Práctica 8-Determinación de urea, creatinina y transaminasas(1) (2)

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B
ioenergética y metabolismo de glúcidos, lípidos, aminoácidos, proteínas y nucleótidos
) (
Segunda Unidad
)
 (
PRACTICA N°08
)
 - DETERMINACION DE ÚREA, CREATININA Y TRANSAMINASAS --
INTRODUCCION:
El metabolismo del nitrógeno tiene utilidad clínica en la determinación del perfil renal, que se define como un conjunto de pruebas de laboratorio necesarias para evaluar la función de los riñones mediante las cuales se miden niveles séricos de sustancias como electrolitos, minerales, proteínas y glucosa.
COMPETENCIAS A LOGRAR POR EL ESTUDIANTE:
· Determina la concentración sérica de urea, empleando de manera responsable el método de la ureasa.
· Determina la concentración sérica de creatinina, empleando de manera responsable la técnica del ácido pícrico en la reacción de Jaffé.
· Determina la concentración sérica de transaminasa glutámico pirúvica (GPT) o alanina aminotransferasa (ALT), empleando de manera responsable la técnica enzimática de la GPT.
· Determina la concentración sérica de transaminasa glutámico oxalacética (GOT) o aspartato aminotransferasa (AST), empleando de manera responsable la técnica enzimática de la GOT.
MATERIAL Y EQUIPOS
· Material de vidrio: tubos de ensayo, pipetas milimétricas.
· Equipo de extracción de muestra: guantes, alcohol, algodón, agujas N° 20, jeringas x 5 cc.
· Equipos: centrífuga, micropipetas x 10 ul, baño maría, espectrofotómetro.
DETERMINACIÓN DE UREA
INTRODUCCIÓN:
La urea, es el principal producto del catabolismo de las proteínas y se distribuye en todos los tejidos. Normalmente no tiene función útil en el organismo, es sintetizada en el hígado y excretado casi enteramente por los riñones (20 a 40 gramos). La urea en el plasma es filtrada por los glomérulos renales, pero en condiciones normales aproximadamente el 40% de este filtrado regresa por difusión a la sangre. La importancia clínica de la urea viene del hecho de una elevada concentración sanguínea puede estar asociada con una mala función renal. El grado de azoemia depende de la extensión y tipo de lesión renal.
La concentración de la urea en la corriente sanguínea es el resultado del balance entre el grado de degradación de las proteínas y el grado de eliminación por los riñones. Los valores normales de urea en suero (como nitrógeno ureico sanguíneo o BUN) es de 9 – 19 mg/100 ml. Las concentraciones de urea en sangre total, suero o plasma, son muy similares. La uremia es determinada colorimétricamente por el uso de ureasa. Este método es altamente específico y aunque está basado en reacciones de urea, es convencionalmente reportado como nitrógeno ureico. 
Los valores de urea se reportan siguiendo la siguiente fórmula: Nitrógeno ureico sanguíneo x 2,14 = UREA
En sentido inverso, conociendo los valores de urea, se informa el BUN según la siguiente fórmula:
Urea x 0,4665 = Nitrógeno ureico sanguíneo
El fundamento de la técnica para la determinación de urea en sangre se basa en la siguiente secuencia de recciones:
 (
pH
Alcalino
) (
Ureasa
)
Urea		 CO2 + NH3			NH3 + Salicilato + Hipoclorito			 Indofenol (verde)
MUESTRA Y REACTIVOS A EMPLEAR:
· Muestra: suero sanguíneo.
· Estándar (S): solución de urea = 0.60 g/l (28.04 mg/dl de BUN).
· Reactivo A: Solución conteniendo buffer fosfatos 200 mmol/l, ácido salicílico 750 mmmol/l, nitroprusiato de sodio 20 mmol/l y EDTA 10 mmol/l.
· Reactivo B: solución concentrada de hipoclorito de sodio 10 mmol/l en hidróxido de sodio 0.1 mol/l
· Reactivo C: ureasa ≥ 75 U/ml en solución glicerada.
PROCEDIMIENTO:
1) Obtención de la muestra:
Desinfectar la zona con alcohol y extraer de 3 a 5 mL de sangre de la vena de la flexura del codo utilizando una jeringa de 5ml y aguja hipodérmica N°21G x 1 ½, de dos pacientes en ayunas. Dejar en reposo por 10 minutos para la coagulación de la sangre, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugar a 2,500-3,000 rpm durante 10 minutos. Separar el suero con una pipeta serológica de plástico descartable.
2) Sistema de incubación para la determinación de urea: Preparar el siguiente sistema agregando lo que se indica en 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) y D (Desconocido o Problema).
	COMPONENTES Y PROCESO
	TUBOS DE ENSAYO
	
