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GÉNERO BRUCELLA HISTORIA ▪ 1884 - Micrococcus melitensis. ▪ 1895 - Bacillus abortus (Benhard Bang). ▪ 1914 - Brucella suis. ▪ 1930 - Enfermedad de Bang. ▪ - Vacuna a partir de B. abortus (cepa 19). ▪ 1934 - Programa cooperativo de Erradicación de Brucelosis. ▪ 1953 - Se identificaron nuevas cepas. CARACTERÍSTICAS ❖ Cocobacilos gramnegativos. ❖ Inmóviles. ❖ No formadores de esporas. ❖ Hábitat intracelular. ❖ Tamaño: 1.2 um de longitud. ❖ Aerobios estrictos. Aunque algunos biotipos pueden ser microaerofílico, precisando una tensión de 10% de CO2 ❖ Su temperatura óptima de crecimiento es 37 ºC. CARACTERÍSTICAS METABÓLICAS B. Melitensis B. Abortus B. Suis Fermentación de: Inocitol - + - Maltosa - - + Manosa - ± + Ramnosa - + - Trealosa - - + Inhibidas por: Tionina 1:8000 - + - Fucsina básica 1:2000 - - + Cristal violeta 1:4000 - - + Pironina 1:8000 - - + Requerimiento de CO2 - + ( a) - Producción de SH2 ± + + + Hidrólisis de la Urea Lenta Lenta Rápida ❖ Son catalasa positivas. ❖ Reducen los nitratos a nitritos. ❖ Algunas producen SH2( B. abortus, B suis, B neotomae.) ❖ Utilizan diversos sustratos hidrocarbonados y aminoácidos a través de una metabolismo oxidativo. ❖ No fermenta hidratos de carbono. TAXONOMÍA DOMINIO: Bacteria FILO: Proteobacteria CLASE: Proteobacteria alfa ORDEN: Rhizobiales FAMILIA: Brucellaceae GÉNERO: Brucella ESPECIE: B. abortus B. canis B. melitensis B. neotomae B. ovis B. suis B. pinnipediae B. cetaceae B. microti B. inopinata ESTRUCTURA ANTIGÉNICA ❖ Contiene un LPS en su pared celular, que forma parte de la endotoxina bacteriana. ❖ El en LPS se distinguen 2 factores antigénicos denominados A y M. ❖ La estructura del LPS de cepas rugosas (R-LPS), es básicamente similar al S-LPS, excepto por la cadena O. PATOGENIA ❖ La Brucella no produce ninguna exotoxina detectable y su endotoxina es menos tóxica que las de otros bacilos gramnegativos. ❖Vías de contagio frecuentes: TUBO DIGESTIVO MUCOSAS LA PIEL ❖Cada especie de Brucella tiene un hospedador preferido, incluidos los seres humanos. ❖ Las brucelas que infectan a ser humano tienen diferencias notables en la patogenicidad. B. abortus B. canis B. suis B. melitensis Produce infección leve sin complicaciones purulentas. Produce enfermedad leve. Produce infección crónica con lesiones purulentas. Infección más aguda y grave MANIFESTACIONES CLÍNICAS SÍNTOMAS INICIALES ❖ Malestar general. ❖ Escalofríos. ❖ Sudoración y fatiga. ❖ Debilidad y mialgias. ❖ Fiebre intermitente (fiebre ondulante). ENFERMEDAD AVANZADA ❖ Síntomas digestivos. ❖ Lesiones osteoliticas. ❖ Manifestaciones cutáneas, neurológicas , cardiovasculares. DIAGNÓSTICO RECOJO DE MUESTRAS MICROSCOPÍA IDENTIFICACIÓN SEROLOGÍA MEDIOS DE CULTIVO PARA BRUCELLA MEDIOS BASALES El aislamiento y cultivo directo de Brucella se realiza normalmente en medio sólido. En general, éste representa el método más satisfactorio porque permite el desarrollo de colonias aisladas fácilmente reconocibles. Agar suero-dextrosa (SDA) Agar tripcasa (o triptona)-soja (TSA) Agar glicerol-dextrosa Medio de Castañeda MEDIOS SELECTIVOS Todos los medios basales indicados antes se pueden emplear para la preparación de medios selectivos. Se añaden antibióticos