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PASTEURELLA l\TRODlJCCION El genero Pas1ew·ei!o fonna parte de- la familia Paste.urella ce.::ae. JUTlto a los géneros Atiinohacil/us y Iiaernophilus._ consr.í tuyendo el grupo de microorganisrno-s designados H PA. Desde bi primera descripción ¡ealízada por Rivolta en l 877. el género Paswurella ha su1:rido numerosos cambios en su ubie-ación taxo nl1nüca. La c!asiticació-n no es absolu1a y está sujeta a constante.::; ca1nbios, Rosenbuch y Me.rchant en l 939 le dieron el nombre de Posreurdla mulrocida. El Manual de Bergcy ,ktaHa. las siguientes c-specie.s: Pas1eu.relia nwlwcida, P haemolyrica (actualmente corresponde a! género Mánnhcimia haemo(vtica al ígual que P. granulomaris [.Mannheimia granulomatis]), P pneurnotropica, P urea. P aerogenes y P gallinanm1. Posteriores investigaciones basadas en di fo.ren.tes análisis genéticos y propiedades fenotípicas distinguen l l especies en el género Pasreure!la: P.. multocida ssp mulrocida, P multocida ssp septica, P multocida ssp gallicida. P. dagmaiis, P canis, P galli narum, P anati.::, P. s1omatis, P lángaa. P aviwn, P vo/antium y dos especies definidas como P. sp. A y P. sp. B . Ei género Pasteurella se redasifica y se integran seis nuevas taxas, índuyendo P caballi, P betti, P. (vrnphangitis, P rnairii y P trehalosi. Estudíos filogenéticos rea1i7..ados en 1 992 lograron separar dentro del género- Pasteurelfa do:; subramas: !as ramas 3A y 3B. La rama 3A contíene P galiinarum, P volantium, P avium, P. sp. A. P anatis y 1� langaa y taxón C, y la rama 3B comprende P multocida ss-p muhocida, P dagmatis, P swnu2tis, P. canis y P sp. B. Una nueva subrama 3D incluye P. langaa, Blsgaards taxón 2 y raxón 3, P onatis y Actinobaci/Jw:; salpingiti.dis. Como se. ha visto, el género Pasteurella ha sufrido pern1a� 11.entes cambios y es posible. que con las nuevas tecnologías éstos se profundicen aún más. hasta permitir una mejnr ubicación de !as especies de este género. P mulwcida es una de las pasteurelas de mayor rele.va.ncia en medicina veterinaria con tres subespecies P. multocida ssp multocida, P nwltocida ssp septica y P muftocido ssp gaflicido, que. incluye a 5 scrotipos capsulares (A, B_ D, E y F) basados en el. antíge.no c.apsuiar y en 1 6 serovariedades o serotipo� basados e.n los antígenos somáticos, Cabe consignar que. P haemofvtica ha sido excluida del género y fonna parte del género Mannheimia, y P. aml!ispestifer constituye el nuevo género Riemerella. HABITAT Pasteurella multocida es un rníc.roorganis-mo de. distribución mundial. habitante y wmcnsa! de membranat- y mucosas de las vías respiratorias altas._ cavidad oral, tracto genital y digestivo de animales mamiferos y aves. Es comensal del tracto respíratorio, en la cavidad oral de perros en un alto porcentaje. y eu gatos en un 40º,'tl . Se. han reg istrado re.laclones variables entre P mulrocida subespecie multoci.da y P multocida subespecie seprica, y no se conocen bien los porcentajes de coexistencia de cada una. P mu/roe ida �ubcspec ie st_mica es comúnmenre aislada de pájaros. pavos, pollos y patos . P. muitncida subespecie gaílicida es más prevale.me en pa hnipedos. CARACTERISTlCAS MORFOLOGICA.S PtL'.' Tr/ure!!a muhocida incluye micrnorganisrno� ovoides o bac-iios conos. g,ramnegativos. que presentan coloración bipol.ar. cuando se obtienen de tej idos. sangre o de ai slamientos recientes en cul.t.ivos. Su tamaño es de 0,4 x 1 ,0� L5 �un de largo, son no esporulados, imnóv!les, aerobios y anaerobios facultativos. y en subcultivos repetidos pueden ser pleomórfi.cos. CAR.\CTERISTICAS CULTURALES Pasreurella. mulrocida crece en condiclones aeróbicas en medios enríq.uecidos con sangre o suero, como en agar nutritivo suplementado con 5%-de sangre bovina, equina u ovína. En agar nutritivo se desarrolla, pero menos intensamente. No e.rece en medio agar Mac Conkey. S'e han dese.r ito diferentes medios selectivos para el aislamiento de Pasteurella muftocida, como el CGT citado por Knight o el sugerido por Avri l y col., en el que se. utilizan el Medio Müeiler Hinton con el agregado de amikacina y vancornicína. Hay una considerable variación de las colonias. re \acionada con la virulencia del microorganismo. Se reconocen tres tipos de colonü:1s: iisas (S) pequeñas y redondas, mucoídes (M) grandes, y