml)
	1.0
	1.0
	1.0
	Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 20 minutos a temperatura ambiente (18 a 25 °C). Leer en espectrofotómetro a 505 nm llevando el aparato a cero con el Blanco.
RESULTADOS:
1. Sistema de incubación para la determinación de colesterol total: Luego de la incubación del sistema, se observa lo siguiente:
D
S
B
1) Valoración cuantitativa del colesterol total:
· Expresión de los resultados: Los resultados se expresan en términos de gramos de colesterol por litro de sangre (g/L) o miligramos de colesterol total por decilitro de sangre (mg/dL), lo cual se determina mediante la siguiente fórmula:
Colesterol total = (Factor) (Lectura de la muestra)
Factor para g/L = ..........................
Lectura St (Lectura de absorbancia del estándar de colesterol): 0.252
· Tabulación/Registro de los resultados:
	Muestras
	Lecturas de absorbancia
	Colesterolemia: [Colesterol]
	
	
	g/L
	mg/dL
	Paciente N° 1
	0.356
	7.94 x 0.356 = 2.83
	283
	Paciente N° 2
	0.278
	7.94 x 0.278 = 2.21
	221
Interpretar los resultados en base a la competencia, según los valores referenciales: [ATP III, NCEP]
· Deseable: < 2.0 g/l (200 mg/dL)
· Moderadamente alto: 2.00 a 2.39 g/l (200 ‒ 239 mg/dL)
· Alto: ≥ 2.40 g/l (240 mg/dL)
DISCUSIÓN:
El estudiante discute o analiza los resultados. Para ello los interpreta comparándolos y verificándolos respecto al marco teórico (principios teórico-prácticos, teorías y leyes que existen para la temática de los resultados) que se encuentra principalmente en libros, y con respecto a los antecedentes (trabajos de investigación alusivos al tema) que se encuentran fundamentalmente en artículos publicados. El marco teórico y los antecedentes se encuentran en las referencias bibliográficas, las cuales deben ser citadas en la discusión.
CONCLUSIONES:
El estudiante, en base a lo realizado en la discusión, elabora conclusiones cortas y puntuales las cuales se enuncian según las competencias a alcanzar en la presente práctica.
Nota: Mínimo deben elaborarse 3 conclusiones por tema.
PREGUNTAS DE APLICACIÓN:
1) Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.
2) Identifique los componentes del sistema enzimático empleado en la práctica y señale sus principales características.
3) ¿Cuál es la importancia del colesterol en nuestro organismo?
4) ¿Cuál es la enzima clave en la regulación de la síntesis del colesterol?
5) ¿Cuál es la base molecular del tratamiento de la hipercolesterolemia?
6) Esquematice la estructura del colesterol.
7) Elabore un esquema y explique la síntesis de colesterol.
DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS
INTRODUCCIÓN:
Los triglicéridos son lípidos simples formados por esteres de glicerol con tres ácidos grasos. Estos pueden ser saturados, monoinsaturados o poliinsaturados. Según ATP III son considerados factores de riesgo coronario; asimismo es un constituyente del síndrome metabólico (>= 150 mg/dL). Pueden tener origen exógeno (dieta) o endógeno (síntesis en hígado, tejido adiposo u otros tejidos). Las hipertrigliceridemias (>=200 mg/dL) pueden ser primarias o secundarias (obesidad, diabetes).
El fundamento de la técnica para la determinación de triglicéridos en sangre se basa en la siguiente secuencia de recciones:
Glicerol kinasa
Lipoprotein lipasa
Triglicéridos		 glicerol + ácidos grasos; glicerol + ATP		 glicerol-1-P + ADP
POD
Glicerolfosfato oxidasa
Glicerol-1-P + O2 		H2O2 + dihidroxiacetonafosfato; 2 H2O2 + 4-AF + clorofenol	 quinonimina roja
MUESTRA Y REACTIVOS A EMPLEAR:
· Muestra: suero sanguíneo.
· Estándar (S): solución de glicerol 2.26 mmol/l (equivale a 2 g/l de trioleína).