apropiados para evitar el crecimiento de organismos distintos a Brucella. El medio selectivo más difundido es el de Farrell. Se añaden las siguientes cantidades por 1 litro de medio: SULFATO DE POLIMIXINA B (5.000 unidades = 5 mg) BACITRACINA (25.000 UNIDADES = 25 MG) NATAMICINA (50 mg) ÁCIDO NALIDÍXICO (5 MG) NISTATINA (100.000 unidades) VANCOMICINA (20 mg). AGAR BRUCELA Medio recomendado para el aislamiento y cultivo de Brucella spp. Con la adición de sangre, el medio se usa para el aislamiento y cultivo de Brucella spp. y de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes, a partir de una gran variedad de muestras clínicas. Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones Tripteína 10.0 Suspender 43 g del polvo en 1 litro de agua destilada. Mezclar vigorosamente, calentar con agitación frecuente y hervir durante 1 minuto para disolver el polvo. Esterilizar por autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Nota: si se quiere suplementar con sangre, agregarla asépticamente, al medio de cultivo estéril, fundido y enfriado a 45-50 ºC. Peptona de carne 10.0 Glucosa 1.0 Extracto de levadura 2.0 Cloruro de sodio 5.0 Bisulfito de sodio 0.1 Agar 15 pH final: 7.0 ± 0.2 B. suis: crecimiento en medio selectivo de Farrell. Detalle ampliado de las colonias de Brucella melitensis, en agar sangre. CARACTERÍSTICAS DEL CULTIVO ❖ Las colonias pueden ser traslúcidas o de color miel presentan un aspecto opaco, granular y pegajoso. ❖ Periodo de incubación de 2 – 5 días. ❖ Cultivo agar de tripticasa-soya o sangre. FORMA LISA FORMA RUGOSA Lisa (S) Translucida, Homogénea Virulenta Rugosa (R) (B. Canis y B. ovis) Opaca, granulares o pegajosas No virulenta La suspensión celular se tiñe con el colorante Rosa de Bengala y se estandariza a una concentración celular del 9 -10% . PRUEBA DE ROSA BENGALA PRUEBA DE AGLUTINACIÓN PRUEBA DE 2 - MERCAPTOETANOL BLOQUEO DE ANTICUERPOS PRUEBA DE INMUNOENSAYO ENZIMÁTICO (ELISA) TRATAMIENTO Las tetraciclinas, con doxociclina como fármaco de elección, suelen disponer de actividad frente a la mayoría de las cepas de Brucella. DOXOCICLINA RIFAMPICINA EPIDEMIOLOGÍA Las infecciones por Brucella tienen una distribución universal y la enfermedad endémica es más frecuente en Latinoamérica, África, la cuenca mediterránea, Oriente Medio y Asia occidental. Cada año se describen más de 500.000 casos. PREVENCIÓN ❖ Eliminación de la infección de los reservorios animales. ❖ Parte de la población se protege al exigir la pasteurización de la leche. ❖ La prevención en grupos ocupacionales, se basa principalmente en educación y uso de ropa protectora. ❖ Las vacunas usadas hasta ahora en humanos tienen eficacia limitada y en el caso de las vacunas vivas, se asociaron con potencial reactogenicidad. Diapositiva 1 Diapositiva 2 Diapositiva 3 Diapositiva 4: CARACTERÍSTICAS METABÓLICAS Diapositiva 5 Diapositiva 6 Diapositiva 7 Diapositiva 8 Diapositiva 9 Diapositiva 10 Diapositiva 11 Diapositiva 12 Diapositiva 13 Diapositiva 14 Diapositiva 15 Diapositiva 16 Diapositiva 17 Diapositiva 18 Diapositiva 19 Diapositiva 20 Diapositiva 21 Diapositiva 22 Diapositiva 23 Diapositiva 24 Diapositiva 25 Diapositiva 26 Diapositiva 27 Diapositiva 28
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