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Facultad de Ciencias Veterinarias -UNCPBA- Evaluación de la calidad de miel con nueces Gerez, María Gabriela; Trama, Andrea; Libonatti, Carina 2020 Tandil Evaluación de la calidad de miel con nueces Tesis de la Carrera de Licenciatura en Tecnología de los Alimentos, presentada como parte de los requisitos para optar al título de grado de Licenciado del estudiante Gerez, María Gabriela. Tutor: Licenciada en Tecnología de los Alimentos, Trama Andrea. Director: Médica Veterinaria, Libonatti Carina. Evaluador: Dra. Basualdo Marina. Agradecimientos A mi familia y amigos por la motivación y el apoyo durante todos estos años de estudio. A Carina Libonatti por la buena predisposición de siempre, su compromiso, dedicación y apoyo a lo largo del proceso que conllevo la tesis. Al Laboratorio de Calidad de Miel y al Departamento de Tecnología y Calidad de los Alimentos por brindarme los materiales e instalaciones para poder realizar los análisis. Y a las personas que lo integran que siempre estuvieron presentes y predispuestos para ayudarme. A la empresa Alimentos Naturales – Natural Foods S.A por permitirme realizar la residencia en sus instalaciones y responder todas mis inquietudes. Al Médico Veterinario Juan Antonio Pasucci por su paciencia y su ayuda desinteresada al realizar los análisis estadísticos. A todos ellos, ¡gracias! Resumen La miel y las nueces son productos estables respecto a los microorganismos debido a su composición y características intrínsecas, sin embargo pueden verse alterados por manipulaciones poco higiénicas durante la extracción, procesamiento, envasado o conservación. El objetivo del presente trabajo es desarrollar un producto elaborado con miel y nueces, y evaluar su calidad a diferentes temperaturas y tiempos de almacenamiento. Previo al desarrollo del producto final, se realizaron análisis fisicoquímicos (determinación de humedad, pH y acidez) y análisis microbiológicos (determinación de mohos y levaduras, Clostridium sulfito reductores, Salmonella spp., Coliformes totales, Coliformes fecales y Staphylococcus aureus) en la materia prima, obteniendo valores que se encuentran dentro de los límites establecidos por la legislación vigente. Luego se procedió al envasado del producto final en la sala de elaboración de la planta fraccionadora de miel, realizando análisis microbiológicos de ambiente e hisopados en envases, obteniendo resultados óptimos. Las muestras fueron almacenadas a tres temperaturas distintas: temperatura ambiente (20°C ± 5°C), temperatura de refrigeración (4°C -7°C) y temperatura extrema (45°C). Se realizaron tres muestreos: al momento cero, a los veinte días y a los cuarenta días posteriores del envasado; realizando determinados análisis microbiológicos (recuentos de mohos y levaduras, recuento de Clostridium sulfito reductores, recuento de Coliformes totales, recuento de Coliformes fecales e investigación de Salmonella spp.); obteniendo resultados adecuados, con algunas recomendaciones. Como última instancia se realizó un análisis sensorial a 97 consumidores los cuales evaluaron las características de tres muestras (M1 – almacenada a temperatura ambiente, M2 – almacenada a temperatura de refrigeración, M3 – envasada en el momento); siendo de mayor agrado para la mayoría de los consumidores M3. Palabras clave: miel, nueces, miel con nueces, análisis fisicoquímicos, análisis microbiológicos, análisis sensorial, determinaciones, calidad. Índice Introducción…………………………………………………………………….1 Marco legal……………………………………………………………………...2 - Definición de miel……………………………………………………...2 - Composición de la miel………………………………………………..2 - Condiciones generales de higiene…………………………………..2 - Criterios microbiológicos………………………………………………2 - Características de la miel……………………………………………...3 - Definición de frutos secos…………………………………………….4 - Definición de nueces………………………………………………….5 - Requisitos intrínsecos…………………………………………………5 - Requisitos microbiológicos……………………………………………8 Marco teórico……………………………………………………………………9 - Definición de miel……………………………………………………...9 - Composición química de la miel……………………………………...9 - Características fisicoquímicas de la miel…………………………....12 - Cristalización de la miel……………………………………………….13 - Flora microbiana habitual……………………………………………..15 - Microorganismos contaminantes……………………………………..16 - Definición de nuez……………………………………………………..19 - Composición de la nuez……………………………………………….19 - Cosecha de la nuez…………………………………………………….19 - Calidad de nueces……………………………………………………...21 - Vida útil de los alimentos………………………………………………22 - Evaluación sensorial…………………………………………………...23 Materiales y métodos…………………………………………………………...25 - Proceso de obtención de miel líquida………………………………...25 - Determinaciones fisicoquímicas en miel…………………………......26 - Determinaciones fisicoquímicas en nueces…………………………27 - Determinaciones microbiológicas en materia prima………………...28 - Envasado de miel con nueces………………………………………...28 - Análisis microbiológicos de ambiente………………………………...28 - Análisis microbiológicos de envases…………………………………29 - Análisis microbiológicos del producto final…………………………..29 - Análisis sensorial del producto final………………………………….30 Resultados y discusión………………………………………………………...31 - Análisis de la materia prima…………………………………………...31 - Determinaciones fisicoquímicas ……………………………………..31 - Determinaciones fisicoquímicas en nueces………………………...31 - Análisis de miel…………………………………………………………31 - Análisis de nueces……………………………………………………..32 - Determinaciones microbiológicas…………………………………….33 - Determinaciones microbiológicas en miel…………………………...33 - Determinaciones microbiológicas en nueces……………………….34 - Análisis del producto final – Miel con nueces………………………35 - Análisis microbiológicos de ambiente………………………………..35 - Análisis microbiológicos de envases….……………………………...36 - Determinaciones microbiológicas en producto final………………..36 - Análisis sensorial del producto final………………………………….38 Conclusiones…………………………………………………………………....40 Bibliografía……………………………………………………………………….41 Anexos…………………………………………………………………………....51 - Anexo 1 – Escala hedónica y cuestionario…………………………..51 1 Introducción Actualmente las exigencias de los consumidores se orientan hacia alimentos saludables, naturales y de consumo inmediato, con un alto contenido de nutrientes, donde el aspecto, el sabor y la textura deben tener un atractivo que saque de la monotonía que siempre acompaña la alimentación habitual. Es por ello que el desarrollo de nuevos productos debe adaptarse a estas nuevas tendencias de consumo (Figueroa, 2018). La elaboración de miel con nueces busca cumplir con estas expectativas de consumo, permitiendo crear oportunidades de mercado para formulaciones y combinación de productos enfocándose en ingredientes naturales como la miel y las nueces, además de adicionarle al producto un valor agregado. La miel es el producto dulce elaborado por las abejas obreras a partir del néctar de las flores o de exudaciones de otras partes vivas de las plantas o presentes en ellas, que dichas abejas recogen, transforman y combinan con substancias específicas propias, almacenándolo en panales, donde madura hasta completar su formación. Por otro lado, las nueces son consideradas frutos secos, los cuales presentan, en su estado natural de maduración un contenido de humedad tal, que permite su conservación sin necesidad de un tratamiento especial (Código Alimentario Argentino, 2010). Si bien ambas materias primas por sus características intrínsecas presentan una elevada estabilidad microbiológica y podrían ser considerados como alimentos seguros, pueden verse alterados debido a manipulaciones poco higiénicas durante la extracción, procesado,envasado o conservación. El objetivo del presente trabajo es evaluar la calidad fisicoquímica, microbiológica y sensorial de un producto elaborado con miel y nueces, almacenado a diferentes temperaturas, y en diferentes tiempos post-elaboración. 2 Marco legal Definición de miel Con la denominación de Miel o Miel de Abeja, se entiende el producto dulce elaborado por las abejas obreras a partir del néctar de las flores o de exudaciones de otras partes vivas de las plantas o presentes en ellas, que dichas abejas recogen, transforman y combinan con substancias específicas propias, almacenándolo en panales, donde madura hasta completar su formación (Código Alimentario Argentino (C.A.A), 2010). Composición de la miel La miel es una solución concentrada de azúcares con predominancia de glucosa y fructosa. Contiene además una mezcla compleja de otros hidratos de carbono, enzimas, aminoácidos, ácidos orgánicos, minerales, sustancias aromáticas, pigmentos y granos de polen (C.A.A, 2010). Condiciones generales de higiene La miel deberá estar exenta de sustancias inorgánicas u orgánicas extrañas a su composición tales como insectos, larvas, granos de arena y no exceder los máximos niveles tolerables para contaminaciones microbiológicas o residuos tóxicos. Su preparación deberá realizarse de conformidad con los Principios Generales sobre Higiene de Alimentos recomendados por la Comisión del Codex Alimentarius, FAO/OMS (C.A.A, 2010). Criterios microbiológicos La miel deberá cumplir con las siguientes características microbiológicas: Coliformes totales/g n=5 c=0 m=0 Salmonella spp – Shigella spp/25g n=10 c=0 m=0 Hongos y levaduras UFC/g n=5 c=2 m=10 M=100 (C.A.A, 2010). 