· Reactivo A: solución conteniendo buffer Good (pH 6.8), clorofenol, lipoproteinlipasa (LPL), glicerol kinasa (GK), glicerol fosfato oxidasa (GPO), peroxidasa (POD), adenosina trifosfato (ATP) y 4-aminofenazona (4-AF).
PROCEDIMIENTO:
1) Obtención de la muestra:
Desinfectar la zona con alcohol y extraer de 3 a 5 mL de sangre de la vena de la flexura del codo utilizando una jeringa de 5ml y aguja hipodérmica N°21G x 1 ½, de dos pacientes en ayunas. Dejar en reposo por 10 minutos para la coagulación de la sangre, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugar a 2,500-3,000 rpm durante 10 minutos. Separar el suero con una pipeta serológica de plástico descartable.
Si lamuestra a utilizar fuese plasma extraer la sangre con un anticoagulante común (se recomienda solamente el uso de heparina).
2) Sistema de incubación para la determinación de triglicéridos: Preparar el siguiente sistema agregando lo que se indica en 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) y D (Desconocido o Problema).
	COMPONENTES
	TUBOS DE ENSAYO
	
	B
	S
	D
	Muestra (suero / µl)
	--
	--
	10
	Estándar (µl)
	--
	10
	--
	Reactivo A (ml)
	1.0
	1.0
	1.0
	Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 20 minutos a temperatura ambiente (18 a 25 °C). Leer en espectrofotómetro a 505 nm llevando el aparato a cero con agua destilada.
RESULTADOS:
1) Sistema de incubación para la determinación de triglicéridos: Luego de la incubación del sistema, se observa lo siguiente:
D
S
B
2) Valoración cuantitativa de triglicéridos:
· Expresión de los resultados: Los resultados se expresan en términos de gramos de triglicéridos por litro de sangre (g/L) o miligramos de triglicéridos total por decilitro de sangre (mg/dL), lo cual se determina mediante la siguiente fórmula:
Triglicéridos = (Factor) (Lectura de la muestra)
Factor para g/L = ..........................
Lectura St (Lectura de absorbancia del estándar de colesterol): 0.285
· Tabulación/Registro de los resultados:
	Muestras
	Lecturas de absorbancia
	Trigliceridemia: [Triglicéridos]
	
	
	g/L
	mg/dL
	Paciente N° 1
	0.376
	7.02 x 0.376 = 2.64
	264
	Paciente N° 2
	0.321
	7.02 x 0.321 = 2.25
	225
Interpretar los resultados en base a la competencia, según los valores referenciales: [ATP III, NCEP]
· Normal (Deseable): < 1.50 g/L (ó < 150 mg/dL).
· Límite alto de normalidad (Moderadamente elevado a elevado): 1.50 – 1.99 g/L (ó 150 – 199 mg/dL).
· Elevado: 2.00 – 4.99 g/L (ó 200 – 499 mg/dL) Hipertrigliceridemia moderada.
· Muy elevado: ≥ 5.00 g/L (ó ≥ 500 mg/dL). Hipertrigliceridemia severa.
DISCUSIÓN:
El estudiante discute o analiza los resultados. Para ello los interpreta comparándolos y verificándolos respecto al marco teórico (principios teórico-prácticos, teorías y leyes que existen para la temática de los resultados) que se encuentra principalmente en libros, y con respecto a los antecedentes (trabajos de investigación alusivos al tema) que se encuentran fundamentalmente en artículos publicados. El marco teórico y los antecedentes se encuentran en las referencias bibliográficas, las cuales deben ser citadas en la discusión.
CONCLUSIONES:
El estudiante, en base a lo realizado en la discusión, elabora conclusiones cortas y puntuales las cuales se enuncian según las competencias a alcanzar en la presente práctica.
Nota: Mínimo deben elaborarse 3 conclusiones por tema.
PREGUNTAS DE APLICACIÓN:
1) Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.
2) Identifique los componentes del sistema enzimático empleado en la práctica y señale sus principales características.
3) ¿Cuál es la importancia de los triglicéridos en nuestro organismo?
4) Fundamente el porqué la hipertrigliceridemia es considerada como un factor de riesgo coronario.
5) ¿Cuál es son las causas primarias de hipertrigliceridemia?
6) Esquematice la estructura del triglicérido
7) Elabore un esquema y explique la síntesis de los triglicéridos.
