T23, T24 y T25_ SEÑALIZACIÓN_

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SEÑALIZACIÓN 
Señalización: En respuesta a uno o varios estímulos externos la célula activa mecanismos que van a generar acciones específicas. 
Todas las células están expuestas a muchos estímulos constantemente. Como consecuencia de este estímulo que impacta con un receptor de la célula se van a activar un montón de complejos mecanismos conocidos como señalización intracelular que van a terminar en la transcripción génica o en la activación de un proceso celular para dar una respuesta al estímulo. Las respuestas son específicas para el estímulo. 
¿Cómo sabe la célula qué hacer, cuándo y cómo? 
Vamos a ver: 
· Generalidades: Elementos de la señalización 
· Receptores acoplados a Proteína G (GPCR) 
 - Receptores acoplados a Enzimas
 - Vías que involucran degradación de proteínas
GENERALIDADES: ELEMENTOS DE LA SEÑALIZACIÓN
los elementos de la señalización son: 
· Proteínas receptoras o en la superficie celular o en el citoplasma 
· Molécula que se una a la proteína receptora. Se la denomina MOLÉCULA LIGANDO 
· Moléculas de señalización 
· Proteínas efectoras: aquellas que generan la respuesta celular (factor de transcripción, enzima,etc)
· Proteína que finaliza el evento de señalización
Tipos de señalización que se conocen: Como se comunica una célula con otra. 
Señalización endocrina: se produce cuando viaja por sangre la molécula señal a una larga distancia en el organismo. 
Señalización paracrina: Se produce cuando la célula señalizadora produce la molécula y está impacta sobre la célula que está al lado 
Señalización autocrina: La señalización que genera una célula impacta sobre ella misma 
Señalización neuronal: El cuerpo neuronal produce la molécula señal que viaja sobre el axón e impacta sobre el receptor de la célula vecina.
Señalización dependiente de contacto: La célula que tiene el receptor para la señal recibe la interacción con la célula vecina a través de una proteína anclada a la membrana. 
La señalización sináptica se puede considerar como señalización endocrina, pero la sináptica es más rápida y eficiente que la endocrina y la concentración que llega a actuar en el receptor también es mayor. 
Ejemplo de señalización endocrina:
Ante determinados estímulos (ejercicio, estrés) las células del hipotálamo liberan el factor de la hormona de crecimiento y va a impactar sobre un receptor en la hipófisis, que emite la hormona de crecimiento y la libera a circulación que llega a distintos órganos blancos (tejido adiposo, tejido óseo, tejido muscular,hígado, etc)
PREGUNTA: COMO HARIA PARA SABER CUÁLES DE LAS CÉLULAS DEL HIPOTÁLAMO PUEDEN PRODUCIR HORMONAS DE CRECIMIENTO FALTA RESPONDER 
El hígado aumenta la producción de glucosa (gluconeogénesis), además el hígado aumenta la liberación de otro ligando, el factor de crecimiento tipo insulina, que impacta sobre los riñones y sobre el músculo, el músculo entonces aumenta el transporte de glucosa. También aumenta la adipolisis por lo cual el músculo obtiene energía. Con esto aumenta la insulina del páncreas que hace que disminuya la gluconeogénesis y adipolisis y favorece la captación de glucosa
Como la hormona de crecimiento impacta sobre una célula que genera una acción sobre una célula vecina (paracrina) o sobre ella misma (autocrina) o La respuesta no sale de la célula e impacta sobre un blanco dentro de ella 
(intracrina)
Tipos de Proteínas receptoras: 
· En la superficie (proteína de transmembrana): 
1. Canales iónicos operados por ligando 
2. Receptores acoplados a proteína G
3. Proteínas con actividad kinasa
4. Proteínas transmembrana asociadas a una kinasa citosólica
· Dentro de la célula (En el citoplasma): 
1. Receptores nucleares (Activan la transcripción)
2. Enzimas que actúan como proteínas receptora 
Una enzima que es un receptor puede ser para el óxido nítrico (NO). Es una molécula señal, que es un gas. Es sintetizada en respuesta a la señal que es la liberación de neurotransmisores. Se libera la acetilcolina, se une a un receptor, la proteína efectora es una óxido nítrico sintetasa (enzima), que es un gas que se difunde a través de la membrana rápidamente y llega a la célula vecina, en este caso músculo liso, donde es recibido por una enzima guanilato ciclasa que funciona con GTP y libera el GMP cíclico, el cual da la orden de relajación rápida a la célula de al musculatura lisa mediante la desfosforilación de la cadena liviana de miosina, lo cual permite que se relajen. Es un tipo de señalización paracrina. La vía finaliza cuando el GMPc sea degradado a GMP.
