Alimentos Práctica 9 espectrofotometria

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTÍN 
Facultad de Ingeniería de Procesos
Escuela Profesional de Ingeniería de Industrias Alimentarias
Nombre: Tania Milagros Pareja Ramírez
CUI: 20172083
Docente: Ing.Mag.Harry Ricardo Yucra Condori
Curso: Análisis de Alimentos
PRÁCTIVA 9: ESPECTOFOMETRÍA DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES POR EL MÉTODO DNS (ácido 3,5 dinitrosalicílico)
1. OBJETIVOS:
· Conocer los principios de funcionamiento del espectrofotómetro UV/VIS. 
· Elaborar curvas de calibración para la cuantificación de azucares reductores. 
· Cuantificar los azucares reductores presentes en jugos de frutas por el método DNS.
2. FUNDAMENTO:
El desarrollo de métodos analíticos es esencial en el seguimiento y control del proceso de fabricación de azúcar y alcohol. En la Industria sucro-alcoholera es común el empleo del método desarrollado por Lane y Eynon para la determinación de azúcares reductores en mieles y caldos de fermentación de destilerías, siendo éste el aceptado y recomendado por la Comisión Internacional para los Métodos Uniformes de Análisis de Azúcar (ICUMSA en Inglés). El método de Lane - Eynon tiene como principal inconveniente el ser un método volumétrico donde el punto final de la valoración se detecta por cambio de color, además es un método poco productivo. Sin embargo, ha demostrado ser exacto y preciso en la determinación de azúcares reductores en mieles y baticiones de mieles (2,5). Sumner y colaboradores desarrollaron otro método utilizando el ácido 3,5 dinitrosalicílico (DNS) para calcular la concentración de azúcares reductores en distintos materiales. El procedimiento se basa en una reacción redox que ocurre entre el DNS y los azúcares reductores presentes en la muestra. Este método ha sufrido varias modificaciones, siendo su principal ventaja su alta sensibilidad y productividad debido a que es un método espectrofotométrico. El método del DNS no es recomendable utilizarlo para la determinación de azúcares reductores en muestras intensamente coloreadas como mieles y caldos de fermentación que la contengan. Estudios de Otero y colaboradores muestran dispersión en la determinación de azúcares reductores en mieles por el método del DNS con la modificación de Miller.
Si se considera que se dispone de una fuente de radiación que hace llegar a la muestra un haz de radiación, de longitud de onda previamente seleccionada, cuya potencia es P0, la muestra de espesor b absorbe una parte de esa radiación incidente, de forma que la potencia del haz disminuye después de atravesar la muestra siendo su nueva potencia P. El cociente entre la potencia de la radiación que sale de la muestra y la de la que incidió sobre ella, se define como transmitancia: = La transmitancia también puede expresarse en tanto por ciento, multiplicando el cociente anterior por 100. Es más frecuente utilizar el concepto de absorbancia, o densidad óptica, que se define como el logaritmo de la transmitancia cambiado de signo: = log = −
Al incidir radiación electromagnética visible sobre la materia puede ser totalmente absorbida o totalmente reflejada. En el primer caso el objeto aparecerá de color negro y en el segundo de color blanco. Puesto que nosotros percibimos los objetos por medio de la luz reflejada, si hacemos incidir un haz de luz blanca (que contiene todas las longitudes de onda) sobre un objeto, éste absorberá ciertas longitudes de onda y reflejará otras, siendo éstas últimas las responsables del color. Se dice que este color (observado) es complementario del que se percibiría si la luz absorbida se pudiera detectar. Dado que en la parte experimental de esta práctica las medidas van a realizarse con espectrofotometría visible, es conveniente conocer para qué longitud de onda tiene cada color su máxima absorción, lo que se muestra en la tabla siguiente:
3. MATERIALES Y MÉTODOS:
	ESPECTOFOTÓMETRO
	AGUA DESTILADA
	