DETERMINACIÓN DE HDL-COLESTEROL
INTRODUCCIÓN:
La lipoproteína de alta densidad o HDL, es considerada antiaterogénica porque interviene en el transporte reverso del colesterol de los tejidos hacia el hígado. Su disminución <40 mg/dL es considerado por ATPIII (NCEP) como un factor de riesgo coronario y como componente del síndrome metabólico (<40 mg/dl en varones y <50 mg/dl en mujeres).
El fundamento de la técnica para la determinación de HDL-colesterol en sangre se basa en lo siguiente: Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) se separan precipitando selectivamente las lipoproteínas de baja y muy baja densidad (LDL y VLDL) mediante el agregado de sulfato de dextrán de PM 50.000 en presencia de iones Mg++. En el sobrenadante separado por centrifugación, quedan las HDL y se realiza la determinación del colesterol ligado a las mismas, empleando el sistema enzimático Colesterol oxidasa/Peroxidasa con colorimetría según Trinder (Fenol/4- Ami-nofenazona)
MUESTRA Y REACTIVOS A EMPLEAR:
· Muestra: suero sanguíneo.
· Estándar (S): solución de colesterol = 200 mg/dl (2 g/l).
· Reactivo A: solución de sulfato de dextrán (PM 50.000)
· Reactivo B: solución de cloruro de magnesio 1.5 M
· Reactivo Precipitante: (A+B); mezclar por inversión 2.5 ml de reactivo A y 2.5 ml de reactivo B (1:1).
PROCEDIMIENTO:
1) Obtención de la muestra:
Desinfectar la zona con alcohol y extraer de 3 a 5 mL de sangre de la vena de la flexura del codo utilizando una jeringa de 5ml y aguja hipodérmica N°21G x 1 ½, de dos pacientes en ayunas. Dejar en reposo por 10 minutos para la coagulación de la sangre, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugar a 2,500-3,000 rpm durante 10 minutos. Separar el suero con una pipeta serológica de plástico descartable.
2)	Sistema de precipitación e incubación para la determinación de HDL-colesterol: Preparar el siguiente sistema agregando lo que se indica, primero en un tubo de ensayo, luego en 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) y D (Desconocido o Problema).
	En un tubo de vidrio colocar:
	Muestra (suero / µl)
	500
	Reactivo Precipitante (µl)
	50
	Homogeneizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
	Dejar 30 a 40 minutos en refrigerador (2-10 °C) o 15 minutos en baño de agua a la misma temperatura. No colocar en el congelador.
	Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m. Usar el sobrenadante límpido como muestra.
	En 3 tubos marcados B, S y D; armar lo siguiente:
	COMPONENTES
	TUBOS DE ENSAYO
	
	B
	S
	D
	Sobrenadante (µl)
	--
	--
	100
	Estándar (µl)
	--
	20
	--
	Reactivo de Trabajo (ml)
	2.0
	2.0
	2.0
	Mezclar e incubar por 5 minutos a 37°C si se usa el reactivo de trabajo de Colestat enzimático AA/líquida o 15 minutos a 37°C cuando se usa el Colestat enzimático. Retirar del baño y enfriar. Leer a 505 nm en espectrofotómetro, llevando a cero con el blanco.
RESULTADOS:
1) Sistema de incubación para la determinación de HDL-colesterol: Luego de la incubación del sistema, se observa lo siguiente:B
D
S
2) Valoración cuantitativa de HDL-colesterol:
· Expresión de los resultados: Los resultados se expresan en términos de gramos de HDL-colesterol por litro de sangre (g/L) o miligramos de HDL-colesterol por decilitro de sangre (mg/dL), lo cual se determina mediante la siguiente fórmula:
HDL-colesterol = (Factor) (Lectura de la muestra)
Factor para g/L = ..........................
Lectura St (Lectura de absorbancia del estándar de colesterol): 0.210
St corregido: 0.457; resulta de corregir los diferentes volúmenes y se aplica para reactivo de 2 ml y concentración de St de 200 mg/dl.
