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BACTERIAS GRAM POSITIVAS INTRODUCCIÓN: Se aíslan con mucha frecuencia. Una gran variedad de especies patógenas: Cocos (estafilococos y estreptococos). Bacilos: Corinebacterias, listeria, erisipelotris, bacilos, entre otros Anaerobio: clostridiales. Producen infecciones sistémicas o localizadas con efecto sistémico (a distancia del sitio de infección). Muchos de ellos resistente a condiciones ambientales. Ubicamos a las toxinas mas potentes de la naturaleza. Muchas son comensales de los animales. Existen especies zoonoticas. 1 2 GÉNERO STAPHYLOCOCCUS STAPHYLOCOCCUS DEFINICIÓN DEL GRUPO: Cocos Gram positivo. En parejas o grupos. No móviles. No esporulado. Catalasa positivo. Oxidasa negativo. Fermentador de azucares. Varían en tamaño y reactividad al Gram (edad). 3 STAPHYLOCOCCUS UBICACIÓN TAXONÓMICA: Familia Staphylococaceae Géneros: Staphylococcus (mas de 47 especies y varias subespecies). Tienen relación genética con Streptococos, Enterococos, Lactobacilos y el genero Bacillus. 4 CLASIFICACIÓN DEL GRUPO: Se dividen en 2 grandes grupos de acuerdo a la producción de la Enzima Coagulasa: Estafilococos Coagulasa Positivos (ECP): S. aureus ssp. aureus, S. intermedius, S. hyicus, entre otros. Estafilococos Coagulasa Negativos (ECN): S. epidermidis, S. chromogenes, S. simulans, entre otros. 5 STAPHYLOCOCCUS HÁBITAT NATURAL: Distribución mundial. Habita piel y sus glándulas, y en membranas mucosas. Algunos son muy específicos de especie y lugar; Ej. S. capitis en cabellos humanos, y S. auricularis en meato auditivo externo de humanos. Se aíslan de objetos inanimados. Disyuntiva: Flora residente (ECN) y flora de tránsito (ECP) en piel. 6 STAPHYLOCOCCUS MORFOLOGÍA: Cocos esféricos 0,5-1,5 m de Se observan solos, en pares, tétradas, grupos. No poseen sistema de locomoción. No producen esporas. Cepas viejas en cultivo o fagocitadas: Gram negativas. Pueden presentar cápsula de polisacáridos. 7 STAPHYLOCOCCUS ULTRAESTRUCTURA DE LA PARED CELULAR : 8 STAPHYLOCOCCUS Proteína A asociada a pared celular FISIOLOGÍA: Metabolismo Anaerobios facultativos. Catalasa positivos (con excepciones). Metabolismo respiratorio y fermentativo. 9 STAPHYLOCOCCUS CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS: Capaces de fermentar lentamente varios tipos de carbohidratos produciendo ácido láctico pero no gas. La fermentación de los azucares usuales y alcoholes polihídricos es irregular. Para la mayor parte no tiene importancia diferencial. La fermentación de manitol tiene significación diferencial para la mayor parte de las cepas coagulasas positivas (SCP). La mayor parte de los estafilococos tiene la capacidad de coagular el plasma. Por medio de la enzima COAGULASA. Presencia de estafilolisinas, presentes en los estafilococos piógenos que casi invariablemente son hemolíticos. 10 STAPHYLOCOCCUS CARACTERISTICAS DE CULTIVO: Requerimientos variables. Resisten hasta un 10% de NaCl. Temperatura: Rango de 6,5-46 ºC (optima 30-37ºC) PH: 4,2-9,3 (optimo 7,0 – 7,5) Colonias 1-4 mm , lisas, opacas, circulares, convexas bajas Algunas cepas pigmentadas, carotenoides (amarillo – anaranjado). 11 STAPHYLOCOCCUS CARACTERISTICAS DE CULTIVO: Diagnóstico de laboratorio Muestras: Exudados, pus de abscesos, leche mastítica, piel de desecho, orina y tejidos afectados. Microscopía directa: Evidenciar en extendidos de las muestras los cocos gram positivos agrupados en racimos de uvas. Aislamiento: Agar sangre de oveja. Agar MacConkey (detecta bacterias Gram negativas). Crecen eficazmente bajo condiciones aeróbicas en la mayoría de los medios bacteriológicos usuales de extracto de carne y peptona. Lo hacen de manera mas profusa en agar sangre. 