PRÁCTICA 2

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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DEL ESTADO DE HIDALGO 
INSTITUTO DE CIENCIAS DE LA SALUD 
ÁREA ACADÉMICA DE NUTRICIÓN 
METABOLISMO DE LAS BIOMOLÉCULAS 
PROGRAMA EDUCATIVO 2016 DE LA
LICENCIATURA EN NUTRICIÓN 
REPORTE DE PRÁCTICA 2: Determinación del enzima Succinato 
deshidrogenasa
SEMESTRE: SEGUNDO 
GRUPO 1
ELABORÓ: 
1. Velazquez Sanchez Valeria 
2. Cervantes Corella Karla Fabiola
 
Introducción 
La conversión de la enzima succinato a fumarato, la tercera reacción de oxidación del ciclo de Krebs, es catalizada por el enzima succinato deshidrogenasa, una flavoproteína y oxidoreductasa que contiene FAD. La parte final del ciclo consiste en la reorganización de moléculas a cuatro átomos de carbono hasta la regeneración del oxalacetato. Para que eso sea posible, el grupo metilo presente en el succinato tiene que convertirse en un carbonilo. Estos tres pasos, además de regenerar oxalacetato, permiten la extracción ulterior de energía mediante la formación de FADH2 y NADH.
El enzima succinato deshidrogenasa es la única enzima del ciclo de Krebs que no se encuentra en la matriz mitocondrial, sino en la membrana mitocondrial interna, con el sitio de unión del sustrato accesible desde la matriz. Es además, la única en el ciclo asociada a un grupo prostético flavínico (FAD) mediante el cual los equivalentes de reducción del succinato son transferidos a la ubiquinona,componente de la cadena de transporte de electrones. En general la función bioquímica del FAD es oxidar alcanos a alquenos, mientras que el NAD oxida alcoholes a aldehídos o cetonas. El malonato es un fuerte inhibidor competitivo de la enzima.
O B J E T I V O G E N E R A L
Identificar en muestras de músculos la presencia del enzima succinato deshidrogenasa mediante una reacción colorimétrica para determinar su importancia fisiológica.
O B J E T I V O S E S P E C I F I C O S
1. Procesar una muestra de tejido muscular
2. Inducir la reacción de oxidación o reducción
3. Evaluar la actividad del enzima succinato deshidrogenasa por medio de una prueba colorimétrica
Reactivos/insumos, materiales/utensilios y equipos
P R O C E D I M I E N T O
1. Se trituró con arena de vidrio 1 g de cada músculo seleccionado en un mortero, en donde se le añadirá de 3 a 4 mL de la solución de ácido succínico y se filtraron las muestras.
2. A continuación se añadirá la solución en cantidades iguales en dos tubos de ensayo (tubo control y tubo problema).
3. Al tubo control se le adicionará 1 mL de la solución de ácido tricloacético para inactivar la enzima.
4. A los tubos se le agregan 1 o 2 gotas de azul de metileno y se agitaron manualmente.
5. A los tubos se le adicionaron 0.5 a 1 mL de aceite con el fin de aislar el oxígeno del aire.
6. Los tubos se incubaron a 50 °C en un baño de María durante 10 minutos.
7. Una vez transcurrido el tiempo de incubación, se observará la decoloración del azul de metileno de acuerdo a la reacción que se llevó a cabo en cada músculo seleccionado.
1. ¿Cuáles son los colores del azul de metileno en sus estados oxidado y reducido? 
En estado reducido el color es azul y en su estado oxidado es incoloro
2. ¿Cuál es la función del fenol en la reacción?
El fenol inhibe la actividad de las enzimas ya que desnaturaliza las proteínas, en este caso a la enzima deshidrogenasa, provocando la pérdida de su actividad.
3. ¿En qué vía metabólica está involucrada la enzima succinato deshidrogenasa?
En el ciclo de Krebs, en la reacción 6.
4. Lista los activadores, inhibidores, Km y mecanismo del enzima.
1. Activadores enzimáticos e Inhibidores enzimáticos.
1.1. Activadores: Glicerofosfato, Acido beta oxidobutirico, isocitrato, Proteína SDHAF2
1.2. Inhibidores:
2-oxoglutarato
Oxalato
I Acido oxalacetico
Km: 0.3Mm
Mecanismo de la enzima
En el succinato de la enzima deshidrogenasa, el anillo isoaloxazina del FAD está unido covalentemente a la cadena lateral de una histidina de la enzima. El FAD es el aceptor de hidrógeno en esta reacción por que el cambio de energía libre es insuficiente para reducir 
5. Realizar una cadena transportadora de electrones que involucre esta enzima.
La enzima Succinato-Q oxidorreductasa, también conocida como complejo II o succinato deshidrogenasa, es el segundo punto de entrada en la cadena de transporte de electrones. Es inusual debido a que esta enzima es la única que forma parte de los procesos del ciclo de Krebs y de la cadena de transporte de electrones.
Conclusión 
Se puede concluir que cuando se coloca una sustancia y luego se trata térmicamente, dando a lugar a la reacción “Óxido-Reducción”, donde se transfieren electrones entre sustancias químicas, en este caso puede ocurrir en la respiración celular del tejido muscular del cuerpo. Pollo, porque estos tienen tal efecto al calentarse, pero en esta práctica también entendemos la importancia de esta sustancia, que a su vez se relaciona con las reacciones ya mencionadas anteriormente, su función principal es la separación de un átomo de hidrógeno en la transposición de metileno. El átomo de carbono en el succinato como regulador de la homeostasis energética es una enzima que contiene FAD como grupo prostético que ayuda a catalizar el ciclo de deshidrogenación del succinato del ciclo del ácido tricarboxílico. Cuando entendemos esto, podemos entender la importancia de nuestra musculatura, que está llena de células que hacen funcionar el ciclo de Krebs, que a su vez hace que funcionen dichas enzimas y reacciones.
Bibliografías 
1. BROCHERO, D. C., & USS, R. P. EQUILIBRIO ACIDO-BASE.
2. Jiménez, R. A. (2004). Regulación del equilibrio ácido base durante el ejercicio. Efectos de la intensidad, tipo de recuperación y velocidad de contracción en sujetos entrenados y no entrenados (Doctoral dissertation, Universidad de Castilla-La Mancha).
3. Díaz, N.P.L. (2010). Manual de bioquímica metabólica. Facultad de Bio-análisis. Universidad Veracruzana.
4. Murray, R.K., Bender, D.A., Botham, K.M., Kennelly, P.J., Rodwell, V.W., Weil, P.A (2012).Harper, bioquímica ilustrada (29 ed.). Mc Graw Hill, China.