	B
	S
	D
	Muestra (suero / µl)
	--
	--
	10
	Estándar (µl)
	--
	10
	--
	Reactivo A + C (ml)
	1.0
	1.0
	1.0
	Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 10 minutos a temperatura ambiente (18 a 25 °C). Luego agregar:
	Reactivo B (ml)
	1.0
	1.0
	1.0
	Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 10 minutos a temperatura ambiente (18 a 25 °C). Leer en espectrofotómetro a 570 nm dentro del plazo de una hora.
RESULTADOS:
1) Sistema de incubación para la determinación de urea: Luego de la incubación del sistema, se observa lo siguiente:
 (
D
) (
B
)
2)	Valoración cuantitativa de la urea:
· Expresión de los resultados: Los resultados se expresan en términos de gramos de urea por litro de sangre (g/L) o miligramos de urea por decilitro de sangre (mg/dL), lo cual se determina mediante la siguiente fórmula:
 (
Urea
 = (Factor) (Lectura de
 
l
a muestra
)
)
Factor para g/L = .............................
Lectura St (Lectura de absorbancia del estándar de colesterol): 0.306
· Tabulación/Registro de los resultados:
	Muestra
	Lectura de absorbancia
	Uremia: [Urea]
	
	
	g/L
	mg/dL
	Suero sanguíneo
	0.145
	1.96 x 0.145 = 0.2842 
	28.42
Interpretar los resultados en base a la competencia, según los valores referenciales: 0.10 – 0.50 g/L (o 10 - 50 mg/dL)
DISCUSIÓN:
El estudiante discute o analiza los resultados. Para ello los interpreta comparándolos y verificándolos respecto al marco teórico (principios teórico-prácticos, teorías y leyes que existen para la temática de los resultados) que se encuentra principalmente en libros, y con respecto a los antecedentes (trabajos de investigación alusivos al tema) que se encuentran fundamentalmente en artículos publicados. El marco teórico y los antecedentes se encuentran en las referencias bibliográficas, las cuales deben ser citadas en la discusión.
CONCLUSIONES:
El estudiante, en base a lo realizado en la discusión, elabora conclusiones cortas y puntuales las cuales se enuncian según las competencias a alcanzar en la presente práctica.
Nota: Mínimo deben elaborarse 3 conclusiones por tema.
PREGUNTAS DE APLICACIÓN:
1) Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.
2) Identifique los componentes del sistema enzimático empleado en la práctica y señale sus principales características.
3) ¿Qué influencia tiene la ingesta proteica sobre la concentración sérica de urea?
4) ¿Qué alteraciones en las concentraciones séricas de urea y amoniaco podrían encontrarse en el coma hepático?
5) ¿Cuál es la importancia metabólica de la existencia del ciclo de la ornitina en el hígado de los seres humanos?
6) Esquematice y explique el ciclo de la urea.
7) Elabore un esquema y explique ciclo de la ornitina.
DETERMINACIÓN DE CREATININA
INTRODUCCIÓN:
La creatina, precursora de la creatinina, aumenta en el cuerpo humano fundamentalmente por síntesis, aunque una pequeña cantidad pre formada es ingerida con los alimentos. La creatina fosfato se forma en los miocitos y es un compuesto importante como fuente de energía en la contracción muscular. Aproximadamente 2% de la creatina fosfato muscular es convertida en creatinina diariamente; la cantidad total depende de la masa muscular. La creatinina es fácilmente difusible y es igualmente distribuida en el agua corporal. Es excretada fundamentalmente por el riñón el cual clarifica el plasma de creatinina. La concentración de creatinina en suero no es afectada por la dieta, catabolismo de proteínas, edad, sexo o ejercicios. Elevadas concentraciones se producen solamente cuando la función renal está muy alterada y aunque el mismo tipo de información acerca del diagnóstico y pronóstico se obtiene por la determinación de nitrógeno ureico o creatinina, esta última determinación se prefiere porque proporciona mayor información relacionada con el estado de lafunción renal, ya que los niveles de creatinina sérica dependen del grado de excreción, siendo la producción endógena constante.