12 STAPHYLOCOCCUS CARACTERISTICAS DE CULTIVO: Crecen rápidamente a 37° C. Las colonias en medio sólido son redondeadas, uniformes, sobresalientes y resplandecientes. Pueden formar varios tipos de pigmentos: Staphylococcus aureus presenta un color amarillo oro intenso . S. epidermidis es de color blanco porcelana También pueden observarse coloraciones intermedias. Muchas colonias desarrollan pigmentos solo después de una prolongada incubación a 20 ° C. 13 STAPHYLOCOCCUS Agar sangre: Hemólisis, o la doble hemólisis (caliente-frío). RESISTENCIA: Bacteria no esporulada mas resistente. Semanas en pus seco. Placas de agar sangre: Meses. Algunas cepas son termo resistentes (60º C/1h). 14 STAPHYLOCOCCUS Hemólisis completa causada por -toxinaColonia Hemólisis incompleta causada por α-toxinaAgar sangre 15 ESTRUCTURA ANTIGÉNICA: Ag capsulares (cepas que lo posean). S. aureus: 11 tipos serológicos (hombre y animales). Pared celular: polisacárido Ay B, ácido teicoico (especifico de especie), peptidoglucano y proteína A. Factor de aglutinación. Otros de menor importancia. 16 STAPHYLOCOCCUS 17 STAPHYLOCOCCUS FACTORES DE PATOGENICIDAD: Toxinas Citolíticas: Hemolisinas: Alfa toxina: Proteasa hemolítica (GR, M, plaquetas), dermonecrótica, neurotóxica (vía IV). Responsable de hemólisis en placa de Agar Sangre. Beta toxina: Esfingomielinasa, actúa sobre esfingomielina de membranas. Responsable de hemólisis caliente-frió. Es cofactor de CAMP . Gamma toxina: Proteasa. Delta toxina: Proteasa. 18 STAPHYLOCOCCUS Exotoxinas: Leucocidina: Actúa sobre PMN (desgranulación, edema celular y lisis). Provoca la formación de poros Toxina del Síndrome de Shock Toxico 1 (TSST-1): Produce un choque endotoxico. Se ha aislado en algunas cepas ECN y ECP de origen animal Enterotoxinas: S. aureus 6 tipos (A-B-C1-C2-D-E) son termoestables y responsables de las intoxicaciones alimentarías en humanos. Mantienen la sobrevida intracelular en animales. 19 STAPHYLOCOCCUS Toxina epidermolítica o exfoliatina: producida por algunas cepas. Existen 2: ET-1 y ET-2. Son proteolíticas y disuelven la matriz mucopolisacárida de la epidermis, por lo que se separan las uniones celulares del estrato granulosos. 20 STAPHYLOCOCCUS ENZIMAS: Catalasa: Inhiben H2O2 y radicales libres del sistema de la mieloperoxidasa de los fagocitos. Coagulasa: Inducen la formación de mallas de fibrina alrededor de la bacteria. Tenemos 2 tipos: Factor de agregación o aglutinante: Coagulasa asociada a pared. Coagulasa libre o extracelular. 21 STAPHYLOCOCCUS ENZIMAS: Fibrinolisina: degrada los coágulos de fibrina y permite la diseminación dentro del tejido. Hialunoridasa: Actúa sobre matriz intercelular facilitando la diseminación. Lipasas, esterasas y enzimas modificantes de los ácidos grasos. 22 STAPHYLOCOCCUS ESTRUCTURAS DE LA SUPERFICIE CELULAR: Peptidoglucano: Pirógeno y quimioatractor. Cápsula: Son exopolisácaridos que facilita la adherencia a la célula del hospedador y a dispositivos. Existen 8 tipos por inmunotipificación. Acidos teicoicos: Protege contra opsonización y activa el complemento. Proteína A: Se une a la región Fc de IgG interfiriendo con la opsonización. Es inmunogénica. 23 STAPHYLOCOCCUS INMUNIDAD Y VACUNACIÓN: Inmunidad poco duradera. Vacunas poco efectivas. Bacterinas autógenas: resultados variables. Pioderma canino: Alteración inmunológica. 