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Bacterias Son procariontes (no tienen membrana nuclear ), unicelulares, heterótrofas. Para observarlas se utiliza lente objetivo de 100x con aceite de inmersión. El cromosoma, compuesto por ADN, está enrollado, en algunos casos puede haber más de uno por célula. Pueden también presentar plásmidos (entidades genómicas extra- cromosómicas) que codifican factores de virulencia o factores de control biológico, esto es, sustancias químicas eficaces contra bacterias u hongos patógenos. Bacterias estilos de vida Las bacterias combinan dos estilos de vida, uno en el que se encuentran libres, y otro en el que se asocian en una matriz de producción propia, que se une a superficies bióticas (filosfera, rizosfera) o abióticas. Estas comunidades reciben el nombre biopelículas o biofilms. Poseen mecanismos de comunicación entre individuos que les permiten modificar su comportamiento según la densidad de población y el hábitat en el que se encuentren. Este proceso, conocido como quorum sensing (percepción de quórum) está involucrado en la formación de las biopelículas, pudiendo determinar además la oportunidad de expresión de algunos genes, por ejemplo para producción de antibióticos. Este mecanismo les permite resistir mejor las condiciones ambientales adversas( sol, viento, etc.), las respuestas de defensa del huésped, competir con otros microorganismos, etc. Bacterias fitopatógenas Las bacterias fitopatógenas: - pueden tener diferentes formas: bacilos, miceloides, pleomórficas -Muchas de ellas poseen movilidad por la presencia de flagelos. - Algunas presentan pared celular y otras no -Respecto a otras bacterias son pequeñas. Generalmente no miden más de 2 u de largo. -No forman endosporas Célula bacteriana http://www.pv.fagro.edu.uy/ Tinción de gram Permite observar a las bacterias e inferir la constitución de su pared celular Pasos: -fijar la muestra en un frotis -Teñir con violeta de genciana -Aplicar fijador -Lavar -Poner tinción de safranina como contrastante Las bacterias con una capa gruesa de peptidoglicano en su pared retienen el colorante violeta. Se leen como G+ Las que tienen una capa fina de peptidoglicano no retienen el violeta y se tiñen de rosado con la safranina. Se leen como G- Tinción de Gram según constitución de la pared https://www.kapitalinteligente.es/tincion-de- gram/#:~:text=El%20cristal%20violeta%20se%20une,las%20Gram%20negativas%20con%2 0safranina. Tinción de Gram https://www.salud.mapfre.es/pruebas-diagnosticas/otras-pruebas-diagnosticas/ tincion-de-gram/ Bacterias fitopatógenas clasificación Ver en teóricos -- Con pared celular -Gram negativas: Proteobacterias -Gram positivas: Actinobacterias (antes actinomycetes) -- Sin pared celular Tenericutes o mollicutes: -Pleomórficas: Fitoplasmas -Espiraladas: Spiroplasmas Colonias bacterianas distintos tipos- Refugia Pérez Sánchez Colonia típica proteobacterias Del latin aktino: “sol” o “en disposición radiada Colonias de actinobacterias https://es.dreamstime.com/ Bacterias Patogénesis La mayoría de las proteo y actinobacterias pueden vivir en forma epífita sobre las plantas antes de la penetración, multiplicándose y conformando biopelículas , sobreviviendo de esa manera en la superficie del tejido del hospedante. Cuándo se dan las condiciones predisponentes, penetran y pasan a vivir en forma endófita, provocando enfermedad. El inóculo lo constituye directamente las células bacterianas, pero , los procesos asociados a la patogénesis en bacterias no dependen de una única célula frente a su huésped, sino que se desarrollan en un contexto poblacional del patógeno, requiriéndose poblaciones de 106 CFU (unidades formadoras de colonias/ml) o más para que puedan iniciar enfermedades o para que funcionen como agentes de control biológico. Los tenericutes presentan transmisión por vectores, generalmente chicharritas, y sobrevivencia en plantas cultivadas o malezas por lo que su patogénesis se asemeja en gran medida a la de las virosis Patogénesis Pseudomonas savastanoi- tuberculosis del olivo Síntomas Y Signos Para síntomas podemos utilizar la misma clasificación que vimos para hongos: Necrosis extensivas: Podredumbres, Tizones Necrosis localizadas: Manchas, cancros y necrosis vasculares Hipertrofia e hiperplasia: agallas En bacterias que invaden vasos , además de la necrosis en vasos encontramos síntomas secundarios derivados al menos en parte de la disfunción de los vasos : marchitez, amarillamiento, enrojecimiento, etc Signos: zoogleas; flujo desde vasos -Los tenericutes, que invaden floema, presentan síntomas muy característicos Principales síntomas de enfermedades causadas por proteo y actino-bacterias (Erwinia actualmente dividido : Erwinia, Pectobacterium y otros) Tomado de Agrios 2005. MANCHAS PRODUCIDAS POR BACTERIAS Tizón en violeta de los Alpes Podredumbre blanda en lechuga Tizón del peral Manchas con halo en soja Podredumbre negra de las crucíferas manchas en V Necrosis en médula Repollo Necrosis en corona Lechuga Zoogleas: Xanthomonas spArroz https://innspubnet.wordpress.com/tag/bacterial-leaf-blight/ Mucílagos en invasión vascular