3 Donde: n = Número de muestras examinadas de un lote. m = Límite microbiológico que, en un plan de dos clases, separa la calidad aceptable de la rechazable y en un plan de tres clases separa la calidad aceptable de la marginalmente aceptable. M = Límite microbiológico que en un plan de tres clases separa la calidad marginalmente aceptable de la rechazable. c = Número máximo permitido de unidades de muestra defectuosas (plan de dos clases) o marginalmente aceptables (plan de 3 clases) (ANMAT, 2007). Características de la miel La miel deberá responder a las siguientes características: a) Consistencia fluida, viscosa o cristalizada total o parcialmente; color variable desde casi incolora hasta pardo oscuro; sabor y aroma propio. b) Agua, por refractometría, Máx.: 18,0%. c) Cenizas a 550-600°C: Miel de flores, Máx.: 0,6%. Miel de mielada y mezcla de miel de mielada y miel de flores, Máx.: 1,0%. d) Azúcares reductores (calculados como Azúcar invertido). Miel de flores: Mín.: 65%. Miel de mielada y mezcla de miel de mielada y miel de flores, Mín.: 60%. e) Sacarosa aparente. Miel de flores, Máx.: 8%. Miel de mielada y mezcla de miel de mielada y miel de flores, Máx.: 10%. f) Sólidos insolubles en agua, excepto en miel prensada, Máx.: 0,1%. Sólidos insolubles de agua de miel prensada, Máx.: 0,5%. g) Acidez, Máx.: 40 miliequivalentes/kg. h) Índice de diastasa (Escala de Gothe), Mín.: 8. i) Hidroximetilfurfural, Máx.: 40 mg/kg. j) Dextrinas totales. Miel de flores, Máx.: 3%. 4 En mieles con contenido natural bajo de enzimas, como mieles de cítricos, se admite: Índice de diastasa (Escala de Gothe): Mín.: 3, siempre que el contenido de hidroximetilfurfural no sea mayor de 15 mg/kg. k) No deberá contener mohos, insectos, restos de insectos, larvas, huevos, así como substancias extrañas a su composición. l) No presentará signos de fermentación ni ser efervescente. m) La acidez de la miel no deberá ser modificada artificialmente. n) No deberá contener ningún aditivo. Este producto se envasará en recipientes bromatológicamente aptos y se rotulará: Miel o Miel de Abeja. Se aplicará el Reglamento MERCOSUR para el rotulado de alimentos envasados. La vida útil del producto será tal que se garantice el cumplimiento de los factores esenciales de calidad e higiene establecidos en esta norma. Deberá indicarse en la rotulación obligatoria la leyenda: "condiciones de conservación: mantener en lugar fresco". En el caso de Miel para uso industrial deberá consignarse esta característica formando una sola frase, con caracteres de igual tamaño, realce y visibilidad. La miel que se expenda a granel deberá consignar las exigencias generales y específicas de rotulación en el cuerpo del envase. Este deberá ser de uso exclusivo para miel y bromatológicamente apto. En todos los casos deberá consignarse en el rotulado el peso neto y el año de cosecha (C.A.A, 2010). Definición de frutos secos Se entiende por Fruta destinada al consumo, el fruto maduro procedente de la fructificación de una planta sana. Fruta Seca: Es aquella que presenta, en su estado natural de maduración un contenido de humedad tal, que permite su conservación sin necesidad de un tratamiento especial. Se presentan con endocarpio más o menos lignificados, siendo la semilla la parte comestible (nuez, avellana, almendra, castaña, pistacho, entre otras) (C.A.A, 2010). 5 Definición de nueces Con el nombre de nueces, se entienden los endocarpios lignificados de los frutos maduros, sanos y secos de los nogales Juglans regia L. Comercialmente se clasifican en: 1) Tipos: Se establecen para el comercio los siguientes tipos: a. Nueces con cáscara: Son las nueces enteras o sea el endocarpio lignificado conteniendo la semilla comestible. b. Nueces sin cáscara: Son las que se les ha eliminado la cáscara y los tabiques internos, o sea que se trata de la semilla comestible sin el endocarpio lignificado. Este Tipo comprende las siguientes clases: b.1. Mitades: Es la semilla dividida longitudinalmente en dos partes aproximadamente iguales. b.2. Cuartos: Es la semilla dividida longitudinalmente en cuatro partes iguales. En el rotulado deberá consignarse la leyenda: Sin cáscara, con el agregado de en mitades o en cuartos, según corresponda, pudiendo reemplazarse en el primer caso por la expresión conocida comercialmente de Mariposa. 2) Tamaños: En el rotulado se consignará: Gigantes, Grandes, Medianas, Chicas y Enanas según la medida de las Nueces con cáscara, debiendo tomarse la medida transversalmente y en su parte más ancha de acuerdo a la siguiente escala: Gigantes: más de 35 mm. Grandes: de 30 a 35 mm. Medianas: de 28 a 30 mm. Chicas: de 25 a 28 mm. Enanas: menos de 25 mm. (C.A.A, 2010). Requisitos intrínsecos Las nueces deben cumplir con los siguientes requisitos intrínsecos: A- Nueces con cáscara. Las nueces con cáscara deben cumplir con los siguientes requisitos intrínsecos: 6 a) Requisitos generales: I- Enteras. II- Llenas (no vanas). III- Limpias. IV- Sanas. V- Bien formadas. VI- Secas (sin humedad externa anormal). VII- Libre de mohos. VIII- Libre de manchas. IX- Libre de insectos y arácnidos. X- Libres de fragmentos de nueces. XI- Libres de trizaduras o rajaduras. XII- Exentas de materias extrañas. XIII- Exentas de olores y sabores extraños. XIV- Madurez apropiada. XV- Características típicas de la variedad. XVI- Color uniforme. XVII- Humedad no mayor al 10%. b) Calibre: Se establecen los siguientes calibres debiendo tomarse la medida transversalmente (es decir perpendicular a la unión de las valvas) y en su parte más ancha: I- Mayor de treinta y seis milímetros (36 mm). II- Mayor de treinta y cuatro milímetros (34 mm) y menor o igual a treinta y seis milímetros (36 mm). III- Mayor de treinta y dos milímetros (32 mm) y menor o igual a treinta y cuatro milímetros (34 mm). IV- Mayor de treinta milímetros (30 mm) y menor o igual a treinta y dos milímetros (32 mm). V- Mayor de veintiocho milímetros (28 mm) y menor o igual a treinta milímetros (30 mm). VI- Menorde veintiocho milímetros (28 mm). B- Nueces sin cáscara. Las nueces sin cáscara deben cumplir con los siguientes requisitos intrínsecos: 7 a) Requisitos generales: I- Limpias. II- Sanas. III- Bien formadas. IV- Secas (sin humedad externa anormal). V- Libre de mohos. VI- Libre de manchas. VII- Libre de insectos y arácnidos. VIII- Sin cuartos ni cuartillos cuando se trate de mitades. IX- Sin cuartillos cuando se trate de cuartos. X- Exentas de materias extrañas. XI- Exentas de olores y sabores extraños. XII- Madurez apropiada. XIII- Color uniforme. XIV- Humedad no mayor al 5%. b) Tipos: Las nueces sin cáscara se clasificarán en tres tipos: I- Mitades o mariposa: Es la semilla dividida longitudinalmente en dos partes aproximadamente iguales. II- Cuartos: Es la semilla dividida en forma longitudinal en cuatro partes aproximadamente iguales. III- Cuartillos: son trozos de cuartos no inferiores a tres milímetros (3 mm). c) Color: Se establecen siete colores, basados en la carta de colores del United States Departament of Agriculture (USDA) o las que en el futuro establezca la Dirección de Calidad Agroalimentaria del SENASA: I- Extra claro o extra blanco. II- Claro o blanco. III- Ámbar claro o dorado claro. IV- Ámbar o dorado. V- Cobrizo. VI- Negro. VII- Amarillo. 8 d) Calibre: Se establecen los siguientes calibres para el tipo mariposa, debiendo tomarse las medidas transversalmente y en su parte más ancha de la mariposa, según la siguiente escala: I- Más de treinta milímetros (30 mm). II- Más de veintiséis milímetros (26 mm) a menos de treinta milímetros (30 mm). III- Menos de veintiséis milímetros (26 mm) (SENASA, 2013). Requisitos microbiológicos Las nueces deberán cumplir con las siguientes características microbiológicas: Escherichia coli Ausencia en 1 g de muestra. Staphylococcus aureus Ausencia en 1 g de muestra. Pseudomonas aeruginosa Ausencia en 1 g de muestra. Salmonella spp. Ausencia en 25 g de muestra. Clostridium perfringens Ausencia en 25gr de muestra. (SENASA, 2013) Mohos y levaduras/g n=5 c=1 m=102 M=103 (Reglamento Sanitario de los Alimentos – Chile, 1997). 9 Marco teórico Definición de miel Se entiende por miel la sustancia dulce natural producida por abejas obreras a partir del néctar de las plantas o de secreciones de partes vivas de las plantas o de excreciones de insectos succionadores de plantas que queden sobre partes vivas de plantas, que las abejas recogen, transforman y combinan con sustancias especificas propias, y depositan, deshidratan, almacenan y dejan en el panal para que madure y añeje (FAO, 1999). Composición química de la miel La miel constituye uno de los alimentos más antiguos que el hombre aprovechó para nutrirse. Su composición es compleja y los carbohidratos representan la mayor proporción, dentro de los que destacan la fructosa y glucosa, pero además contiene una gran variedad de sustancias menores como enzimas, aminoácidos, ácidos orgánicos, antioxidantes, vitaminas y minerales (FAO, 1999). Carbohidratos: Son los componentes mayoritarios de la miel. Representan aproximadamente el 80% de los componentes totales. Dentro de los carbohidratos los principales azúcares son los monosacáridos fructosa y glucosa. Estos azúcares simples representan el 85% de sus sólidos, ya que la miel es esencialmente una solución altamente concentrada de azúcares en agua. Los otros sólidos de la miel incluyen al menos otros 25 azúcares complejos, pero algunos de ellos están presentes en niveles muy bajos y todos están formados por la unión de la fructosa y glucosa en diferentes combinaciones (Ulloa et al., 2010). Ácidos: Los ácidos orgánicos representan aproximadamente el 0.5% de los sólidos de este alimento. Ellos son los responsables del bajo pH (3.5 a 5.5) de la miel y de la excelente estabilidad de la misma. Son varios los ácidos orgánicos que están presentes en la miel, aunque el que predomina es el ácido glucónico. El ácido glucónico se origina de la glucosa a través