DIAPOSITIVAS - LEUCEMIAS AGUDAS Y MIELODISPLÁSICOS

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 CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE
LAS CÉLULAS DE LA MÉDULA ÓSEA
INTRODUCCION
 La mayoría de las células de la médula ósea pertenecen
a precursores granulocíticos y eritroides con una
proporción normal 2 a 1.
 Los basófilos, mastocitos y los macrófagos están
presentes en proporción escasa.
 El porcentaje de megacariocitos es muy variable: 1
megacariocito por 100 células medulares.
 Si se aspiran mas de 0.1 -0.2 ml de MO aumenta el n° de
linfocitos de sp (contaminación periférica).
SERIE ERITROBLASTICA (I)
 30-35% de los elementos nucleados de la MO.
 Los cambios morfológicos que se experimentan durante
su maduración se caracterizan por una notable
disminución del tamaño nuclear de los eritroblastos con
una condensación progresiva de la cromatina.
 El citoplasma adquiere la acidofília (color rosado) típica
que le proporciona la hemoglobina en los estadios más
maduros.
SERIE ERITROBLASTICA (II)
 Proeritroblasto
 Eritroblasto basófilo
 Eritroblasto
policromático
 Eritroblasto
ortocromático
 Reticulocito
 Hematie
SERIE ERITROBLASTICA (III)
 PROERITROBLASTO
 Célula más inmadura de la serie roja que es
visible al microscopio óptico con la tinción
panóptica.
 Célula grande, alta relación N/C
 Cromatina reticulada, visible algún nucléolo.
 Citoplasma intensamente basófilo
(polirribosomas)
 Mamelones citoplasmáticos.
SERIE ERITROBLASTICA (IV)
 ERITROBLASTO BASÓFILO:
 Menor tamaño que su predecesor.
 Citoplasma basófilo intenso
 Alta relación N/C
 ERITROBLASTO POLICROMATÓFILO
 Inicia la síntesis de hemoglobina (citoplasma menos basófilo)
 ERITROBLASTO ORTOCROMÁTICO:
 Tamaño más pequeño
 Núcleo picnótico, muy condensado y pequeño.
 Citoplasma mas acidófilo, aumenta el contenido de Hb.
 No tiene capacidad mitótica, sintetiza proteínas y hemoglobina.
SERIE ERITROBLASTICA (V)
 RETICULOCITOS
 Anucleado
 Sintetiza ARN, proteínas y HB por
la persistencia de mitocondrias,
ribosomas y restos de retículo-
endoplasmático.
 Tamaño algo superior al hematíe.
 Cierto grado de basofilia
(policromatofilia)
 Permanecen unos días en la MO
y luego pasan a sangre periférica.
SERIE GRANULOPOYETICA(I)
 Constituyen de un 60-65% de los componentes
citológicos medulares.
 Los cambios morfológicos evolutivos se resumen en:
 Reducción de la relación núcleo-citoplasma.
 Desaparición de los nucléolos
 Maduración de la cromatina nuclear.
 Desaparición de la basofília citoplasmática.
 Aparición de la granulación primaria o azurófila a
partir del promielocito.
 Aparición de la granulación secundaria o específica a
partir del mielocito.
SERIE GRANULOPOYETICA(II)
 Mieloblasto
 Promielocito
 Mielocito
 Metamielocito
 Banda o cayado
 Granulocito segmentado
 Neutrófilo
 Eosinófilo
 Basófilo
SERIE GRANULOPOYETICA(III)
 El mielocito es el último elemento con capacidad
mitótica,
 En el metamielocito se produce la identación nuclear.
 En el PMN el proceso de segmentación nuclear.
 La granulación primaria o azurófila es característica de
esta serie: hidrolasas ácidas, mieloperoxidasa, lisozima,
fosfatasa ácida.
SERIE GRANULOPOYETICA(IV)
 A partir del mielocito aparece la granulación secundaria
o específica.
 Son gránulos de menor tamaño.
 La granulación 2° representa las 2/3 partes en el PMN.
 Son MPO positivos, lisozima, lactoferrina, proteínas
captadoras de Vit. B12, gelatinasa.
SERIE MONOCITARIA (I)
 Son células pertenecientes al sistema mononuclear
fagocítico.
 Monoblasto: células más joven, muy escasa en MO
normales.
 Promonocito: gran tamaño, núcleo irregular, cromatina
más condensada que el monoblasto, 1-2 nucleolos.
 Monocito: células de mayor tamaño de la sp. Núcleo
voluminoso, adopta formas abigarradas en herradura,
identado o doblado, cromatina densa.
 Macrófagos.
