Biologia-celula-19

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TÉCNICAS DE MICROSCOPÍA
El principal instrumento, aunque no el único, para el es-
tudio de la célula y de los tejidos es el microscopio; por
ello iniciaremos este capítulo explicando qué es y para
qué sirve este instrumento, así como los diferentes ti-
pos de microscopio y las diversas técnicas que se reali-
zan con ellos.
MICROSCOPIO ÓPTICO DE CAMPO CLARO
Características
Básicamente, el microscopio óptico compuesto es un
tubo provisto de dos lentes (una en cada extremo) que
amplían sucesivamente la imagen del objeto (prepara-
ción histológica), el cual está intensamente iluminado.
De las dos lentes, una se encuentra próxima al objeto y
se denomina lente objetivo; la otra se sitúa junto al ojo
del observador, en cuya retina se forma la segunda ima-
gen aumentada, y recibe el nombre de lente ocular. Si
se sustituye el ojo del observador por una cámara foto-
gráfica se pueden obtener fotografías de la preparación
histológica, a los mismos aumentos a los que se obser-
va o a mayores aumentos si se amplía el negativo. Este
esquema simple inicial se perfecciona añadiendo lentes
intermedias, que multiplican el aumento, y otros dispo-
sitivos como el condensador, que concentra la luz emiti-
da por la fuente luminosa sobre el objeto, o diversos
sistemas para aumentar el contraste (Fig. 1.1).
Lo importante del microscopio no son los aumentos
en sí mismos, pues una fotografía puede ampliarse to-
do lo que se desee sin que por ello se observen objetos
que no aparecían en la imagen inicial, sino el poder de
resolución. Éste se define como la capacidad de distin-
guir como imágenes diferentes dos puntos cercanos. El
poder de resolución se mide utilizando como unidad la
inversa del límite de resolución (poder de resolución = 
= 1/límite de resolución). El límite de resolución se defi-
ne como la distancia mínima entre dos puntos para que
éstos puedan distinguirse como tales. Se calcula por la
fórmula de Abbe:
Límite de resolución = 
= 0.61 × longitud de onda/apertura numérica.
La longitud de onda dependerá de la luz empleada; si
se usa luz natural blanca, la longitud de onda es 550 nm
(nm es la abreviatura de nanómetros). La apertura nu-
mérica es igual a n x seno α, siendo n el índice de re-
fracción (cambio en la velocidad de la luz difractada) del
medio situado entre el objeto y la lente, y α el ángulo de
semiapertura de la lente. Si el medio es aire, n = 1. Si se
utiliza aceite de inmersión, n = 1.51. El valor de seno α
(siempre menor que uno por definición) puede llegar a
ser 0.93 como máximo en los microscopios actuales. En
estas condiciones:
Límite de resolución = 
= 0.61 × 550/(1.51 × 0. 93) = 335.5/1.4 = 240 nm.
Fuente luminosa
Lente condensadora
Muestra
Lentes del objetivo
Imagen intermedia
Lente proyectora
Imagen final
Lámpara Filamento
Microscopio electrónicoMicroscopio óptico
Figura 1.1. Comparación de los microscopios óptico y
electrónico.
MÉTODOS DE ESTUDIO DE LA CÉLULA Y LOS TEJIDOS
01 PANIAGUA BIOLOGIA 3 01 29/11/06 12:38 Página 5
	BIOLOGÍA CELULAR (...)
	CONTENIDO
	1. ESTUDIO DE LA CÉLULA