de la acción de la enzima glucosa oxidasa añadida por las abejas. El efecto combinado de su acidez y el peróxido de hidrógeno ayudan a la conservación del néctar y la miel. Otros 10 ácidos orgánicos contenidos en menor proporción en la miel son el fórmico, acético, butírico, láctico, oxálico, succínico, tartárico, maleico, pirúvico, piroglutámico, α-cetoglutárico, glicólico, cítrico, málico (Ulloa et al., 2010). Proteínas: La miel contiene aproximadamente 0.5% de proteínas, principalmente como enzimas y aminoácidos. Cerca de 20 proteínas no enzimáticas se han identificado en la miel, muchas de la cuales son comunes a distintas mieles. Algunas de ellas tienen su origen en las abejas y otras en el néctar de la planta. La presencia de las proteínas en la miel resulta en una baja tensión superficial, lo que fomenta la formación de las finas burbujas de aire en una marcada tendencia al espumado. La cantidad de aminoácidos libres en la miel es pequeña y no tiene importancia nutricional. En la miel se han encontrado entre 11 y 21 aminoácidos libres, de los cuales la prolina representa alrededor de la mitad del total. Además de la prolina, el ácido glutámico, alanina, fenilalanina, tirosina, leucina e isoleucina se presentan en niveles mayores (Ulloa et al., 2010). Sin embargo pese a la pequeña cantidad de aminoácidos, se cree que los mismos desempeñan un rol fundamental en el desarrollo del color, sabor y aroma de las mieles durante su procesamiento y almacenamiento. Esto es debido a la reacción de los grupos amino con los carbonilos para formar compuestos coloreados y numerosos productos volátiles, como consecuencia de la reacción de Maillard (Buera, 2004). Enzimas: Son añadidas principalmente por las glándulas hipofáringeas de las abejas, aunque algunas pocas proceden de los nectarios de las plantas. Las abejas añaden enzimas a fin de lograr el proceso de transformación del néctar a miel y éstas son en gran parte las responsables de la complejidad composicional de la miel (Ulloa et al., 2010). Las enzimas de la miel se podrían usar como indicadores de calidad, tiempo y tipo de exposición al calor. Las principales enzimas que se encuentran en la miel, desde el punto de vista alimentario son invertasa, glucosa-oxidasa y amilasa. La catalasa y fosfatasa acida también se encuentran presentes en la miel (García et al., 1986). 11 Invertasa: Es la enzima más importante presente en la miel ya que invierte la sacarosa presente en el néctar obtenido por las abejas desde las plantas, en fructosa y glucosa durante el proceso de elaboración y maduración de la miel dentro de los panales (Crane, 1990). Por otro lado, la actividad de la invertasa desaparece rápidamente entre los 55°C y los 65°C, iniciándose su inactivación a los 40°C luego de 10 minutos de exposición al calor (García et al., 1986). Glucosa-oxidasa: Esta enzima es más activa en la miel cuando la concentración de azúcar es entre 25-30%, la actividad del sistema de glucosa-oxidasa se ve disminuida a medida que aumenta la concentración de azúcar durante el proceso de transformación del néctar en miel, desapareciendo por completo cuando todo el néctar ha sido transformado (Crane, 1990). Por acción de la misma, sobre la glucosa presente en el néctar, en presencia de oxígeno, se produce ácido glucónico y H2O2 (peróxido de hidrogeno) que contribuyen junto con la baja actividad de agua (aW) a la preservación de la miel (White et al., 1963). Amilasa: Esta enzima es segregada por las glándulas hipofaríngeas de la abeja, que hidroliza el almidón y otros azucares complejos. La conservación por un largo tiempo, así como la exposición al calor, conlleva la desnaturalización de la enzima con la consiguiente baja en su actividad (Piro, 1996). Minerales:El contenido de minerales en la miel oscila entre 0,02 a 1%, siendo el potasio cerca de la tercera parte de las cenizas totales (Ulloa et al., 2010). Los minerales presentes en la miel provienen casi exclusivamente del arrastre que la planta hace de los minerales del suelo a través de la savia, desde donde pasan al néctar. Es por esta razón que el potasio es el mineral predominante en todas las mieles (Gómez, 1995). Vitaminas: Las vitaminas predominantes en la miel, son Tiamina (B1), Niacina (B3), Ácido Pantoténico (B5), Piridoxina (B6), Riboflavina (B12) y Ácido Ascórbico (Vitamina C). La cantidad de vitaminas en la miel y su contribución a la dosis diaria recomendada es despreciable (The National Honey Board, 2003). 12 Características fisicoquímicas de la miel Humedad: El contenido de humedad es una de las características más importantes de la miel y está en función de ciertos factores tales como los ambientales y del contenido de humedad del néctar. La miel madura tiene normalmente un contenido de humedad por debajo del 18% y cuando se excede de este nivel, es susceptible a fermentar, particularmente cuando la cantidad de levaduras osmofílicas es suficientemente alta. Además, el contenido de agua en la miel influye en su viscosidad, peso específico y color, condicionando así la conservación y cualidades organolépticas de este producto. Después de la extracción de la miel de la colmena, su contenido de humedad puede cambiar dependiendo de las condiciones de almacenamiento (Ulloa et al., 2010). Actividad de agua (aW): La actividad de agua de la miel oscila de 0.55 a 0.60 dependiendo del contenido de agua de la misma. Como la humedad ambiente difunde lentamente hacia el seno de la miel, y considerando que es un alimento muy higroscópico, debe evitarse la exposición a ambientes de alta humedad relativa para evitar el crecimiento de hongos aeróbicos en la superficie (Buera, 2004). Acidez: La acidez se debe principalmente a los ácidos orgánicos presentes en la miel que se encuentran en equilibrio con sus lactonas y con algunos iones inorgánicos (fosfatos, sulfatos, cloruros y nitratos). El origen de estos ácidos esta principalmente en las reacciones enzimáticas que tienen lugar durante la maduración y almacenamiento del producto. La acidez es una característica importante de la miel, ya que la protege frente al ataque microbiano y contribuye a darle aroma y sabor así como le confiere propiedades antibacterianas y antioxidantes. La acidez también se relaciona con la probable fermentación por desarrollo de microorganismos, pues durante las fermentaciones los azúcares de la miel se transforman en alcoholes y ácidos por acción de levaduras (Cavia et al., 2007). Viscosidad: Esta es una característica que posee la miel, debido a la gran concentración de azúcares. Esta condición hace que la miel, con tenores de humedad entre el 17% y 18% y con temperaturas de 10˚ C por ejemplo, presente una verdadera dificultad para circular por tuberías. Pero si la miel es calentada, 13 cuanto más se eleva la temperatura, la viscosidad va bajando en relación inversa con el calentamiento, así al llegar a 71-73 ̊ C la viscosidad disminuye en tal forma que se asemeja al agua permitiendo su rápido desplazamiento por las tuberías (Cornejo, 1988). Color: El color de la miel es una propiedad óptica de ésta, y es resultante de los diferentes grados de absorción de la luz de distintas longitudes de onda, por parte de los constituyentes de la miel (Bianchi, 1990). Se relaciona con el origen botánico de ésta, viéndose más o menos modificado con el procesado y almacenamiento. Éste parámetro es importante al momento de valorar la calidad de una miel, condicionando su utilización y su precio (Rivero et al., 1991). El color de las mieles tiende a oscilar mucho, entre el blanco casi transparente que se obtiene en algunas floraciones (romero, limonero, etc.) hasta oscuro, casi negro de otras (miel de monte), siendo el factor que más influye en el color, el contenido de minerales en la miel: las mieles claras tienen un contenido bajo de minerales, del orden del 0,1%, mientras que las mieles oscuras tienen porcentajes más altos, llegando a superar el 1% (Gómez, 1995). Aroma y sabor: El sabor y el aroma dependen fundamentalmente de los componentes aromáticos característicos presentes en el néctar de la flor utilizada por la abeja. Sin embargo, White (1978), señala que la percepción final está notablemente afectada por otros componentes presentes en la miel tales como ácidos, restos de polifenoles, aminoácidos, alcoholes, cetonas, ésteres y aldehídos. La miel es un producto que puede captar fácilmente sabores y aromas extraños y desagradables, provenientes del humo, pintura, combustible, etc., pudiendo llegar a modificar el producto, por lo cual se debe tener cuidado en la limpieza de los envases y tanques donde se deposita la miel, tanto en la higiene durante el proceso, como en la manipulación del producto final (Cornejo, 1994). Cristalización de la miel La formación de cristales de azúcar en miel, consiste en la separación de la glucosa en forma sólida. Generalmente se considera que cuando la glucosa cristaliza de una solución acuosa, como lo es la miel, aproximadamente diez 14 partes de ella en peso se combinan químicamente con una parte de agua, conociéndose dicha combinación como glucosa hidratada (Root, 1976). La cristalización de la miel consiste en la cristalización de la glucosa monohidratada con un 10% de agua, que engloba los demás componentes en la estructura cristalina, lo que da lugar a que la miel se transforme en una masa granujienta, tanto más cohesionada y por lo tanto más estable, cuanto menor sea el contenido de agua y mayor sea la proporción de glucosa (Peris, 1990). En el proceso de cristalización, parte del agua que rodea las moléculas de azucares queda liberada al agruparse entre sí, por lo cual si la temperatura