GUÍA Q A APLICADA 2017

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Trabajos Prácticos De Laboratorio 
 QUÍMICA ANALÍTICA APLICADA 
 
 
 
Profesores: 
 
 Lic. Ceres Beatriz Andisco 
 Bioq. Laura Inés Stella 
 Far. Juan Mario Delgado 
 Ing. Laura Cecilia Gómez Pamies 
Año 2017 
 
 UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA NACIONAL 
FACULTAD REGIONAL RESISTENCIA 
INGENIERÍA QUÍMICA 
 
 
1 
 
 
Química Analítica Aplicada - 2017 
 
ÍNDICE 
 
NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO ...................................................... 2 
GENERALIDADES ................................................................................................................... 3 
SUGERENCIAS PARA LA TOMA DE MUESTRA ................................................................. 3 
PROPIEDADES GENERALES DE LA MUESTRA ................................................................ 3 
SÓLIDOS SEDIMENTABLES ............................................................................................... 4 
RESIDUO TOTAL POR EVAPORACIÓN ........................................................................... 6 
ALCALINIDAD ......................................................................................................................... 8 
DETERMINACIÓN DE CLORUROS ................................................................................. 10 
OXÍGENO CONSUMIDO ...................................................................................................... 12 
GRASAS Y ACEITES.............................................................................................................. 16 
PRETRATAMIENTO ............................................................................................................ 19 
FOSFATOS ............................................................................................................................... 20 
NITRÓGENO AMONIACAL ................................................................................................ 21 
NITRÓGENO DE NITRATOS ............................................................................................. 24 
NITRÓGENO DE NITRITOS ............................................................................................... 25 
DETERGENTES ..................................................................................................................... 26 
ANEXO ...................................................................................................................................... 27 
 FOSFATOS ...................................................................................................................... 27 
 NITRÓGENO AMONIACAL ........................................................................................ 30 
 NITRÓGENO DE NITRATOS ..................................................................................... 33 
 NITRÓGENO DE NITRITOS ...................................................................................... 36 
 DETERGENTES ............................................................................................................. 40 
 OXÍGENO CONSUMIDO .............................................................................................. 42 
 DEMANDA BIOQUÍMICA DE OXÍGENO (D.B.O5) .............................................. 42 
 OXÍGENO DISUELTO .................................................................................................. 54 
BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................................... 62 
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NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO 
 
NORMAS PARA UN TRABAJO EFICIENTE 
 
El alumno deberá: 
1) Ser puntual y no podrá ausentarse del laboratorio sin autorización del docente a 
cargo. 
2) Conocer los contenidos teóricos inherentes al trabajo práctico a desarrollar. 
3) Contar con un cuaderno de laboratorio (no se permitirán hojas sueltas) en el que tome 
nota de todas las observaciones que realice y los cálculos que desarrolle. 
4) Asistir con elementos de uso personal: trapo rejilla, fósforos, y accesorios de higiene 
personal. 
5) Antes de comenzar el trabajo práctico, controlar la presencia de todos aquellos 
elementos y materiales necesarios, como también su estado de funcionamiento y 
limpieza. 
6) Al terminar el trabajo, limpiar y ordenar todo el material utilizado y colaborar en la 
limpieza general del laboratorio. 
7) Presentar un informe escrito en el que consten los datos, observaciones y 
conclusiones del trabajo práctico. 
8) Para la ejecución de los trabajos prácticos se formarán comisiones de 2 (dos) alumnos 
como mínimo y 4 (cuatro) como máximo, que se mantendrán fijas durante todo el 
cuatrimestre. 
 
RECOMENDACIONES DE ÍNDOLE PERSONAL 
 
1) Esté familiarizado con la ubicación y uso de los elementos de seguridad con que 
cuenta el laboratorio (ducha, matafuegos, etc.). 
2) No se distraiga, ni distraiga a otros mientras está trabajando. La concentración es la 
mejor aliada. 
3) Está prohibido: 
 Tener y/o consumir bebidas alcohólicas en el laboratorio 
 Fumar 
 Comer 
 Correr dentro del laboratorio, salvo en casos de extrema urgencia. 
4) Cada grupo se responsabilizará de su zona de trabajo y de su material. 
5) Utilizar elementos de protección personal (guardapolvo, gafas, barbijo, guantes) 
6) Es muy aconsejable, si se tiene el cabello largo, llevarlo recogido o metido en la 
ropa, así como no llevar colgantes, bufandas, etc. todo tipo de accesorio que genere 
riesgos durante el desarrollo del práctico. 
7) Usar zapatos cerrados como medida preventiva. 
 
 
 
 
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GENERALIDADES 
 
SUGERENCIAS PARA LA TOMA DE MUESTRA 
 
Para la extracción de muestras de efluente líquido se debe utilizar un recipiente 
de vidrio o plástico con capacidad para 2 litros. Debe estar limpio, tener boca ancha y 
cierre hermético para evitar pérdidas por derrame. El recipiente deberá enjuagarse con 
el líquido y luego ser llenado por el mismo sin dejar cámara de aire. El recipiente con la 
muestra deberá refrigerarse y conservarse a oscuras hasta el análisis en el laboratorio. Se 
utilizarán como accesorios, en caso de necesidad, un balde y embudo para trasvasar el 
líquido residual. 
Cada recipiente deberá rotularse identificando la muestra con un número y 
acompañar con una hoja de datos complementarios donde deben figurar entre otros 
fecha, hora, sitio, cantidad, temperatura ambiente, etc. de cada muestra que se extraiga, 
como así también nombre del responsable de la extracción. 
Se deberán tomar medidas de precaución en la operación de muestreo como ser 
el uso de guantes, protección ocular y nasal por posibles salpicaduras, no fumar ni 
ingerir alimentos simultáneamente. 
Realizar el registro de datos obtenidos in situ como ser observaciones de 
aspecto, color, olor y, de ser posible, medidas como temperatura, oxígeno disuelto y pH. 
El sitio de muestreo debe tener la posibilidad de acceder a un efluente que esté 
fluyendo, el líquido no debe estar estanco. 
 
PROPIEDADES GENERALES DE LA MUESTRA 
 
1. OBSERVACIONES MACROSCÓPICAS: Especificar el aspecto general de la 
muestra: 
 
 Número de fases en la que se encuentra 
 Turbiedad 
 Existencia de grandes sólidos 
 Existencia de macro organismos 
 Espuma 
 
2. DETERMINACIONES FÍSICAS 
 
 pH 
 Conductividad 
 Temperatura 
 
3. PROPIEDADES ORGANOLÉPTICAS 
 
 Color 
 Olor 
 
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SÓLIDOS SEDIMENTABLES 
 
GENERALIDADES 
 
1- Los sólidos sedimentables totales de 
un líquido cloacal o residual son los sólidos 
de un litro de líquido que se sedimentan en 2 
horas en un cono de Imhoff. Esta 
determinación es de frecuente aplicación en 
las plantas de tratamiento cloacal, se suele 
usar una permanencia en el cono igual a la 
teórica en las unidades de sedimentación. 
 
2- Los sólidos sedimentables fijos son 
aquellos no volátiles a 600ºC en 15 minutos; 
los sólidos sedimentables volátiles son los 
que se volatilizan a la misma temperatura y 
en el mismo tiempo. Los sólidos fijos y volátiles corresponden respectivamente en 
forma aproximada a la materia mineral y orgánica. 
 
3- Los sólidos sedimentables totales se determinan en peso y en volumen. Los 
fijos y volátiles en peso solamente. 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
Sólidos sedimentables totales en volumen 
1. Agitar a fondo la muestra y verter un litro en un cono Imhoff. 
2. Dejar sedimentar el líquido durante 10 minutos y leer el volumen del sedimento. 
3. Dejar sedimentar el líquido hasta completar las 2 horas. 
4. Previamente a la lectura final, remover suavemente el sedimento de modo de 
llenar sus espacios vacíos. 
 
Sólidos sedimentables totales en peso 
1. Después de las 2 horas de sedimentación, sifonar el líquido sobrenadante y pasar 
el sedimento a una cápsula pesada previamente al miligramo. 
2. Evaporar en baño María. 
3. Secar en estufa a 105ºC durante una hora. 
4. Enfriar en desecador. 
5. Pesar al miligramo. 
 
Sólidos sedimentables fijos 
1. Calcinar los totales en una cápsula a 600ºC durante 15 minutos. 
2. Enfriar y pesar al miligramo. 
 
Cono Imhoff 
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EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS 
 
1. Los sólidos sedimentables totales en volumen se expresan en ml/l con la siguiente 
aproximación: 
- 0,1ml/l hasta 1ml/l 
- 0,5ml/l desde 1 ml/l hasta 5ml/l 
 
2. Los sólidos sedimentables fijos, volátiles y totales en peso se expresan en mg/l. 
 
CÁLCULOS 
 
Cuando los resultados se dan en peso, los cálculos se hacen con las siguientes 
fórmulas: 
 
 
 
 
 
 
Dónde: 
P1: peso de cápsula vacía [mg]; 
P2: peso de la cápsula más el sedimento secado a 105ºC [mg]; 
P3: peso de la cápsula más el sedimento calcinado a 600ºC [mg]. 
 
mg/l de sólidos sedimentables totales = P2 – P1 
mg/l de sólidos sedimentables fijos = P3 – P1 
mg/l de sólidos sedimentables volátiles = P2 – P3 
 
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RESIDUO TOTAL POR EVAPORACIÓN 
 
GENERALIDADES 
 
El residuo total por evaporación de un líquido cloacal o de un líquido residual es 
el peso de materias en suspensión y disueltas no volátiles a 105ºC contenidas en 1 litro 
de líquido. 
Los sólidos fijos de un líquido cloacal residual constituyen la parte de su residuo 
total no volátil a 600ºC en 15 minutos. Los sólidos volátiles son los que se volatilizan en 
las condiciones mencionadas. Los sólidos fijos y volátiles corresponden, 
respectivamente, en forma aproximada, a la materia mineral y orgánica contenida en la 
muestra. 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
Residuo total 
1. Agitar la muestra a fondo y enseguida tomar 25 o 50ml (V), dependiendo de la 
muestra, con probeta y verter en una cápsula de porcelana de suficiente capacidad 
previamente pesada el miligramo (P1). 
2. Pasar a una cápsula los sólidos que suelen quedar adheridos a la probeta, usando 
para esto pequeñas cantidades de agua destilada. 
3. Evaporar hasta sequedad en baño María. 
4. Llevar la cápsula a estufa a 105ºC durante una hora. 
5. Dejar enfriar en desecador. 
6. Pesar al miligramo (P2). 
 
