PRÁCTICA4_TECNICAS DE TINCIÓN_AliciaZamudioSanchez

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Facultad de Bioanálisis
Región Xalapa
Microbiología General.
Docente: Edith Pozos Mestizo
Practica 4: TECNICAS DE TINCIÓN
 
Alicia de los Ángeles Zamudio Sánchez
Universidad Veracruzana
PRÁCTICA No. 4
Fundamento
En microbiología el microscopio se utiliza de forma rutinaria, ya que proporciona importante información para la identificación temprana y definitiva de los microorganismos. En la valoración de las muestras, es trascendente el poder de resolución del microscopio, el cual se define como la capacidad que posee un objetivo para distinguir la distancia mínima entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar como dos puntos separados. 
Las tinciones se pueden clasificar como simples cuando toda la muestra se tiñe del mismo color y se utiliza un sólo colorante (azul de lactofenol o tinta china); tinción diferencial, cuando se visualiza más de un color porque se utiliza más de un colorante (Gram o Ziehl-Neelsen).
Algunas técnicas tintoriales como Gram o ZiehlNeelsen requieren antes de su proceso la fijación de las muestras, con la finalidad de preservar la arquitectura estructural y química de las células.
 
Objetivos
· Hacer visibles a los objetos microscópicos y transparentes.
· Revelar su forma y tamaño.
Material
· Microscopio
· Cultivo puro
· Portaobjetos
· Colorantes
· Puente para tinción
· Asa bacteriológica
· Aceite de inmersión
Tinción de Gram
Esta tinción es un procedimiento de gran utilidad empleado en los laboratorios donde se manejan pruebas microbiológicas. Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas.
En microbiología clínica resulta de gran utilidad, ya que a partir de muestras clínicas directas provenientes de sitios estériles se puede saber de manera rápida las características de la muestra y hacer una diferencia de los potenciales microorganismos causantes de una infección.
PROCEDIMIENTO
1. Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un isopo.
2. Extender dicha muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
3. Fijar la muestra mediante un alcohol (metanol).
4. Aplicar el tinte de violeta de genciana sobre el portaobjetos y esperar un minuto.
5. Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador del violeta de genciana (lugol). El lugol y el violeta de genciana forman un complejo insoluble en agua capaz de penetrar en la pared de las células bacterianas.
6. Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona durante unos segundos.
7. Añadir safranina o fucsina para distinguir las gram negativas que aparecerán bajo el microscopio (en lugar de incoloras) con un tono rosado o rojo. 
8. Lavar con agua.
9. Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán de color violeta las gram positivas y de color rosa-rojizo las gram negativas.
TINCIÓN SIMPLE
La tinción simple es un procedimiento de tinción rápido y sencillo en el cual se emplea un solo colorante, por eso se denomina simple. Se utiliza principalmente para determinar la morfología y la organización de las células presentes en una muestra.
Naturalmente las células no tienen color, por lo que es necesario hacerlas visibles de alguna manera cuando se observan en el microscopio.
Colorantes empleados en la tinción simple
– Azul de metileno.
– Violeta de cristal.
– Verde malaquita.
– Fucsina básica.
PROCEDIMIENTO
1. Colocar el portaobjeto sobre un estante de tinción y aplicar el colorante deseado. Dejar actuar el tiempo correspondiente.
2. Lavar cuidadosamente el frotis del portaobjetos con agua destilada de una botella, o también con agua del grifo que fluya lentamente, hasta que la escorrentía se vuelva transparente. Por lo general esto tarda de 5 a 10 segundos.
3. Secar el portaobjetos con toallas de papel absorbente en un solo sentido y sin frotar. Asegurarse de que la parte inferior del portaobjeto quede limpia.
4. Observar el frotis teñido en el microscopio. Comenzar por los objetivos más lejanos para ubicar adecuadamente la zona que se desea observar con más detalle. Cambiar de objetivo para acercarse cada vez más a la muestra.
Resultados
Resultados con la tinción Gram:
Resultados con la tinción simple:
 
Conclusiones
La tinción Gram muy sencilla que se basa en el uso de un colorante (tinción) y que tiene una gran utilidad en medicina y que permite observar las bacterias mejor que bajo el microscopio. La gran aportación práctica de la tinción de Gram es que permite determinar el tipo de antibiótico, así como su eficacia. Por otro lado, la tinción simple solo sirve para denotar la morfología celular.
Referencias
1. (2001). Microbiological Applications: Laboratory Manual in General Microbiology (8 th ed.). The McGraw-Hill Companies.
2. Harisha, S. (2006). An Introduction to Practical Biotechnology (1st). Firewall Media.
3. Moyes, R. B., Reynolds, J., & Breakwell, D. P. (2009). Preliminary staining of bacteria: Simple stains. Current Protocols in Microbiology, (SUPPL. 15), 1–5.