es muy alta y la miel presenta una humedad por encima de 18% puede formarse una capa líquida en la sección superior del envase, por lo que el riesgo de fermentación es bastante elevado (Gómez, 1997). Cualquier miel que presente cristalización, cambia su color a uno más claro. En ocasiones, en las mieles envasadas y cristalizadas se producen unas tonalidades veteadas más claras en algún lado del envase. Este fenómeno suele ocurrir en zonas frías y está producido por una disminución brusca de la temperatura, que hace contraerse a la masa de miel y seca los cristales del azúcar en esa porción del producto (Gómez, 1997). Factores que influyen en la cristalización Comportamiento del azúcar: El azúcar simple, responsable del inicio de la cristalización, es la glucosa, siendo ésta menos hidrosoluble que la fructosa, por lo que mientras más alto es el contenido de glucosa en la miel, más rápido cristalizara; por el contrario, mieles con bajo contenido de glucosa y una cantidad de fructosa más alta, presentan una cristalización más lenta (Bogdanov, 1987). La velocidad de cristalización, forma, tamaño y densidad de los núcleos, varían con la composición de la miel y la temperatura ambiental. Se definen como núcleos de cristalización los monocristales de glucosa de distintos tamaños distribuidos en la miel (Bonvehí, 1989). Temperatura: A medida que la temperatura es mayor, la solubilidad del azúcar aumenta y la tendencia a la cristalización disminuye. A bajas 15 temperaturas la solubilidad baja, con un aumento simultáneo de la viscosidad, mientras más viscosa sea una solución, menos cristales desarrollará. La temperatura óptima para la cristalización de la miel es 14- 15°C, donde se aprecia una cristalización rápida, formándose cristales relativamente finos; temperaturas por fuera de la óptima, tienden a disminuir la velocidad de cristalización, generandola formación de cristales más grandes (Bogdanov, 1987). Presencia de sólidos: La presencia de partículas sólidas, favorece la velocidad de cristalización debido a que estas partículas actúan como núcleos de cristalización, alrededor de las cuales se aglutinan las moléculas de azúcar (Gómez, 1997). Flora microbiana habitual El término calidad referido a los alimentos, engloba una serie de propiedades organolépticas características tales como la textura, color, sabor, etc. por las cuales este alimento resulta en un producto comestible, de aspecto atractivo, nutritivo y agradable al paladar. En el caso específico de la miel, la calidad está determinada por sus características sensoriales, químicas, físicas y microbiológicas. Como todo producto de origen natural, las mieles de Apis mellifera, presentan una flora microbiana propia. Bacterias: En la miel se encuentran bacterias del género Bacillus, éstas se presentan en estado esporulado, aunque en mieles recientes se pueden encontrar formas vegetativas. Se trata de microorganismos que no tienen acción negativa sobre la miel y no son peligrosas para la salud humana. Bajo algunas circunstancias pueden encontrarse algunos patógenos para las abejas, como esporas de Paenibacillus larvae, responsable de la Loque americana, y Bacillus alvei, agente relacionado con la Loque europea. Mohos: Los mohos que se encuentran en algunas mieles pertenecen a los géneros Penicilliun y Mucor; éstos provienen del polen, se encuentran 16 en la miel en forma de esporas, pero no crean problemas en la miel a no ser que se absorba humedad en la superficie debido a un mal almacenamiento, pudiendo entonces desarrollarse y alterar el producto. Levaduras: Las levaduras por presentar capacidad de evolucionar en un ambiente tan concentrado como los azúcares presentes en la miel, se conocen como osmófilas o sacarófilas, provienen de las flores del medio ambiente de donde se originan o manipulan las mieles, del equipo utilizado en las operaciones de extracción y sobre todo de las condiciones de envasado. Estas levaduras, pertenecen al género Saccharomyces, y son las principales responsables de la fermentación de la miel, cuando las condiciones de humedad son elevadas (Salamanca et al., 2001). Microorganismos contaminantes La miel de abejas puede estar contaminada con microorganismos que se encuentran alojados en el polen, el néctar, en el tracto digestivo de las abejas, en el aire, en las flores y el medio ambiente. No obstante las malas prácticas de cosecha y posterior manipulación de la miel e inadecuados sitios de ubicación de las colmenas también pueden ocasionar contaminación microbiológica. Coliformes: Comprende todos los bacilos Gram negativos aerobios y anaerobios facultativos, no formadores de esporas capaces de fermentar la lactosa produciendo ácido y gas a una temperatura de 32°C dentro de un periodo de 24 a 48hs. La presencia de Coliformes en la miel, nos da un índice del grado de contaminación de la materia prima, fallas en los procesos de extracción y elaboración o contaminaciones post tratamiento térmico (Rey y Silvestre, 2005). Mohos y levaduras: La importancia de la presencia de Mohos y Levaduras atípicas en la miel, está determinada por la capacidad de producir diferentes grados de deterioro y descomposición de los mismos. Los hongos son microorganismos aerobios estrictos, que se desarrollan en un rango de pH de 2 a 9, con temperaturas entre 10 a 35°C y pueden crecer en condiciones de actividad de agua relativamente bajas (<0,85). - Los mohos son hongos multicelulares filamentosos, dotados de un micelio verdadero, microscópicos y su crecimiento en los alimentos se reconoce 17 fácilmente por su aspecto aterciopelado o algodonoso. - Las levaduras son hongos que crecen generalmente en forma de agregados sueltos de células independientes, cuando crecen sobre medios sólidos, forman colonias de aspecto característico que recuerdan a las colonias bacterianas (ANMAT, 2014). Salmonella spp: El género Salmonella pertenece a la familia Enterobacteriaceae. Son bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos, no formadores de esporas. Se encuentran en el trato intestinal de los seres humanos y animales, actuando como reservorios, difundiendo la Salmonella por el medio ambiente, eliminándola por materia fecal (Rey y Silvestre, 2005). Algunos estudios han demostrado que determinados géneros de Salmonella, son capaces de resistir 34 días en la miel, cuando ésta se mantiene a 10º C, con lo que existiría un riesgo si el producto contaminado se emplea como ingrediente en la industria alimentaria o en el hogar (Cárdenas et al., 2008). Escherichia coli: Los Coliformes Fecales incluyen bacilos Gram negativos, aerobios y anaerobios facultativos, no formadores de esporas capaces de fermentar la lactosa produciendo ácido y gas a una temperatura de 45°C dentro de un período de 24-48hs. La presencia de Coliformes Fecales y Escherichia coli se utiliza para indicar una contaminación potencialmente peligrosa, por el hecho de que el hábitat natural de la familia Enterobacteriaceae, a la que pertenecen estos microorganismos, son las heces humanas y de animales de sangre caliente. Una población de Coliformes Fecales es posible que contenga una alta proporción de Escherichia coli como el indicador más positivo de contaminación fecal reciente. Esta contaminación se produce de modo general, por deficiencia en la limpieza y desinfección de las industrias y por falta de higiene en los manipuladores. La contaminación en alimentos por Escherichia coli, lleva implícito el riesgo de que hayan podido llegar al alimento microorganismos entéricos patógenos, haciendo su consumo peligroso (ANMAT, 2014). 18 Staphylococcus aureus: Es una bacteria anaerobia facultativa, Gram positiva, productora de coagulasa, catalasa positiva, inmóvil y no esporulada. Su peligrosidad radica en que produce, cuando las condiciones le son favorables, enterotoxinas termorresistentes de elevada estabilidad, que al ser ingeridas, desencadenan la intoxicación estafilocóccica (Rey y Silvestre, 2005). El hombre es el principal reservorio de Staphylococcus aureus ya que se encuentra en la piel y en las vías respiratorias superiores. La contaminación de los alimentos puede ocurrir desde los operadores, por contacto directo con lesiones en la piel o por microgotas salivales generadas en estornudos o tos y por contaminación cruzada por el uso de utensilios contaminados (ANMAT, 2014). Clostridium Sulfito-Reductores: Los anaerobios sulfito-reductores constituyen un grupo bacteriano asociado al género Clostridium. Se caracterizan por ser organismos Gram positivos, anaeróbicos, formadores de esporas que tienen la propiedad de reducir el ion sulfito a sulfuro en presencia de citrato férrico u otra sal de metales pesados, formando colonias negras características. En los alimentos, recuentos elevados de Clostridium Sulfito-Reductores pueden indicar la existencia de patógenos, tales como Clostridium botulinum y Clostridium perfringens. Las bacterias del género Clostridium son ubicuas en el medio ambiente, y sus esporas se encuentran habitualmente en el suelo, polvo, sedimentos, medio acuático, vegetación en descomposición y en el tracto digestivo de los animales, incluido el hombre (ANMAT, 2014). La presencia de esporos de Clostridium botulinum es en especial peligrosa para bebés y niños de corta edad, siendo causante del botulismo infantil. La miel, al presentar un alto contenido de azúcares y un pH entre 3.5 a 5.5, permite que estos microorganismos sobrevivan y una vez ingeridos por el niño, pueden pasar a forma vegetativa, multiplicándose y colonizando el colon, produciendo luego, la neurotoxina, causante de la enfermedad. Diversos estudios realizados, mostraron que entreun 7 