LIGANDO HIDROFÓBICO: Tienen el receptor dentro de la célula, ya que van a atravesar la membrana plasmática. Los receptores del citoplasma pertenecen a la superfamilia de receptores nucleares. Todos los receptores de este tipo tienen los mismos dominios: Dominio de unión al ADN, un dominio de unión al ligando y un dominio de activación. 
Hay 3 tipos de receptores nucleares: 
1. Hay algunos receptores que están en el citoplasma, cuando no hay ligando el receptor está unido a una proteína que no lo deja actuar, cuando llega un ligando y se une al receptor, este cambia su conformación, se libera el ligando y el receptor puede translocar al núcleo a la secuencia correspondiente del DNA. Por ejemplo, una hormona esteroide impacta en el receptor del citoplasma, lo que él permite translocar al núcleo y la respuesta será la transcripción de genes que respondan a los estrógenos, andrógenos y glucocorticoides. 
2.Otro tipo de receptor que están en el núcleo , cuando no tienen ligando no están pegados al ADN, y cuando interactúan con el ligando se unen al ADN. Pueden actuar como homodímeros (dos subunidades iguales) o heterodímeros (dos subunidades distintas)
3.Este tipo de receptor también está en el núcleo pero actúa como una sola unidad
Microscopía de fluorescencia: La célula está viva y lo fluorescente es una proteína combinada con una proteína fluorescente verde. Esa fluorescencia se puede ver con un anticuerpo que tiene un fluorocromo o haciendo una proteína de fusión. En este caso se hizo un receptor para betametasona (un antiinflamatorio esteroide) que está en el citoplasma. Una vez que se le agrega el ligando betametasona se ve como empieza a ir al núcleo, ya qué se moviliza el receptor de un lado a otro. . 
Todos los receptores nucleares están el citoplasma y cuando interactúan con el ligando activan la transcripción, se los llama nucleares porque terminan en el núcleo de la célula. Algunos no necesitan traslocar pero los esteroides sí. El óxido nítrico es una excepción. 
La hormona interactúa con el receptor nuclear, que transloca al núcleo y activa la transcripción nuclear. Muchas de las proteínas sintetizadas como respuesta de un receptor que funciona como transcriptor, son a su vez proteínas que actúan como factores de transcripción que pueden activar o reprimir la sintetizan de muchas más proteínas. A eso se llama respuesta tardía. Respuesta temprana es la síntesis de los factores de transcripción. Por ejemplo, la aldosterona (hormona esteroide) es un mineralocorticoide de la corteza supra-adrenal, que ingresa a la célula y su receptor está unido a un inhibidor. La interacción hormona receptor transloca al núcleo, donde se activa la transcripción de genes, por ejemplo, un canal de sodio, la bomba sodio potasio, síntesis de colágeno. Lo que se descubrió recientemente es que las hormonas esteroides pueden actuar tanto dentro como en un receptor asociado la membrana plasmática: se le llama efecto NO genómico de las hormonas esteroideas. No genómico porque da respuesta sobre proteínas en el citoplasma que directamente dan la respuesta celular. Estos efectos a nivel de membrana plasmática son rápidos y no involucran la transcripción que toma más tiempo. Hay otros efectos (como el de la betametasona) que son a largo plazo y tardan en transcribir, actúan a nivel del núcleo. 
LIGANDOS HIDROFÍLICOS: no atraviesan la membrana, tienen el receptor en la superficie, en la membrana, algunos ejemplos de ligandos hidrofilicosson la acetilcolina, adrenalina, serotonina, lisofosfatidilcolina, PGE2 (prostaglandina E), insulina y hormona de crecimiento (GH). Los tipos de receptores con los que pueden interaccionar son los que están en la superficie: 
· Canales iónicos operados por ligando (ya lo vimos en otro teórico)
· Receptores acoplados a proteína G
· Proteínas con actividad kinasa
· Proteínas transmembrana asociadas a una kinasa 
Receptores acoplados a la proteína G: Estos receptores proteína que están en la membrana y la atraviesan 7 veces, tienen su receptor hacia la parte extracelular en el dominio celular e interaccionan con una proteína G (proteína que se activa cuando une GTP y se inactiva cuando se transforma en GDP. Su actividad es la de cambiar la forma y activar otras moléculas) 
Receptores acoplados a enzimas: receptores transmembrana que actúa como dímeros y en su dominio citosólico tienen una actividad quinasa. Hay otros sin actividad de quinasa pero son capaces de acoplar una enzima activa. 
