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Tema 3 Crecimiento y Desarrollo microbiano Clasificación nutritiva de los microorganismos Ing. Agr. Msc. Susana Krieger Crecimiento microbiano Como resultado del metabolismo , el microorganismo crece y se multiplica. El crecimiento implica la división celular y el aumento del número células por unidad de volumen. Los microorganismos unicelulares se reproducen generalmente por fisión binaria. N = No 2 n No: número inicial de células/mL, n: N° generaciones log N = log No + n log 2 TIEMPO DE GENERACIÓN Es el intervalo de tiempo requerido para que una población se duplique. Es muy variable y depende de la especie. Varían de 20 minutos hasta 24 horas. Ej. en Escherichia coli es de 20 minutos (3 generaciones/hora) VELOCIDAD DE CRECIMIENTO Es el número de generaciones que ocurren en un tiempo t y se expresa en generaciones por hora. Curva de crecimiento o exponencial o de muerte Fase de crecimiento acelerado Fase de crecimiento desacelerado Fases del crecimiento bacteriano Fase de latencia No hay crecimiento visible y puede haber una reducción en el número de bacterias. Es un período de adaptación, en que las bacterias ponen a punto su paquete enzimático. Fase de crecimiento exponencial o logarítmica Después de algunas horas de haber sembrado las bacterias en un medio óptimo, las bacterias comienzan a dividirse en forma constante. El número de bacterias aumenta en progresión geométrica y la resultante es una línea recta ascendente. La velocidad de crecimiento es máxima. Fase estacionaria Debido a la acumulación de desechos metabólicos y disminución de los nutrientes, la actividad metabólica decae. Las bacterias se dividen con menor frecuencia y el número total de bacterias vivas permanece constante, puesto que el número de muertes se equilibra con el de multiplicación. Velocidad de crecimiento 0. Fase de muerte microbiana o regresión Las bacterias dejan de multiplicarse y mueren con el tiempo, debido a que los nutrientes se agotan, hay acumulación de metabolitos tóxicos y una disminución del espacio físico. QUIMIOSTATO El quimiostato es un aparato que se utiliza para obtener un cultivo continuo en medio renovado, permite mantener poblaciones de células en crecimiento exponencial por largos periodos de tiempo Usos: obtención de productos a escala industrial: antibióticos, yogur, enzimas (celulasas), vinos, ácido cítrico y otros. MEDIDA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO Método Directo Recuento de células al microscopio : contar al microscopio el número de células en un volumen conocido. Limitante: No diferencia células vivas y muertas. Método Indirecto Recuento de células viables en placa: cada célula viable es una Unidad Formadora de Colonia o UFC. Se expresa en UFC/mL o gramo. Recuento de viables en medio líquido (NMP/mL o gramo) Se usa cámara de Petroff-Hausser Diluciones Sucesivas Recuento de células viables en medio sólido Se eligen placas que tengan entre 30 a 300 colonias para efectuar el recuento y se expresan en UFC/mL o g Métodos Indirectos: determinación de biomasa celular TURBIDIMETRÍA: establecer número de células través de un colorímetro o espectrofotómetro. Cuánto mas bacterias hay mayor luz se dispersa y más turbia aparece la suspensión. Medida de crecimiento de los hongos Levaduras: Se trabaja en medio líquido con las mismas características que los cultivos bacterianos. Hongos filamentosos: En medio de cultivo sólido Se mide el diámetro de la colonia Hongos filamentosos En Medio de cultivo líquido sin agitación: película superficial En cultivo líquido con agitación: se forman pellets En ambos casos se filtra y se mide PESO SECO Importancia del crecimiento en la industria Inoculantes Bebidas alcohólicas (vinos) Levaduras (cerveza, panificación) Antibióticos Nutrientes Sustancias necesarias para asegurar supervivencia de los microorganismos. Proveen energía y elementos necesarios para síntesis de estructuras celulares. Todos los microorganismos necesitan: Elementos esenciales: CHON Fuente de energía Macronutrientes Micronutrientes Agua Requerimientos nutricionales de los microorganismos Agua: Más del 80% de la composición celular bacteriana es agua. Fuente de Carbono: Todos los compuestos orgánicos poseen carbono. Las fuentes más simples de carbono son el CO2 y el CH4. Fuentes más complejas son aminoácidos, hidratos de carbono y lípidos. Nitrógeno: elemento fundamental, ya que es el componente principal de proteínas y ácidos nucleicos, constituyendo el 10% del peso seco de una bacteria. Macronutrientes: (P, K, Mg, Ca,) El fósforo es esencial en estructuras como ácidos nucleicos, ATP, fosfolípidos de membrana y algunas coenzimas, como NAD y FAD. Ej: Solución Salina Standart Elementos traza u oligoelementos: Son aquellos elementos que las bacterias requieren en cantidades muy pequeñas, como Fe, Cu, Mo, Zn. Ej. Solución de oligoelementos. Factores de crecimiento Sustancias que la bacteria, es incapaz de sintetizar Ej.: vitaminas, purinas, pirimidinas, aminoácidos. Estos compuestos hay que aportarlos al medio. Categorías nutricionales Los microorganismos se pueden clasificar: Según fuente de Carbono: Autotróficos: sintetizan sus propios compuestos a partir de sustancias inorgánicas minerales. Heterotróficos: necesitan sustancias preelaboradas no pueden llevar a cabo reacciones de síntesis. Son los descomponedores. Según fuente de energía: Fotótrofos :estos utilizan la energía electromagnética (luz) para su desarrollo. Quimiótrofos :que obtienen su energía a partir de la oxidación de compuestos químicos Además de la energía necesitan un dador de electrones por lo que los podemos clasificar en: Fotolitótrofos: si el dador de electrones es de origen inorgánico (algas, bacterias fotosintéticas sulfurosas, cianobacterias) Fotoorganótrofos: si el dador de electrones es de origen orgánico (bacterias fotosintéticas no sulfurosas) Quimiolitótrofos: oxidación de compuestos inorgánicos (nitritadores, nitratadores, bacterias oxidantes del azufre elemental y sulfuros) Quimioorganótrofos: oxidación de compuestos orgánicos (hongos, la mayoría de las bacterias) Los microorganismos usan diferentes mecanismos para realizar su metabolismo Se pueden categorizar con respecto al oxígeno: Aerobios: usan el O2 como aceptor de electrones. Anaerobios: usan a los nitratos, sulfatos y compuestos oxidados del Fe como aceptores de electrones. Respiración : proceso para la generación de energía ( ATP) Respiración aerobia : glucosa +O2 CO2 + H2O + ATP Respiración anaerobia : glucosa +Nitrato CO2 + N2 at.+H (Sustrato variado : producto degradación polímeros: celulosa, pectinas) … Bibliografía Frioni, Lilian. 2011. Microbiología: Básica, Ambiental y Agrícola.1ª edición. Orientación Gráfica Editora. Buenos Aires. Argentina. Madigan, T. et al. 2009. Brock. Biología de los Microorganismos. 12ª edición. Ed. Pearson Educación. S.A. España. Prescott, Harley, Klein. 1999. Microbiología. Mc Graw- Hill. Ed. Interamericana
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