a 13% de las mieles estudiadas, contaban con valores de 1 a 10 esporos/kg de Clostridium botulinum. Debido a esta contaminación y la asociación epidemiológica de la ingestión de miel con el botulismo infantil, U.S. 19 Food and Drug Administration, Centros de Control y Prevención de Enfermedades y la Academia Americana de Pediatría han alertado sobre la peligrosidad de este agente, aconsejando evitar la ingesta de mieles en niños menores de un año (Monetto et al., 1999). Definición de nuez La nuez (Juglans regia L.) es una drupa, con endocarpio (cáscara) de textura dura, lignificado y arrugado, compuesto por dos valvas, con su interior dividido incompletamente en dos o cuatro celdas y la semilla (fracción comestible) con dos o cuatro lóbulos. En el lenguaje productivo-comercial, se denominan “cascos” las valvas del endocarpio y “pepita”, “pepa” o “pulpa” a la semilla. Ésta puede extraerse en dos mitades denominadas “mariposas”, o en cuatro cuartos (“media mariposa”). La semilla está cubierta por un tegumento o piel que presenta distintas tonalidades, desde claras a oscuras (Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca, 2005). Composición de la nuez El contenido de humedad de las nueces, al momento de la cosecha, varía entre 10 y 30%; para darles estabilidad y posibilidades de almacenamiento, las nueces deben secarse hasta un contenido de humedad entre un 12 y15%. Las nueces se destacan por poseer un alto contenido de lípidos que varía de un 64 a un 72 %. Los principales ácidos grasos de la nuez son de tipo insaturado, como el linoleico (ω 6) con un 58.3% del total de los ácidos grasos y el linolénico (ω 3) con un 13,8 %. La proporción entre ácidos grasos saturados y polinisaturados que contiene la nuez es de 1 a 7, proporción difícil de encontrar en otros alimentos naturales. Este alto contenido de aceites es responsable de la rancidez oxidativa, que es uno de los problemas más serios que afecta la calidad de las nueces y lo que limita su utilización en el consumo fresco e industrial (Gutiérrez, 2004). Cosecha de la nuez Existen dos formas de cosechar las nueces: Manual: Es la manera tradicional, denominada garroteo, consiste en golpear las ramas para que caigan los frutos. El procedimiento implica 20 daños para la planta, por lo que es habitual en plantaciones pequeñas e irregulares, donde la recolección mecanizada no resulta rentable. Mecanizada: Está generalizada en las plantaciones de grandes extensiones. Se emplean sacudidores o vibradores mecánicos que sacuden el árbol y desprenden el 90-95% de las nueces. El fruto cae sobre una lona o malla que lo preserva de golpes y facilita su transporte. La maduración escalonada de la nuez supone la necesidad de efectuar varias pasadas. Para reducir este número, algunos establecimientos concentran la maduración con tratamientos a base de hormonas vegetales. Este sistema de cosecha presenta como ventajas el ahorro de mano de obra y de tiempo destinado a la recolección. Además la nuez no permanece en el suelo, reduciéndose así el riesgo de deterioros (Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca, 2005). La recolección de las nueces se inicia tras la maduración, con objeto de reducir al mínimo los problemas por infestación de hongos o insectos. Durante este período se procede a la eliminación de restos o materiales en descomposición donde puedan desarrollarse los hongos, en el terreno situado bajo los árboles. Tras su recolección, las nueces son seleccionadas descartando todas aquellas que posean su cáscara rota; se eliminan pelones y todas las materias extrañas que puedan servir de sustrato para el desarrollo microbiológico, y luego son inmediatamente puestas en secadero para eliminar su humedad. Las nueces que no pueden ser sometidas a secado de manera inmediata se almacenan temporalmente lo más secas posibles y protegidas de lluvias, insectos, roedores, aves y del drenaje de aguas del suelo (Ministerio de Producción y Trabajo, 2014). El secado se hace para reducir el contenido de humedad del fruto llegando hasta un 12-15%. Generalmente las nueces son secadas con cáscara, y después descascaradas. Puede realizarse en forma artificial, mediante silos equipados con ventiladores y calefactores, o en forma natural exponiéndolas al sol. Este último procedimiento es el más difundido en nuestro país (Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca, 2005). Las nueces deben secarse sobre recipientes que no estén en contacto directo 21 con el piso y protegidos de posibles fuentes de contaminación (animales, productos químicos, etc.). Periódicamente la nuez a secar se remueve con las manos o con algún utensilio previamente higienizado para evitar la acumulación de humedad y así la proliferación de microorganismos patógenos u otras plagas (Ministerio de Producción y Trabajo, 2014). En el caso de que el producto final sean nueces en mitades o cuartos, luego del secado se realiza el pelado de la nuez. Esta etapa del proceso puede realizarse en forma manual o mecánica, sin embargo pelarlas a mano impide que el producto presente las “lastimaduras” propias del pelado con máquinas (Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca, 2005). La nuez puede venderse a granel o envasada, el fraccionamiento se realiza en bolsas de 25 ó 50 Kg o en envases más pequeños, de 5 Kg, 1 Kg, 500 gramos, etc. Una vez envasado el producto, se debe evitar condensaciones dentro del envase. Se recomienda que la temperatura en el interior del depósito sea inferior a los 10ºC (Ministerio de Producción y Trabajo, 2014). Calidad de nueces La calidad en la comercialización de las nueces se determina de acuerdo a diversos parámetros de tipificación. Considerando la nuez entera se pueden citar: tamaño, peso, forma, espesor de la cáscara, textura de la superficie de la cáscara y color de la cáscara. En el caso de la pepita, se evalúa el rendimiento al descascarado, el tamaño, el color del tegumento o piel y el sabor. En general, la nuez entera es el producto de mayor calidad; cuando presenta algún defecto en la cáscara o su tamaño no es el adecuado, se la destina al pelado, y se comercializa como mariposa, en mitades, en cuartos o con diversos grados de molienda (Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca, 2005). La calidad de las nueces puede estar afectada por desarrollos microbiológicos, siendo de gran importancia el desarrollo de hongos productores de aflatoxinas. Aflatoxinas: Las aflatoxinas son sustancias altamente tóxicas, resultantes del metabolismo secundario de algunas cepas de Aspergillus flavus y Aspergillus parasiticus. Las aflatoxinas al ser metabolitos secundarios no representan sustancias requeridas para el crecimiento del hongo, la finalidad de su síntesis 22 es aumentar su adaptación al medio. Para esto, la especie promotora deberá primero establecerse en el hábitat para la producción de la toxina, acción bastante limitada en sustratos pobres y con condiciones ambientales adversas como lo es la cáscara de la nuez, sin embargo, la pulpa podría ofrecer un sustrato rico para su desarrollo (Ministerio de Producción y Trabajo, 2014). Las especies Aspergillus que producen aflatoxinas, y en consecuencia la contaminación de los alimentos, están muy difundidas en zonas del mundo con climas cálidos y húmedos. El Aspergillus flavus y el Aspergillus parasiticus no pueden crecer o producir aflatoxinas cuando la actividad acuosa es menor de 0,7, la humedad relativa es inferior al 70% y las temperaturas se mantienen por debajo de los 10 °C. Lo ideal sería que cuando la recolección de las nueces se realice sacudiendo los árboles, se utilicen cosechadoras mecánicas dotadas de un bastidor para recoger las nueces, o algún tipo de telas o lonas protectora colocadas bajo los árboles para impedir que las nueces caigan al suelo. Tras su recolección,las nueces deberán ser seleccionadas para eliminar las que estén dañadas, podridas, vacías y rancias y ser transportadas lo antes posible a las instalaciones de elaboración (para su descascarado inmediato) en medios de transporte que estén limpios, secos, protegidos contra la humedad y exentos de insectos y proliferación visible de hongos. Si las nueces no pueden transportarse inmediatamente a las instalaciones de elaboración, deberán almacenarse temporalmente de forma que se mantengan secas y protegidas de la lluvia, los insectos, roedores y aves y el drenaje del agua del suelo. Vida útil de los alimentos La vida útil es un período en el cual un alimento mantiene las características físicas, químicas, nutricionales, sensoriales, microbiológicas y de seguridad aceptables para el consumidor, almacenándolo bajo condiciones óptimas preestablecidas. En el instante en que alguna de las características mencionadas se considera como inaceptable, el producto ha llegado al fin de su vida útil (Anzueto, 2012). 