.
Algunas de las moléculas de señalización: proteínas quinasas (fosforila) y fosfatasas (desfosforila). Proteínas quinasas muy conocidas de las vías son la PKA, PKB y MAPK. Proteínas fosfatasas muy conocidas son la PDE, MAPKPs. Hay proteínas que se activan por fosforilación; 
Un dominio proteico es un dominio de una proteína con una conformación determinada por secuencias de aminoácidos. Hay muchísimos dominios proteicos, como el PH que es de homologa con preptina. Un dominio PTP o SH2 tiene conformación espacial que el permite unirse a tirosina fosforilada, lo que hace que se unen y activan una cascada de encajes que esparcen la señalización. Las vías de señalización se caracterizan por tener proteínas con múltiples dominios. Existen proteínas que pueden generar dobles señalizaciones, otras proteínas adaptadoras, proteínas armazón y complejos de señalización. Estos son los componentes de la señalización.
Un dominio raft es rico en colesterol, ácidos grasos saturados con cadenas largas, esfingomielina. La membrana tiene una fluidez menor, la membrana es más ancha espesa. El receptor se encuentra fuera del dominio raft, porque dos proteínas que interactúan con él le inhiben. Dentro del raft, tengo proteínas quinasas. Cuando aparece el ligando, que es un antígeno en este ejemplo, va a interactuar con la proteína receptora, que cambia su conformación, se desinhibe y va a ingresar al dominio raft. Esas proteínas quinasas van a fosforilar y activar toda la vía de señalización qué va a terminar dando todo lo qué la célula necesite. . 
Las proteínas interruptoras que importan son la calmodulina, que tiene 4 motivos que unen calcio. En presencia de aumento de calcio, la calmodulina cambia su forma y se activa la calmodulina quinasa (no ocurre si no hay calcio). Otra gran proteína interruptora son las proteínas G, con GTP unida está activa, con GDP inactiva. Hay dos tipos de proteínas G: triméricas (tres subunidades: alfa, beta y gamma) y monoméricas. 
SEÑALIZACIÓN 2:
Diversas respuesta celulares: dependen del estímulo. Pueden ser de dos tipos (rapida y no necesita activación de la transcripción, o lenta y con activación de la transcripción) 
La velocidad y la magnitud de la respuesta dependen del número de moléculas señal, del número de moléculas receptoras, del número de moléculas de señalización y del número de moléculas efectoras. 
Un mismo ligando puede impactar sobre distintos tipos de receptores, en base al receptor se activan distintas moléculas de receptor y se dan distintas respuestas de señalización.
EJ: ligando acetil colina da distintas respuestas dependiendo del tipo de receptor.
Cómo finaliza la respuesta: Tiene que finalizar sí o sí para que no sea perjudicial para la célula. Puede finalizar disminuyendo la actividad de ligando, disminuyendo la actividad del receptor, disminuyendo el número de moléculas de señalización o disminuyendo el número de moléculas efectoras. Todos estos casos son finalización de la respuesta por desensibilización del receptor (disminución de la respuesta ante una exposición prolongada al estímulo)
Componentes y etapas: 
· Tipo de señalización: 
· Síntesis y liberación de la molécula señal o ligando 
· Transporte del ligando hasta la célula diana, blanco o target
· Activación del receptor:
· Unión del ligando al receptor
· Vía de señalización:
· Activación de una o más proteínas o moléculas de señalización 
· Activación de una o más proteínas efectoras
· Respuesta celular:
· Cambios específicos en la función, metabolismo o desarrollo celular
· Eliminación de la seña: 
· Fin de la respuesta
RECEPTORES ACOPLADOS A LA PROTEÍNA G (GPCR) 
Superfamilia de receptores acoplados a proteína G (GPCR): En la membrana plasmática, tienen 7 pasos transmembrana, 7 hélices hidrofóbicas.Tiene un dominio extracelular que interactúa con el ligando y un dominio intracelular que interactúa con la proteína G, una proteína trimérica con subunidad alfa, beta y gamma. Se pueden bloquear los receptores beta de estos receptores, inhibiendo la vía. Encontramos receptores para adrenalina. La mayoría de los procesos fisiológicos dependen de la GPCR y la mayoría de los fármacos interactúan con este receptor. Este tipo de receptores se activa cuando el ligando interacciona con el receptor (en la membrana) y la interacción genera un cambio conformacional en el receptor de manera que el dominio citosólico del receptor cambia su conformación tridimensional y expone parte de la proteína (loop) con actividad GEF (factor intercambiador de nucleótidos de guanina) y la otra parte interacciona con la proteína G trimérica (subunidades alfa, beta y gamma) qué está anclada a la membrana por lípidos. Gracias a la actividad de GEF va a favorecer qué se intercambia el GDP (inactiva) por el GTP (Activa) y la subunidad alfa se separa de las subunidades beta y gama y estas subunidades ahora están activas por el cambio conformacional y son capaces de activar otras proteínas. La subunidad alfa activa a una proteína de la membrana (transmembrana o periférica). Cuando finaliza la respuesta la proteína intercambia GTP por GDP y se inactiva devuelta. 