	
	CELDAS DE PLÁSTICO
	SAL DE ROCHELLE
	
	
	MUESTRA DE JUGO DE PIÑA
	DNS
	
	
	GRADILLA
	TUBOS DE ENSAYO
	
	
PROCEDIMIENTO:
· Filtramos la muestra de jugo de piña.
· En un tubo de ensayo colocamos 5ml de agua destilada y 1ml de la muestra filtrada de jugo de piña.
· Luego de agitar el tubo, extraemos 0.5ml y añadimos 3ml de DNS.
· Colocamos la muestra a Baño Maria.
· Agregamos 1ml de Sal de Rochelle.
· Luego agregamos 15ml de agua destilada.
· Seguidamente con la ayuda de una celda colocamos la muestra en un espectofotómetro.
· Anotamos los resultados.
4. RESULTADOS Y DISCUSIONES:
	DATOS OBTENIDOS
	Concentración de Glucosa(g/L)
	ABSORBANCIA (540nm)
	0.2 g/L
	0.016
	0.5 g/L
	0.067
	1 g/L
	0.109
	1.5 g/L
	0.167
	2 g/L
	0.228
	Muestra de Piña g/L
	0.805
Debemos hallar la Concentración de Glucosa con la ayuda de la siguiente gráfica:
En la hoja de Cálculo de Excel, obtuvimos la ecuación de la recta, la gráfica y el valor de . Entonces para calcular la Concentración de Glucosa en la muestra de piña reemplazamos el valor hallado con el espectrofotómetro en la ecuación de la recta de la siguiente manera:
Con la curva obtenida se realiza una gráfica de tendencia lineal que se ajusta a los datos, el  obtenido para la ecuación de la recta es de 0.9935. Teniendo en cuenta que el  es mayor a 0.95 los datos no tienen mucha dispersión y por lo tanto son aceptables.
REALIZAMOS UNA COMPARACIÓN TEÓRICA DE LA CURVA ESTÁNDAR DE GLUCOSA:
La ecuación es: 
 y 
Fuente: OLAZAVAL L.; CASTAÑEDA C.2005 Obtención de un Hidrolizado enzimático a partir de Harina de Maca.Tesis de UNAS. Arequipa-Perú
Fuente: OLAZAVAL L.; CASTAÑEDA C.2005 Obtención de un Hidrolizado enzimático a partir de Harina de Maca.Tesis de UNAS. Arequipa-Perú
Calculamos:
Error Relativo:
DISCUSIONES: Se obtuvieron valores muy diferentes en la curva de glucosa de la Tesis usada y la experimenta. El procedimiento del método DNS se basa en una reacción redox que ocurre entre el DNS y los azúcares reductores presentes en la muestra. Si se hubieran hache más diluciones probablemente se hubiera tenido resultados más certeros, pero no fue así ya que en una tesis se investiga más que al hacer un experimento solo con una muestra y pocas diluciones. El método del DNS no es recomendable utilizarlo para la determinación de azúcares reductores en muestras intensamente coloreadas como mieles y caldos de fermentación que la contengan
5. CONCLUSIONES:
En esta práctica se realizó un procedimiento para la determinación de azúcares reductores totales en el jugo de piña por el método de DNS. También se realizó una curva patrón que se elaboró con diferentes concentraciones de glucosa y se pudo observar que la absorbancia de esta es directamente proporcional a la concentración de azucares presentes en las soluciones. Utilizando el procedimiento del DNS para calcular una curva patrón de glucosa se observa que la gráfica mostró una desviación pequeña al tener una  esta desviación en la curva patrón se pudo deber a los contaminantes presentes en el jugo que no son azucares, o alguna contaminación en el material manejado.
6. Esquematice el fundamento de la determinación de A.R. por el método de DNS.
Elaboración de una curva estándar
Preparación de glucosa
Tratamiento de muestra
Llevar la muestra a un espectrofotómetro
Anotamos los datos de glucosa y de la muestra
Realizamos la curva de la glucosa y comparamos valores
7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
Manual de técnicas analíticas, ICIDCA,1974. 
Biart J. R, Manual de Técnicas analíticas de las plantas de Levadura, ICIDCA ,1976. 
Catálogo de Normas Cubanas, NC 81-42: 88, 2004 
International Commission of Unified Methods of Sugar Analysis (ICUMSA), Methods Book, 2005.
Curva Patrón de Absorbancia vs Concentración de Glucosa
Absorbancia	0.2	0.5	1	1.5	2	1.6E-2	6.7000000000000004E-2	0.109	0.16700000000000001	0.22800000000000001