Biologia de los microorganismos (359)

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262 G E N Ó M I C A , G E N É T I C A Y V I R O L O G Í A
infecta células que crecen sobre una superficie plana, se forma 
una zona de lisis que se denomina calva (o placa de lisis) y apa-
rece como una zona más clara en el césped de células hospe-
dadoras. Con los bacteriófagos, las calvas se pueden obtener 
mezclando viriones en un volumen pequeño de agar fundido 
que contenga las bacterias hospedadoras y que se ha extendido 
sobre la superficie de un medio de agar (Figura 8.8a). Durante la 
incubación del cultivo, las bacterias crecen y forman una capa 
turbia (césped) que se puede ver a simple vista. No obstante, 
la célula hospedadora en concreto y puede ir de unos pocos a 
varios miles. La duración del ciclo completo de replicación tam-
bién varía, de entre 20 y 60 minutos (en muchos virus bacteria-
nos) a entre 8 y 40 horas (en la mayoría de los virus de animales). 
En las Secciones de la 8.5 a la 8.7 usaremos un ejemplo espe-
cífico para repasar estas etapas del ciclo de replicación vírica y 
examinaremos cada una en más detalle.
MINIRREVISIÓN
 ¿Qué es lo que se empaqueta en las cápsidas durante la 
maduración?
 Explique el término «tamaño de la explosión».
 ¿Por qué el período de latencia se denomina así?
8.4 Cultivo, detección y recuento 
de virus
Es necesario cultivar las células hospedadoras para poder repli-
car los virus en ellas. Se utilizan cultivos puros de bacterias hos-
pedadoras crecidas en medios líquidos o como un césped sobre 
la superficie de placas de agar y se inoculan con una suspen-
sión vírica. Los virus de animales se pueden cultivar en cultivos 
celulares que son células tomadas inicialmente de un órgano 
de un animal y cultivadas en recipientes estériles de plásticos o 
de vidrio que contengan un medio de cultivo apropiado (véase 
la Figura 8.9). Los medios para los cultivos tisulares suelen ser 
muy complejos, ya que contienen una gran variedad de nutrien-
tes como suero sanguíneo o agentes antimicrobianos para pre-
venir la contaminación por bacterias.
Detección y recuento de virus: el ensayo de calvas
Una suspensión vírica puede ser cuantificada determinando 
la cantidad de viriones infecciosos por volumen de fluído, una 
cantidad llamada título (o concentración). Esto se realiza nor-
malmente haciendo un ensayo de calvas. Cuando un virus 
Enzimas 
tempranas
Ácido 
nucleico
Cubierta de 
proteínas
Ensamblado 
y liberación
Tiempo
R
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)
Adición 
de virus
Eclipse Maduración
Período de latencia
Figura 8.7 Curva de una sola etapa de la replicación vírica. Después
de la adsorción, los viriones infecciosos no pueden ser detectados en el medio 
de crecimiento, un fenómeno llamado eclipse. Durante el período de latencia, 
que incluye el eclipse y las primeras fases de maduración, el ácido nucleico se 
replica y se realiza la síntesis de proteínas. Durante el período de maduración, 
el ácido nucleico y las proteínas se ensamblan para formar viriones maduros 
que finalmente son liberados.
(b)
J
a
c
k
 P
a
rk
e
r
Calvas
1. Se vierte la mezcla de
células y fagos sobre
placas con agar
nutritivo solidificado.
Placa de agar con 
nutrientes
«Sándwich» de agar 
blando y agar nutritivo
Césped 
de células 
hospedadoras
Calvas de fago
(a)
Mezcla de agar
de superficie
(blando) fundido,
células bacterianas
y suspensión del
fago diluido
2. Se deja solidificar
la mezcla.
3. La incubación permite
que las células se
multipliquen y los
fagos se repliquen.
Figura 8.8 Recuento de virus bacterianos por ensayo de calvas. (a) Se
mezcla una dilución de una suspensión que contiene el virus con una pequeña 
cantidad de agar fundido y la bacteria hospedadora sensible y se vierte en 
la superficie de una placa que ya contiene una capa de agar. Las células 
hospedadoras se lisan y forman calvas en el césped. (b) Calvas (de 1 a 2 mm 
de diámetro) formadas por el bacteriófago T4.
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