Sólidos fijos 
1. Calcinar el residuo obtenido por evaporación en mufla a 600°C durante 15 
minutos. 
2. Dejar enfriar en desecador. 
3. Pesar al miligramo (P3). 
 
EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS 
 
El residuo total por evaporación, los sólidos fijos y los volátiles se expresan en 
mg/l. 
 
 
 
 
 
 
 
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CÁLCULOS 
 
 
 
 
 
 
 
Dónde: 
P1: peso de cápsula vacía [mg] 
P2: peso de la cápsula más el sedimento secado a 105ºC [mg] 
P3: peso de la cápsula más el sedimento calcinado a 600ºC [mg] 
V: volumen de muestra [ml] 
 
 
 
 
 Residuo total por evaporación en mg/l = (P2 – P1)*1000/V 
 Sólidos fijos en mg/l = (P3 – P1) *1000/V 
 Sólidos volátiles en mg/l = (P2 – P3) *1000/V 
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ALCALINIDAD 
 
GENERALIDADES 
 
La alcalinidad de un agua natural está habitualmente representada por su 
contenido en carbonatos y bicarbonatos. Eventualmente la alcalinidad puede deberse a 
la presencia de hidróxidos, boratos, silicatos y fosfatos. 
Dado que las soluciones acuosas de bicarbonatos tienen un pH próximo a 8,3 y las 
de ácido carbónico un pH 4,2, se eligen estos pH como puntos finales en las 
determinaciones de la alcalinidad de carbonatos y bicarbonatos, respectivamente. Como 
indicadores de estos puntos se utilizan generalmente, la fenolftaleína (pH = 8,3) y la 
heliantina (pH = 4,2). 
Para evitar errores de apreciación en los puntos finales de estas determinaciones, 
es conveniente efectuar la titulación teniendo a la vista una muestra “testigo” (la 
muestra utilizada con el indicador –sin titulante-). 
 
SOLUCIONES A PREPARAR 
 
 Solución de carbonato de sodio 0,02N. 
 Solución de ácido sulfúrico 0,2N aproximadamente, a partir de ácido sulfúrico p.a. 
(d=1,84). 
 Solución de ácido sulfúrico 0,02N a partir de la solución anterior. Valorar con la 
solución de carbonato de sodio y corregir convenientemente (calcular factor de 
corrección f). 
 Solución de fenolftaleína al 0,5% P/V: 
1- Disolver 5g de fenolftaleína pura en 500ml de alcohol etílico 96%. 
2- Completar el volumen hasta 1 litro con agua destilada. 
3- Alcalinizar con hidróxido de sodio 0,02N hasta ligera coloración rosada. 
 Solución de heliantina al 0,05%P/V. Guardar la solución en un frasco de vidrio 
color caramelo. 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
1. Añadir 0,2 ml de solución de fenolftaleína a 100ml de muestra (o un volumen 
menor según se considere conveniente). Una coloración rosada indica la presencia 
de carbonatos y, eventualmente, hidróxidos. En este caso, añadir con una bureta y 
gota a gota, solución de ácido sulfúrico 0,02N hasta cambio en la coloración 
(controlar con muestra testigo). Se designa por F el número de mililitros 
empleados. 
2. A la misma muestra empleada en la determinación anterior, agregar 2 gotas de 
solución de heliantina. Añadir luego gota a gota, solución de ácido sulfúrico 
0,02N hasta obtener cambio de coloración (controlar con muestra testigo). Se 
designa por H el número de mililitros empleados en esta determinación. 
 
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Si el número de mililitros utilizados en la titulación es superior a 25, conviene 
repetir la determinación sobre una alícuota de menor volumen de muestra (NO utilizar 
diluciones en esta técnica). 
 
 
CÁLCULOS Y EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS 
 
La alcalinidad se expresa en miligramos por litro de carbonato de calcio: 
mg/l CaCO3 
 
Los cálculos se efectúan según las indicaciones siguientes: 
 
 
 
 
 
Dónde: 
F: volumen utilizado en titulación con fenolftaleína [ml] 
H: volumen utilizado en titulación con heliantina [ml] 
V: volumen de muestra utilizado [ml] 
f: factor de corrección del ácido sulfúrico 0,02N. 
 
Alcalinidad de carbonatos= 2 F * f * 1000/V [mg/l] 
Alcalinidad de bicarbonatos = (H - F) * f * 1000/V [mg/l] 
 
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DETERMINACIÓN DE CLORUROS 
MÉTODO DE MOHR 
 
GENERALIDADES 
 
Al agregar iones plata a una solución de pH comprendido entre 7 y 10 que 
contenga iones cloruro y cromato, comienza a precipitar el cromato de plata cuando la 
precipitación del cloruro de plata está prácticamente terminada, es decir, cuando la 
concentración de iones cloruros es despreciable desde el punto de vista analítico. Esto 
permite considerar la aparición del precipitado rojo de cromato de plata como una 
indicación del punto final de la reacción entre los iones cloruros y los iones plata. 
 
2Ag
+
 + CrO4
2- 
→ Ag2CrO4(s) 
 
SOLUCIONES A PREPARAR 
 
 Solución 0,0282N de nitrato de plata. 
Guardar en frasco de vidrio color caramelo. Valorar con solución de cloruro de 
sodio, y calcular y considerar el factor de corrección. 
 Solución 0,0282N de cloruro de sodio. (1ml = 1mg de Cl-). 
 Solución de cromato de potasio 5% P/V. 
 Bicarbonato de sodio para análisis. 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
1. Filtrar el agua, si contiene materias en suspensión. 
2. Medir 100ml de la muestra o de una dilución de la misma. Si el pH de ésta es 
inferior a 7 añadir aproximadamente 1g de bicarbonato de sodio. 
3. Agregar 1ml de la solución de cromato de potasio. 
4. Valorar añadiendo gota a gota la solución de nitrato de plata hasta coloración 
rojiza apenas perceptible. 
5. Realizar el ensayo en blanco. 
 
Si el número de mililitros utilizados en la titulación es superior a 25, repetir la 
determinación sobre una alícuota de la muestra diluida en forma adecuada. 
 
 
 
 
 
 
 
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CÁLCULOS Y EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS 
 
 
 
 
 
Dónde: 
n: volumen de solución de nitrato de plata utilizados en la titulación [ml] 
b: volumen de solución titulante consumidos en el ensayo en blanco [ml] 
V: volumen de muestra original [ml]. 
f: factor del nitrato de plata. 
 
Los resultados se expresan sin decimales. 
 
Cl
-
 [mg/l] = [(n – b) * 1000 * f]/V 
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OXÍGENO CONSUMIDO 
 
GENERALIDADES 
 
Se llama oxígeno consumido al oxígeno del permanganato de potasio que 
consume un agua cuando se la trata con este reactivo en condiciones determinadas. 
Puesto que el resultado del ensayo depende apreciablemente de estas condiciones 
(temperatura y tiempo de calentamiento, concentración de los reactivos, etc.), es 
imprescindible practicar la determinación ajustándose rigurosamente a ellas. 
El ensayo tiene por objeto medir en forma aproximada la materia orgánica 
existente en el agua, por lo cual, si ésta contiene sustancias minerales reductoras del 
permanganato, debe efectuarse la corrección correspondiente (ver instructivo de 
trabajo). 
El consumo de oxígeno proporciona un índice del grado de contaminación, 
concentración o carga de la muestra, de suma utilidad cuando no se practica la DBO o 
aún como dato complementario de ésta última. 
 
SOLUCIONES A PREPARAR 
 
 Agua destilada sobre permanganato de potasio. 
1- Agregar al agua destilada común 1g/l de permanganato de potasio e igual 
cantidad de carbonato de sodio. 
2- Redestilar en aparato de vidrio. 
 Solución 0,0125N de ácido oxálico (C2O4H2.2H2O). 
La solución no es estable debiéndose renovar mensualmente. 
 Solución de ácido sulfúrico (1+3). 
 Solución estabilizada de permanganato de potasio 0,1N: 
1- Pesar 3,160g de KMnO4. 
2- Disolver en agua destilada. 
3- Estabilizar a ebullición, durante 2 horas, reponiendo el agua que se evapora. 
4- Dejar enfriar. 
5- Filtrar por Buchner. 
6- Diluir a 1 litro con agua destilada. 
 
Valoración de la solución de permanganato de potasio 0,1 N 
1- En erlenmeyer de 300ml, colocar aproximadamente 100ml de agua destilada y 
5ml de ácido sulfúrico 1+3. 
2- Agregar 0,5ml de la solución de permanganato que se va a valorar. 
3- Calentar a ebullición durante 5 minutos. 
4- Decolorar con 0,5ml de ácido oxálico 0,1N. 
5- Agregar solución de permanganato, gota a gota, hasta débil color rosado. 
6- Agregar 25ml de la solución de ácido oxálico 0,1N. 
7- Titular con la solución de permanganato de potasio, hasta débil coloración 
rosada. 
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 Solución 0,0125N de permanganato de potasio a partir de KMnO4 0,1N. 
1ml = 0,1mg de oxígeno. 
Se conserva en frasco de vidrio color caramelo. 
 