https://www.apsnet.org/edcenter/disandpath Detección y diagnóstico El diagnóstico en enfermedades producidas por bacterias requiere, como en otros patógenos, el aislamiento del causal y comprobar luego la patogenicidad Para la identificación en las proteo y actino- bacterias se deben estudiar la morfología de la célula bacteriana y de la colonia y además determinar algunas características fisiológicas y bioquímicas. En el caso de los tenericutes el trabajo se asemeja al que se realiza con virus: la observación en microscopio electrónico de cortes ultrafinos permite la detección en tejidos enfermos de estos patógenos y observar la citopatología que provocan. También es importante conocer los vectores y algunas propiedades químicas En ambos casos para la identificación se puede recurrir a pruebas serológicas y técnicas moleculares Diagnóstico: Aislamiento La mayoría de las bacterias fitopatógenas son posibles de cultivar in vitro, aunque en algunas esto resulta muy difícil ( fastidiosas) y a otras no se las ha logrado cultivar. En bacterias dada la alta posibilidad de contaminación con saprófitas debemos asegurarnos que las colonias que obtengamos al aislar, provengan de la multiplicación de una sola célula bacteriana (colonias puntuales) Para lograr esto se toma una gota de una suspensión de células bacterianas que se distribuye en una caja de Petri estriando con un anza bacteriológica. Para obtener la suspensión bacteriana se toma un trozo de la zona de avance, se lo corta en pequeños trocitos o se lo desarma (dilacerado) en un vaso con agua o solución estéril. En algunos casos es mejor utilizar pinchazos (punciones) con aguja estéril en el material enfermo para extraer las células bacterianas Una vez obtenidas las colonias puntuales se las analiza para ver si tienen las características propias de las bacterias fitopatógenas y se repican para lograr cultivos puros y continuar luego con otras estudios. Aislamiento estriado. Colonias puntuales Con AISLAMIENTO Con o sin AISLAMIENTO Palacio Bielsa Zaragoza 2019 Caracterización de aislamientos •Características de la colonia: forma, color, bordes, relieve etc •Características de la célula bacteriana: GRAM, flagelos forma, tamaño... •Estudios bioquímicos y fisiológicos : aerobios/ anaerobios, utilización de sustancias y acidificación o alcalinización del medio etc. •Técnicas serológicas: ELISA, Inmunofluorecencia •Técnicas moleculares: PCR etc Características de las colonias Célula bacteriana Universidad Continental 2017 InteriorExterior Clasificación Reacción de hipersensibilidad Consiste en introducir en el mesófilo de una hoja de un no hospedante, una suspensión de la bacteria en estudio.Generalmente se utilizan hojas de tabaco o de Mirabilis sp. Cuando la planta reconoce como patógena a la bacteria, reacciona rápidamente (24/48 hs) necrosando las células alrededor de la zona donde se introdujo la suspensión, para bloquear un posible avance , dando lugar una lesión necrótica acuosa localizada. No todas las especies de bacterias se adaptan a esta prueba; Agrobacterium y Pectobacterium no la provocan. Esta es una reacción de resistencia y nos permite saber si el aislamiento corresponde o no a una bacteria fitopatógena y descartar los negativos. Reacción de hipersensibilidad en tabaco Proteobacterias Bacterias clásicas Gram negativas Forma de bacilos Provistas de flagelos, por lo tanto móviles Colonias de colores claros: crema, amarillentas Algunas utilizadas en control biológico o en procesos industriales Ver estas enfermedades en guía de T Pcos Xanthomonas Pseudomonas Colonias de los 2 géneros más importantes de proteobacterias Agalla de corona: Agrobacterium tumefaciens https://www.portalfruticola.com/ BACTERIOSIS DEL SORGO 1-ESTRÍA ROJA (Burkholderia andropogonis syn. Pseudomonas andropogonis) 2-ESTRÍA BACTERIANA (Xanthomonas vesicatoria pv. holcicola syn. X. holcicola) 3-MANCHA BACTERIANA (Pseudomonas syringae pv. Syringae) Estría Roja Estría Bacteriana Mancha Bacteriana Sorgo Maíz Podredumbre blanda de las hortalizas Pectobacterium caratovorum Cancrosis de los cítricos- Xanthomonas citri Sarna común de la papa Streptomyces scabies (Actinoacteria) Nivel 1: Reticulado Nivel 2: Sarna Media Nivel 3: Sarna Profunda Streptomices scabies Sarna común de la papa https://projects.ncsu.edu/ Streptomyces ipomoeaME https://projects.ncsu.edu/ Bacterias vasculares Ejemplos: En Xilema: Ralstonia sp: marchitez bacteriana Xilella sp varias enfermedades En floema Candidatus liberibacter: HLB Fitoplasmas Spiroplasmas Tenericutes- Síntomas --Necrosis de floema --Amarillamiento, superbrotación, distorsiones --Acortamiento de entrenudos que da lugar a rosetas, achaparramiento y escobas de brujas --Filodia: los órganos florales se transforman en hojas --Virescencia, los pétalos toman color verde -- frutos pequeños y deformes Síntomas en Vinca Síntomas rama negra, duraznero y vinca http://aafitopatologos.com.ar/wp/wp-content/uploads/2020/12/Boletin-N-7-AAF.pdf Síntomas en frutilla http://aafitopatologos.com.ar/wp/wp-content/uploads/2020/12/Boletin-N-7-AAF.pdf Rama negra superbrotación. Escoba de bruja
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