mucosas y i:ugosas (R) que son raras y nonnalmente care.cen de c¡lpsula. Las colonias de P. multocida en agar sangre �on normalmente no hemolíticas, de color gris, translúcídas, con un característico olor dulce. Bisgaard ha observado algunas cepas de P n-iultocida con cierta. activídad he-molitica. Colonias mucoides han sido descritas en aislamientos obtenidos de. gatos, conejos·y bovinos. Otros autores distinguen tre-s tipos de colonias al usar e! est.e reomicroscopio c.on luz transmítída oblicuamente: las iridiscentes. Ias azules y las intennedias:. CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS Me-taboHzan la glucosa por fermentación con producción de ácido pero no de gas, Se utiliza ei me-dio de Hugh y Leifson para de.mostrar su metabolismo fermentativo. Dan positiva la reacción de oxídasa y producen enzimas nitratorreductasas. Las reacciones bioquímicas más usadas para la separación de Pas� teure!la incluyen decarboxilación de !a orni t'ina., producción de indoL reacción de la cataiasa, ataque a la urea y produccíón de ácid(i a partir de la mal.tosa, manitol. dulcito!, sorbüoL a.rabinosa y trehalosa. Fennentación de maltosa y glicerol para cepas de P multocida ssp multocida y P multocida ssp seprica. En la t.abh; :n� 1 se consignan algunas de las pruebas bioquímicas impo1i:antes para la caracterización del género P asteurella. Tabla Pruebas bioquímicas para caraterizar bacterias del género Pasteu.rella Oxída,;a " Catalasa " Motilidad Temperatura de crecimiento 37 ºC Glucosa Fermenta sin gas + Urcasa V Nitratos + Crecimiento en agar Mac Conkey - V CARACTERISTICAS ANTIGENICAS Y SEROLOG[CAS "• Pasreurella multocida no dispone de características anti� génicas uniformes. Presenta un antígenü somático O, donde se reconocen 1 6 serotipos o serovariedades que se detennina por la prueba de inrnunodifusión en agar por el método de Heddlcs ton con antisueros específicos. Namioka tambíén desarrolló un esquema serológico basado en los antígenos somáticos, con mé todos de aglutinación. Además posee anti.genos capsulares, que no siempre suelen detectarse y se demuestran por la técnica de hemaglminación pasiva de Carter. Hasta el presente se reconocen los 1 ipos capsulares A, B, C D, E y F Roberts caracteri7.ó los tipos !, II, llI y IV sobre la base de la prueba de seroprotección en ratones y los correlacionó con el origen de las cepas aisladas de P multocida, con las especies de animales afectados y la fennentación del dulcitol, la arabinosa y la xilosa. Carter caracterizó los tipos capsulares A, B, C y D, y pro movió el uso de este esquema serológico util izando la técnica de hemaglutínación pasiva_ Demostró una fuerte correlación entre las cepas aisladas y las especies de animales susceptibles que serian equivalentes a los tipos 1, H. 111 y IV de Roberts. En la tabla 37-2, se consignan los tipos capsulares de P mu.ltocida, las afecciones patológica.,; que producen y los animales hospedadores. CARACTERISTICAS PATOGENICAS Y ESPECIES AFECTADAS En las aves, especialmente- en gallinas, producen el cólera aviar. Por lo usual, la fonna aguda se presenta como una septicemia bac teriana con eleva.da morbilidad y baja mortalidad. y en cerdos está asociada a la rinitís atrófica relacionada con otros factores concurren tes. En ovinos, caprinos y bovinos P multocida esta relacionada con la enfermedad del embarque o fiebre del transporte. En ocasiones produce enfermedad en hwnanos a partir de heridas por mordedurJs y arañazos de perros o gatos. La bacteria causa una variedad de enfennedades en humanos y es el microorganismo aislado con más frecuencia. En la tabla 3 7-3, se detallanlas especies afectadas, los cuadros clínicos y los tipos antigénicos predominantes. FACTORES PATOGENICOS Los factores de virulencia de Pasteurella multocida esta rian asociados a sustancias tóxicas que han sido demostradas en cepas de rinitis atrófica del cerdo. cuyos fihrados producen Infiltrados importantes cuando se inoculan intradém1ic.amente a cobayos, y actuarían como dermotoxinas que a su ·vez producen daños celulares cuando se inoculan a cultivos de tejidos, La en dotoxina (LPS) y la cápsula cüotóxica estarían asocia.das como factores patogénicos. La septicemia hemorrágica es causada por dos serovares de P multocida: B:2 y E :2; el antí.geno capsular es determinado