SERIE MEGACARIOCITICA (I)
 Promegacarioblasto: sin identificación precisa
 Megacarioblasto: < 1%
 Promegacariocito
 Megacariocito:
• Megacariocito granular
• Megacariocito maduro
 Plaquetas o trombocitos
SERIE MEGACARIOCITICA
Regulación de la hematopoyesis
 El desarrollo de la hematopoyesis es el resultado de un
conjunto de factores, la interacción entre las células
hematopoyéticas, las células del estroma y los factores
de maduración o regulación.
 Los factores de crecimiento celular, citocinas, son
glicoproteínas que actúan como hormonas con doble
actividad endocrina y paracrina.
Regulación de la hematopoyesis
 En CN la concentración sanguínea de citocinas es muy
pequeña, pero ante estímulos (infección) aumenta de
forma rápida y significativa.
 La mayoría de las citocinas se descubrieron en los años
60.
 En lo 80 fueron purificadas y posteriormente se clonaron
los genes para sintetizarlas in vitro.
Propiedades de las citocinas
 Actúan a concentraciones extremadamente bajas.
 Son multifuncionantes, ejercen acciones sobre varias
líneas celulares simultáneamente.
 La EPO y la TP solo ejercen función sobre los eritrocitos
y megacariocitos respectivamente.
 Inducen la proliferación y diferenciación de los
progenitores comprometidos.
 Promueven cambios funcionales en las células maduras
 Disminuyen la apoptosis o muerte celular programada.
Citocinas que intervienen en la 
regulación de la hematopoyesis
 CARACTERISTICAS DE 
LAS CÉLULAS 
SANGUINEAS 
Características morfológicas 
de las células sanguíneas
Características morfológicas 
de las células sanguíneas
ERITROCITOS (I)
 Componente más abundante de la sangre (50% del
volumen sanguíneo)
 Elevada diferenciación carece de núcleo y organelas.
 La hemoglobina ocupa en solución acuosa la totalidad
del citoplasma.
 Con los colorantes habituales adquieren una tonalidad
rosada.
ERITROCITOS (II)
 En CN los eritrocitos tienen un tamaño, forma y color
uniforme.
 En la extensión sanguínea son corpúsculos
redondeados, con una coloración más intensa en la
periferia con una zona clara central.
 Forma de disco bicóncavo, garantiza la deformación a
su paso por la microcirculación esplénica.
PLAQUETAS (I)
 Son corpúsculos discoides de pequeño tamaño (2-5 μm)
que carecen de núcleo.
 Su citoplasma de color rosa pálido contiene cuatro tipos
de granulación distintos:
 Gránulos alfa (moléculas de adhesión, fact coag)
 Gránulos densos (serotonina)
 Lisosomas (enzimas líticas)
 Microperoxisomas (catalasa)
PLAQUETAS (II)
 Mediante la tinción panóptica no es posible distinguir
estas granulaciones.
 Los gránulos α, contienen factor plaquetar 4 importante
en la coagulación sanguínea.
 Las plaquetas intervienen en la reparación de lesiones
vasculares y facilitan la formación de trombos para
evitar la hemorragia.
 Tienen un citoesqueleto muy desarrollado con
microtúbulos que despolimerizan cuando se agregan las
plaquetas.
PLAQUETAS (III)
Leucocitos polimorfonucleares: 
Granulocitos neutrófilos
 Constituyen el 40-75%
 Leucocitos predominantes
 Citoplasma ligeramente acidófilo
(rosa pálido)
 Abundante granulación, afinidad
por los colorantes neutros,
tonalidad parda.
 Núcleo violeta-púrpura, cromatina
muy densa
 2-5 lobulaciones nucleares.
Leucocitos polimorfonucleares: 
Granulocitos eosinofilos
 1-6% del total de leucos.
 Variabilidad durante el día >
mañanas y < tardes.
 Poseen un citoplasma repleto
de gránulos bien
individualizados, redondos de
gran tamaño fijan los colorantes
ácidos, color naranja intenso.
 Gránulos: proteína catiónica
mayor, peroxidasa del
eosinófilo, neurotoxina derivada
del eosinófilo.
 Función de defensa para las
infecciones parasitarias y
procesos alérgicos.
Leucocitos polimorfonucleares: 
Granulocitos basófilos
 Es el menos abundante
 < 1%
 Citoplasma con abundante
granulación que se tiñe
con colorantes basófilos.
 Los gránulos contienen
principalmente histamina,
heparina, proteasas,
lípidos y citocinas.
Leucocitos mononucleares: 
Monocitos Constituyen el 2-10%
 Citoplasma abundantes de
color gris, fina granulación
azurófila.