24 STAPHYLOCOCCUS PREVENCIÓN: Limpieza, higiene y tratamiento aséptico de lesiones controla la diseminación de las infecciones de la piel. Los métodos de purificación de agua coadyuvan al control de la diseminación de esta bacteria. En alimentos hacer un estricto control de la higiene reduce el riesgo de propagación. El contagio a través del aire es mucho más difícil de evitar siendo que los intentos de desinfección química del aire no han tenido éxito. Presentan mucha resistencia a antibióticos comunes. 25 STAPHYLOCOCCUS TRATAMIENTO: Drenaje de lesiones supurativas cerradas es esencial. El rápido desarrollo de resistencia. Incapacidad para actuar en la parte necrótica central de las lesiones. Escrupulosa asepsia.Evita la diseminación a partir de una lesión (ej. forúnculo) a otras áreas en la piel. Realizar pruebas de sensibilidad antimicrobiana. No deben emplearse Eritromicina y Novobiocina en el tratamiento de infecciones crónicas. La penicilina G es el antibiótico de elección. Por el alto porcentaje de cepas resistentes se debe utilizar combinada a otros antibióticos: Cloxacilina, espiramicina, eritromicina, neomicina, gentamicina. 26 STAPHYLOCOCCUS DIAGNOSTICO: Sospecha clínica (abscesos, supuraciones, etc.) Laboratorio: Muestra representativa. Cultivo y aislamiento. Antibiograma. Terapéutica: Depende del antibiótico. Existe mucha resistencia contra beta-lactamicos. 27 STAPHYLOCOCCUS DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO: Prueba de la Catalasa: Se coloca una gota de solución de peróxido de hidrógeno sobre un portaobjetos y sobre esa solución se vierte una pequeña cantidad de las bacterias en crecimiento. La formación de burbujas (liberación de oxígeno) indica una prueba positiva. Prueba de Coagulasa: El plasma citratado de conejo (o humano) se mezcla con un volumen igual de caldo de cultivo o colonias en crecimiento sobre agar y se incuba a 37° C. Se incluye como control un tubo de plasma mezclado con caldo estéril. Si se forma con coágulos en 1 a 4 horas la prueba es positiva. 28 STAPHYLOCOCCUS 29 STAPHYLOCOCCUS DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO: Los Estafilococos Coagulasa Positivo se consideran patogénicos para los humanos, no obstante los estafilococos positivos de los perros (S. intermedius) muy pocas veces causan enfermedades en humanos. Son capaces de crecer en presencia de Cloruro de Sodio al 7.5 %, que inhibe muchas bacterias. Se usan Medios Selectivos que contienen sal junto con manitol, y a veces rojo de fenol como indicador ácido-básico. Ej Manitol Salt Agar. Para aislar estafilococos de muestras muy contaminadas con otras bacterias. 30 STAPHYLOCOCCUS 31 STAPHYLOCOCCUS CULTIVO EN AGAR SANGRE 32 STAPHYLOCOCCUS CULTIVO EN AGAR SANGRE 33 STAPHYLOCOCCUS CULTIVOS SELECTIVOS Demostración de Actividad DNAsa Prueba Coagulasa en Tubo ENFERMEDADES: Especie Hospedador Enfermedad S. aureus Bovinos Mastitis, lesiones supurativas Ovinos Mastitis, piemia por acaros Porcinos Lesiones supurativas Equinos Botriomicosis, artritis, mastitis Caninos Pioderma, dispondilosis, infecciones urinarias Aves Lesiones en piel, artritis S. intermedius Caninos Pioderma, otitis externa, lesiones vairas Equinos Lesiones supurativas Aves Abscesos, artritis S. hyicus Cerdos Epidermitis exudativa ECN: patógenos oportunistas. Actualmente se involucran mucho en producción de mastitis y otras afecciones. Grave en humanos. 34 STAPHYLOCOCCUS
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