por la prueba de hemagiuünación indirecta de Carter y el numeral 2 represen.ta el antígeno somático O, y es determinado por la prueba de precipitación por inmunodifusíón en agar, desarrollada por Heddelston . TRANSMISION Todos los mamiferos y aves pueden ser coionizados por pas teurelas. En humanos pueden ocurrir infecciones por mordeduras_ rasguños o arañazos de animales portadores. La tTansmisiún ani mal a animal puede ocurrir por ingestión o inha.lación . El a.gua de bebida y los alimentos contaminados por animales portadores o enfermos sería una de la fuentes de contaminac.ión hab i.tuales. SIGNOS CLlNICOS Un variado rango de signos pueden s.er observados en in� fecc.i.ones causadas por Pasteurella rnultocida y varían según la naturaleza de la infección. En los casos peraf:,rud.os, se observan pocos signos y la muerte en goteo puede ser el único signo en la explotación. En 1os ca-sos más evidente.s se observa descarga seromucosa a partir d.el pico o la boca 1 la nariz y lo-s ojos; cia nosis, depresión general y diarrea. En infeccicmes crónicas, los signos dependen de. la localización de !as lesiones: en la-; pata_s o articulaciones1 y en los tejidos subcutáneos de la cabeza, el oviducto y el tracto respiratorio. PATOLOGIA Pasteurella multocida puede causar neumonías o septicemias en muchas especies de animales y aves. En algunos ca.'ios puede causar infección crónica de las vías- respiratorias superiores y del oido medio, especialmente en conejos; procesos neumónicos en bovinos, ovinos, caprinos y otras especies y ma .. <;ti.tis severas en rumiantes. Las pasteure.J.as de serotipo D toxigénlcas son respon- Tabla. Tipos capsulares de Pasteurella multocida, enfermedad y animaJes afectados Tipo capsular Tipo A Tipo B Tipo e Tipo D Tipo E Tipo F Cuadro clínico Cólera de. !.as aves Pasteurelosis epizoótica o septicemia hemorrágica Poco frecuente Neumonías Septicemia hemorrágica Procesos respiratorios Especie animal Aves Bovinos Perros y gatos Bovínos. ovinos, cerdos. aves de corral Bovinos Pavos . ; i,¡ Tabla . Manifestaciones patológicas y tipo capsular predoroinanie Espe-cie animal Aves Cuadro clínico Tipo antigénico Cólera. rinitis, sinusitis. A - D - F artrit is , infección crónica, neumonía Bovino�: y búfalos Septicemia hemorrágica. B Capnnos Cerdos Humanos Ovinos pasteure!osis aguda Neumonía enzoótica A Neumonía, rinitis atrófica A - . D Septicemia he.morr.'.igic.a B Enfermedad respirato-riri A D aguda y cróníca Cunjuntivitis., únitÍ$ Endocarditis. in fección A de heridas infección latente- de faringe A y tonsilas Pleuroneumonía aguda A y crónica sables del sindrome de rinitis atrófica en cerdos, míentras que. las del tipo A, no toxigénicas normalmente complican los casos de neumonía enzoótica porcina. Hay importantes diferencias de virulencia entre los dos tipos de Pasteurella : el A afecta las vfas respiratorias inferiores y el D afecta las vfas respiratorias superi-o res y es de tipo toxigéni.co. En conejos producen catarro. infección crónica de- las vías respiratorias superiores y del oído medio. En humanos está asociada a infección de heridas por mor dedura,;; o arafiazos de gatos o perros. y progresa a una celulitis, abscesos, tenosinovitis, osteomielitis y artritis séptica. En las vías respiratoria�- causa infección del tracto superior, incluyendo sinusitis, otitis me-dia, mastoiditis, epiglositis y faringitis; rara vez causa infección del. tracto respiratorio inferior, con neumonía. abs ceso pulmonar y empiema. Puede causar endocarditis, infección de injertos vascular y pericarditis . Es p<>co común como causal de meningitis, empiema subdural y absceso de cerebro; cuadros de meningitis han sido asociados con lamidos o mordeduras de gatos. Esta. enfermedad ocmTe en personas mayores de edad. Rara vez causan desórdenes gastrointestinales: cuando éstos ocu1Ten incluyen apendícitis, abscesos hepa{oesplénicos y peritonitis. Se han reportado casos de- peritonitis en pacientes dializados, abscesos periorbitales, conjuntivitis, Ulcera de cómea y endoftalmitis, pie lonefritis, abscesos renales: epididimitis y cervicitis. En aves, las lesiones son las típicas de una septícemia bacteriana, con disturbios vasculares, hiperemia pasiva y congestión: petequias y equimosis en la subserosa abdominal, mucosa intest inal, cavidad torácica y