Valoración de la solución de permanganato de potasio 0,0125N: 
1- Colocar en un erlenmeyer 10ml (exactamente medidos) de la solución de ácido 
oxálico 0,0125N, 100ml de agua destilada sobre permanganato y 10ml de ácido 
sulfúrico 1+3. 
2- Calentar a 60-80ºC. 
3- Efectuar la valoración añadiendo la solución de permanganato de potasio hasta 
obtener una débil coloración rosada persistente. Calcular y considerar el factor de 
corrección. 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
1. En un erlenmeyer de volumen adecuado verter 100ml de muestra (o un volumen 
menor llevado a 100ml con agua destilada sobre permanganato), 10ml 
exactamente medidos de solución de permanganato y 10ml de solución de ácido 
sulfúrico 1+3. 
2. Sumergir el erlenmeyer en un baño de agua hirviente, cuidando que el nivel del 
agua en el baño sobrepase el nivel del líquido en el erlenmeyer para una correcta 
calefacción. 
3. Transcurridos 30 minutos de calefacción la solución debe presentar una débil 
coloración rosada. Si la solución está fuertemente coloreada o no está coloreada, 
la dilución de trabajo no es la correcta y se debe corregir según el caso. 
4. Retirar el erlenmeyer del baño, agregar 10ml de solución de ácido oxálico, 
llegando a decoloración, y valorar por retorno con solución de permanganato de 
potasio 0,0125N hasta obtener una coloración rosada débil y persistente. Esta 
valoración debe efectuarse a 60-80ºC. El volumen de solución de permanganato 
empleado en la valoración por retorno debe ser inferior a 5ml; si resulta superior, 
debe repetirse la determinación sobre una dilución adecuada de la muestra, 
utilizando agua destilada sobre permanganato para diluir. 
5. Realizar el ensayo en blanco. En la práctica, un valor para el ensayo en blanco 
inferior a 0,1mg/l en oxígeno, carece de importancia, y puede prescindirse de la 
corrección. 
6. Valoración en frío: se realiza si la muestra contiene minerales reductores del 
permanganato. Debe efectuarse conjuntamente con el ensayo corriente, siguiendo 
la técnica a continuación: 
1- Verter en un erlenmeyer 100ml de muestra o el mismo volumen de la 
dilución utilizada para el ensayo de oxígeno consumido. 
2- Agregar 10ml de solución de ácido sulfúrico 1+3. 
3- Valorar en frío con solución de permanganato de potasio hasta obtener una 
coloración rosada que persista durante 3 minutos. 
 
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EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS 
 
Los resultados se expresan en mg/l de oxígeno consumido como se indica a 
continuación: 
- Valores entre 0 y 10mg/l de oxígeno: con un decimal. 
- Valores entre 10 y 100mg/l de oxígeno: sin decimal. 
- Valores entre 100 y 1000mg/l de oxígeno: con dos cifras significativas. 
 
CÁLCULOS 
 
La cantidad de oxígeno consumido se calcula con la siguiente expresión: 
 
Oxígeno consumido [mg/l] = (N-Nf-Nb) * 100 * f/V 
 
Siendo: 
N: número de ml empleados en la valoración de la muestra por retorno; conviene 
aclarar que si el ensayo se practica sobre la muestra diluida,N conserva su significado, 
pues la corrección por dilución ya está considerado en la fórmula. 
Nf: número de ml empleados en la valoración en frío. 
Nb: número de ml empleados en la titulación en blanco. 
V: volumen de muestra, en ml, empleado en la determinación. 
f: factor de corrección de la solución de permanganato. 
 
OBSERVACIONES 
 
- Seguir estrictamente la técnica descripta, especialmente en lo que se refiere al 
sistema y al tiempo de calefacción. 
- En el ensayo deben siempre emplearse 100ml, ya sea de la muestra diluida o sin 
diluir. 
- Antes de comenzar el ensayo verificar el valor de cloruros de la muestra. Si el 
valor es mayor a 500mg/l se debe utilizar en el ensayo una dilución que asegure trabajar 
con una concentración de cloruros menor a ese valor o se debe realizar una Digestión 
Alcalina (ver ANEXO). 
- Para evitar el calentamiento en baño de agua, suele reemplazarse esta fuente 
térmica por calentamiento directo sobre la plancha eléctrica o mecheros a gas, pero con 
estos sistemas de calefacción es difícil reproducir y mantener las condiciones térmicas 
propias de un baño de agua, a menos que se utilicen dispositivos especiales. Las 
experiencias de laboratorio han confirmado que al apartarse del sistema de 
calentamiento prescripto por el método, se originan variaciones grandes en los 
resultados, y que solo atendiéndose minuciosamente a él pueden obtenerse resultados 
comparables. 
- Para evitar que el consumo de solución de permanganato sea excesivo, y haya 
por tanto que repetir la determinación, puede tomarse como guía el cuadro siguiente, en 
el cual, según la naturaleza de la muestra, se establece la dilución que más 
probablemente cumplirá con la exigencia del método, referente al volumen máximo que 
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debe emplearse en la valoración por retorno. La gran variedad de composiciones que 
presentan los efluentes industriales, impide fijar para ellos diluciones con carácter 
general. 
 
Muestra Dilución % 
Liquido cloacal 1 a 10 
Efluentes cloacales de plantas de purificación 25 a 50 
Aguas de río contaminadas 25 a 50 
 
 
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GRASAS Y ACEITES 
SUSTANCIAS SOLUBLES EN FRÍO EN ETER ETÍLICO 
 
GENERALIDADES 
 
La determinación de sustancias en frío en éter etílico revela el contenido de grasas 
y aceites en un líquido contaminado y comprende la suma de hidrocarburos, ácidos 
grasos, jabones, grasas, ceras, aceites y cualquier otro material extraíble por éter etílico 
en frío, de una muestra acidificada a pH 4,2 que no sean volátiles a 70ºC. 
La presencia de algunos aceites en las aguas naturales puede deberse a la 
descomposición del plancton o formas superiores de la vida acuática. 
La mayoría de los aceites pesados y grasas con insolubles en agua pero se pueden 
emulsionar o saponificar por la acción de detergentes, álcalis y otras sustancias 
químicas. 
 
FUNDAMENTO Y LIMITACIONES 
 
 Las grasas o aceites emulsionados o disueltos se extraen del agua acidulada a pH 
4,2 por contacto íntimo con solventes orgánicos que disuelven, además, otras sustancias 
orgánicas. No se conoce ningún solvente selectivo de grasas y aceites solamente. 
 Algunas fracciones de bajo punto de ebullición se evaporan durante la realización 
del análisis y no son determinadas, y otras fracciones de aceites lubricantes se evaporan 
a la temperatura necesaria para remover las últimas trazas del solvente de extracción. 
 El querosene y la nafta son tan volátiles que no pueden determinarse con 
seguridad por este método. 
 El método puede aplicarse a las aguas contaminadas y líquidos residuales, con las 
limitaciones establecidas en los puntos anteriores. 
 
INTERFERENCIAS 
 
- Los aceites y grasas saponificados tienden a permanecer en emulsión, pero la 
acidificación de la muestra hasta pH 4,2 y/o el agregado de cloruro de sodio, ayuda a 
romper esta emulsión. 
- Interfieren, como se indicó anteriormente, las sustancias orgánicas solubles en éter 
etílico. 
 
SENSIBILIDAD 
 
La sensibilidad máxima alcanzable con la técnica que a continuación se describe 
es de 2mg/l de sustancias solubles en éter. 
 
 
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17 
 
 
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EXTRACCIÓN Y CONSERVACIÓN DE LA MUESTRA 
 
 La muestra debe ser representativa, para lo cual es fundamental elegir, dentro del 
sitio de extracción, una zona donde la agitación del líquido sea significativa. 
 La muestra no debe llenar totalmente el frasco que la contiene pues puede ocurrir 
que se produzcan pérdidas del aceite flotante, al atraparlo. 
 Para la conservación de la muestra durante su almacenamiento, conviene 
acidificar la misma con HCl diluido hasta pH 4,2. 
 
MATERIAL A UTILIZAR 
 
- Plancha calefactora de temperatura regulable. 
- Desecador de vidrio. 
- Probetas graduadas de 50ml. 
- Cápsulas de porcelana o cristalizadores de vidrio de aproximadamente 9cm de 
diámetro. 
- Ampollas de decantación cilíndricas, de 125ml, con llave de teflón o de vidrio sin 
lubricar o lubricadas con sustancias insolubles en solventes orgánicos. 
- Embudos de 70mm de diámetro, con vástagos de 150mm. 
- Papel de filtro rápido. 
 
SOLUCIONES A PREPARAR 
 
 Ácido Clorhídrico diluido. 
 Éter Etílico. Por ser inflamable y explosivo, deberán tomarse todas las 
precauciones de seguridad al manejarlo. 
 Solución de heliantina al 0,05% P/V. 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
1. La muestra deberá homogeneizarse convenientemente por agitación adecuada, 
inmediatamente antes de medir la alícuota de la muestra. 
2. Medir 50ml de la muestra con una probeta de 50ml. 
3. Acidificar con ácido clorhídrico diluido hasta pH 4,2. 
4. Añadir 2 gotas de heliantina. 
5. Añadir a la ampolla de decantación. 
6. Agregar 50ml de éter. 
7. Agitar bien. 
8. Dejar separar perfectamente las dos capas. 
9. Descartar la capa inferior acuosa. 
10. Filtrar a través de papel de filtración rápida recibiendo la capa etérea en una 
cápsula o cristalizador previamente tarado. 
11. Si fuera necesario realizar una segunda extracción con 20ml de éter. 
12. Enjuagar la ampolla de decantación, con unos 10ml de éter y con el mismo lavar 
el papel de filtro. 
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18 
 
 
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13. Evaporar el éter en una plancha calefactora a 60-70ºC. 
14. Una vez evaporado todo el éter dejar enfriar en desecador de vidrio. 
15. Simultáneamente hacer un blanco evaporando igual cantidad del éter usado en la 
extracción y lavado de la ampolla. 
16. Pesar los residuos de la muestra y el blanco. 
 
CÁLCULOS 
 
 
 
 
Dónde: 
 A = Peso de la cápsula luego de evaporación del éter [mg] 
 B = Tara de la cápsula [mg] 
 V = Volumen de muestra [ml] 
 
EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS 
 
Los resultados se expresan como “sustancias solubles en frío en éter etílico” en 
mg/l, sin decimales. 
 
 
Sustancias solubles en éter etílico en mg/l = (A – B) * 1000/V 
 
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PRETRATAMIENTO 
 
Para las determinaciones colorimétricas, en el caso de muestras turbias y 
coloreadas, se deberá realizar un pretratamiento a la muestra según el procedimiento a 
continuación. 
 
