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272 Capítulo 12 Uno consistió en ADN con una densidad intermedia entre el ADN marcado con 15N y el ADN marcado con 14N, mientras que el otro con- tenía sólo ADN con una densidad del ADN marcado 14N. Este descubri- miento refutó el modelo de dispersión, que predijo que todas las cadenas tendrían una densidad intermedia. La replicación semiconservativa explica la perpetuación de las mutaciones El reconocimiento de que el ADN podía ser copiado por un mecanismo semiconservativo sugirió una explicación para una tercera característica esencial del ADN como material genético, la capacidad de mutar. Ya era Meselson y Stahl esperaban que las cadenas de ADN recién sinteti- zadas fueran menos densas porque incorporaron bases que contenían el isótopo más ligero 14N. En efecto, la doble cadena del ADN de las células aisladas después de una generación tenía una densidad intermedia, indi- cando que contenían un medio como muchos átomos de 15N como el ADN “progenitor”. Este descubrimiento apoyó el modelo de replicación semiconservativa, que predijo que cada doble hélice podría contener una cadena previamente sintetizada (pesada en este caso) y una cadena recién sintetizada (ligera en este caso). También fue consistente con el modelo de dispersión, que también produciría una clase de moléculas, todas ellas con densidad intermedia. Era inconsistente con el modelo conservativo, que predijo dos clases de moléculas de doble cadena, las que tienen dos cadenas pesadas y las que tienen dos cadenas ligeras. Después de otro ciclo de división celular en el medio con el isótopo 14N más ligero, aparecieron dos tipos de ADN en el gradiente de densi- dad, tal y como lo predice el modelo de replicación semiconservativa. (a) Hipótesis 1: Replicación semiconservativa ADN de la célula progenitora o parental ADN de la célula progenitora o parental ADN de la célula progenitora o parental Primera generación Segunda generación (b) Hipótesis 2: Replicación conservativa Primera generación Segunda generación (c) Hipótesis 3: Replicación dispersiva Primera generación Segunda generación FIGURA 12-10 Modelos alternativos de la replicación del ADN La disposición de las hipótesis de las cadenas de ADN viejas (azul claro) y recién sintetizadas (azul oscuro) después de una y dos generaciones, de acuerdo con (a) el modelo semiconservativo, (b) el modelo conservativo y (c) el modelo dispersivo. E X P E R I M E N TO C L AV E PREGUNTA: ¿Cuál es el mecanismo de replicación del ADN? HIPÓTESIS: La fi gura 12-10 ilustra tres hipótesis de la replicación del ADN y pronostica la disposición de las cadenas de ADN viejas y recién sintetizadas después de una o dos generaciones, de acuerdo con cada hipótesis. EXPERIMENTO: Meselson y Stahl cultivaron bacterias (E. coli) en un medio de cultivo con nitrógeno pesado (15N) para muchas gene- raciones, de tal modo que todas las cadenas de ADN fueran pesadas. Después transfi rieron algunas de las células a medios con nitrógeno ligero (14N) de manera que las cadenas recién sintetizadas serían lige- ras. Aislaron el ADN de las células bacterianas después de 20 minu- tos (primera generación) y de 40 minutos (segunda generación) y las centrifugaron para separar el ADN en bandas basadas en la densidad. 14N ADN (ligero) 14N –15N ADN híbrido 15N ADN (pesado) En la centrifugación con gradiente de densidad, la concentración del CsCl es más alta en la parte inferior del tubo y más baja en la parte superior. Las moléculas de ADN se mueven a las posiciones donde su densidad es igual a la de la disolución de CsCl en la que se centrifugaron. RESULTADOS Y CONCLUSIÓN: Con base en la densidad de las moléculas de ADN observada en cada generación, Meselson y Stahl llegaron a la conclusión de que el modelo semiconservativo predice con precisión el mecanismo de replicación del ADN. 14N ADN (ligero) 14N –15N ADN híbrido 14N –15N ADN híbrido 15N ADN (pesado) Antes de la trans- ferencia a 14N Primera generación de células después de la transferencia de 14N Segunda generación de células después de la transferencia a 14N La ubicación de las moléculas de ADN dentro del tubo de centrifugación se puede determinar por óptica UV. Las disoluciones de ADN absorben con firmeza a 260 nm. FIGURA 12-11 El experimento de Meselson y Stahl 12_Cap_12_SOLOMON.indd 27212_Cap_12_SOLOMON.indd 272 15/12/12 13:2615/12/12 13:26 Parte 3 La continuidad de la vida: Genética 12 ADN: Molécula portadora de la información genética 12.3 Replicación del ADN La replicación semiconservativa explica la perpetuación de las mutaciones
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