Técnicas de PCR

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Técnicas de PCR
César Iván Rodríguez Rivas
Biología Molecular
PCR anidada
DNA
dNTPs
y buffer
Cebador interno
Cebador externo
La PCR anidada se usa para aumentar la especificidad de la amplificación de ADN al reducir la amplificación no específica de ADN. Un ensayo de PCR anidada tiene 2 conjuntos de cebadores (par externo y par interno) para un solo locus y dos PCR sucesivos.
Taq
polimerasa
PCR anidada
5´
5´
3´
3´
5´
5´
3´
3´
5´
3´
3´
5´
PCR inversa-RT PCR
ARN
dNTPs
y buffer
Transcriptasa inversa
Cebador
La PCR de transcripción inversa o RT-PCR, permite el uso de RNA como molde. Un paso adicional permite la detección y amplificación del RNA. El RNA se transcribe de forma inversa en DNA complementario (cDNA) utilizando una transcriptasa inversa. La calidad y pureza del RNA molde es esencial para el éxito de la RT-PCR. 
Taq polimerasa
PCR inversa-RT PCR
5´
3´
cDNA
5´
5´
3´
3´
PCR en tiempo real-qPCR
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real es la capacidad de controlar el progreso de la PCR a medida que ocurre (es decir, en tiempo real). Por lo tanto, los datos se recopilan durante todo el proceso de PCR, en lugar de al final de la PCR. Esto revoluciona completamente la forma en que uno aborda la cuantificación basada en PCR de ADN y ARN.
ADN
dNTPs
y buffer
Sonda fluorogénica
Taq polimerasa
Cebador
PCR en tiempo real-qPCR
5´
5´
3´
3´
F
Q
F
Q
F
Q
PCR multiplex
Es una PCR en la cual se amplifica más de una secuencia en una misma reacción. Emplea dos o más pares de iniciadores en un único tubo de reacción con el fin de amplificar simultáneamente múltiples segmentos de ADN. Consiste en combinar en una única reacción todos los pares de iniciadores de los sistemas que queremos amplificar simultáneamente, junto con el resto de los reactivos de la reacción en cantidades suficientes.
ADN
dNTPs
y buffer
Cebador
Cebador
Taq polimerasa
PCR multiplex
PCR RFLP
Los RFLP son marcadores génicos del ADN y se pueden encontrar en regiones que codifican proteínas o exones, en los intrones o en el ADN que separa un gen de otro. Lo único que se necesita para que puedan ser marcadores genéticos es que sean polimórficos teniendo más de un alelo.
PCR RFLP
¿Qué es un polimorfismo?
PCR RFLP
PCR RFLP
PCR RFLP
¿Alguna duda?
DNA/RNA
ependorf
dNTPs
y buffer
Primer
Ependorf con liq
5´
5´
3´
3´
5´
3´
cDNA