El suero es depurado de creatinina en el riñón por filtración glomerular proporcionando una buena base para el test de clearance. La concentración normal en suero varía de 0,5 a 1,4 mg /100 ml. El clearence de creatinina normal es mayor de 100 ml / min.
La determinación de creatinina tiene utilidad en la práctica médica para la evaluación de la función renal, la cual puede alterarse por diversas causas; las que pueden ser de origen pre renal como el shock o la insuficiencia cardíaca; renal, como las glomerulonefritis o la nefropatía diabética o post renal, como las uropatías obstructivas. 
El fundamento de la técnica para la determinación de creatinina se basa en lo siguiente: La creatinina en medio alcalino reacciona con el ácido pícrico produciendo un cromógeno de picrato de creatinina de color rojo (Reacción de Jaffé). La determinación se realiza en un filtrado de proteínas obtenido a partir del suero (desproteinizado).
MUESTRA Y REACTIVOS A EMPLEAR:
· Muestra: suero sanguíneo.
· Estándar (S): solución de creatinina = 20 mg/l.
· Reactivo A: Ácido pícrico 41.4 mmol/l.
· Reactivo B: Buffer glicina/NaOH 1mol/l.
PROCEDIMIENTO:
1) Obtención de la muestra:
Desinfectar la zona con alcohol y extraer de 3 a 5 mL de sangre de la vena de la flexura del codo utilizando una jeringa de 5ml y aguja hipodérmica N°21G x 1 ½, de dos pacientes en ayunas. Dejar en reposo por 10 minutos para la coagulación de la sangre, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugar a 2,500-3,000 rpm durante 10 minutos. Separar el suero con una pipeta serológica de plástico descartable.
2) Sistema de desproteinización e incubación para la determinación de creatinina: Preparar el siguiente sistema agregando lo que se indica, primero en un tubo de ensayo, luego en 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) y D (Desconocido o Problema).
	Desproteinización del suero: Colocar en un tubo 0.4 ml de suero y agregar 2 ml de Reactivo A. Mezclar por inversión. Dejar en reposo durante 10 minutos y luego centrifugar a 3000 rpm por cinco minutos. Transcurrido el tiempo armar el siguiente sistema:
	COMPONENTES Y PROCESO
	TUBOS DE ENSAYO
	
	B
	S
	D
	Desproteinizado (ml)
	--
	--
	1.5
	Estándar (ml)
	--
	0.25
	--
	Agua Destilada (ml)
	0.5
	0.25
	--
	Reactivo A (ml)
	1.0
	1.0
	--
	Reactivo B (ml)
	0.25
	0.25
	0.25
	Mezclar por inversión. Incubar 20 minutos a temperatura ambiente. Luego leer en espectrofotómetro a 510 nm, llevando el aparato a cero con el Blanco o con agua destilada (se debe restar la absorbancia del B de las absorbancias del S y D).
RESULTADOS:
1) Sistema de incubación para la determinación de creatinina: Luego de la incubación del sistema, se observa lo siguiente:
 (
D
) (
B
)
2)	Valoración cuantitativa de la creatinina:
· Expresión de los resultados: Los resultados se expresan en términos de miligramos de creatinina por litro de sangre (mg/L) o miligramos de creatinina por decilitro de sangre (mg/dL), lo cual se determina mediante la siguiente fórmula:
 (
Creatinina
 = (Factor) (Lectura de
 