Hay distintos tipos de subunidad alfa con distintas funciones: 
1. activa la adenilato ciclasa (Gs) 
2. Subunidad alfa y qué inactiva la adenilato ciclasa (Gi)
3. Sobre canales de calcio inactivandolos o activando canales de potasio (Go)
4. Activa fosfolipasa C 
VÍA DE ACTIVACIÓN DE LA ADENILATO CICLASA (AC):El ligando se une a la proteína receptora, hay un cambio conformacional y el lado citosólico se une a la proteína G trimérica, permitiendo que esta intercambie GDP por GTP. Se separa la subunidad alfa, quedando activa y esta subunidad alfa es capaz de activar alostericamente a una proteína que es la adenil ciclasa, proteína integral de membrana. A partir de ATP, me da un producto determinado AMP cíclico; es una molécula pequeña, que cuando se produce lo que hace es unirse a una proteína quinasa A (PKA). Esta formada por dos tipos de subunidades: dos catalíticas (asociadas a la actividad de la enzima, fosforilación) y dos subunidades regulatorias. Cuando se produjo el AMPc, éste se une a la subunidad reguladora que se desprende de la catalítica y así se activó esta enzima. Irá a fosforilar proteínas, que participan de una vía metabólica que da la respuesta celular. La proteína PKA puede fosforilar proteínas citosólicas, que me den la respuesta celular: es una respuesta rápida. Pero puede ocurrir que la PKA pueda exponer un dominio de localización nuclear, traslocar al núcleo y fosforilar un factor de transcripción inactivo, un factor de transcripción específico que pasará a estar activo. Eso será una respuesta lenta. El receptor es un GPCR asociado a una unidad G alfa S. Activa la vía de señalización del AMP cíclico, que implica activación de la adenilato ciclasa y proteína quinasa A, dando respuestas nucleares o citosólicas. La degradación del AMPc por una fosfodiesterasa puede ser un inicio de la finalización de la señal; también el hidrolisis del GTP,la eliminación de la molécula ligando. 
Ejemplo en tejido adiposo: El receptor interactúa con la adrenalina, ocurre un cambio conformacional que va a permitir activar la proteína G alfa, activando la adenilato ciclasa, que transforma el ATP en AMPc, que activa la PKA, que fosforila la triglicérido lipasa (degrada triglicéridos), lo que me genera ácidos grasos libres. De repente el organismo detecto que falta glucosa, necesito ácidos grasos y esto ocurre en el tejido adiposo (serán usados para energía). 
Ejemplo del cólera: Uno muere por deshidratación. La bacteria genera una toxina, con varias subunidades. Es una glucoproteína que interactúa con receptores de membrana del enterocito. GM1 es un gangliósido, un glucolípido, que interactuará con la toxina colérica. Se ubican en los lipid rafts, se meten dentro de una vesícula cubierta de gangliolina y se meten por endocitosis, saltean varios procesos, pero atraviesa el complejo de Golgi y el retículo endoplasmático, donde se desensambla. Se une a la subunidad G alfa S que está en la célula, que al ser modificada covalentemente por ADP-ribolisación, lo que genera que siempre esté activa, tenga o no GTP. Esto genera que la adenilato ciclasa esté siempre activa, creando exceso de AMPc y exceso de acción de la PKA, fosforilando extra como por ejemplo el CFTR, un transportador tipo ABC que permite la salida de cloruro. Al cloruro de sodio lo sigue el agua, si queda activado en exceso el CFTR y los canales de sodio, entonces se pierden sales y agua, lo que se traduce en diarrea. 