SOLUCIONES A PREPARAR 
 
 Sulfato de aluminio al 10% P/V. 
 Hidróxido de sodio al 50% P/P. 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
1. Medir aproximadamente 300ml de muestra en un erlenmeyer de 1000ml. 
2. Agregar 3ml de solución de sulfato de aluminio al 10% y 3 gotas de hidróxido de 
sodio al 50%. 
3. Tapar y agitar suavemente en formacircular. 
4. Controlar el pH de manera que el mismo se encuentre en el rango 6,5 – 7,5. 
Ajustar con ácido o base diluidos gota a gota en el caso que sea necesario. 
5. Dejar decantar (en lo posible 24hs) y utilizar la solución sobrenadante límpida 
para efectuar las determinaciones colorimétricas correspondientes. 
 
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20 
 
 
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FOSFATOS 
 
GENERALIDADES 
 
La determinación se efectúa mediante el método de Murphy y Riley. El ion fosfato 
reacciona con molibdato de amonio, el cual al ser reducido con ácido ascórbico da un 
compuesto coloreado de composición bien definida que es el complejo de azul 
molibdeno. 
Se determina el contenido de fósforo en forma de PO4
-1
 PO4
-2
 mediante kit 
colorimétrico. 
 
Interferencias: 
 
- El pH no interviene. 
- No interfiere el cobre hasta 10mg/l. 
- El cobre sólo interfiere en cantidades mayores a 5mg/l. 
- El arsénico hasta 0,05mg/l no interfiere. 
- La presencia de oxidantes y reductores no perturba seriamente la exactitud del 
método. 
 
EQUIPOS Y MATERIALES 
 
- Kit colorimétrico para Fosfatos 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
1. Llenar ambos tubos de medida con 5ml de la muestra. 
2. Colocar un tubo de medida en la Pos. A del comparador. 
3. Medición de PO4
-1
: En el recipiente de medida B añadir 6 gotas de reactivo PO4
-1
, 
cerrar el tubo y mezclar. 
4. Medición de PO4
-2
: En el recipiente de medida B añadir 6 gotas de reactivo PO4
-2
, 
cerrar el tubo y mezclar. 
5. Después de 10 minutos, abrir el tubo y colocarlo en la Pos. B del comparador (ver 
figura en ANEXO). 
6. Desplazar el comparador hasta alcanzar la igualdad de color en la parte 
transparente. Hacer la lectura del valor de medida en la muesca de la lengüeta del 
comparador. Los valores intermedios pueden interpolarse. (Ver figura en 
ANEXO) 
7. Después del uso, limpiar muy bien los tubos de medida y cerrar. 
 
EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS 
 
El contenido total de fosfatos expresado como fósforo, PO4-P, corresponde a la 
suma de las concentraciones obtenidas con los ensayos PO4
-1
 y PO4
-2
. 
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21 
 
 
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NITRÓGENO AMONIACAL 
 
GENERALIDADES 
 
En muestras con alto contenido de amoníaco se omite la destilación y la muestra 
se somete a nesslerización directa. 
El tratamiento con sulfato de zinc en medio alcalino se usa para precipitar Ca
++
, 
Mg
++
, Fe
+++
, y S
=
 que pueden ocasionar turbidez con el reactivo de Nessler (R de N). El 
coágulo precipita también la materia orgánica en suspensión y a veces, la coloración. El 
agregado de EDTA, o sal de Rochelle (o de Seignette N de T), impide la precipitación 
de Ca residual y del Mg, en presencia del reactivo de Nessler. 
 
INTERFERENCIAS 
 
Se ha encontrado que con un cierto número de aminas aromáticas o alifáticas, 
cloroaminas, acetona, aldehídos y alcoholes entre otros dan una coloración parásita que 
varía del amarillo al verde o cierta turbidez al agregar el reactivo de Nessler. No hay un 
procedimiento recomendable para eliminar todas las interferencias, debiéndose recurrir 
a la destilación cuando no se las puede evitar. 
 
MINIMO DETECTABLE 
 
En condiciones óptimas, el reactivo correctamente preparado permite detectar 
1mg de N amoniacal en 50ml de solución. La reproducibilidad de datos por debajo de 
mg puede ser errática. 
 
SOLUCIONES A PREPARAR 
 
 Agua libre de amoníaco: agua destilada sobre KMnO4 en medio ácido. 
 Solución de stock de NH4
+
: 
1- Disolver 3,819g de ClNH4 anhidro secado a 100ºC. 
2- Diluir a 1000ml de agua libre de amoníaco. 
1ml=1mg N= 1,22mg NH3. 
(Ver procedimiento de valoración en ANEXO) 
 Solución estándar de NH4: diluir 10ml de la solución stock a 1000 ml. 
1ml = 10mg de N= 12,2 mg de NH3. 
 Reactivo de Nessler: 
1- Disolver 100g de yoduro de mercurio, I2Hg, y 70g de IK en una pequeña 
cantidad de agua libre de NH3. 
2- Agregar esta solución lentamente y con agitación sobre solución fría de 160g 
de NaOH en 500ml de H2O libre de amoníaco. 
3- Llevar a un litro con agua libre de NH3. 
4- Conservar en frascos oscuros al abrigo de la luz. 
 
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22 
 
 
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 Solución de ZnSO4: 
1- Disolver 100g de ZnSO4.7H2O en agua libre de NH3. 
2- Llevar a 1000ml con agua libre de NH3. 
 Solución de NaOH 6N en agua libre de NH3. 
 Sal de Rochelle (o de Seignette): 
1. Disolver 50g de tartrato de sodio y potasio en 1000ml de agua libre de NH3. 
2. Desprender el NH3 que por lo general contiene la sal, haciendo hervir la 
solución hasta obtener 70ml. 
3. Dejar enfriar y llevar a 100ml con agua libre de NH3 
 
EQUIPOS Y MATERIALES 
 
- Espectrofotómetro λ=420nm. 
- Cubetas de cuarzo para espectrofotómetro. 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
Curvas de Calibración y medición 
1- Medir en matraces aforados de 50ml: 0,5; 1,5; 2 y 3ml de solución estándar de N 
de amoníaco. 
2- Diluir a 50ml con H2O libre de amoníaco. 
3- Agregar 2 gotas de solución de sal de Seignette y 1ml de R de N. 
4- Dejar reposar al abrigo de la luz durante 10 minutos. 
5- Leer el % T en espectrofotómetro a 420nm ajustando el 100%T con un blanco de 
reactivos. 
6- Representar en papel semilogarítmico %T en función de la concentración de N de 
NH3. 
 
ml de solución std. 
de N de NH3 
N de NH3 en 
50 ml de patrón 
mg/l de N de NH3 
(rep. en curva) 
0,5 5 mg 0,1 
1,0 10 mg 0,2 
1,5 15 mg 0,3 
2,0 20 mg 0,4 
2,5 25 mg 0,5 
3,5 30 mg 0,6 
 
7- Para la medición, realizar el mismo procedimiento con la muestra o una dilución 
adecuada de la misma y leer el %T en el espectrofotómetro a 420nm, ajustando 
previamente con el blanco. 
 
 
 
 
 
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23 
 
 
Química Analítica Aplicada - 2017 
Cálculo 
- En la curva leer mg/l de N de NH3 correspondiente a la lectura %T. 
 
mg/l N de amoníaco = mg/l de curva x 50/volumen de muestra 
ó 
mg/l N de amoníaco = mg/l de curva x factor de dilución. 
 
 
 
 
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24 
 
 
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NITRÓGENO DE NITRATOS 
 
GENERALIDADES 
 
 La determinación se realiza mediante un kit colorimétrico que utiliza el método de 
Reducción de Cadmio. Los iones nitrato se reducen casi cuantitativamente a nitritos en 
presencia de cadmio. Los iones nitrito producidos se determinan por diazotación con 
sulfanilamida y acoplamiento con dihidrocloruro de N-(1-naftil)-etilendiamina para 
formar un colorante azoico de color ámbar que se puede medir colorimétricamente. 
 
EQUIPOS Y MATERIALES 
 
- Kit colorimétrico para Nitratos. 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
1. Llenar los dos tubos del kit hasta la primera marca (5ml) con la muestra. 
2. Colocar uno de los tubos en la abertura izquierda del comparador. 
3. Añadir un sobre del reactivo de nitratos, NitraVer5, en el segundo tubo. 
4. Tapar el tubo y agitar vigorosamente durante un minuto. 
5. Esperar un minuto a que se desarrolle el color. 
6. Colocar el segundo tubo en el comparador de color. 
7. Mantener el comparador frente a una fuente de luz y girar el disco de color hasta 
encontrar coincidencia. 
8. Leer el resultado en mg/l NO3
-
N en la escala. 
 
EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS 
 
Para obtener el contenido real de nitratos expresado como Nitrógeno, NO3
-
N, se 
debe restar al valor leído en la escala (afectado por el factor dilución si corresponde) la 
concentración de nitritos [mg/l NO2
-
N] de la muestra. 
 
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25 
 
 
Química Analítica Aplicada - 2017NITRÓGENO DE NITRITOS 
 
GENERALIDADES 
 
La determinación se realiza mediante un kit colorimétrico que utiliza el método de 
Sulfato Ferroso. En medio ácido, el sulfato ferroso reduce los iones nitrito a óxido 
nitroso. Los iones ferrosos se combinan con el óxido nitroso para formar un ion 
complejo de color pardo y la intensidad del color es directamente proporcional a la 
concentración de iones nitrito presentes en la muestra. 
 
EQUIPOS Y MATERIALES 
 
- Kit colorimétrico para Nitritos 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
1. Llenar los dos tubos de visualización de color del kit hasta la marca de 5ml con la 
muestra o una dilución de la misma (el rango 0-100mg/l puede ser leído 
directamente en el comparador). 
2. Añadir el contenido de un sobre de reactivo a uno de los tubos. Tapar y agitar. 
3. Si el nitrito está presente en la muestra, se desarrollará un color pardo verdoso. 
Dejar 5 minutos para desarrollo completo del color. 
4. Colocar el tubo de la muestra preparada con el reactivo en la abertura superior 
derecha del comparador y el tubo que contiene sólo la muestra en la abertura 
superior izquierda del comparador. 
5. Sujetar el comparador frente una fuente de luz y girar el disco hasta obtener la 
coincidencia de color. 
6. Leer la concentración en mg/l NO2
-
. 
 
EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS 
 
 Para convertir la lectura en mg/l de nitrito de sodio (NaNO2), multiplicar el 
resultado por 1,5. 
 Para convertir la lectura en mg/l de Nitrógeno, multiplicar el resultado por 0,3. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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26 
 
 
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DETERGENTES 
 
GENERALIDADES 
 
Los detergentes aniónicos se combinan con la o-toluidina blue dando origen a una 
sustancia de color azul soluble en cloroformo. La intensidad del color es proporcional a 
la concentración de detergente. 
 
INTERFERENCIAS 
 
La materia orgánica da coloración violácea con la o-toluidina blue, interfiriendo 
en la determinación. Por lo tanto, si se trata de determinar detergentes en líquidos 
cloacales, residuales industriales o cualquier tipo de líquido que contenga materia 
orgánica, es dando una coloración roja soluble en cloroformo. Por esta razón se agrega 
arsenito de sodio al reactivo, que elimina hasta 1mg/l. La interferencia del sulfuro de 
hidrógeno puede eliminarse por acidificación y aireación. 
 
EQUIPOS Y MATERIALES 
 
- Kit colorimétrico para Detergentes 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
1. Llenar uno de los tubos hasta la marca superior (20ml) con la muestra. 
2. Añadir 12 gotas del reactivo para determinación de detergentes y agitar. 
3. En el mismo tubo, añadir cloroformo hasta la marca inferior (5ml). El cloroformo 
es más denso que el agua. Tapar y agitar vigorosamente por 30 segundos y esperar 
aproximadamente 1 minuto que ocurra la separación de fases. 
4. Usar pipeta de vaciado o pipeta Pasteur para remover la muestra del tubo y 
descartar. 
5. Llenar el tubo hasta la marca superior con buffer de lavado y luego removerlo con 
la pipeta de vaciado o pipeta Pasteur. Este paso permite eliminar la muestra 
restante. 
6. Llenar nuevamente el tubo hasta la marca superior con buffer de lavado, tapar y 
agitar vigorosamente por 30 segundos, luego esperar aproximadamente 1 minuto 
que ocurra la separación de fases. 
7. Insertar el tubo en el compartimiento derecho del comparador de color. 
8. Llenar el otro tubo con agua destilada y colocarlo en el compartimiento izquierdo. 
9. Colocar el comparador cerca de la luz y observar a través de las dos aberturas en 
el frente. Rotar el disco de color hasta que haya coincidencia. Leer la 
concentración en ppm en la escala. 
 
Si la coloración obtenida con la muestra es más intensa que la del patrón de 
concentración más elevado, debe repetirse la determinación tomando una dilución de la 
muestra. Luego afectar el valor en ppm leído de este factor de dilución. 
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27 
 
 
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ANEXO 
 
FOSFATOS 
 
LECTURA DE CONCENTRACIONES EN KIT FOSFATOS 
 
Comparador de color del kit fosfatos 
 
 
 
 
 
MÉTODO TRADICIONAL DE MURPHY Y RILEY 
 
El método es adecuado para determinar la concentración de las diversas formas 
del compuesto del fósforo en líquidos cloacales, en agua potable y cursos de agua, tanto 
en ortofosfatos como polifosfatos y fósforo orgánico. 
 
Ventajas: 
- Mayor recuperación del fósforo añadido a un líquido cloacal por no tener 
prácticamente interferencias. 
- Estabilidad del color del azul de molibdeno. 
- Adición de un sólo reactivo a la muestra preparada. 
- Tolerancia a oxidabilidades mayores a 5mg/l de oxígeno consumido (cantidad 
señalada como máxima en el método de Denigés). 
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28 
 
 
Química Analítica Aplicada - 2017 
 
EQUIPOS Y MATERIALES 
 
- Espectrofotómetro. λ=890nm 
- Celdas de cuarzo 
 
SOLUCIONES A PREPARAR 
 
 Ácido sulfúrico 5N. 
 Molibdato de amonio: disolver 40g de Mo7O24(NH4)6.4H2O en agua destilada y 
diluir hasta 1 litro. Esta solución puede guardarse en frasco de vidrio Pyrex. 
 Ácido ascórbico: disolver 1,32g de ácido ascórbico en 75ml de agua destilada. 
Como el ácido ascórbico es rápidamente oxidado, preparar esta solución en el día 
de uso. 
 Tartrato de antimonil potasio: 1mg de Sb por ml. Disolver 0,2743g de tartrato 
antimonil potasio en agua destilada y diluir a 100ml. 
 Reactivo mezcla: 
1- Mezclar perfectamente 125ml de H2SO4 5N y 37,5ml de solución de 
molibdato. 
2- Adicionar 75ml de solución de ácido ascórbico y 12,5ml de solución de 
tartrato. 
Este reactivo deberá ser preparado cuando se requiera y no se guardará más 
de 24hs. 
 Solución de fosfato madre: 0,5mg de P por ml. Disolver 2,1954g de H2KPO4 en 
1000ml de agua destilada. 
 Solución patrón: 0,01mg de P por ml. 
1- Tomar 2ml de la solución madre. 
2- Llevar a 100ml con agua destilada. 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
Inmediatamente antes de separar las alícuotas, las muestras deberán ser mezcladas 
perfectamente. 
 
Ortofosfatos 
 
1. Filtrar 50ml de la muestra mezclada a través de cualquiera de los filtros 
descriptos. 
2. Colocar 8,0ml del reactivo mezcla en un matraz de 50ml y llenar con el filtrado. 
3. Dejar 10 minutos para el desarrollo del color. 
4. Observar la absorbancia a 890nm. 
5. Determinar el contenido de fósforo en la curva de calibración preparada usando 
solución de fosfato patrón. 
6. La concentración de P como ortofosfato será: 
 
C = n x 50/V 
 
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29 
 
 
Química Analítica Aplicada - 2017 
 Dónde: 
 n = concentración del patrón cuya coloración es igual a la muestra [mg] 
 V = volumen usado para la determinación [ml] 
 
Fósforo Inorgánico Total 
 
1. Colocar 20ml de la muestra mezclada en un frasco erlenmeyer de 125ml. 
2. Adicionar 1ml de H2SO4 5N. 
3. Diluir con 25ml de agua destilada aproximadamente. 
4. Adicionar varias cuentas de ebullición y hervir la muestra durante 15minutos. Un 
embudo de vidrio pequeño insertado en la entrada del frasco ayuda a prevenir 
pérdidas de la muestra. 
5. Enfriar el erlenmeyer en agua y transferir el contenido a un matraz de 50ml, 
enjuagar el frasco y el embudo pequeño con agua destilada y llenar hasta la marca. 
6. Repetir los pasos 2,3 y 4 de la determinación de ortofosfatos. 
 
Fósforo Total 
 
1. Colocar 10ml de la muestra mezclada en un frasco erlenmeyer de 125ml. 
2. Adicionar 0,2ml de H2SO4 5N y 0,1g de persulfato de potasio (S2O8K2) 
3. Diluir con alrededor de 30ml de agua destilada. 
4. Agregar cuentas o perlas de ebullición y hervir unos 15 minutos. Un embudo 
pequeño debe ser usado como se indicó anteriormente. 
5. Enfriar el erlenmeyer en aguay transferir el contenido a un matraz de 50ml; 
enjuagar el frasco y el embudo pequeño con agua destilada y llenar hasta la marca. 
6. Repetir los pasos 2,3 y 4 de la determinación de ortofosfatos. 
 
Curva de calibración 
 
Solución patrón En agua destilada 
hasta 50ml 
Concentración 
[mg/l de P] N° ml de patrón 
1 0,75 0,0075 0,15 
2 1,50 0,0150 0,30 
3 2,25 0,0225 0,45 
4 3,00 0,0300 0,60 
5 3,75 0,0375 0,75 
6 4,50 0,0450 0,90 
7 5,25 0,0525 1,05 
8 6,00 0,0600 1,20 
9 6,75 0,0675 1,35 
 
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30 
 
 
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NITRÓGENO AMONIACAL 
 
Valoración de la solución stock de N de amoníaco 
 
1. Pipetear 10ml de solución stock, medidos exactamente, dentro de un balón de 
destilación. 
2. Diluir a 250ml con agua libre de amoníaco. 
3. Agregar granallas de zinc y 70ml de NaOH. 
4. Conectar inmediatamente el refrigerante y destilar, recogiendo el destilado sobre 
25ml de H2SO4 0,05N. 
5. Usando rojo de metilo como indicador, valorar el exceso de H2SO4 con solución 
0,05N de NaOH, calcular mg/l de N de NH3 mediante la fórmula 
 
 
 
 
Dónde: 
mb = ml de NaOH 0,05 N consumido por el blanco. 
mm = ml de NaOH 0,05N consumido por la muestra. 
f = factor NaOH 
 
Como alternativa puede seguirse el método de titulación con NaOH 0,05N en 
presencia de formol neutralizador. 
 
 
MÉTODO POR DESTILACIÓN Y NESSLERIZACIÓN 
 
FUNDAMENTOS 
 
El amoníaco libre contenido en una muestra puede ser recuperado 
cuantitativamente si se mantiene el pH cercano a 7,4. El destilado se recoge sobre 
H2SO4 estándar, y el amoníaco se determina por titulación. 
 
INTERFERENCIAS 
 
La recuperación del amoníaco dará resultados por defectos en muestras 
conteniendo más de 250mg/l de ion Ca, a menos que se agregue suficiente cantidad de 
solución buffer de fosfato. 
La precipitación de fosfatos de Ca libera protones que hace que baje el pH, 
después de la cual puede destilarse. 
En la titulación también interfieren las aminas, dado que éstas consumen ácido 
estándar, en cambio no interfieren los compuestos orgánicos de carácter neutro. 
 
mg/l de N = (mb – mm x 0,7 f) / (10 x 100) 
 
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31 
 
 
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EQUIPOS 
 
- Destilador. 
- Balón de destilación de 800ml con condensador y adaptador para recoger el 
destilado sobre H2SO4 estándar. 
 
