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Práctica .- CPS, Tecnicas de concentracion Asignatura: MICROBIOLOGIA CLINICA Periodo 2023 Docente: Edlin Mariel Ramos González Integrantes: Cesia Carolina Castillo Izaguirre Fecha de entrega: 21/06/2023 Resumen En el diagnóstico coproparasitoscópico (CPS), se utilizan técnicas de concentración para la detección de parásitos en muestras fecales. La técnica de concentración y flotación en solución de Lugol es comúnmente empleada en estos procesos. La implementación adecuada de estas técnicas es esencial para el control de las enfermedades parasitarias y permite el diagnóstico preciso y oportuno de estas enfermedades. En esta práctica se realizó la técnica de concentración de parásitos por flotación para poder observar distintos parásitos en materia fecal de humano, gato y perro. Palabras clave: sulfato de zinc, CPS, coproparasitoscopico, Entamoeba, flotación INTRODUCCION La parasitosis intestinal es una enfermedad causada por la presencia de organismos parasitarios en el intestino humano o animal. Entre los parásitos intestinales se encuentran los gusanos (helmintos) y los protozoos, que se pueden adquirir a través de la ingesta de agua o alimentos contaminados, o por el contacto directo con animales o personas infectadas. Los síntomas de la parasitosis intestinal pueden incluir dolor abdominal, diarrea, náuseas, vómitos, pérdida de apetito, anemia, entre otros. El diagnóstico se realiza a través del examen coproparasitoscópico (CPS) en el que se observan los parásitos en la muestra fecal del paciente. El tratamiento depende del tipo de parásito y puede incluir medicamentos antiparasitarios. El CPS en Parasitología se refiere al "examen coproparasitoscópico", el cual es un conjunto de técnicas diagnósticas que utilizan materia fecal para el diagnóstico parasitológico. El CPS puede incluir técnicas de flotación, concentración, sedimentación y visualización directa de los parásitos mediante el microscopio. El CPS es una herramienta importante para la detección y diagnóstico de enfermedades parasitarias en humanos y animales. Existen diversas técnicas de concentración utilizadas en Parasitología como lo son: 1. Técnica de Ritchie: esta técnica consiste en utilizar sulfato de zinc para separar los parásitos del resto de la muestra. 2. Técnica de formol-éter: en esta técnica, se utiliza una mezcla de formol y éter para eliminar las impurezas de la muestra y concentrar los parásitos. 3. Técnica de Willis: esta técnica se usa principalmente para la detección de larvas de nematodos. Consiste en utilizar una solución de sal de mesa y un agente reductor para concentrar las larvas. 4. Técnica de Faust: en esta técnica, se emplea una solución hipertónica (cloruro sódico) para concentrar los parásitos y separarlos de la materia fecal. 5. Técnica de sedimentación espontánea: esta técnica se basa en la sedimentación natural de la muestra fecal en un tubo de ensayo, tras lo cual se separa la capa de parásitos y se descarta el resto. 6. Técnica de centrifugación: con esta técnica se utiliza un centrifugador para concentrar los parásitos de la muestra fecal. Estas técnicas permiten la detección de diferentes tipos de parásitos en las muestras fecales con un alto grado de precisión y fiabilidad. SULFATO DE ZINC El sulfato de zinc se utiliza en el método de flotación porque es una solución hipertónica que permite la separación de los huevos y quistes de parásitos presentes en las muestras fecales. Al utilizar el sulfato de zinc con una densidad específica elevada, los huevos y quistes se desplazan hacia la superficie, mientras que las impurezas se hunden al fondo del tubo de ensayo. De esta manera, se logra una mayor concentración de los parásitos, lo que facilita su detección e identificación. Además, el sulfato de zinc no daña los huevos y quistes, lo que permite la realización de estudios morfológicos y de identificación más precisos. LUGOL El Lugol se utiliza en técnicas de concentración en Parasitología, ya que es una solución que permite observar mejor ciertos parásitos, principalmente los protozoos (como los trofozoitos de Entamoeba histolytica), y los huevos y larvas de ciertos helmintos. El Lugol contiene yodo y yoduro de potasio, lo que hace que algunos parásitos absorban el yodo, aumentando su tamaño y facilitando su visualización al microscopio óptico. Además, el Lugol puede preservar la muestra fecal, lo que permite su almacenamiento para estudios posteriores. El Lugol se utiliza en combinación con técnicas de flotación (como la técnica de Sheather) y sedimentación para la detección y concentración de parásitos en las muestras fecales. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Dada la necesidad de aumentar la sensibilidad en la detección de parásitos en muestras fecales, se requiere evaluar el rendimiento del método de concentración y CPS en comparación con otros métodos de detección parasitológica. Es necesario determinar la efectividad y eficiencia del método de concentración y CPS en la recuperación de especies de parásitos y en la reducción del tiempo requerido para el diagnóstico coproparasitológico en la práctica clínica. JUSTIFICACION Debido a la baja densidad de los parásitos en la materia fecal y la presencia de otros elementos que pueden interferir en la observación microscópica, estas técnicas son necesarias para detectar ciertos parásitos que no son visibles en el examen directo de las heces fecales. Mejorar la eficiencia en la detección de parásitos y garantizar un diagnóstico preciso. OBJETIVOS Poder conocer las diferentes técnicas de concentración de muestra Reconocer la importancia de las técnicas de concentración Poder describir las características morfológicas obtenidas por esta tecnica METODOLOGIA MATERIALES Cubrebocas Portaobjetos Agitador Gotero Espátula Pipetas (5 ml, 10 ml) Piseta Papel filto PROCEDIMIENTO CONCENTRACION DE PARASITOS POR FLOTACION. 