l
a muestra
)
)
Factor para g/L = .............................
Lectura St (Lectura de absorbancia del estándar de colesterol): 0.031
· Tabulación/Registro de los resultados:
	Muestra
	Lectura de absorbancia
	[Creatinina]
	
	
	mg/L
	mg/dL
	Suero sanguíneo
	0.060
	645.16 x 0.060 = 38.70 
	3.870
Interpretar los resultados en base a la competencia, según los valores referenciales: 8 – 14 mg/L (ó 0.8 – 1.4 mg/dL)
DISCUSIÓN:
El estudiante discute o analiza los resultados. Para ello los interpreta comparándolos y verificándolos respecto al marco teórico (principios teórico-prácticos, teorías y leyes que existen para la temática de los resultados) que se encuentra principalmente en libros, y con respecto a los antecedentes (trabajos de investigación alusivos al tema) que se encuentran fundamentalmente en artículos publicados. El marco teórico y los antecedentes se encuentran en las referencias bibliográficas, las cuales deben ser citadas en la discusión.
CONCLUSIONES:
El estudiante, en base a lo realizado en la discusión, elabora conclusiones cortas y puntuales las cuales se enuncian según las competencias a alcanzar en la presente práctica.
Nota: Mínimo deben elaborarse 3 conclusiones por tema.
PREGUNTAS DE APLICACIÓN:
1) Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.
2) Identifique los componentes del sistema de incubación empleado en la práctica y señale sus principales características.
3) ¿Por qué se prefiere la determinación de creatinina urinaria a la de nitrógeno ureico?
4) ¿Por qué se prefiere suero y no sangre total para la determinación de creatinina?
5) ¿Qué importancia tiene, determinar el clearence de creatinina?
6) Esquematice y explique la formación de creatinina.
7) Elabore un esquema de la molécula de creatinina y explique sus componentes.
DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASA GLUTÁMICO PIRÚVICA O ALANINA AMINOTRANSFERASA (ALT)
INTRODUCCIÓN:
La transaminasa glutámica pirúvica (GPT), llamada también alanina aminotransferasa (ALT) cataliza la reacción de transaminación de alanina y alfacetoglutarato formando como productos piruvato y glutamato. Esta enzima es exclusivamente citoplasmática y es más específica de daño hepático o renal.
También se encuentra presente en el tejido muscular y puede aumentar en Hepatitis aguda, GPT>GOT, generalmente >500 U/l. Hepatitis crónica: GPT>, <300 U/l. Hepatitis alcohólica y cirrosis hepática, GOT: GPT >2, sugestivo e Ictericia obstructiva: discreto aumento. Otras causas: en daño muscular la AST aumenta en forma significativa y la ALT menos, igualmente con la hemólisis. La AST aumenta en el infarto de miocardio
El fundamento de la técnica para la determinación de transaminasa ALT en suero sanguíneo se basa en la siguiente reacción:
 (
GPT
)
L-alanina + alfa cetoglutarato 		 L- Glutamato + Piruvato
El piruvato reacciona con la fenilhidrazina dando un compuesto coloreado en medio alcalino que se lee a 505 nm.
MUESTRA Y REACTIVOS A EMPLEAR:
· Muestra: Suero sanguíneo
· Estándar (S): solución de piruvato de sodio 2 mmol/l.
· Reactivo A: solución con 200 mM de dl-alanina y 2 mM de α-cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mM, pH 7,4
· Reactivo B: solución conteniendo 1 mmol de 2,4-dinitrofenilhidracina (2,4-DNFH) en ácido clorhídrico 1 mol/l.
· Reactivo C: solución de hidróxido de sodio 4 mol/l.
PROCEDIMIENTO:
1) Obtención de la muestra:
Desinfectar la zona con alcohol y extraer de 3 a 5 mL de sangre de la vena de la flexura del codo utilizando una jeringa de 5ml y aguja hipodérmica N°21G x 1 ½, de dos pacientes en ayunas. Dejar en reposo por 10 minutos para la coagulación de la sangre, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugar a 2,500-3,000 rpm durante 10 minutos. Separar el suero con una pipeta serológica de plástico descartable.
2) Sistema de incubación para la determinación de transaminasa GPT: Preparar el siguiente sistema agregando lo que se indica, primero en 2 tubos de ensayo marcados con B (Blanco) y D (Desconocido o Problema).
	COMPONENTES Y PROCESO
	TUBOS DE ENSAYO
	