SOLUCIONES A PREPARAR 
 
 Agua libre de amoníaco. 
 Solución buffer de fosfatos O.S.M: 
1- Disolver 14,3g de fosfato dipotásico en agua libre de amoníaco. 
2- Diluir a 1000ml. 
 Solución estándar 0,05N de H2SO4, 0,7mg de nitrógeno de amoníaco. 
 Solución estándar 0,05N de NaOH. 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
Destilación 
1. Destilar agua libre de amoníaco hasta reacción negativa de amoníaco para 
asegurarse que el destilador esté limpio. 
2. Colocar en el balón entre 100-400ml de muestra y neutralizar hasta pH 7 si la 
muestra es ácida o alcalina. 
3. Agregar 25ml de solución buffer para mantener el pH en 7,4 durante la 
destilación. 
4. En muestras que contienen más de 250mg/l de la concentración de Ca++. Agregar 
primero 40ml de solución buffer y luego ajustar a pH 7,4. 
5. Diluir a 400ml de agua libre de amoníaco y destilar sobre aproximadamente 200 
ml de H2SO4 0,05N (25 de H2SO4 para muestras hasta 150mg de N amoniacal por 
litro). 
 
Titulación 
1. Titular por retorno, con solución 0,05N de NaOH, usando rojo de metilo como 
indicador. 
2. Titular un blanco con la misma cantidad de H2SO4 que se usa para recoger la 
muestra. 
 
CÁLCULOS 
 
 
 
 
Dónde: 
mb = ml de NaOH 0,05N consumido por el blanco. 
mm = ml de NaOH 0,05N consumido por la muestra. 
 
mg/l de N = (mb – mm x 0,7 factor NaOH) / (10 x 100) 
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Método para controlar la solución patrón del N de NH3 
1. Tomar 20 a 40ml de formol. 
2. Agregar igual volumen de agua destilada. 
3. Neutralizar con solución de NaOH hasta débil coloración rosada usando 
fenolftaleína, como indicador. 
4. Agregar 10ml de la solución patrón de N de NH3 (1ml = 1mg de N de NH3). 
5. Titular con la solución 0,05N de NaOH hasta coloración rosada. 
 
Los ml gastados multiplicados por 0,7 da la cantidad de N de NH3 en los 10ml de 
solución patrón. 
 
Entonces: N de NH3 [mg/ml] = (V x 0,7)/10 
 
Dónde: V es el volumen de solución NaOH gastados en la titulación. 
 
Ecuación 
 4 ClNH4 + 6 C-H = 4 ClH + 6 H2O + N4(CH2)5 
 
ml de solución Std mg de N de NH3 
mg/l de N de NH3. 
(Rep. Curva) 
% T: 425nm 
0,5 5 0,1 56,5 
1 10 0,2 91,0 
1,5 15 0,3 88,0 
2 20 0,4 84,0 
2,5 25 0,5 80,0 
3 30 0,6 77,5 
3,5 35 0,7 74,5 
4 40 0,8 72,0 
4,5 45 0,9 68,0 
5 50 1 67,0 
5,5 55 1,1 63,5 
6 60 1,2 61,0 
6,5 65 1,3 57,5 
 
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NITRÓGENO DE NITRATOS 
 
MÉTODO DEL ÁCIDO FENOLDISULFÓNICO 
 
GENERALIDADES 
 
Este método consiste en tratar con ácido fenoldisulfónico el residuo que se obtiene 
evaporando una porción de la muestra, diluir con agua y neutralizar con amoníaco. 
Cuando la muestra contiene nitratos aparece una coloración amarilla producida por la 
sal triamónica del ácido nitrofenoldisulfónico. 
 
INTERFERENCIAS 
 
La turbidez, el color, la alcalinidad, los cloruros, los nitritos y los hidratos de 
carbono interfieren en la determinación. Las interferencias pueden evitarse excepto en el 
caso de los hidratos de carbono. La turbidez y el color deben separarse. 
No requieren eliminación previa: concentraciones inferiores a 1mg/l de nitrógeno 
de nitritos, y cantidades inferiores, en la porción evaporada, a 0,5mg de ion cloruro y 
50mg de alcalinidad (CaCO3). 
 
SOLUCIONES A PREPARAR 
 
 Ácido fenoldisulfónico. 
1- Disolver 25g de fenol puro incoloro en 150ml de ácido sulfúrico (d= 1,84) para 
análisis. 
2- Agregar 75ml de ácido sulfúrico fumante (con 13 a 15% de SO3 libre). 
3- Agitar. 
4- Calentar a 100ºC durante 2 horas en baño de agua. 
 Solución stock de nitrógeno de nitratos: disolver 0,7216g de nitrato de potasio 
para análisis, anhidro, en 1 litro de agua destilada. 
1ml = 0,01mg de N-NO3. 
 Solución standard de nitrógeno de nitratos. 
1- Evaporar 50ml de solución stock a sequedad en baño María. 
2- Disolver el residuo con 5ml de solución de ácido fenoldisulfónico frotando con 
varilla de vidrio. 
3- Diluir a 500ml con agua destilada. 
1ml contiene 0,001mg de N-NO3. 
 Solución de sulfato de plata: disolver 4,397g de sulfato de plata, exento de nitratos 
en un litro de agua destilada. 1ml de esta solución equivale a 1mg de cloruro. 
 Solución de peróxido de hidrógeno: diluir 10ml de H2O2 al 30% a 100ml con agua 
destilada. 
 Solución de sulfato de aluminio (con 18 H2O), para análisis, en agua destilada y 
diluir hasta 100ml. 
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 Solución de NaOH 5% P/V. 
1- Disolver 5g de NaOH, para análisis, en agua destilada. 
2- Diluir hasta 100ml. 
 
CURVA DE CALIBRACIÓN 
 
1- Los patrones se preparan en matraces aforados de 50ml, agregando las 
cantidades standard (reactivo 3) que se indican en la tabla a continuación. 
2- En todos los casos agregar 5ml de solución de NaOH y diluir con agua 
destilada a 50ml. 
3- Tabla de preparación de los patrones: 
 
Patrón Nº 
Solución estándar [ml] 
(reactivo 3) 
mg/l N-NO3 
1 0,25 0,05 
2 0,50 0,10 
3 1 0,20 
4 2 0,40 
5 3 0,60 
6 4 0,80 
7 5 1 
 
4- Dejar en reposo entre 10 y 30 minutos. 
5- Leer %T a una longitud de onda de 420nm. 
6- Representar en papel semilogarítmico %T en función de laconcentración de N-
NO3 expresada en mg/l. 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
Determinaciones previas 
 
1- Determinar alcalinidad y cloruros en la muestra y de acuerdo con el mismo, 
agregar una cantidad equivalente de solución de Ag2SO4 evitando el exceso, a 
modo de eliminar la interferencia por cloruros. 
2- Si la muestra contiene color, realizar el pretratamiento indicado en la guía. 
 
Procedimiento 
1. Evaporar una alícuota de 50ml de líquido sobrenadante a sequedad en cápsula de 
porcelana en baño María. Si la muestra contuviera nitritos, oxidar éstos durante la 
evaporación con agua oxigenada (reactivo 5). 
2. Dejar enfriar el residuo. 
3. Agregar 1ml de ácido fenoldisulfónico (reactivo 1) y frotar con una varilla de 
vidrio asegurándose que todos los sólidos se disuelven. 
4. Diluir con 20ml de agua destilada. 
5. Dejar enfriar. 
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35 
 
 
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6. Agregar con agitación, 5ml de NaOH (reactivo 7). 
7. Transferir el líquido a matraz aforado de 50ml. 
8. Diluir hasta la marca. 
9. Dejar reposar de 10 a 30 minutos. 
10. Determinar el % de transmitancia de la muestra a 420nm con 1cm, ajustando el 
100% de transmitancia con un blanco de reactivo. 
 
Diluir convenientemente la muestra con agua destilada de modo que su 
concentración entre en el rango de lectura del instrumento. 
 
CÁLCULOS 
 
 
 
 
 
Al expresar los resultados, restar el nitrógeno correspondiente a nitritos. 
 
mg/l N-NO3 = 
muestra de ml
50 x curva laen leído mg/l
 
 
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NITRÓGENO DE NITRITOS 
 
MÉTODO DEL ÁCIDO SULFANÍLICO 
 
INTERFERENCIAS 
 
No interfieren cantidades relativamente elevadas de los siguientes iones: alcalino-
térreos, zinc, níquel, arseniato, borato, bromuro, cloruro, fluoruro, yodato, molibdato, 
nitrato, fosfato, sulfato y tiocianato. Estos iones pueden estar presentes en 
concentraciones de hasta 1000 veces mayores que las de ion nitrito. 
Algunos metales como el plomo, bismuto, hierro y mercurio interfieren debido a 
precipitación o por la coloración de sus sales. 
Las aminas alifáticas reaccionan con los nitritos y liberan nitrógeno gaseoso. El 
amoníaco no interfiere en las pequeñas proporciones en que, por lo general, se lo 
encuentra. No debe haber agentes reductores u oxidantes fuertes. 
 
CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS 
 
La determinación de nitritos, debe hacerse sobre muestras frescas porque la 
transformación de los nitritos en nitratos o en amoníaco, procede ininterrumpidamente 
por acción biológica, a menos que la muestra se conserve con ácido sulfúrico en la 
proporción de 1,5g/l. 
 