1. Con un abate lenguas se toman aproximadamente 1 g de heces (el tamaño de un cacahuate) y se deposita en un vasito que contenga de 10 a 15 ml de agua de la llave y se mezclan con un aplicador. 2. La suspensión se filtra a través de una coladera o malla y se recibe el filtrado en un tubo de centrífuga de 14 ml. Se le adicionan 1- 2 ml de éter. Tape con un corcho y agite vigorosamente. Adicione agua hasta que la muestra quede a 1cm por debajo del bordo superior del tubo. 3. Centrifugue por 45 segundos a 2500 rpm. Rompa cualquier acúmulo que pudiera haberse formado en la parte superior y decante el sobrenadante. 4. Añada 2 a 3 ml de agua de la llave y agite para resuspender el sedimento. Se resuspende nuevamente el sedimento, adicionando agua de la llave poco a poco, hasta que quede la muestra a 1 cm del borde superior del tubo. Se centrifuga de nuevo. 5. Se decanta el sobrenadante y se agregan al sedimento 2 a 3 ml de sulfato de zinc (dens. 1.180. Equivale a 330 g de sulfato de zinc en 1 litro de agua), moviendo con un aplicador para resuspender. Se agrega más sulfato de zinc hasta que llegue a unos 0.5 cm del borde superior del tubo. 6. Se centrifuga a 2300 rpm durante 2 min. y NO SAQUE EL TUBO. 7. Sin sacar el tubo de la centrífuga, recoja algunas gotas del material que flota en la superficie con un asa de platino (se debe cuidar que el asa no penetre demasiado bajo la superficie). 8. Se deposita la gota en un portaobjetos y se monta con una gota de lugol entre porta y cubre. 9. Se observa al microscopio, a 10X y 40X. 10. Haga dibujos detallados de los parásitos observados. RESULTADOS FOTOGRAFIA O DIBUJOS OBSERVACIO NES Imagen 1.- muestra fecal humana Se observa un quiste de forma redonda con una membranadelgada y núcleos en su interior Imagen 2 .- Muestra fecal de perro Se observa un quiste con forma de “bolillo” o “balón de futbol americano” con contenido granuloso y fino Imagen 3.- Muestra fecal de gato Se observa un huevo de forma redonda y en el interior una masa granular ANALISIS DE RESULTADOS La primera muestra (imagen 1) fecal de un humano hombre de 20 años se puede observar un quiste de forma redonda con una membrana delgada y con núcleos en su interior podemos decir que por estas características en su morfología se trata de un quiste de Entamoeba histolytica. En la segunda muestra (imagen 2) fecal de un perro se pudo observar un huevo con forma de “bolillo” con tapones mucoides a los extremos, además de contenido granuloso y fino. Por su morfología se puede decir que es un huevo de Trichuris Además al ser la muestra de heces de perro se podría decir que es una Trichuris vulpis ya que esta infecta mayormente a perros. En la tercera muestra (imagen 3) fecal de un gato se puede observar un huevo de forma redonda con una cubierta protectora por tres capas y en el interior una masa granular (en esta se originará la larva) Gracias a su morfología de forma de ficha se podría especular que es una Ascaris lumbricoides pero no está confirmado. CONCLUSION Al concluir esta práctica se cumplieron los objetivos de ella ya que se logró comprender el método de flotación al igual que su importancia para la detección de quistes de parásitos fecales, logrando así la detección de Entamoeba Histolytica y Trichuris trichiura Además, se pudo comprobar que el método de concentración y flotación es más efectivo que los demás métodos de detección de parásitos en muestras fecales, ya que permite recuperar un mayor número de especies de parásitos y presenta una mayor sensibilidad en la detección de éstos. Además, el uso de esta técnica permite reducir el tiempo requerido para el diagnóstico coproparasitológico en la práctica clínica. Se recomienda el uso de esta técnica de concentración y flotación en la detección de parásitos en las muestras fecales en la práctica clínica, para mejorar la sensibilidad y eficiencia en la detección de parásitos intestinales . BIBLIOGRAFIAS Murray (2014) Microbiología médica, Barcelona, Elsevier. Forneli F. manual de prácticas de microbiología y parasitología. UACJ. 2014 3. Romero R. Síndrome diarreico Ed. Medica Panamericana.2012 Centers for Disease Control and Prevention. 2010. Stool Specimens. Centers for Disease Control and Prevention. http://www.cdc.gov/ncidod/dpd/paras it es/index.htm Ultimo Acceso Junio 21, 2023. Facultad de Medicina, Depto. de Microbiología y Parasitología, UNAM. http://www.facmed.unam.mx/marc o/ind ex.php?dir_ver=87. Ultimo acceso Junio 21, 2023. Eurofarma. (n.d.). Parasitosis intestinales - Eurofarma. https://www.eurofarma.com.py/artigo s/parasitosis-intestinales ANEXO DIAGRAMA DE LA PRACTICA
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