	B
	D
	Reactivo A: GPT (ml)
	0.5
	0.5
	Colocar en baño de agua a 37°C unos cinco minutos.
	Muestra: Suero (µl)
	--
	100
	Agua Destilada (µl)
	100
	
	Mezclar por agitación suave e incubar exactamente 30 minutos y luego agregar:
	Reactivo B (ml)
	0.5
	0.5
	Mezclar. Dejar 10 minutos a 37°C. Luego agregar:
	Reactivo C: diluido (ml)
	5
	5
	Mezclar por inversión y retirar del baño. Después de 2 minutos leer la absorbancia en espectrofotómetro a 505 nm, llevando el aparato a cero con agua destilada.
3) Curva de Calibración para GPT:
· Se construye usando diferentes concentraciones del estándar (piruvato de sodio) de acuerdo al protocolo señalado por el laboratorio.
	Tubo
	Estándar (mL)
	Reactivo A (m)
	Agua destilada (mL)
	1
	0.00
	1.000.2
	2
	0.05
	0.95
	0.2
	3
	0.10
	0.90
	0.2
	4
	0.15
	0.85
	0.2
	5
	0.20
	0.80
	0.2
	6
	0.25
	0.75
	0.2
	7
	0.30
	0.70
	0.2
	8
	0.40
	0.60
	0.2
	9
	0.50
	0.50
	0.2
· Calcular la absorción neta de cada actividad.
· Graficar la curva de calibración.
RESULTADOS:
1) Sistema de incubación para la determinación de transaminasa GPT: Luego de la incubación del sistema, se observa lo siguiente:
 (
B
) (
D
)
2)	Valoración cuantitativa de la transaminasa GPT:
· Elaboración de la curva de calibración:
Corrección de lecturas: Se calcula la absorbancia neta de cada actividad, restando a cada lectura (tubos 2 al 9) la obtenida con el tubo Nº 1.
	Tubo
	Actividad:
Unidades (U/L)
	Absorbancia
	Absorbancia Neta
	1
	0
	0.217
	0.000
	2
	9
	0.264
	0.047
	3
	18
	0.339
	0.122
	4
	25
	0.384
	0.167
	5
	37
	0.464
	0.247
	6
	46
	0.519
	0.302
	7
	56
	0.563
	0.346
	8
	79
	0.679
	0.462
	9
	113
	0.786
	0.569
Gráfico de la curva de calibración: En papel milimetrado, trazar un sistema de coordenadas colocando en el eje vertical (de ordenadas) las lecturas corregidas (absorbancia neta) y en el horizontal (de abscisas) las actividades para GPT. Determinar en el gráfico los puntos correspondientes a cada tubo y unirlos para obtener la curva para GPT.
· Valoración de la actividad de la transaminasa GPT: Restar la absorbancia del Desconocido – Blanco para obtener su absorbancia neta. Calcular la actividad de GPT para la muestra analizada, proyectando la absorbancia neta, primero hacia la curva de calibración y, luego, hacia el eje de abscisas. Los resultados se expresan en términos de unidades de transaminasa GPT por litro de sangre (U/L). Tabular/registrar los resultados.
	Muestra
	Lecturas de absorbancia
	Transaminasa GPT, U/L
	