abdominal. Es común observar en el ba;,..o y el hlgado áreas focales múh:iples de necrosis coagula ti va o de necrosis generalizadas en la mayoría de los órganos. Los pulmones suelen estar in.criminados. Se observan artritis cascosa e lnflan.1.ación productiva de ia cavidad peritoneal y de los oviductos en las formas crónicas. CARACTERISTICAS PATOGENICAS EXPERIMENTALES Inoculación en anímales Se utili?.an ratones libres de Pasteurella para inoculación expenmental de cepas aisladas de casos naturales de P. multocida por inyección subcutánea. imraperitoneal o intramuscular del espécimen. Cepas virulentas de P mulr.ocida pueden producir ia muerte en ratones susceptibles dentro de las 48 horas posteriores a la inoculación . P mulrocida se puede ret'Uperar del bazo, el higado y de sangre cardíaca de los animales inye.ctados. El costo de íos ratones y !os valores éticos observados en el uso ex.perimenr.ai de animal.es deberían ser reconsiderados y replantea.dos, sobre. la base de los derechos de protección a los. animalts. DlAGNOSTICO Un diagnós.t.ic.o acertado de la enfermedad debe estar basado en La historia , los signos clínicos, la necropsia de ios anima.les y e.\ aislamiento de P mulrocida de los individuo:; eníennos y necropslados. lmpr()ntas de higado podria.n colorear::e con la récnica tintorial de Wright y podrían observarse- micrnorganis� mos bipolares en el mícrnscopio de luz. P mul!ocida pueden s.er aislada directamente de los siguien\'es órganos. : c.ora.zó-n. pulmón, hígado y m.édula ósea. A partir de aves vlvas se pue den tomar muestras de-\ nmc.us nasal o de la mue.osa doac'2..L y cultivarlas e11 a!!,ar sangre a �5-3-7 ºC en aunósfe.ra aeróbica vio microaerofilic-a� Cien� cepas de P multocida y P a.'iw-n blotipo 1, P volatium y P especie A dependen para. su crecimíenw de. la inc-orporación del factor V Métodos genotípicos para identificación de Pasteare/la multocida En la ac.tualidad e.x isten dos tipos de pruebas de la reacc.ión en cadena de ia polimerasa (PCR), especie específica, una de el las basada en la proteína P6 like (PSL). donde se han probado los 16 serotípos somáticos reconocidos hasta e l presente de. P m.ultocida, y otra PCR desarrollada por Towsend en 1998. Los métodos s.e basan en el análisis de.\ DNA cromosó-mic-0 y del DNA plasmídico: el. p1imero incluye análisis de restricción de endonucleasas (REA) y PCR. No obstante la disponibi lidad de estas técnicas, su uso está muy limita.do en la epidemiologia de las pasteurelosis. Mut.t.ers usa hibridación DNA-DNA y e.smb!ece relaciones genotípicas entre las especies de- la familia Pasleurel lacae.: P. mul10cida subespecie mu/tocida, P mu.iwcida subespe-c:ie séptica y, P multocida subespecie gallicida y otras espec.íes como P. canis, P. sromatis, P dagnwtis, P anorís, P fongaa. P gallinarum, P volatium,P aviurn. Pasteurella especie A y Pa!:teurella especie B. Perfil proteico de Pasteurella multocida Han sido utilizados en forma limitada en el géne.ro Pasteurella modernos métodos de tipificación fenotípica basados en la separa ción de proteínas, incluyendo la prote.ína principal de membrana (OMP), el analisis de proteínas de la pared celular (WCP) y la técnlc.a denominada rnu!tilocus enzima electroforesis (MLEEl. TRATAMIENTO, PREVENCION Y CONTROL Generalmente los tratamientos con sulfas v antibíóticos como penicilina y tetraciclina suelen ser utilizados· con exito . Es con veniente prever la posibilidad de mordeduras protegiendose. con guantes y máscaras, especialmente con animales agresivos . Una de la formas de prevenir la enfermedad o reducir el número de casos en la población de animales susce·ptibks e:- inmunizar con vacunas que incluyan !as cepas prevalem.es en la región o explotación . Se util izan vacunas con cepas mu tantes que suelen dar reacciones cruzadas con diversos ripo de Pasteurella. ASPECTOS DE SALUD PUBLICA Aún no se c.onocen casos. au1.