 Núcleo central y de
aspecto arriñonado,
cromatina laxa, irregular.
Leucocitos mononucleares: 
Linfocitos
 20-40%
 70-75% son linfocitos T
 15-20% son linfocitos B
 5-10% células NK
 Células pequeña, citoplasma
escaso, cromatina densa,
núcleo redondo, escasa
granulación azurófila.
 Si sufre activación celular
aumenta de tamaño, citoplasma
más abundante.
INTRODUCCION
 Bases clínicas de las leucemias agudas, de origen
mieloide (LMA), linfoide (LLA) u otras, y de los
síndromes mielodisplásicos (SMD).
 Necesidad de un laboratorio de hematología para
el diagnóstico de estas enfermedades.
Definiciones
 LEUCEMIA AGUDA
 Proliferación neoplásica de células inmaduras
(blastos) de estirpe mieloide (LMA) o linfoide
(LLA), que proceden de un progenitor
hematopoyético lesionado con capacidad de
maduración alterada y que, debido a su
crecimiento excesivo, desplaza a las células
normales de la médula ósea.
 Esta proliferación se traduce en síntomas y signos
de enfermedad y en alteración del hemograma.
 Estos blastos se originan e infiltran la médula ósea
e invaden sangre periférica y otros tejidos.
Definiciones
 SINDROME MIELODISPLÁSICO
 Es un grupo heterogéneo de enfermedades
clonales de las células hematopoyéticas
pluripotentes caracterizado por la presencia de
alteraciones morfológicas de las células de las
diferentes líneas hematopoyéticas, citopenias y
frecuente evolución a leucemia mieloide aguda.
 La médula ósea muestra generalmente una
celularidad normal o aumentada, pero en alguna
ocasión puede ser hipocelular.
CLASIFICACIONES
 Ante el diagnóstico de un leucemia aguda la principal
clasificación con interés terapéutico es:
 Leucemia aguda linfoide (LAL) y leucemia aguda
mieloide (LAM).
 Se define por la presencia de más o menos de
3% de blastos que se tiñan con mieloperoxidasa
(técnica de tinción citoquímica sobre extensiones
de sangre o médula)
 La LMA tiene mayor prevalencia en la población
adulta-anciana y la LLA tiene más prevalencia en la
edad infantil, pero ambas pueden verse a cualquier
edad.
CLASIFICACIONES
 Con las nuevas clasificaciones (OMS) la infiltración por
células leucémicas o blásticas en la médula ósea queda
definida en el 20%.
 Un porcentaje de blastos mieloides inferior al 20%
clasificaría al proceso como un SMD
 Un porcentaje de blastos mieloides superior al 20%
clasificaría el proceso como LMA.
 En cuanto a la patología linfoide neoplásica también
existe un punto de corte de infiltración blástica para
distinguir leucemia y linfomas linfoblásticos o tipo Burkitt:
25%.
CLASIFICACIONES
 Para una adecuada clasificación, tanto de una leucemia como de un
síndrome mielodisplásico, son imprescindibles:
 Revisión morfológica de las células que infiltran médula ósea y
sangre periférica.
 Tinciones citoquímicas de éstas células
 Inmunofenotipo de la celularidad patológica (casi siempre por
citometría de flujo multiparamétrica).
 Estudios de citogenética convencional y FISH
 Técnicas moleculares como la PCR.
 Todo lo arriba reseñado tiene un inconveniente, se debe hacer con una
representación celular óptima, preferiblemente de médula ósea, o en su
defecto sangre periférica. En ocasiones es imposible obtener una
muestra representativa de éstas células en suspensión (mielofibrosis,
aspirado seco, etc).
 En estas situaciones hay que hacer estudios histológicos sobre
biopsias de médula ósea principalmente: descripciones
morfológicas, inmunohistoquímica, estudios genéticos sobre tejidos
parafinados.
FAB DENOMINACION INCIDENCIA CARACTERISTICAS
M0 Indiferenciada 3% <3% blastos MPO+; marcadores 
mieloides por IF
M1 Sin maduración 15-20% >90% blastos, >3% MPO+
M2 Con maduración 25-30% 30-89% blastos, >3% MPO+
M3 promielocítica 10-15% >30% promielicitos atípicos. Múltiples 
bastones. MPO +++
M4 mielomonocítica 25% >30% blastos mieloides, >20% 
monoblastos y monocitos atípicos. 
Variedad con eosinófilos (M4EO)
M5 monoblástica 10% >80% de infiltración monocitaria, 
monoblastos (M5a) o promonocitos
(M5b). Mieloblastos <20%.