· Tabulación/Registro de los resultados:
	Muestras
	Lecturas de absorbancia
	[HDL-colesterol]
	
	
	g/L
	mg/dL
	Paciente N° 1
	0.165
	2.18 x 0.165 = 0.36
	36
	Paciente N° 2
	0.240
	2.18 x 0.240 = 0.52
	52
Interpretar los resultados en base a la competencia, según los valores referenciales:
· Normal: 0.40 a 0.6 g/L (ó 40 – 60 mg/dL).
· Bajo o de Riesgo: < 0.40 g/L (ó < 40 mg/dL).
· Protector: ≥ 0.60 g/L (ó ≥ 60).
DISCUSIÓN:
El estudiante discute o analiza los resultados. Para ello los interpreta comparándolos y verificándolos respecto al marco teórico (principios teórico-prácticos, teorías y leyes que existen para la temática de los resultados) que se encuentra principalmente en libros, y con respecto a los antecedentes (trabajos de investigación alusivos al tema) que se encuentran fundamentalmente en artículos publicados. El marco teórico y los antecedentes se encuentran en las referencias bibliográficas, las cuales deben ser citadas en la discusión.
CONCLUSIONES:
El estudiante, en base a lo realizado en la discusión, elabora conclusiones cortas y puntuales las cuales se enuncian según las competencias a alcanzar en la presente práctica.
Nota: Mínimo deben elaborarse3 conclusiones por tema.
PREGUNTAS DE APLICACIÓN:
1) Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.
2) Identifique los componentes del sistema enzimático empleado en la práctica y señale sus principales características.
3) ¿Cómo es el metabolismo de las HDL?
4) ¿Porqué es importante la determinación de HDL?
5) ¿Qué alteraciones pueden reportarse de los valores de HDL colesterol?
6) ¿Cuándo se consideran de riesgo los valores de HDL?
7) ¿Cómo se mejorarían los niveles de HDL colesterol?
DETERMINACIÓN DE LDL-COLESTEROL
INTRODUCCIÓN:
La lipoproteína de baja densidad o LDL se encarga del transporte del colesterol en la sangre. Es la principal lipoproteína aterogénica. Habitualmente se determina por la fórmula de Friedwald empleando la fórmula:
Si los Triglicéridos, se hallan en valor iguales o mayores a 400 mg/dl se determina directamente.
El fundamento de la técnica para la determinación de LDL-colesterol en sangre se basa en lo siguiente: Las lipoproteínas de baja densidad (LDL o β­lipoproteínas) se separa del suero precipitándolas selectivamente mediante el agregado de polímeros de alto peso molecular. Luego de centrifugar, en el sobrenadante quedan las demás lipoproteínas (HDL y VLDL); el colesterol ligado a las mismas se determina empleando el sistema enzimático Colesterol oxidasa/ Peroxidasa con colorimetría según Trinder (Fenol/4­AF). Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en el sobrenadante, se obtiene el colesterol unido a las LDL.
MUESTRA Y REACTIVOS A EMPLEAR:
· Muestra: suero sanguíneo.
· Estándar (S): solución de colesterol = 200 mg/dl (2 g/l).
· Reactivo A: (Reactivo precipitante) sulfato de polivinilo disuelto en polietilenglicol al 25 %
PROCEDIMIENTO:
1) Obtención de la muestra:
Desinfectar la zona con alcohol y extraer de 3 a 5 mL de sangre de la vena de la flexura del codo utilizando una jeringa de 5ml y aguja hipodérmica N°21G x 1 ½, de dos pacientes en ayunas. Dejar en reposo por 10 minutos para la coagulación de la sangre, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugar a 2,500-3,000 rpm durante 10 minutos. Separar el suero con una pipeta serológica de plástico descartable.
2)	Sistema de precipitación e incubación para la determinación de LDL-colesterol: Preparar el siguiente sistema agregando lo que se indica, primero en un tubo de ensayo, luego en 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) y D (Desconocido o Problema).
	En un tubo de vidrio colocar:
	Muestra (suero / µl)
	200
	Reactivo Precipitante (µl)
	100
	Homogeneizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
	Dejar 15 minutos en baño de agua a 20-25°C
	Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m. Separar inmediatamente el sobrenadante. 
Usar el sobrenadante como muestra para el ensayo colorimétrico.