 La proteína Gq activaba la fosfolipasa C beta (PLC beta). Hay varios tipos de fosfolipasa, pero todos degradan fosfolípidos. Degrada polifosfoinosítidos: PIP2 o PI(4,5)P2. Los degrada en diacilglicerol e inositol 1,4,5-trisfosfato. ¿Cómo se activa la PLC beta? Por un ligando, que se unió a GPCR que tiene afinidad para unirse y activar a una proteína Gq; no activa la vía del AMPc, sino esta. La fosfolipasa C gamma la activa otro tipo de receptor, pero hace lo mismo. Como consecuencia de la producción inositol trifosfato, aumenta el calcio citosólico. El aumento de calcio citosólico más el diacilglicerol genera la activación de la PKC. El inositol trifosfato es un ligando del receptor de calcio del retículo endoplasmático, que será la señal que permita el aumento de calcio citosólico para una contracción muscular, por ejemplo. La fosforilación por la PKC será la respuesta celular. Finalizo con una fosfatasa que saque los fosfatos, entre otras técnicas.
Además de la PKC, el aumento del calcio citosólico genera la activación de la calmodulina, una proteína interruptora que puede unir 4 calcios; al hacerlo, cambio su conformación y la calmodulina activada se une a la calmodulina quinasa que está plegada de forma inactiva hasta que se une la calmodulina activada. Al activarla, va a fosforilar cosas, da una respuesta celular. 
Ejemplo de la acetilcolina en músculo liso: La acetilcolina se une al receptor GPCR, que va a interaccionar con una proteína G trimérica con subunidad alfa Q. Va a hacer que alfa Q intercambie GDP por GTP; va a activar un efector, la fosfolipasa C, que va a degradar los polifosfoinosítidos. Los degrada en diacilglicerol e inositol trifosfato. Este ultimo opera sobre los receptores del retículo endoplásmico, se abre el canal de calcio y se libera al citosol. El diacilglicerol favorece la apertura de canal de calcio del medio extracelular, con toda esa cantidad de calcio intracelular se activa la calmodulina y activa NO calmodulina quinasa, sino la quinasa de la cadena liviana de la miosina, que cuando se fosforila esta cadena liviana de la misiona, genera contracción. El AMPc evitaba esta contracción para tener relajación de los vasos sanguíneos. 
El diacilglicerol actia la PKC, que en este ejemplo va a fosforilar una fosfolipasa A, que va a fosforilar una enzima MAPK. Como consecuencia, se favorece la reproducción celular y síntesis de sustancia eicosanoide que favorece vasoconstricción. La ciclo oxigenasa es una enzima sobre la que actúan drogas para la inflamación. 
¿Cómo se re capta el calcio? Por la bomba de calcio del retículo endoplásmico y la bomba de calcio que está en la membrana plasmática. Gracias a estas bombas, se disminuye la cantidad de calcio intracelular. La organela que más calcio acumula es la mitocondria, ya que no tiene canales para sacarlo, lo almacena todo. 
La onda de calcio ocurre en un ovocito siendo fecundado por un espermatozoide; yo puedo verlo por el fura que es un quelante de calcio fluorescente al unirse a calcio. Hay diferentes colores acorde a la cantidad de calcio y furas fluorescentes. Así se ve como un ovocito sufre una onda literal de color rojo y luego amarillo y verde. 
Cuando se activa por acetilcolina un receptor muscarínico, se va a activar una subunidad alfa I, que inhibe a la adenilato ciclasa y la subunidad beta gamma va a unirse al canal de potasio y permitir la perdida de potasio. Este mecanismo es parte de la contracción muscular.
¿Cómo desensibilizar el receptor GPCR? Hay una GRK que fosforila el dominio citosólico del receptor, lo que hace que no esté más en condiciones de activar la proteína G. PKA y PKC también pueden fosforilar el receptor. Una vez que pasó esto, se une una proteína llamada arrestina, que convoca para la endocitosis la AP2 y la clatrina.
RECEPTORES ACOPLADOS A ENZIMAS. Son receptores de membrana que en su dominio citosólico tiene actividad catalítica o un dominio que se une a una enzima. Tenemos 3 tipos: citocinas citoquinas, tirosina quinasa (RTK) y TGF beta (factor de transformación tumoral)
El receptor RTK está relacionado a factores de crecimiento; las respuestas están relacionadas a proliferación, supervivencia y crecimiento de tamaño celular. 