23 Evaluación sensorial La división de evaluación sensorial del Instituto de Tecnólogos de Alimentos de Estados Unidos, define la evaluación sensorial como, la disciplina científica utilizada para evocar, medir, analizar e interpretar las reacciones a aquellas características de alimentos y otras sustancias, que son percibidas por los sentidos de la vista, olfato, gusto, tacto y oído. Existen diferentes pruebas sensoriales entre ellas se pueden describir: Pruebas descriptivas: Se trata de definir las propiedades de un alimento y de medir su magnitud o intensidad lo más objetivamente posible. Para estas pruebas se requieren jueces expertos o muy bien entrenados. Estos procedimientos se conocen como análisis descriptivos cuantitativos y usa diseños experimentales y análisis estadístico. El panel para tal análisis podría consistir de quizá 10 a 12 individuos bien entrenados (Carrillo y Munguía, 2013). Pruebas de discriminación: Sirven para conocer si hay o no diferencia entre dos o más muestras y la magnitud de esa diferencia. Se utilizan en control de calidad o para conocer el efecto en un producto de un cambio en su procesado o en su formulación. Generalmente las realizan jueces de laboratorio (entre 7 y 15). En algunos casos la complejidad de las pruebas aconseja utilizar jueces entrenados (CIAL, 2011). Pruebas afectivas: El principal propósito es evaluar la respuesta (reacción, preferencia o aceptación) de consumidores reales o potenciales de un producto. A diferencia de los métodos analíticos que se realizan con evaluadores seleccionados y entrenados, las pruebas afectivas se realizan con los consumidores objetivo del producto en cuestión (Sosa, 2011). Los jueces no entrenados evalúan con distintos valores ciertos atributos de acuerdo al grado de conocimiento de estos o a su gusto personal. Por esta razón, para realizar este tipo de análisis de aceptabilidad con consumidores, se requiere un número elevado de personas, para que los resultados sean representativos (Jáuregui, 2006). La escala hedónica es una prueba afectiva, que consiste en que el consumidor expresa su reacción subjetiva ante el producto, indicando si le gusta o le 24 disgusta, si lo acepta o lo rechaza. Los métodos de escalas involucran la aplicación de números para cuantificar experiencias sensoriales. A través de este proceso de números, la evaluación sensorial se vuelve una ciencia cuantitativa sujeta a análisis estadísticos, modelos y predicciones. Los números pueden ser asignados por sensaciones de los consumidores en una variedad de maneras: algunos por simple categorización, por ordenamiento, o en palabras que intentan reflejar la intensidad de la experiencia sensorial (Lawless y Heymann, 1998). Las escalas hedónicas usadas frecuentemente son las siguientes: - Escala hedónica estructurada de 9 puntos: El consumidor debe indicar su agrado/desagrado haciendo una marca en el cuadro que mejor represente su opinión. - Escalas hedónicas faciales: Son utilizadas en investigación infantil o en personas adultas con dificultades para leer o simplemente para llamar su atención. Los consumidores deben indicar su percepción eligiendo una de las expresiones faciales que van desde el enfado (desagrado total) hasta la felicidad (agrado completo). - Escala hedónica de categoría: Utiliza un número definido de respuestas. Cada categoría está descrita verbalmente o cuantitativamente o solamente están fijados los extremos y/o punto medio (Jáuregui, 2006). 25 Materiales y métodos La toma de muestra fue realizada en una planta fraccionadora de miel, localizada en el partido de Tandil, Provincia de Buenos Aires. Las muestras se procesaron en el Laboratorio de Calidad de Miel, ubicado en el Departamento de Tecnología y Calidad de los Alimentos de la Facultad de Ciencias Veterinarias, UNCPBA. Proceso de obtención de miel liquida El proceso de obtención de miel líquida fue realizado en la planta fraccionadora. Descripción de las etapas del proceso: Recepción de materia prima: La miel se recibe en tambores de 300kg aproximadamente. En este paso se realiza el control de proveedores donde se verifican: buenas condiciones de higiene del tambor, el número de Registro Nacional de Productor Apícola (RENAPA) y número de sala de extracción. Precalentamiento de la miel: Una vez determinados los tambores que conformaran la volcada, éstos se sumergen en una batea con agua caliente con el objetivo de eliminar restos de suciedad y facilitar la posterior caída de la miel sólida desde el tambor. Volcado: Se vuelcan los tambores boca abajo sobre las serpentinas del tanque de volcada, y la miel va licuándose. El tiempo de una volcada depende de la época del año, de la naturaleza de la miel, de la textura de la miel, etc. Homogeneizado y decantado: A medida que el tanque de volcada se va llenando, se hace circular agua caliente en las paredes del mismo. La miel volcada se lleva a una temperatura suficiente para lograr que la misma se mezcle y comience a decantar. El tiempo de decantado será de 12 hs como mínimo. Filtrado: En esta etapa, se separan las impurezas que se encuentran en la miel y se eliminan las finas partículas de material en suspensión. La miel pasa por una batería de filtros. 26 Tratamiento térmico: Se utilizan altas temperaturas con el objetivo de lograr retardar la cristalización de la miel. En esta etapa no se modifica ninguna característica fisicoquímica. Decantado: Se realiza un decantado por un mínimo de 12 hs en tanques de decantado. Envasado primario: La miel llega por cañerías, pasando por un filtro y llegando a la tolva envasadora que dosifica de a 4 picos. Los frascos son colocados en la cinta transportadora previamente. Una vez que estos se llenan siguen por la cinta hasta la tapadora, donde un operario es el encargado de colocarle la tapa al frasco y la maquina la ajusta automáticamente. Los envases siguen por la línea y pasan por la etiquetadora. Envasado secundario: Cada unidad del producto terminado se coloca en cajas. Las cajas se colocan en un pallet, una vez completa la cantidad de cajas, se envuelve en film y se identifica para ser almacenado hasta su despacho. Materia prima Se tomaron 30 muestras aleatorias de miel líquida de 500gr cada una, en diferentes tiempos de la línea de envasado, pertenecientes al mismo lote; y 4 muestras de nueces en mitades. Estas muestras fueron sometidas a determinaciones fisicoquímicas y microbiológicas. Se tomaron muestras de materia prima y luego del producto final para tener un correcto seguimiento a nivel microbiológico del producto. Determinaciones fisicoquímicas en miel Determinación de humedad: La técnica se basa en la medición del índice de refracción de la muestra, utilizandoun refractómetro manual “Arcano” a una temperatura entre 18-22°C. Se coloca una película de miel sobre el prisma del aparato y se realiza la lectura. 27 Determinación de pH y acidez: Se pesan 10gr de miel y se agregan 75ml de agua destilada. Con una varilla de vidrio se homogeniza y luego se disuelve bien la miel con ayuda de un agitador magnético. - Para la determinación de pH se utilizaron cintas reactivas, las cuales se sumergieron en la solución y tomaron determinados colores, los cuales fueron comparados con las referencias de la caja. - Para la determinación de acidez, se preparó una solución de NaOH 0,1 N, la cual fue colocada en una bureta y a la solución de miel se le agregaron 2 gotas del indicador fenolftaleína. La titulación se realizó gota a gota con agitación continua hasta llegar al punto final, donde se apreció un cambio de color y en ese momento fue preciso medir el volumen gastado de base. Para calcular la acidez expresada en meq/kg se utiliza la siguiente fórmula: 𝐴𝑐𝑖𝑑𝑒𝑧 = V × N m × 1000 Donde: V: Volumen utilizado de NaOH. N: Normalidad de la base. m: Cantidad de muestra. Determinaciones fisicoquímicas en nueces Determinación de humedad: Se pesan 5gr de muestra en una capsula de porcelana y se lleva a estufa por 3hs a 100°C. Pasado el tiempo, se retira de la estufa, se deja enfriar en desecador y se pesa tan pronto como se equilibre con la temperatura ambiente. Estos pasos se deben repetir hasta obtener peso constante. Para calcular el porcentaje de humedad se utiliza la siguiente fórmula: 28 % ℎ𝑢𝑚𝑒𝑑𝑎𝑑 = (cápsula muestra humeda − cápsula) − (𝑐á𝑝𝑠𝑢𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑠𝑒𝑐𝑎 − 𝑐á𝑝𝑠𝑢𝑙𝑎) (cápsula muestra humeda − cápsula) 𝑥 100 Determinaciones microbiológicas en materia prima Recuento de Mohos y Levaduras, Recuento de Clostridium sulfito reductores y presencia de Salmonella spp. (A.P.H.A, 2015) se determinaron tanto en la miel como en las nueces. En cuanto a los Coliformes se analizaron Coliformes Totales en la miel y Coliformes Fecales en las nueces (ICMSF, 1983). Se realizó el recuento de Staphylococcus aureus en nueces (ISO 6888-1; ISO 6888-2, 1999). Producto final - Miel con nueces Envasado: El envasado se realizó en la sala de elaboración de la planta fraccionadora de miel. Se contó con tapas y frascos de tereftalato de polietileno (PET) y se utilizó como materia prima, la miel liquida y nueces utilizadas para los ensayos previos de laboratorio; seleccionando para el envasado, aquellas que obtuvieron resultados microbiológicos óptimos. Las nueces se limpiaron en forma manual, sacando las impurezas que pudieran estar presentes, tales como restos de ramas, resto de hojas, polvo, etc. y se añadieron 10 nueces en mitades, por envase. Luego, se agregó la miel liquida a temperatura ambiente hasta completar el envase de 500 gr. Las muestras fueron almacenadas a diferentes temperaturas, con el fin de analizar las diferencias en los resultados obtenidos. Temperatura extrema fue definida teniendo en cuenta las temperaturas a las que puede estar expuesto el producto durante el proceso de expendio y transporte durante la época de verano. Estas muestras fueron envueltas en papel aluminio antes de su almacenamiento en estufa. Análisis microbiológico de ambiente Para el análisis microbiológico ambiental, durante el envasado, se tomaron las muestras a partir de la exposición de placas de Petri abiertas con un medio adecuado para el crecimiento de mohos y levaduras, por 15 minutos. Luego las placas fueron llevadas al laboratorio para su posterior incubación (ICMSF, 1983). 