SOLUCIONES A PREPARAR 
 
a. Solución de ácido sulfanílico: 
1- Disolver 0,60g de ácido sulfanílico en 70ml de agua destilada caliente. 
2- Enfriar. 
3- Agregar 20ml de ácido clorhídrico concentrado. 
4- Diluir a 100ml con agua destilada. 
5- Agitar. 
b. Solución de clorohidrato de 1-naftilamina: 
1- Disolver 0,6g de clorohidrato de 1-naftilamina y 1ml de ácido clorhídrico 
concentrado en agua destilada. 
2- Diluir a 100ml. 
c. Solución de acetato de sodio 2M: disolver 16,4g de NaC2H3O2 o 27,2g de 
NaC2H3O2.3H2O en agua destilada y diluir a 100ml. 
d. Solución stock de nitrito de sodio: 
1- Pesar exactamente 0,986g de NaNO2 previamente secado sobre ácido sulfúrico 
durante 24hs. 
2- Diluir con agua libre de nitritos, hasta 100ml. 
Esta solución deberá valorarse de acuerdo con la técnica indicada más adelante. 
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37 
 
 
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e. a) Solución patrón de nitrito de sodio: de acuerdo con la valoración de la solución 
anterior, preparar una solución que contenga 0,4925g de NaNO2 en 1000ml, 
diluyendo con agua libre de nitritos. 
b) Solución intermedia de nitrito de sodio: diluir 100ml de la solución patrón a 
1000ml, con agua libre de nitritos. 
c) Solución estándar de nitrito de sodio: diluir 50ml de la solución intermedia a 
1000ml, con agua libre de nitritos. 1ml = 0,5mg de N de nitritos. 
f. Solución de sulfato manganoso: 
1- Disolver 480g de MnSO4. 4H2O, 400g de MnSO4. 2H2O o 364g de MnSO4. 
H2O, en agua destilada. 
2- Filtrar. 
3- Diluir a 1000ml. 
g. Solución de permanganato de potasio: disolver 0,4g de KMnO4 en 1 litro de agua 
destilada. 
h. Solución de oxalato de amonio: disolver 0,9g de (NH4)2C2O4. H2O en 1 litro de 
agua destilada. 
i. Agua libre de nitritos: 
1- Agregar 1ml de ácido sulfúrico concentrado y 0,2ml de solución de sulfato 
manganoso a 1 litro de agua destilada. 
2- Luego añadir algunos ml de solución de permanganato de potasio hasta 
coloración francamente rosada. 
3- Agitar y dejar reposar preferiblemente unas horas. 
4- Si la coloración se desvanece, repetir el agregado de solución de permanganato 
de potasio, agitar y dejar reposar durante otras 2 horas. 
5- Repetir esta operación, tantas veces como sea necesario para que permanezca, 
durante 2 horas, una débil coloración rosada. 
6- Luego decolorar con solución de oxalato de amonio. 
 
EQUIPOS 
 
- Espectrofotómetro para lectura a 540nm 
- Cubetas de cuarzo para espectrofotómetro. 
 
INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
1. Realizar el pretratamiento a la muestra (ver procedimiento en la guía). 
2. Si el líquido todavía estuviese turbio, filtrar por papel de filtro lavado con agua 
libre de nitritos y descartar las primeras porciones. 
3. Si hubiese coloración, puede recurrirse al tratamiento del líquido con 1g de carbón 
activado por cada 100ml y filtración posterior. 
4. En un matraz aforado de 50ml, medir la cantidad apropiada de muestra y diluir a 
50ml. 
5. Pasar el contenido del matraz a un Erlenmeyer de 125ml. 
6. Agregar 1ml de solución de ácido sulfanílico, 
7. Agitar. 
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38 
 
 
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8. Dejar reposar durante 10 minutos para que tenga lugar la diazotación. El pH de la 
solución debe estar cercano a 1,4. 
9. Agregar 1ml de solución de clorhidrato de 1-naftilamina y 1ml de solución de 
acetato de sodio para buferizar el sistema en pH 2,5. Dejar reposar entre 10 y 30 
minutos, para que tenga lugar la conjugación del diazocompuesto con la 1-
naftilamina. 
10. Medir el %T a 540nm, ajustando el 100%T con un blanco de reactivos. 
 
Nota: Si el agua libre de nitritos ha sido correctamente preparada, el blanco no 
debe dar coloración rosada perceptible a simple vista. 
 
CÁLCULOS 
 
 
 
 
 
PRECISIÓN Y EXACTITUD 
 
A pesar que esta reacción coloreada es muy sensible, su exactitud en líquidos 
cloacales y residuales no ha sido comprobada. La precisión, en términos de desviación 
standard, para líquidos cloacales es de 0,05mg de N de nitritos. 
 
CURVA DE CALIBRACIÓN 
 
1- En matraces aforados de 50ml, medir las cantidades de solución standard de N 
de nitritos que se indican en el cuadro de más abajo. 
2- Diluir en todos los casos hasta 50ml. 
3- Agregar las cantidades de los distintos reactivos que se indican, poniendo 
especial cuidado en respetar el período de 10 minutos de reposo entre la 
diazotación y la conjugación. 
4- Medir 10ml de cada uno de los patrones, con pipeta de doble aforo, en los 
tubos Nessler. 
5- Leer %T a 540nm, ajustando el 100% con un blanco de reactivos. 
6- Representar en papel semilogarítmico: % T frente a concentración de N de 
nitritos expresada en mg/l. 
 
N-NO2
-
 [mg/l]= 
muestra de ml
50 x curva laen leído mg/l
 
 
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PatrónNº 
ml de solución standard 
de N de NO2 
mg de N de 
NO2- en 50ml 
mg/l de 
N de NO2 
1 2,5 1,25 0,025 
2 5,0 2,5 0,050 
3 10,0 5,0 0,10 
4 20,0 10,0 0,20 
5 30,0 15,0 0,30 
6 40,0 20,0 0,40 
7 50,0 25,0 0,50 
 
Método para valorar la solución stock de nitrito de sodio 
 
Soluciones a preparar 
 Solución de ácido oxálico 0,1N 
 Solución estabilizada de permanganato de potasio 0,1N (ver técnica de Oxígeno 
Consumido) 
 Ácido sulfúrico 1+3 
 
Valoración de la solución de N de NO2
-
 
1- En erlenmeyer de 500ml, agregar 100mL de agua destilada, 5 ml de ácido 
sulfúrico concentrado y 50 ml de solución de permanganato de potasio 0,1 N. 
2- Añadir luego 10ml de solución stock de nitrito de sodio, cuidando que el extremo 
de la pipeta quede sumergido en el contenido del erlenmeyer. 
3- Calentar en baño María a 40ºC durante 2 minutos. 
4- Dejar reposar durante 5 minutos. 
5- Agregar 25ml de ácido oxálico 0,1 N. 
6- Calentar a 80ºC en baño de agua, durante 10 minutos, debiendo quedar límpida la 
solución. 
7- Titular con solución de permanganato de potasio 0,1N. 
1ml de solución MnO4K 0,1N: 0,00345g Na NO2 
 
Los: 50ml Sol. MnO4= 0,1 N originales 
 +x ml ídem. CONEC. En titulación final 
 
Se corresponden con: 
 25 ml de sol. MnO4 – 0,1N Conc. Por ácido oxálico 
 +a ml de sol. Conc. Por los nitritos donde: 
 a = 25 +x = ml Conc. Por los nitritos 
 Luego: (25+ x) 3,45 x 100) / 10 = mg NO2 Na/100 ml 
 
Notas 
Si el factor de la solución de permanganato no fuese 1, se lo deberá tomar en 
cuenta al calcular el contenido de nitritos de la solución stock. 
Equiv. Red.-ox NO2H: NO2H + H2O—NO3_ + 3H +2e Eq= p.m/2 
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DETERGENTES 
 
MÉTODO TRADICIONAL 
 
SOLUCIONES A PREPARAR 
 
 Solución colorante: 
1- Pesar 20mg de o-toluidina blue, 40mg de fosfato monosódico (PO4H2Na.H2O), 
200mg de arsenito de sodio. 
2- Diluir a 200ml con ácido sulfúrico 1N. 
3- Extraer 3 veces con 20ml de cloroformo para eliminar impurezas. 
 Cloroformo p.a. 
 Solución madre de detergentes: Detergente sintético aniónico patrón (Comité 
Argentino de la Detergencia) contenido 10,3% de sustancia activa; densidad 
1,025. No biodegradable Activo Norma IRAM. 
 Soluciones patrones: 
 1ml = 0,01mg de sustancia activa 
 1ml = 0,001mg de sustancia activa. 
 Agua bidestilada: destilar agua destilada en presencia de permanganato de potasio 
y ácido sulfúrico. 
 Ácido sulfúrico 1N a partir de ácido sulfúrico p.a. d=1,84 
 Coagulante férrico: 
1- Disolver 10g de ClFe.6H2O. 
2- Llevar a 1000ml con agua bidestilada. 
 
EQUIPOS Y MATERIALES 
 
- Ampolla de decantación de 25ml con llave de teflón. 
- Probetas de 10ml. 
- Tubos de ensayo. 
- Pipetas graduadas de 1ml. 
- Bureta de 10ml graduada al centésimo. 
- Matraz aforado de 1000ml y 100ml. 
- Frasco erlenmeyer de 125ml. 
- Agitador mecánico múltiple, con vasos de precipitación de 1500ml. 
- Columna de arena filtrante, de 0,60 metros de longitud y 3cm de diámetro. 
- Espectrofotómetro. λ= 625nm. 
- Celdas de cuarzo 
 
 
 
 
 
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INSTRUCTIVO DE TRABAJO 
 
Coagulación de la muestra 
1. Colocar 1000ml de muestra en un vaso de precipitado de 1500ml. 
2. Agregar 10 o 15ml de solución coagulante, de acuerdo a la turbiedad de la 
muestra. 
3. Agitar durante 2 o 3 minutos mediante agitación mecánica. 
4. Dejar sedimentar. 
5. Filtrar por columna de arena, recogiendo el filtrado en erlenmeyer de 125ml. 
 
Determinación 
1. Colocar 10ml de muestra en una ampolla de decantación de 25 ml. 
2. Agregar 1 ml de solución colorante y 5 ml de cloroformo. 
3. Agitar durante 30 segundos. 
4. Deja separar ambas capas. 
5. Extraer la capa clorofórmica en la que se ha disuelto el detergente con al o-
toluidina blue. 
6. Simultáneamente hacer un blanco de reactivos. 
7. Efectuar la lectura de la transmitancia a 625nm. 
 
Si la coloración obtenida con la muestra es más intensa que la del patrón de 
concentración más elevado, debe repetirse la determinación tomando un volumen menor 
de la muestra y diluyendo a 10ml con agua bidestilada. 
 
Curva de calibración 
 
La curva de calibración, que relaciona transmitancia con concentración, se 
construye aplicando la técnica descripta, tomando transmitancia de 100% para el blanco 
de reactivos. Los patrones se construyen de modo de tener concentraciones de 
sustancias activas de 0,20; 0,40; 0,80; 1,20; 1,60; y 2,00mg/l. 
 
Nº 
Conc. patrón 
[mg/l] 
Soluc. patrón [ml] 
4ª 4
b
 
Agua 
bidestilada 
[ml] 
1 0,20 - 2 8 
2 0,40 - 4 6 
3 0,80 - 8 2 
4 1,20 1,2 - 8,8 
5 1,60 1,6 - 8,4 
6 2,00 2,0 - 8 
 
 
 
 
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PRECAUCIÓN 
 
Todo el material de vidrio usado en este ensayo debe ser lavado con solución 
sulfocrómica y enjuagado varias veces con agua destilada y bidestilada. La preparación 
de soluciones patrones y reactivos se debe realizar con agua bidestilada. 
 