M6 eritroleucemia 3-5% Eritroblastos en médula >50% de 
celularidad y >30% de la celularidad
no eritroide son blastos.
M7 megacariocitica 3% >30% blastos, CD41/CD61+
Procedimientos diagnósticos
 Anamnesis y exploración
 Síntomas: Síndrome
anémico, fiebre, (con
infección o sin ella),
manifestaciones
hemorrágicas (cutáneas,
mucosas, internas).
 Signos: esplenomegalia,
hepatomegalia,
adenomegalias, afectación
orgánica (SNC, pulmón, piel,
encías)
Procedimientos diagnósticos
 Hemograma y frotis sanguíneo
 Citopenias, aumento del
número de leucocitos, formas
blásticas.
 Aspirado medular y citoquímica
 Infiltración blástica, hiato de
diferenciación,
dismielopoyesis,
sideroblastos en anillo.
 Pruebas confirmatorias y
clasificatorias:
 Inmunofenotipo por citometría
de flujo, citogenética y
biología molecular.
Citogenética: pronóstico en LMA
Síndrome mielodisplásicos: Pronóstico
Reordenamientos moleculares
Trascendencia del laboratorio
 Por lo tanto, ¿qué nos interesa conocer de un paciente
que sospechamos de leucemia aguda o SMD?
 ¿Qué utilidad obtendremos del laboratorio de
hematología?
Información diagnóstica
Información pronóstica
Apoyo al tratamiento 
Trascendencia del laboratorio
 INFORMACION DIAGNÓSTICA
 Hemograma, reticulocitos y frotis sanguíneo
 Leucopenia, leucocitosis, blastos en sangre
periférica, displasia de una o varias células
 Anemia hiporregenerativa (reticulocitos bajos)
 Trombocitopenia (trombocitosis, raro)
 Hemostasia básica y fibrinolisis
 Alteración de las dos vías (alargamiento de TP o
Quick o INR, alargamiento del TTPa)
 Aumento de PDF y/o D-dímero, con fibrinógeno bajo
(hiperfibrinolisis).
Trascendencia del laboratorio
 INFORMACION DIAGNÓSTICA
 Aspirado-biopsia de médula ósea
 Estudio morfológico y citoquímico
 Diagnóstico de leucemia aguda o SMD
 Datos morfológicos y citoquímicos
 Cuantificación del número de blastos
 Extracción de muestra para estudio inmunofenotípico y genético-
molecular
 Confirmación diagnóstica, información clasificatoria y
pronóstica.
 Extracción de muestras de otros sitios (LCR; ganglio, piel, etc)
 Confirmación de extensión de la enfermedad a otros tejidos por
cualquiera de los métodos utilizados para estudios en sangre o médula.
Trascendencia del laboratorio
 INFORMACION DIAGNÓSTICA
 Estudio inmunofenotipico (citometria de flujo)
 Confirmación del diagnóstico de leucemia aguda
 Caracterización de línea (mieloide, linfoide B, linfoide T, bifenotípica)
 Cuantificación de blastos en SMD
 Demostración de la existencia de enfermedad en otros tejidos.
 Estudio genético molecular (cariotipo convencional, FISH y biología
molecular)
 Confirmación de la existencia de patología clonal (sobre todo en SMD)
 Caracterización de subtipos leucémicos (leucemia promielocítica aguda,
LMA o LLA cromosoma Philadelphia positiva).
Trascendencia del laboratorio
 INFORMACION PRONÓSTICA
 HEMOGRAMA
 Leucocitosis y grado
 Recuento de PMN y plaquetas (para SMD)
 Aspirado-biopsia de médula ósea
 Cuantificación del número de blastos (SMD)
 Clasificación del tipo de leucemia
 Obtención de muestra para estudio fenotípico, genético
y molecular.
Trascendencia del laboratorio
 INFORMACION PRONÓSTICA
 Estudio inmunofenotipico (citometria de flujo)
 Aproximación a subtipos concretos (leucemia promielocítica,
LLA cromosoma Phi+, LLA-T)
 Demostración de la existencia de enfermedad en otros
tejidos.
 Estudio genético molecular (cariotipo convencional, FISH y
biología molecular)
 Alteraciones cromosómicas con influencia pronóstica tanto en
leucemias agudas como síndromes mielodisplásicos
 Demostración de alteraciones moleculares con influencia
pronóstica en leucemiaaguda.
Trascendencia del laboratorio
 Recolección de muestras: procedimientos preanalíticos
 En todos los casos de sospecha diagnóstica de leucemia
aguda o síndrome mielodisplásico sería mandatorio obtener
en paralelo muestras de sangre periférica y de médula ósea.