	Blanco
	Desconocido
	Neta
	
	Suero sanguíneo
	0.223
	0.517
	0.294
	
Interpretar los resultados en base a la competencia, según los valores referenciales: Hasta 12 U/L
Nota: Se han hallado individuos normales con valores hasta 18 U/L; sin embargo, niveles de 12 a 18 U/L deben considerarse sospechosos.
DISCUSIÓN:
El estudiante discute o analiza los resultados. Para ello los interpreta comparándolos y verificándolos respecto al marco teórico (principios teórico-prácticos, teorías y leyes que existen para la temática de los resultados) que se encuentra principalmente en libros, y con respecto a los antecedentes (trabajos de investigación alusivos al tema) que se encuentran fundamentalmente en artículos publicados. El marco teórico y los antecedentes se encuentran en las referencias bibliográficas, las cuales deben ser citadas en la discusión.
CONCLUSIONES:
El estudiante, en base a lo realizado en la discusión, elabora conclusiones cortas y puntuales las cuales se enuncian según las competencias a alcanzar en la presente práctica.
Nota: Mínimo deben elaborarse 3 conclusiones por tema.
DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASA GLUTÁMICO OXALACÉTICA O ASPARTATO AMINOTRANSFERASA (AST)
INTRODUCCIÓN:
Aspartato amino transferasa (AST) o Transaminasa glutámico oxalacética (GOT), es una enzima citoplasmática y mitocondrial presente en los hepatocitos, pero también en las células de otros tejidos como corazón, músculo esquelético y riñón. Se emplea en el diagnóstico de hepatitis aguda igual que la TGP. En hepatitis alcohólica y cirrosis en donde la relación GOT/GPT se invierte.
El fundamento de la técnica para la determinación de transaminasa AST en suero sanguíneo se basa en la siguiente reacción:
 (
GOT
)
L-aspartato + alfa cetoglutarato 		 L- Glutamato + Oxalacetato
El oxalacetato se convierte en piruvato, el cual reacciona con la fenilhidracina formando un compuesto de color marrón en medio alcalino, el que se lleva a lectura en el espectrofotómetro a 505 nm.
MUESTRA Y REACTIVOS A EMPLEAR:
· Muestra: Suero sanguíneo
· Estándar (S): solución de piruvato de sodio 2 mmol/l.
· Reactivo A: solución con 100 mM de l-aspartato y 2 mM de α-cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mM, pH 7,4
· Reactivo B: solución conteniendo 1 mmol de 2,4-dinitrofenilhidracina (2,4-DNFH) en ácido clorhídrico 1 mol/l.
· Reactivo C: solución de hidróxido de sodio 4 mol/l.
PROCEDIMIENTO:
1) Obtención de la muestra:
Desinfectar la zona con alcohol y extraer de 3 a 5 mL de sangre de la vena de la flexura del codo utilizando una jeringa de 5ml y aguja hipodérmica N°21G x 1 ½, de dos pacientes en ayunas. Dejar en reposo por 10 minutos para la coagulación de la sangre, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugar a 2,500-3,000 rpm durante 10 minutos. Separar el suero con una pipeta serológica de plástico descartable.
2) Sistema de incubación para la determinación de transaminasa GOT: Preparar el siguiente sistema agregando lo que se indica, primero en 2 tubos de ensayo marcados con B (Blanco) y D (Desconocido o Problema).
	COMPONENTES Y PROCESO
	TUBOS DE ENSAYO
	
	B
	D
	Reactivo A: GOT (ml)
	0.5
	0.5
	Colocar en baño de agua a 37°C unos cinco minutos.
	Muestra: Suero (µl)
	--
	100
	Agua Destilada (µl)
	100
	