	En 3 tubos marcados B, S y D; armar lo siguiente:
	COMPONENTES
	TUBOS DE ENSAYO
	
	B
	S
	D
	Sobrenadante (µl)
	--
	--
	100
	Estándar (µl)
	--
	20
	--
	Reactivo de Trabajo (ml)
	2.0
	2.0
	2.0
	Mezclar e incubar por 5 minutos a 37°C si se usa el reactivo de trabajo de Colestat enzimático AA/líquida o 15 minutos a 37°C cuando se usa el Colestat enzimático. Retirar del baño y enfriar. Leer a 505 nm en espectrofotómetro, llevando a cero con el blanco.
RESULTADOS:
1) Sistema de incubación para la determinación de LDL-colesterol: Luego de la incubación del sistema, se observa lo siguiente:B
D
S
B
2) Valoración cuantitativa de LDL-colesterol:
· Expresión de los resultados: Los resultados se expresan en términos de gramos de LDL-colesterol por litro de sangre (g/L) o miligramos de LDL-colesterol por decilitro de sangre (mg/dL), lo cual se determina mediante la siguiente fórmula:
LDL-colesterol = (Factor) (Lectura de la muestra)
Factor para g/L = ..........................
Lectura St (Lectura de absorbancia del estándar de colesterol): 0.230
St corregido: 0.624; resulta de corregir los diferentes volúmenes y se aplica para reactivo de 2 ml y concentración de St de 200 mg/dl.
· Tabulación/Registro de los resultados:
	Muestras
	Lecturas de absorbancia
	[LDL-colesterol]
	
	
	g/L
	mg/dL
	Paciente N° 1
	0.635
	2.71 x 0.635 = 1.72
	172
	Paciente N° 2
	0.360
	2.71 x 0.360 = 0.97
	97
Interpretar los resultados en base a la competencia, según los valores referenciales:
· Deseable: < 1.00 g/L (ó 100).
· Casi deseable: 1.00 a 1.29 g/L (ó 100 – 129 mg/dL).
· Alto limítrofe: 1.30 – 1.59 g/L (ó 130 – 159 mg/dL
· Alto: 1.60 – 1.89 g/L (ó 160 – 189 mg/dL)
· Muy alto: ≥ 1.90 g/L (ó ≥ 190 mg/dL).
DISCUSIÓN:
El estudiante discute o analiza los resultados. Para ello los interpreta comparándolos y verificándolos respecto al marco teórico (principios teórico-prácticos, teorías y leyes que existen para la temática de los resultados) que se encuentra principalmente en libros, y con respecto a los antecedentes (trabajos de investigación alusivos al tema) que se encuentran fundamentalmente en artículos publicados. El marco teórico y los antecedentes se encuentran en las referencias bibliográficas, las cuales deben ser citadas en la discusión.
CONCLUSIONES:
El estudiante, en base a lo realizado en la discusión, elabora conclusiones cortas y puntuales las cuales se enuncian según las competencias a alcanzar en la presente práctica.
Nota: Mínimo deben elaborarse 3 conclusiones por tema.
PREGUNTAS DE APLICACIÓN:
1) Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.
2) Identifique los componentes del sistema enzimático empleado en la práctica y señale sus principales características.
3) ¿Cuál es el fundamento bioquímico para el tratamiento del incremento de los niveles de LDL?
4) ¿Cuáles son las causas primarias y secundarias del aumento del LDL-colesterol?
5) Esquematice la síntesis del LDL-colesterol.
6) Haga un esquema explicando cuál es el rol del LDL en la aterogénesis.
7) Haga una interpretación global del perfil lipídico de ambos pacientes.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.
2) Nelson D, Cox M. Lehninger. Principios de Bioquímica. 6ta Edición, Editorial Omega, España, 2011
3) Huamán-Saavedra J. Laboratorio clínico. Procedimiento e interpretación, 2 edición Edit. Universitaria. Trujillo, 2018.
4) Ecuación de Friedewald para lipoproteínas de baja densidad (C-LDL)-Calculadora en línea. Disponible: https://www.msdmanuals.com/es-cr/professional/multimedia/clinical-calculator/clinicalcalculator_es_v13948925_es