 Casi todos los estudios pueden recogerse en tubos de EDTA
como anticoagulante, salvo los de citogenética convencional
que precisan heparina como anticoagulante.
 Para un estudio global es preciso una muestra de 5-10 ml de
sangre y de 10-20 ml de médula.
 Las muestras debería de llegar al laboratorio en las 24 horas
siguientes de su extracción.
Trascendencia del laboratorio
 Procesamiento de muestras
 Citomorfología citoquímica:
 Se deben hacer al menos 5 extensiones de sangre y médula
 se tiñen con May Grünwald Giemsa, mieloperoxidasa y esterasas no
específicas (hierro, PAS; NSB, etc)
 Inmunofenotipo:
 Se procede a lisado de hematíes previos.
 Citogenética:
 Se precisa 5 x 107 células de m.o.
 Se añade colchicina y citoquinas
 Se deberían leer 25 metafases.
 FISH:
 Precisa fijación para hibridación
 Se puede interpretar a las 24 horas
 ESTUDIOS MOLECULARES:
 Precisa obtención de DNA y RNA mediante gradiente de densidad y 
centrifugación. 
Laboratorio a la ayuda del tratamiento
 Hemograma y hemostasia
 Control clínico del proceso terapéutico
 Apoyo para el soporte transfusional
 Banco de sangre y laboratorio de inmunología:
 Soporte transfusional de todo el proceso
 Grupos ABO, pruebas pretransfusionales y de compatibilidad inmunológica.
 Estudios HLA de paciente y familiares
 Indicación de trasplante de precursores hematopoyéticos
 Unidad de aféresis
 Extracción de células precursoras autólogas o alogénicas para proceder a un 
trasplante de progenitores.
 Aspirado medular
 Determinación de respuesta postratamiento
 Citometría de flujo y laboratorio de genética molecular
 Adecuación terapéutica al pronóstico genético molecular
 Determinación de respuesta al tratamiento y de enfermedad mínima residual post-
tratamiento.
 Apoyo de otros laboratorios: Bioquímica, Anatomía Patológica, Microbiología
Laboratorio de diagnóstico hematológico
 Sospecha clínica de leucemia aguda o síndrome
mielodisplásico.
1. Hemograma, reticulocitos y frotis sanguíneos
2. Aspirado-biopsia medular
3. Estudio citomorfológico
1. Tinciones citoquímicas
4. Estudio Imnunofenotípico por citometría de flujo
5. Estudio genético
1. Cariotipo convencional
2. FISH
6. Estudio molecular
HEMOGRAMA
 Anemia hiporregenerativa (macrocítica)
 Trombopenia (trombocitosis)
 Leucocitosis o leucopenia
 Presencia de formas anormales (LUC)
 Combinación de varias de las anteriores
Tinciones citoquímicas
 Leucemia Aguda
 Mieloperoxidasa
 Negro Sudan B
 Estereasas (Alfa-naftil acetato esterasa, alfa-naftil
butirato esterasa, esterasa ácida, naftol-AS-D
acetatoesterasa)
 PAS
 Fosfatasa ácida.
 Síndrome mielodisplásico
 PAS
 Tinción de hierro (Perls)
Citometría de flujo: inmunofenotipo
 Utilidad de la citometría de flujo y el inmunofenotipaje en
el campo de las leucemias agudas
 Identificación de la existencia de blastos en sangre,
médula o cualquier tejido que se estudie
 Cuantificación de los blastos
 Caracterización de los blastos: mieloides (de línea
monocítica, megacariocítica, promielocítica),
linfoides (de estirpe B, de estirpe T)
 Determinación de aberraciones fenotípicas
 Enfermedad residual tras tratamiento.
CITOGENETICA: Cariotipo
CITOGENETICA: FISH
BIOLOGIA MOLECULAR
ENFERMEDAD MINIMA RESIDUAL
ENFERMEDAD MINIMA RESIDUAL
 IMNUNOFENOTIPO
 Leucemia linfoide aguda del niño (estándar)
 Leucemia linfoide aguda del adulto (estándar investigacional)
 Leucemia mieloide aguda del adulto (estándar-
investigacional)
 BIOLOGIA MOLECULAR
 Leucemia mieloide crónica (bcr/abl): estándar
 Leucemia promielicítica aguda (pml/rarα): estándar
 Leucemia linfoide de células B o linfomas de células B (IgH):
estándar investigacional
 Leucemia linfoide de célula T o linfomas de célula T (RCT):
investigacional.
ESTRUCTURA DE LABORATORIO NECESARIA