29 Análisis microbiológico de envases Se tomaron muestras de los frascos y tapas utilizadas para el envasado del producto final, mediante la técnica de hisopado, con hisopos estériles que al momento del muestreo fueron embebidos en tubos de ensayo con agua peptonada 0,1%. Los hisopos se depositaron en los tubos de ensayo, y luego en contenedores refrigerados hasta su procesamiento (ISO 18593: 2004). Para los hisopados de superficies se realizaron las siguientes determinaciones: Coliformes totales y aerobios mesófilos respectivamente (ICMSF, 1983). Análisis microbiológicos del producto final Se prepararon 18 muestras de miel con nueces, las cuales fueron debidamente rotuladas y almacenadas en diferentes temperaturas. 6 muestras almacenadas a temperatura ambiente (20°C ± 5°C). 6 muestras almacenadas a temperatura de refrigeración (4-7°C). 6 muestras almacenadas a temperatura extrema (45°C). Los análisis microbiológicos se realizaron en diferentes tiempos del almacenamiento, realizando 1 muestreo para cada tiempo: Día cero de almacenamiento (luego del envasado). Día veinte de almacenamiento. Día cuarenta de almacenamiento. Las determinaciones que se realizaron fueron las siguientes: Recuento de Mohos y Levaduras (ICMSF, 1983). Recuento de Clostridium sulfito reductores (A.P.H.A, 2015). Recuento de Coliformes Totales (ICMSF, 1983). Recuento de Coliformes Fecales (ICMSF, 1983). Investigación de Salmonella spp (A.P.H.A, 2015). 30 Análisis sensorial del producto final Una vez finalizados los análisis microbiológicos se realizó una evaluación sensorial con un total de 97 consumidores, mediante una escala hedónica (Peryam y Girardot, 1952). El análisis sensorial se realizó a los 150 días posteriores a su envasado. Al momento de la evaluación los consumidores contaban con tres muestras del producto final, siendo: Muestra 1: Miel con nueces almacenada a temperatura ambiente. Muestra 2: Miel con nueces almacenada a temperatura de refrigeración. Muestra 3: Miel con nueces envasada en el momento. La muestra 3 fue envasada en el momento previo al análisis sensorial debido a que la empresa busca que el producto en góndola tenga miel en estado líquido, y las muestras 1 y 2 se encontraban en proceso de cristalización. En la evaluación sensorial no se contempló la muestra de miel con nueces a temperatura extrema, ya que no es viable que pase tantos días a esa temperatura constante, por lo cual no iba a ser una representación real. Aun así, se les comento a los consumidores sobre el almacenamiento a temperaturas extremas. A los consumidores, se les proporciono mediantes vasos de degustación, porciones de las tres muestras, y cada uno contaba con planillas donde se encontraban las escalas hedónicas y un cuestionario (ANEXO 1). Para el análisis de los datos, se realizó el test de Friedman para detectar diferencias en la opinión de los degustadores dentro de cada muestra. Además se estimó la asociación entre el género y la preferencia por alguno de las muestras por medio del test Chi2. Todos los análisis se realizaron con el Software InfoStat. 31 Resultados y discusión Análisis de la materia prima 1. - Determinaciones fisicoquímicas 1.1. - Análisis de miel Tabla 1 - Contenido de humedad, pH y acidez en muestras de miel líquida. Muestra Humedad (%) pH Acidez (meq/kg) M1 15,2 4,5 15 M2 15,4 4,5 15 M3 15,5 4,5 16 M4 15,5 4,5 15 M5 15,6 4,5 15 M6 15,5 4 15 M7 15,6 4 16 M8 15,5 4,5 16 M9 15,6 4,5 15 M10 15,6 4 15 M11 15,6 4,5 15 M12 15,6 4,5 15 M13 15,6 4,5 15 M14 15,7 4,5 15 M15 15,6 4,5 15 M16 15,8 4,5 14 M17 15,5 4,5 15 M18 15,5 4,5 15 M19 15,6 4,5 16 M20 15,6 4,5 15 M21 15,6 4,5 17 M22 15,7 4,5 16 M23 15,4 4,5 17 M24 15,5 4,5 17 M25 15,4 4,5 18 M26 15,6 4,5 17 M27 15,6 4,5 16 M28 15,5 4,5 19 M29 15,6 4,5 18 M30 15,7 4,5 18 Humedad: El rango de humedades que se encontró en las muestras de miel líquida fue de 15,2% - 15,8%. Estos valores concuerdan con el porcentaje de 32 humedad establecido por el Código Alimentario Argentino, donde se establece que no debe exceder de 18% - 20%. Estos valores concuerdan con estudios realizados por diferentesautores (Tabera et al., 2002; Libonatti et al., 2010; Blanco, 2016), para mieles procedentes de la misma región. pH: Los valores de pH en las muestras de miel líquida oscilaron entre 4 y 4,5. Esto concuerda con lo establecido por la Norma IRAM 15938 que establece un rango de 3,5 – 4,5 para mieles provenientes de néctares (Acquarone, 2004). Los valores obtenidos concuerdan con el trabajo realizado por Blanco (2016). Acidez: La acidez en la miel indica el grado de frescura de la misma y de su conservación (Ballesteros et al., 2019). El rango de acidez que se encontró en las muestras de miel líquida fue de 14 meq/kg – 19 meq/kg. Estos valores concuerdan con el valor de acidez establecido por el Código Alimentario Argentino, donde se establece que no debe exceder los 40 meq/kg. Los valores obtenidos concuerdan con el trabajo realizado por Blanco (2016). 1.2. – Análisis de nueces Humedad Tabla 2 – Contenido de humedad (%) en muestras de nueces Muestra Humedad (%) M1 4 M2 4,1 M3 4 M4 6 El rango de humedades que se encontró en las muestras de nueces fue de 4 % - 6 %. Estos valores concuerdan con el porcentaje de humedad que presentan las nueces luego del tratamiento post-cosecha de almacenamiento y secado, ya que es aconsejable que el valor resulte inferior al 8% (Parra, 2006). 33 2. - Determinaciones microbiológicas 2.1 – Determinaciones microbiológicas en miel Recuento de mohos y levaduras Los valores obtenidos en el recuento de mohos y levaduras, fueron negativos en un 73,3% de las muestras, mientras que en un 26,7% los valores estuvieron en un rango entre 1 a 1,9 log UFC/g, excediendo el límite establecido por el Código Alimentario Argentino (<1 log UFC/g) para una calidad aceptable. Existen dos tipos de planes de muestreo reconocidos internacionalmente, definidos por la ICMSF: plan de dos clases y plan de tres clases. El recuento de mohos y levaduras es un plan de tres clases ya que es utilizado para el análisis de indicadores de higiene. El criterio microbiológico para el recuento de mohos y levaduras en miel es n=5; c=2; m=1 log UFC/g; M=2 log UFC/g; donde m es el límite microbiológico que en un plan de tres clases separa la calidad aceptable de la marginalmente aceptable; y M es el límite microbiológico que en un plan de tres clases separa la calidad marginalmente aceptable de la rechazable (ANMAT, 2007). Por lo tanto, el 26,7% de las muestras que excedieron los valores de m, presentan una calidad marginalmente aceptable. .Estos valores concuerdan con los estudios realizados por Tabera et al., (2002). Recuento de Clostridium sulfito-reductores Los valores obtenidos en el recuento de Clostridium sulfito reductores, fueron negativos en un 83,3% de las muestras, mientras que en un 16,7% los valores dieron positivo hasta un valor de 1,3 log UFC/g. La presencia de Clostridium sulfito reductores en cantidades bajas en la miel se puede relacionar con defectos en el proceso ya que pudo haber contaminación de la miel durante su manipulación, por la implementación inapropiada de prácticas apícolas y por el uso de material sometido a un deficiente proceso de desinfección, durante la extracción, envasado y almacenamiento (Vázquez et al., 2012). Aun así, Gallez (2009), relaciona la presencia de este esporulado desde la extracción de miel debido a polen contaminado o a contaminación con polvo, 34 así como el tracto intestinal de las abejas donde se ha observado que existen una gran cantidad de anaerobios. La implementación de buenas prácticas apícolas durante la cosecha y el transporte de alzas melarías desde el apiario hasta la sala de extracción tiende a minimizar los riesgos de contaminación. Esto permite inferir que en aquellos casos en los que se detectaran contaminaciones en la miel, estas serán atribuibles a problemas de higiene y sanidad en el circuito dentro de la planta de extracción (Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca, 2014). Es por ello importante que las plantas fraccionadoras de miel cuenten con un correcto control de proveedores y de sus buenas practicas apícolas; ya que la presencia en dosis bajas de Clostridium sulfito reductores implica un riesgo potencial cuando se utiliza la miel como ingrediente para la preparación de otros alimentos (Vázquez et al., 2012). Investigación de Salmonella spp. - Recuento de Coliformes Totales Del total de las muestras analizadas ninguna presento desarrollo de Salmonella spp. ni de Coliformes Totales. Estos valores obtenidos concuerdan con el criterio microbiológico de miel líquida, exigido por el Código Alimentario Argentino, donde se establece: Ausencia de Salmonella spp. en 25 gramos de muestra. Recuentos negativos de Coliformes Totales por gramo de muestra. Estos valores concuerdan con estudios realizados por diferentes autores (Gallez, 2009; Tabera et al., 2001). 2.2. - Determinaciones microbiológicas en nueces Recuento de mohos y levaduras Los valores obtenidos en el recuento de mohos y levaduras, fueron negativos en un 25% de las muestras, mientras que en un 75% los valores estuvieron en un rango entre 1,6 a 3 log UFC/g, excediendo el límite establecido por el Reglamento Sanitario de los Alimentos (< 2 log UFC/g) para una calidad aceptable. 