	Mezclar por agitación suave e incubar exactamente 30 minutos y luego agregar:
	Reactivo B (ml)
	0.5
	0.5
	Mezclar. Dejar 10 minutos a 37°C. Luego agregar:
	Reactivo C: diluido (ml)
	5
	5
	Mezclar por inversión y retirar del baño. Después de 2 minutos leer la absorbancia en espectrofotómetro a 505 nm, llevando el aparato a cero con agua destilada.
3) Curva de Calibración para GOT:
· Se construye usando diferentes concentraciones del estándar (piruvato de sodio) de acuerdo al protocolo señalado por el laboratorio.
	Tubo
	Estándar (mL)
	Reactivo A (m)
	Agua destilada (mL)
	1
	0.00
	1.00
	0.2
	2
	0.05
	0.95
	0.2
	3
	0.10
	0.90
	0.2
	4
	0.15
	0.85
	0.2
	5
	0.20
	0.80
	0.2
	6
	0.25
	0.75
	0.2
	7
	0.30
	0.70
	0.2
	8
	0.40
	0.60
	0.2
	9
	0.50
	0.50
	0.2
· Calcular la absorción neta de cada actividad.
· Graficar la curva de calibración.
RESULTADOS:
1) Sistema de incubación para la determinación de transaminasa GOT: Luego de la incubación del sistema, se observa lo siguiente:
 (
D
) (
B
)
2)	Valoración cuantitativa de la transaminasa GOT:
· Elaboración de la curva de calibración:
Corrección de lecturas: Se calcula la absorbancia neta de cada actividad, restando a cada lectura (tubos 2 al 8) la obtenida con el tubo Nº 1.
	Tubo
	Actividad:
Unidades (U/L)
	Absorbancia
	Absorbancia Neta
	1
	0
	0.223
	0.000
	2
	7
	0.269
	0.046
	3
	12
	0.295
	0.072
	4
	20
	0.327
	0.104
	5
	28
	0.358
	0.135
	6
	37
	0.389
	0.166
	7
	48
	0.426
	0.203
	8
	81
	0.510
	0.287
Gráfico de la curva de calibración: En papel milimetrado, trazar un sistema de coordenadas colocando en el eje vertical (de ordenadas) las lecturas corregidas (absorbancia neta) y en el horizontal (de abscisas) las actividades para GOT. Determinar en el gráfico los puntos correspondientes a cada tubo y unirlos para obtener la curva para GOT.
· Valoración de la actividad de la transaminasa GOT: Restar la absorbancia del Desconocido – Blanco para obtener su absorbancia neta. Calcular la actividad de GOT para la muestra analizada, proyectando la absorbancia neta, primero hacia la curva de calibración y, luego, hacia el eje de abscisas. Los resultados se expresan en términos de unidades de transaminasa GOT por litro de sangre (U/L). Tabular/registrar los resultados.
	Muestra
	Lecturas de absorbancia
	Transaminasa GOT, U/L
	
	Blanco
	Desconocido
	Neta
	
	Suero sanguíneo
	0.229
	0.384
	0.155
	
Interpretar los resultados en base a la competencia, según los valores referenciales: Hasta 12 U/L
Nota: Se han hallado individuos normales con valores hasta 18 U/L; sin embargo, niveles de 12 a 18 U/L deben considerarse sospechosos.
DISCUSIÓN:
El estudiante discute o analiza los resultados. Para ello los interpreta comparándolos y verificándolos respecto al marco teórico (principios teórico-prácticos, teorías y leyes que existen para la temática de los resultados) que se encuentra principalmente en libros, y con respecto a los antecedentes (trabajos de investigación alusivos al tema) que se encuentran fundamentalmenteen artículos publicados. El marco teórico y los antecedentes se encuentran en las referencias bibliográficas, las cuales deben ser citadas en la discusión.
CONCLUSIONES:
El estudiante, en base a lo realizado en la discusión, elabora conclusiones cortas y puntuales las cuales se enuncian según las competencias a alcanzar en la presente práctica.
Nota: Mínimo deben elaborarse 3 conclusiones por tema.
PREGUNTAS DE APLICACIÓN:
1) Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.
2) Identifique los componentes del sistema empleado en la práctica y señale sus principales características.
3) ¿Cuál es la utilidad de las transaminasas en el diagnóstico médico?
4) ¿Cuál es el rol del piridoxal fosfato en la transaminación?
5) ¿Cuál es la ubicación intracelular de las transaminasas GPT y GOT?
6) Esquematice la transaminación y explique sus características.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.
2) Nelson D, Cox M. Lehninger. Principios de Bioquímica. 6ta Edición, Editorial Omega, España, 2011
Nota: Mínimo deben revisar y consignar 3 referencias bibliográficas, las cuales deben estar citadas en la discusión. Emplear las normas Vancouver.
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