émicos de in fecciones huma nas debido a !.os sernti.pos B:2 y E:2: sin embargo, ya que otros:. serotipos de P mulrocida pueden causar una variedad de infec ciones humanas se deberán tomar precauciones para minimizaí ia exposición a las varie.dades de P multocida que causan la septicemia hemorrágica, La mayor parte de los perros y gatos son portadores de P muliocida que colonizan !a cavidad bucal y se. transmiten por mordedura. A I morder el animal transmite el microorgan ismo a la herida. y horas después se producen los signos-de !a inflamación c.on tumefacción, enrojecimiento y dolor. E! proceso puede afectar tejidos profundos- y complicarse con amit.is sCptica y osteomielitis . Mannheimia haemolytica HABITAT Y TAXONOMIA Jfa.nnheimia haemoZvrica es un microorganismo integrante de la familia Pasteurel laceae. Se considera_ ageme etiológico de enfermedades de aves y mamiferos. Siendo controvertido su papel patógeno, se lo aísla frecuentemente de infecciünes respi ratorias . Algunos autores lo consideran agente primario y otros como un organismo secundario, Dentro del genero Mannheimia haemo�vtica es !a especie mas importante en medicina veterinaria . La mayoría de las serova.res aisladas de bovinos y ovinos s.on hospedadores nom1ales de sus vías respirarorias. En los bovinos M. haemolytica es responsable de neumonías y en !.os pequeños rumiantes produce neumonías_ ma.;:;t itis y septicemias. Infecciones en aves Harbourne. informó aislamientos de una bacteria hemolittca de hígados de pollos jóvenes y pavos. N icolet aisló cultivos puros de M. haemolytica de neumonías y sal pingi.tis . Matthes info1mó infecciones por M. haemolytica en aves con alta morbilidad y baja mortalidad. Jant.tschke aisló A1. haemolyrica de pulmones y oviductos de pollos y gal linas con lesiones patológicas en tracto respi.ratorio, hígado y oviducto, y Hacking obtuvo aislamientos de este microorganismo en pollos y gall inas a partir de hígado y sangre del corazón. Su presencia produce caída de la postura de. huevos, aerosaculitis, peritonitis, salpingitis y, en algunos casos, entcritís combinada con hepatitis . Infecciones en bovinos Las serovares 1 y 2 de M. haemolytica �on aisladas de !.a nasofaringe. de animales sanos. Una infección. clínica se ma" nifiesta com o consecuencia de si tua.c iones de estrés , como el transporte, que origina la fiebre de.l transporte, favorec ida por el agrnpamiento de animales, las malas condiciones. climática s o los cambios bruscos de la alimentación. Las infecciones respiratorias. virales y la micoplasmosis constituyen factores predisponentes a favor de la mu!üpiic.acíón local de }vi. haemo lytica alterando !os mecanismos de defensa pulmonar. La ins piración favorece- el ingreso de- bacterias a las vías respiratorias profundas, !a co lonización de los alvéol.os y !a mult ipl ic.aciónÚ Cl. in icame.nte, se observa estado general di sminuido. fiebre,(· '] abatimiento, disnea grave y a menudo los animales muere-n ett� ;: 24 a 48 horas. Las lesiones consisten en una pleuroneumoniJ'., ,j o neumonía broncoa.lveolar fibrinosa o fibrinohcmorrágica co� ·j presencia de. focos necróti.cos. Infecciones en pequeños rumiantes ;/f,I A1. haenuJ(vti.ca está en la nasofaringe. l.a boea, y las amígda . la{f·! de los animales sanos. La e-ontammae-ión de corderos y cabrilOSj{if se pro-duce en las primeras horas del nacimienrn con el cont.actofih · :',.:· ¡ con sus madres. La serovar más frecuente es la 2 y las menoi'..�f frecuentes son l . 5. 6 , 7 . 8 . 9 . l 2 , 1 3 . 1 4 . Ln in foc.dón clínica se . .-, · traduce- p0r desórdenes respiratorios y se-pticcmi ,1:- asociados a :j: J factores predi sponemes. Los corderos presentan ::signos respira. torios moderados con exudado seroso y tos, que lue.go se a.strava con neumonia y fiebre. Ciertos individuos mueren en pocas horas '/:./ y otros presentan disnea pronunciada. En ausencia.de tnnarnien.to, ./:;,:j la tasa de mortalidad puede. akanzar al 1 0°,-0 . Las n1as1itís pueden: {i.Í resultar de una infección de la mamas por via ascende-me. Los<t.¡ corderos portadores de Afannheimia haemo!vtiu.1 en la boca: :.1W:.¡contaminan los pezones de las mamas. · ifti '.tt.'.•1· ?± ,':J/ FUENTE DE MUESTREO 11 L1. toma de muestras en !.os casos agudos se realiza a Partir 1 de hi sopa . dos traqueal,es . , 1 . ·ava�os b:oncoalve . ol�res y/o aspirados . , -.. � . ] de exudados de las v1as respiratonas u omi.s v1sccras afectadas. � como híg ado. oviducto, ovario, sacos aéreos. cavidad peritoneaL ¡ en animales muertos, a partir de un fragmento de. pulmón que _ .. N:.1 presenre lesión. Mannheimia haemolytica puede estar presente 1 en las cavidades nasales de animales sanos. f¡· CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS Í, Y TINTORIALES ½" Són bacilos o cocobacilos, inmóviles, no esporulados, gram" .v negativos, aerobios o anaerobios faculta t ivos o mic.roaerófilos; j' su tamaño osci la entre- O,2 y 0,5 por l ,2 a 2 µm. ¡i CARACTERISTICAS CULTURALES En agarbase nutritivo, crecen con cierta d.