OXÍGENO CONSUMIDO 
 
Digestión alcalina 
 
Si la muestra contiene más de 500mg/l de cloruros, conviene efectuar la digestión 
de la misma en medio alcalino. 
1- Introducir en un erlenmeyer 100ml de muestra (sin diluir o previa dilución 
según el caso). 
2- Agregar 0,5ml de solución de hidróxido de sodio y 10ml de solución de 
permanganato de potasio. 
3- Calentar durante 30 minutos. 
4- Añadir 5ml de solución de ácido oxálico. 
5- Valorar efectuando paralelamente un ensayo en blanco. 
 
 
DEMANDA BIOQUÍMICA DE OXÍGENO (D.B.O5) 
 
DEFINICIÓN 
 
Se llama demanda bioquímica de oxígeno (D.B.O) de un líquido contaminado, al 
oxígeno expresado en mg/l, que este líquido consume en la descomposición de la 
materia orgánica, por acción microbiana aerobia. Como el proceso de descomposición 
tarda varios meses en completarse y su velocidad es variable con la temperatura, en la 
práctica se mide D.B.O correspondiente a un lapso de 5 días y a una temperatura de 
20ºC. 
De esta definición resulta que la medida de la D.B.O de un líquido exige la 
presencia simultánea en el mismo de: 
a) materia orgánica, sobre la cual se opere la descomposición; 
b) microorganismos aerobios o facultativos que ejecuten esta descomposición; 
c) oxígeno disuelto para que la descomposición de la materia orgánica pueda 
realizarse en aerobiosis. 
 
GENERALIDADES 
 
La D.B.O es un ensayo empírico usado para estimar les requerimientos relativos 
de oxígeno en desagües, efluentes y aguas contaminadas. Los microorganismos utilizan 
el oxígeno atmosférico disuelto en el agua para la oxidación bioquímica de la materia 
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contaminante, que es su fuente de carbono. La DBO es usada como una medida 
aproximada de la cantidad de materia orgánica degradable bioquímicamente en una 
muestra. 
Este test fue originalmente concebido por la United Kingdom Royal Commission 
on Sewage Disposal, como una medida para apreciar el grado de oxidación bioquímica 
que ocurriría en un cuerpo de agua natural al cual fueran descargados efluentes 
contaminantes. 
Sin embargo, las condiciones reales del medio, temperatura, movimiento del agua, 
iluminación, concentración de oxígeno, población biológica, incluyendo algas 
planctónicas y plantas con raíces, el efecto de depósitos de sedimentos, etc., no pueden 
ser reproducidos en el laboratorio. En consecuencia, las predicciones del efecto de la 
polución en un curso no son logradas por medios directos,y requieren la consideración 
de muchos factores no implicados en la determinación de DBO. 
Por ejemplo, la materia suspendida en un efluente es frecuentemente depositada a 
corta distancia, inmediatamente río abajo del desagüe, donde puede ejercer un efecto 
bastante considerable sobre la concentración local del oxígeno disuelto (O.D). 
La DBO determinada por incubación en oscuridad incluye oxígeno consumido por 
la respiración de las algas. El efecto contaminante de un efluente en un curso de agua 
puede ser considerablemente alterada por la acción fotosintética de plantas verdes 
presentes, pero es imposible determinar este efecto cualitativamente en experimentos de 
DBO a 5 días, por lo que no existen reglas generales que pueden ser dadas para DBO de 
muestras que contienen algas, y cada caso debe ser considerado según sus 
características. 
Una complicación en el test de DBO es que la mayor parte del consumo de 
oxígeno de las muestras puede ser debido al amoníaco y al nitrógeno orgánico, los que 
pueden ser oxidados eventualmente a nitritos y nitratos por las bacterias nitrificantes, si 
están presentes. Además, el amonio agregado en el agua de dilución puede también 
nitrificarse, y por lo tanto el valor de DBO no es representativo de la muestra por si 
sola. 
Por otra parte, las bacterias nitrificantes son extremadamente sensibles a trazas de 
elementos que pueden estar presentes, y la nitrificación es por lo tanto esporádica e 
impredecible, aún con muestras cuyo contenido en bacterias nitrificantes es conocida. 
Además debido al bajo crecimiento de bacterias nitrificantes, el grado de 
nitrificación dependerá del número de bacterias inicialmente presentes, la nitrificación 
no ocurre en una medida detectable durante el lapso de los 5 días en los líquidos 
cloacales crudos y sedimentados y en casi todos los efluentes industriales. El test de 
DBO es por lo tanto útil para determinar la carga relativa del desagüe a la planta de 
tratamiento, y el grado de demanda de oxígeno removido por tratamiento primario. 
La nitrificación durante la incubación de 5 días es casi siempre limitada a 
efluentes tratados y aguas de río, los cuales ya estarían parcialmente nitrificados. 
Solamente estos casos necesitan especial atención y la cuestión surge por el uso (o no) 
del método incorporando un inhibidor de nitrificación. La determinación del grado de 
nitrificación es tediosa pero, a menos que sean conocidos, los valores de DBO pueden 
ser erróneos al evaluar el funcionamiento de las plantas o en el cálculo de los efectos de 
un efluente sobre un río. 
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La DBO determinada por el método de dilución se emplea como una medida 
aproximada de la cantidad de materia bioquímica degradable de una muestra. Para este 
propósito el test de dilución se ha aplicado exitosamente en la práctica a muestras en las 
cuales la nitrificación no ocurre, y sigue siendo probablemente el test más simple y 
adecuado, aunque en algunos casos puede ser empleado el método manométrico. El 
analista considerará también si la información que él necesita puede obtenerse por 
alguna otra vía. 
Por ejemplo, el test químico de oxígeno efectuará virtualmente una oxidación 
completa de la mayoría de las sustancias orgánicas, y así indicará la cantidad de oxígeno 
requerido para la oxidación completa de la muestra. En otras circunstancias, y 
particularmente en trabajos de investigación, la determinación del contenido en carbono 
orgánico es más apropiada. En algunos casos, los resultados obtenidos por el test de 
DBO no deberán considerarse nunca separadamente sino en el contexto de las 
condiciones locales y con resultados de otros test. 
La oxidación completa de un desagüe determinado puede requerir un período de 
incubación demasiado largo para propósitos prácticos, ya que tarda varios meses en 
completarse. En la práctica la oxidación se considera completa a los 20 días. Por esta 
razón, el periodo de 5 días a 20ºC ha sido aceptado como standart. 
Sin embargo, para ciertos desagües industriales y para aguas poluídas por ellos, 
puede ser conveniente determinar una curva de oxidación. 
Los cálculos de la DBO ultima a partir de valores de DBO a 5 días (basados en 
cálculos usando las expresiones exponenciales de primer orden) no son correctas. La 
conversión de datos de un período de incubación a otro puede ser hecha solamente si la 
curva de oxidación ha sido determinada para este caso individual, para una serie de tests 
de DBO sacados a diferentes períodos de incubación. 
 
MÉTODO POR DILUCIÓN 
 
El método de dilución de determinación de DBO es generalmente el más usado. 
El OD de la muestra es determinado antes y después de la incubación durante 5 días a 
20ºC. La diferencia es la DBO de la misma muestra después de tener en cuenta la 
dilución efectuada. 
 
1- Precauciones: 
- El test debe realizarse tan rápido como sea posible una vez tomada la muestra. 
Esto posibilita la repetición de la determinación si los resultados obtenidos no son 
satisfactorios. 
- Si las muestras son mantenidas a temperatura ambiente por varias horas puede 
ocurrir un cambio apreciable en la DBO, dependiendo del carácter de la muestra. En 
algunos casos puede disminuir y en otros aumentar. La disminución a temperatura 
ambiente es del 40% durante las primeras 8 horas de estacionamiento. 
- Las muestras deben estar libres de conservadores y envasados en frascos de 
vidrio. Si las muestras no pueden ser procesadas de inmediato, deben mantenerse a 
temperatura de 5ºC. En el caso de muestras individuales recolectadas durante un largo 
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período, es deseable mantener todas las muestras a temperatura de 5ºC hasta que la 
muestra compensada pueda prepararse para la determinación de DBO. 
- Es necesario que haya exceso de OD durante el período de incubación y es 
deseable que alcance por lo menos al 30% del valor de saturación luego de los 5 días. 
Puesto que la solubilidad del oxígeno a la temperatura de incubación es solamente 
9mg/l, las muestras que absorben más de 6mg/l durante la incubación por 5 días no 
cumplen esta condición. Este es el caso de líquidos cloacales y muchos otros líquidos 
contaminados. 
- El oxígeno adicional es agregado por dilución de la muestra con agua limpia 
bien aireada; la dilución depende de la naturaleza de la muestra. 
 
2- Interferencias y deficiencias: 
- Si el pH de la muestra no se encuentra entre 6,5–8,5, es necesario adicionar 
suficiente álcali o ácido para asegurar ese rango. Para ello, sobre una porción de la 
muestra se determina la cantidad de ácido y álcali que va a ser agregado para 
neutralizar, usando un indicador apropiado como por ejemplo azul de bromotimol, o un 
pHímetro. Luego se adiciona el volumen de la alícuota calculada de ácido o álcali a la 
muestra cuya DBO va a determinarse. 
- Algunas muestras pueden ser estériles y deben ser sembradas. El propósito de 
esta siembra es introducir en la muestra una población biológica capaz de oxidar la 
materia orgánica. Las aguas domiciliarias, los efluentes no clorados y las aguas 
superficiales que poseen estos microorganismos no necesitan de esta siembra. 
- Cuando se sabe que la muestra contiene muy pocos microorganismos como 
resultado, por ejemplo de coloración, alta temperatura, pH extremos, o composiciones 
específicas de algunas aguas industriales, el agua de dilución debe ser sembrada. Para la 
siembra, a cada litro de agua de dilución adicionar 5ml de líquido cloacal crudo 
obtenido de los sedimentadores subsiguientes a procesos biológicos aerobios de 
purificación. Si es necesario, sedimentar el efluente dejándolo en un cilindro durante 
aproximadamente 30 minutos. Para