35 Al ser el recuento de mohos y levaduras un criterio complementario de tres clases, los recuentos excedidos de 2 log UFC/g contaran con una calidad marginalmente aceptable; teniendo como límite para separar la calidad marginalmente aceptable de la rechazable 3 log UFC/g. Estos valores concuerdan con los estudios realizados por Sacchi et al., (2019). Recuento de Clostridium sulfito-reductores – Investigación de Salmonella spp. – Recuento de Coliformes Fecales – Recuento de Staphylococcus aureus coagulasa positivo. Del total de las muestras analizadas ninguna presento desarrollo de Clostridium sulfito reductores, Salmonella spp., Coliformes Fecales y Staphylococcus aureus coagulasa positivo. Estos valores obtenidos concuerdan con el criterio microbiológico de nueces, exigido por el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA) donde se establece: Ausencia de Clostridium sulfito reductores por gramo de muestra. Ausencia de Salmonella spp. en 25 gramos de muestra. Recuentos negativos de Coliformes Fecales por gramo de muestra. Recuentos negativos de Staphylococcus aureus coagulasa positivo por gramo de muestra. Estos valores concuerdan con los estudios realizados por Vera (2007). Análisis del producto final – Miel con nueces Análisis microbiológico de ambiente Los valores obtenidos en el recuento de mohos y levaduras para las muestras de ambiente fueron de 1,04 log UFC/15 min exposición. Si bien la legislación vigente no fija límites en cuanto al análisis de muestras de ambiente, por los resultados obtenidos se pudo demostrar una baja carga de mohos y levaduras a nivel ambiental. Similares resultados fueron obtenidos por Veiga (2018) en “Verificación de los procedimientos de sanitización en una fraccionadora de miel bonaerense”. La evaluación de la calidad microbiológica del ambiente nos indica la cantidad de microorganismos que están presentes en un área determinada, en este caso 36 buscamos cuantificar la presencia de mohos y levaduras, ya que estos microorganismos tienen capacidad de producir deterioro y descomposición en los alimentos. De esta manera, mantener un control microbiológico ambiental es indispensable para asegurar la calidad de los productos elaborados y es un índice del estado higiénico del ambiente que rodea a las instalaciones (Pérez y Sánchez, 2010). Análisis microbiológico de envases Los valores obtenidos en el recuento de mohos y levaduras y coliformes totales fueron negativos para las muestras obtenidas a través del hisopado de frascos y tapas. En Argentina,la legislación vigente no fija límites en cuanto al análisis de superficies. Aun así, se puede evidenciar que al dar resultados negativos en los respectivos recuentos, los envases son aptos para contener el producto final. Determinaciones microbiológicas en producto final En la totalidad de las 18 muestras, tanto Coliformes Totales, Coliformes Fecales y Salmonella spp. no evidenciaron crecimiento bacteriano, concordando con el criterio microbiológico de miel y nueces exigido por C.A.A y SENASA respectivamente. Tabla 3 – Recuento de Clostridium sulfito-reductores (log UFC/g) en muestras de miel con nueces almacenadas a temperatura ambiente, temperatura de refrigeración y temperatura extrema; en diferentes tiempos de almacenamiento. Muestra Clostridium sulfito-reductores (log UFC/g) Día 0 T° Ambiente T° Refrigeración T° Extrema Día 20 Día 40 Día 20 Día 40 Día 20 Día 40 M1 - - - 1,3 log UFC/g - - - M2 - - - - - 1 log UFC/g - M3 - - - - - - - M4 - 1 log UFC/g - - - - - M5 - - - - - - - M6 - - - - - - - 37 El recuento de Clostridium sulfito-reductores tuvo valores positivos en tres muestras que se encontraban a diferentes temperaturas durante el día 20 de almacenamiento. Durante el tercer muestreo, a los 40 días de almacenamiento, los valores fueron negativos. Tabla 4 – Recuentos de Mohos y Levaduras (log UFC/g) en muestras de miel con nueces almacenadas a temperatura ambiente, temperatura de refrigeración y temperatura extrema; en diferentes tiempos de almacenamiento. Muestra Mohos y Levaduras (log UFC/g) Día 0 T° ambiente T° refrigeración T° extrema Día 20 Día 40 Día 20 Día 40 Día 20 Día 40 M1 1 log UFC/g 2 log UFC/g - 1,5 log UFC/g 1 log UFC/g 1 log UFC/g - M2 1,9 log UFC/g 2,1 log UFC/g - 1,6 log UFC/g - 1 log UFC/g - M3 1 log UFC/g 1,7 log UFC/g - 1,5 log UFC/g 1 log UFC/g 1 log UFC/g - M4 1 log UFC/g 1,9 log UFC/g - 1,6 log UFC/g 1,5 log UFC/g - - M5 1 log UFC/g 1,7 log UFC/g - 1 log UFC/g - 1 log UFC/g - M6 1,3 log UFC/g 2 log UFC/g - 2,1 log UFC/g 1,8 log UFC/g 1,6 log UFC/g - En el recuento de Mohos y Levaduras se evidencio crecimiento durante los tres muestreos observándose un rango de 1 a 2,1 log UFC/g. Las muestras almacenadas a temperatura ambiente fueron las que obtuvieron mayor recuento de mohos y levaduras, debido a que la temperatura utilizada (20°C ± 5°C) es considerada temperatura de incubación para estos microorganismos. Los valores obtenidos en el recuento de mohos y levaduras, en algunos casos excedieron el límite establecido por el Código Alimentario Argentino (<1 log UFC/g). Si el límite excedido corresponde a un criterio complementario, el alimento no necesariamente ha perdido su inocuidad. Este criterio permite un margen de discrecionalidad, sirve para alertar sobre deficiencias en el proceso, distribución, almacenamiento o comercialización. Debe realizarse 38 inmediatamente una investigación integral de las buenas prácticas de manufactura, pudiendo incluirse un nuevo muestreo y poniendo especial énfasis en las prácticas de higiene del establecimiento (SENASA, 2007). Análisis sensorial del producto final Noventa y siete personas realizaron una degustación de tres muestras (M1 – M2 – M3) para evaluar las variables: aspecto, color, olor, sabor y textura. Todas las variables tomaron valores entre 1 y 9 (siendo 1 menor valor y 9 mayor valor). Además fueron consultados respecto a si aceptarían o no comprar dicho producto. Durante el almacenado de las muestras a diferentes temperaturas, se pudo observar que en las muestras que se encontraban a temperatura ambiente (M1) y a temperatura de refrigeración (M2), a los 40 días posteriores de su envasado comenzaron a cristalizar, ya que la nuez actuó como núcleo de cristalización. Luego de 150 días, cuando se realizó el análisis sensorial, se observó que M1 estaba totalmente cristalizada mientras que M2 contaba con fragmentos de miel cristalizada y fragmentos de miel líquida; obteniendo por consecuencia, texturas distintas: M1 contaba con cristales de azúcar grandes y M2 con cristales más pequeños, generando una textura cremosa. Tabla 5 – Media aritmética de cinco atributos para la evaluación sensorial del producto miel con nueces. M1: Miel con nueces almacenada a temperatura ambiente. M2: Miel con nueces almacenada a temperatura de refrigeración. M3: Miel con nueces envasada en el momento. Atributos M1 M2 M3 Test de Friedman (p valor) Aspecto 5,78 a 5,84 a 8,08 b <0,0001 Color 6,47 a 6,27 a 8,26 b <0,0001 Olor 6,65 a 6,57 a 7,47 b <0,0001 Sabor 7,08 a 6,88 a 7,86 b <0,0001 Textura 5,70 a 5,82 a 7,97 b <0,0001 39 El Test de Friedman de datos apareados, expresa si las opiniones de los individuos con respecto a las variables son iguales o distintas, determinando si alguna muestra para ellos es sustancialmente diferente de otra, ya sea por aspectos negativos o positivos. Los datos son apareados porque se les brindan las tres muestras a los mismos consumidores y la decisión se toma en función de que los datos están relacionados, no son independientes. En la tabla 5 se puede observar que M1 y M2 son muy similares, mientras que M3 es la muestra estadísticamente diferente la cual fue puntuada con mejores valores para todos los atributos por los 97 consumidores. Tabla 6 – Asociación entre el género y las preferencias de las muestras M1; M2; M3 del producto miel con nueces. Muestra Género femenino Género masculino Total M1 5 5 10 M2 12 6 18 M3 45 20 65 Total 62 31 93 Chi2: p=0,4862 Al finalizar el análisis sensorial, se le realizó a los consumidores un cuestionario donde debían responder si aceptarían o no a comprar dicho producto. De las 97 personas respondieron 93 y las respuestas se dividieron por género para determinar si existe asociación entre la preferencia de alimento. En la tabla 6 se puede observar que M3 fue la muestra más elegida por los consumidores y que no se encontraron diferencias significativas (p>0.05) entre los géneros para ningunas de las tres muestras; por lo tanto las preferencias son iguales entre consumidores masculinos y femeninos. 40 Conclusiones Fue posible el desarrollo de un producto con agregado de valor: miel con nueces. Los valores obtenidos en los análisis de materias primas a nivel fisicoquímico y microbiológico concuerdan con los límites y criterios microbiológicos exigidos por la autoridad competente, de esta manera la miel líquida y las nueces son alimentos óptimos para su utilización en el desarrollo del producto. Los análisis microbiológicos del producto final obtuvieron recuentos negativos de coliformes totales y Salmonella Shigella. Se detectó la presencia de Clostridium sulfito-reductores y en algunos casos se encontraron recuentos positivos de mohos y levaduras superando el límite establecido por la legislación vigente. Aun así, al ser el recuento de mohos y levaduras un criterio complementario de tres clases, las muestras con recuentos excedidos de 1 log UFC/g contaron con una calidad marginalmente aceptable, por lo que se concluyó que el producto final no perdió su inocuidad. La correcta aplicación de las buenas prácticas de manufactura en la planta de fraccionamiento podrá garantizar la obtención de un alimento seguro y de calidad, aumentando la vida útil del producto. El análisis sensorial determinó que la muestra más aceptada por los consumidores en los atributos: aspecto, color, olor, sabor y textura, fue la muestra 3 (M3), la cual correspondía a la miel con nueces envasada en el momento. Se concluyó que la temperatura es un factor importante en la cristalización. Por último, se recomienda seguir con el estudio acerca del desarrollo de este producto ya que la nuez
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