í ticultad entre 24 y 48 horas de incuba.ción. Las colonias son de 2 mm de diámetro, redondeadas, amari llentas y !isas. También c-rece.n en medíos selectivos como agar Mac Conkey, donde desaiToilan colonias lactosa negativas al inicio del crecimiento con un diámetro de 1 mm aproximadamente y luego, a las 48 horn.s se ohservan colonias lactosa positivas. En agar almidón dextrosa, en 24 horas, cree.en colonias de 2 a 3 mm de diámetro risas. redondas, trans lúcidas, con cierta iríd.iscencia. En caldo infusión de ternera ., se observa ligera turbidez unifmmc. después de 24 honL.i;; el 1i1cdio tiende a daríficarse y fonnar un depósíto granul oso. En agar srmgre bovina luego de 24 horas de- incub-ación a 3 7 ºC en a1mósfera normal, las colonias son _lisBs. gris3ceas� con un diámetro de enrrt l y 2 mm. Presentan hemólisis tipo /l . CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS Las caracte.risticas bioquímicas util izadas para la ide.nti:fica· ción de Mannheimia haemolytica se detallan en la tabla 37·.4_.,,. :pf 'fabla Característ icas bioquímicas de Aiannheimia haemofytica Oxidasa Catalasa Requerimiento de factor V Nitrato reductasa Fosfatasa alcalina D-Fructosa D�Manito! Sacarosa Ci1rato Muca to Crecimiento en caldo CNK Rojo de. metilo Voges Proskauer Hidrógeno su lfurado Ureasa Hidrólisis de la arginina Lisina decarboxi lasa Feni laian ína desaminasa Gelatinasa Hidrólisis del Tween 20 CARACTERISTICAS ANTIGENICAS Y SEROLOGICAS + .¡. + + t El uso de la hemaglutimtción pasiva pennit.e diferenciar 1 2 serovariedades en Mannheimfo haemolytica: l , 2, 5 , 6, 7, 8 , 9, 1 2. 1 3. 14, l6 y 1 7 . CARACTERISTICAS PATOGENICAS La patogenicidad obedece a la acción de componentes es tmcturales, tóxicos, metabólicos y enzimáticos. Las e.epas de A.fannheimia haemolytica de serovar 1, culti vadas in vitro 1 elaboran dos tipos de fimbrias, Una rígida de 12 nm y otra flexíbk de 5 nm, que podrían ser las responsables de la adhesión a las células de las vías respiratorias. Su cápsula está constituida por polisaciridos, de composición variada según las serovares. Es- elaborada durante. la fase exponen cíal de su crecimiento in vivo. Las cepas aisladas de tráquea, bron quios o alvéolos presentan un material capsular importante. Esta estructura se adhiere a las célula<; epiteliales, es quimíotáctica para los neutrófüos, pero se opone a la fagocitosis y confiere resistencia a la lisis por el sistema complementario. Experimentalmente, los anticuerpos dirigidos contra la cápsula son aptos para proteger a los animales de un desafio con cepas virnlentas. El lipopolisacárido (LPS) es un constituyente de la membra na externa . Los LP S <le 1.as sernvares 2 y 8 carecen de cadenas laterales, los otros tienen un LPS c.:ornpleto . La actividad endo tó.xica del LPS de Mannheimía haemo(vtica es similar a otras bacterias gramnegativas. Provoca la reacción de Sc.hwartzman en la piel del ratón. es piretógena para el conejo, letal para el embrión de pollo y activa la vía alterna del complemento . La inyección endovenosa de- LPS a temeros induce la liberación de tromboxano A2. prostaglandinas,_ serotonina, AMPc y GMPc. Estos: mediadores son en parte responsables de los signos clínicos del shock endotóxico, Después de su instilación en las vfas respiratorias, el LPS se fija sobre las membranas c.elulares1 actíva el complemento a nivel de los alvéolos, conduc.e al flujo de nemrófüos, !2 formación de edemas. hemorragias: y atelectasias. ln vitro, el LPS es cítotóxico pare las células endotelfales. ío que podn'.a. explicar las les.íones hemorrágícas, necróticas y la e,:udación de fibrina observadas en ios pulmones de los animales infectados-. Las antiendotoxinas dirigidas contra el LPS de A4annheimia hoemo!yrica no son eficaces para proteger a l.os animaks en una infección exµ1�imentaI . Proteinas y Hpoproteinas de membrana externa de A1.an nheimia haem.o(vrica son aptas. para alterar ia función de íos neutrófilos e inhibir la fagocitosis. Las leucotoxínas son proteínas que están relacionada.,; con la patogenie-ídad de esta,:; bacterias y fonnan poros en las men.1branas celulares. La leucotoxina de Mannheimi{] haemolyúca es S.ttscepti. ble de. fijarse, de manera no especifica. sobre la membrana de los glóbu l<)s rojos y ejercer una acclón hemolítica moderada . Las enzimas extr<acelu lares acüvan la.-;. plaquetas. facilitan la col.oni.zación de los alveolos pulmonares y di sm. inuyen ia resistencia a los mecani.smos de defensa. La neuraminidasa es producida por tod.as la-; cepas y faciiita la colonización de las mucosas, constituyendo pan.e de los factores patogénicos de la mayoria de las cepas virulentas de Afannheim íc.; haemofvtica. DIAGNOSTICO Se realiza sobre la ba.se de la anamnesis de la población afectada, los signos y síntomas clínicos . y el aislamiento y 12: identificación de AI. haemo�vtica según car.acterísücas culturales. bioqu í1nicas y scrológicas. La.,;; muestras obienidas de las lesione.s se cultivan en medios ricos como agar Columbia. o agar triptosa enriquecido con 5°/o de sangre de bovino o ternero , o l 0% de suero equino. Se incuban en atmósfera normal o con un adicional del 5% de CO�. Después de 24 horas de incubac¡on. las colonias son drculares: de un tamaño de l a 2 mm. E1 diagnóstico ulterior se orienta a las características morfológic.as, al tipo respira.torio, a la presencia de la ox idasa, l.a reducción de nitratos y la acidifica ción de la glucosa, y a otras pruebas basadas en otros caracteres bioq_uími.cos. sumados a la serotipificación. La <letemlinación de serovar puede ser útil para estudios epidemiológicos. La prueba de hcmaglutinac.íón pasiva y la de coaglutinación resultan de las pruebas prácticas en uso actual para la determinac ión de las serova.res prevale-mes. TRATAMIENTO Los. animales pueden ser tratados con antibióticos de uso convencional, pero lo conveniente es realizar pruebas de la sensibilidad a los antibióticos y quimioteráplcos para instalar e[ tratamiento adecuado. Se conoce la aparición de. cepas resistentes a los tratamientos realizados con sulfas, penicilinas y tctraciclina� en bovinos, y, en menor proporción, en ovinos. PROFILAXIS Los cuidados sanita..'1os estrictos disminuyen las posibilidadtf: de enfennedad de los animales susceptibles. La ionmnizaclón con las setovariedades prevalentes puede proteger a la mayor ía de. lo�· an imales. Se- han desarrol lado inmunógenos basados en antígenos capsulares, proteína principal de membrana. lipop-roteín2-.:; de membrana externa, leucowxinas, prote ína A y proteína B, que podrían tener un pape( protector. Riemerella anatipestifer (Pasteurella anatipestifer) TAXONOMIA Y HABITAT Ri.emere/la anatipest[fér es un microorganismo ubica.do taxonó inica1m::n1e como un nuevo génern dentro de ia familía Pasteurel.ia ceae. Es una bacteria distribuida ex.tensarnent.e en e! mundo, se ta ha_ aislado de animales domé:sti.co-s y salvajes. Es agente causal de las s.erosiris y septicemia. aguda o crónica en patos y pavos. Afecta a los animales durante los primeros dias de vi.da, ingresando a tra�s de las vias respirarorias altas o por picotazos en !a piel y e-venmalmente por picaduras de mosquitos. También se ha reportado su presencia. patógena en otras aves, c-0n:10 faisán .. cordomiz, perdiz, y ha sido reproducida experimentalmente en pollos. Asimismo se ha aislado de pulmón en ne.umonía exudatiya de cerdos. SIGNOS CLIN!COS La infección se presenta en animales j óvenes,. con morbilidad y monalidad altas. Cuando el microorganismo ejerce acc.ión patógena en los animales susceptibles, se presenta con escasos si.n tomas : descarga nasal y ocular, anorexia, incoordinadón motriz, temblores, debilitamiento, postración, artritis, tos. estor nudos, disnea, diarrea, c-oma y muerte. Las lesiones más frecuentes son inflamación mU$cular del. intestino, hígado. bazo, artritis, pericarditis fibrinosa, aerosacu litis, sinovitis y meningitis fibrinosa. FUENTE DE MUESTREO La toma preferencia. ! de muestras, en los casos agudos, es partir de los exudados de- las vías respiratorias. Otras fuentes al ternativas son los sacos aéreos. el hígado y la sangre cardiaca. CARACTERJSTICAS CULTURALES No se desarrolla en agar_¡.\.fac Conkey. en citrato de Simmons� en agar cetrimidc. ni en caldo con KCN, Crece bíe:n en medios enriquecidos., como a.gar suero, agar sangre y agar chocolate. La 1empcratura óptima de crecimiento es 37 ºC: puede crecer a 45 <ic en annó¡:;fera microaerofiiica_ enriquecida con CO�, se facilita el ere-cimiento, y en el término de 24 horas se obsen-an colonias pequeñas de l a 1 ,5 mm de diáme.tro, lisas, convexas, bri llantes y transparentes. En los cultivos viejos las colonias son grandes y tienen aspecto mucoide. En agar sangre las colonias no son he molíticas ni pigmentadas (a excepc.ión de una cepa de Riemerefla anatipestifer-like que produce un pigmento amarillo). CARACTERJSTICAS MORFOLOGICAS V TINTORIALES Lb bacterfas son gramnegativas, no móviles,. bas tón o bacilo no esporuladú, simple, en pares o cadenas cortas, suelen presen tar coloración bipolar y a veces fomrns de filamentos cortos El tama.fio es de 0.2 a 0.5 por 1 .0 a 2,5 µm. CARACTERJSTICAS BIOQUIMICAS Se diferencia en dos grupos: Riemerella anatispenfer sensu. stricto indol?ge.1rn_c. y Rhzmereila anatipestijér like no indológenas. Los c-arbohidrat.os son escasamente utíl iz..a.dos-. la acidificación deii l,:1 glucosa depende del tiempo de inc.ubación o es negativa. y t¡� de la lactosa es negativa. Licua la gelatina. El ataque a la ureaf'-··:_:· a I i.ndol es variable. No son hemoliricos_ Las- pruebas de oxidas{?t y e-at.alasa son positivas, y la de nitraro-reductasa, neg_a.tiva. nt'f: resultado negativoa !as _pruebas del rojo de metilo, _fenüa!an-ina;:l: desa.minasa. hidrólisis de la. escul.in.a y el cilrato de. Sl!nmons. ·,J.¡ En la tabl,:1 3 7-� . se destacan las prueba,;; bioquímicas ele.menta-/l ·j • .%,;e- , les para la identificación de los gé-nerns Riemerella y Pasteure/ia. �f ; CARACTERISTICAS ANTIGE'.'/ICA.S Y SEROLOGICAS Sobre !a base de !os ;:mtigenos de !.a pared e-dular, se íogran diferenciar 2 1 sernvari.edades, tamhién conoc-idas cmno innmnú rípos. Se utiliza la prueba serológica de inmunoprecipitación por imnunodifüsíón en agar. Se ha detectado que las serovariedades 1 , 2. y 5 �on preva.lentes en el medio ambiente. La determ.inaclón de la serova.r tíene gran importancía epidemiológica y para la elecClón de inrno.nógenos para !a inmunoprofi la:ds. DIAGNOSTICO El diagnóstico se basa-en los signos, sin tornas dínícos y lesiones de los animales enfe1mos, y en e[ aislamiento y la caracterización del agente. causaL Es recomendable et aislamiento en medio agar chocolate o agar sangre-. con incubación a 37 ºC en jarra con o con atmósfera del 5';-'ó de dióxído de carbono. Los aislamientos caracterizados bi.oquímicamente como Riemcn:lla m-w[j.pest{fer de berían ser serotipificados, a fin de disponer de infónnación necesaria para sdecciona,r cepas con fines vacuna.les y epidemiológicos. MF,DIDAS DE CONTROL Y PREVENCION Medidas prácticas de cuidad.os y control soh importantes para la prevención de la infección. La aplicación de rígidas medidas sanitarias y de despoblación es necesaria para la eliminación de la enfermedad. Se m:iliwn bactcrinas comerc iales, al igual Tabla 37-5. Pruebas bioquímicas elementales para l.a identifica ción de los géneros Riemerella y Pasteu.rella Caracteristicas Pigmentación Crr:-eimiento en agar Mac Conkey Crecimiento en aerobiosis (agar sangre a 3 7 ºC) Catalasa lireasa Reducción de nitratos lndol Gdatinasa Hidrólisis de la esculina ONPG Acidificación de glucosa Asimilación del L-mala10 d ""' variable. Riemerel/a anatipestifer t:�ensu stricto) Generalmente + + d d Genera.!mentc. 1- d Pasteurell.a sp � + + d d + :fH que v2ctmas con cepas Y'ivas atenuadas y auwvacunas con los ¡nrnunorípos de R. analipesr!f'er más frecuente en el medio, p-ara el controi y la prevención de. la enfermedad_ In stalada ía enfermedad. se usan de manera combinada antibióticos y q,uimioterápicos como estreptomicina o �uifaqui noxalina. al inicio del tratamienw. Lú conveniente es realizar esnidi0s de sensibilidad a los qui.m i.oterápicos y antibiótlc.o!s para instalar una 1crapéu1ie-a más acertada. Se ha detec.tado R.iemerelia anar.ipes1Uér sensible a rei:raci dinz .. ampicilina. esm .. -ptomicina., neomic.ina. lincomicina y is asociac.ion con trimemprima-sulfame.tüxazol y resi stencia a la pt..--nicihna. fosfomici.n.a. bacitracina y la eritromícina. BIBLIOGRAFIA Pasteurella Carter GR. Studies on P,1siewélo mu!wndt1, !. A hemagglunnation lest fnr the idenúfic.ation of se.rologicai types . 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