Todos los receptores tienen 3 dominios: extracelular, transmembrana e intracelular. Tengo un subdominio con actividad tirosina quinasa, que fosforila una tirosina cuando el receptor se active. Entonces, aunque son todos receptores diferentes en el dominio extracelular, son iguales en el intracelular porque todos tienen el dominio tirosina quinasa. Se activa por dos ligandos normalmente; las dos subunidades suelen estar separadas en membrana, y se aproximan al activarse con los ligandos. Interaccionan entre ellas, las subunidades citosólicas se activan (tirosina quinasa), y comienza a fosforilar al otro dominio. A esto se llama trans-autofosforilación. En estas condiciones el receptor está activo. Se le llama activación por proximidad inducida. Cuando el receptor está activo, con todas sus tirosinas fosforiladas, van a estar rodeadas por aminoácidos diferentes. Una tirosina puede tener una prolina al lado o lo que sea. En cada una de las tirosinas fosforiladas van a poder interactuar proteínas señalizadoras diferentes acorde a los aminoácidos vecinos diferentes; esto da especificidad a la vía que se activa luego del receptor. Como consecuencia de la activación del receptor, tengo muchas tirosinas fosforiladas con aminoácidos vecinos diferentes, activando varias vías diferentes: la via MAPK, la vía PLC gamma o la vía PI3K.
 
Activación de la MAPK: Proteína quinasa activada por mitógino 🡪 que induce la mitosis. Cada vez que haya una sustancia mitogénica, va a activar los RTK. Tengo dos subunidades, que unen el factor de crecimiento EGF (factor de crecimiento epidérmico) que se dimeriza y se trans fosforila. Como consecuencia se unen proteínas adaptadoras que es la GRB2 con dominio SH2 que se unen específicamente a fosforilaciones. Esta proteína se va a unir al dominio citosólico cuando este se haya activado y va a interaccionar con la fosfotirosina que le corresponde, cambiando la conformación de GRB2 y entonces los dos dominios SH3 se exponen y pueden interaccionar con la proteína Sos; es una proteína GEF, que va a favorecer el intercambio del GDP por GTP. Esto hace que se active la proteína Ras, que estaba inactiva por tener GDP se vuelve activa. Es muy importante la proteína Ras porque está mutada en la mayoría del cáncer. Al estar mutada estásiempre activa, lo que genera que su respuesta se mantenga. La función de la proteína G y Ras es activar alostericamente a otras proteínas, llamada Raf (MAp quinasa-quinasa-quinasa), fosforila la Mek que fosforila la Erk, conocida como MAP-quinasa, que va a empezar a fosforilar en el citoplasma (respuesta rápida) o proteínas de expresión génica (respuesta lenta). Esas proteínas que regulan la expresión génica van a ser proteínas involucradas en la proliferación es decir división celular. Si está Ras constantemente activa, tengo constantemente reproducción celular. La cantidad de intermediarios habla de una altísima regulación. La MAP quinasa una vez activa va a fosforilar factores de transcripción específicos en el núcleo, como c-fos y c-mys
La vía de la fosfolipasa C gamma tiene un dominio de SH2, que se va a unir a una fosfotirosina. Esta fosfolipasa C gamma se une a la fosfotirosina y se activa, activar toda la vía de la PKC que ya vimos.
La PI3K va a terminar actuando sobre fosfatidilinositol 4 5 difosfato va a ser marcador de la membrana plasmática. Se va a generar fosfatidilinositol 3 4 5 trifosfato cuando sea fosforilado en posición tres por la PI3K. Se activa por un dominio SH2 que una vez que se activa el receptor, activa la PI3K. También puede unirse a otra proteína que es sustrato del receptor de insulina, una proteína adaptadora. Esta es la proteína que se va a unir a una fosfotirosina. Cuando se une por acción de la insulina, va a generar sitios que van a permitir que se unan otras proteínas de señalización. La insulina es un factor de crecimiento que actúa por RTK. 
Receptor para RTK se une a factor de crecimiento, se fosforilan las tirosinas; se une específicamente la PI3K, que va a cambiar su conformación y activarse, fosforilando al fosfatidilinositol 4 5 difosfato y hace fosfatidilinositol 3 4 5 trifosfato. Este ultimo es importante porque es una nueva superficie de reconocimiento para proteínas que tienen dominios PH que son dominios de proteínas que reconocen polifosfoinosítidos. La proteína PDK1 va a fosforilar a la AKT que ya interactúo y la mTOR2 también va a fosforilar la AKT, también llamada PKB. Va a pasar a estar activa. Una vez esta fosforilada en sus dos dominios, va a quedar activada, dejar el fosfatidilinositol 3 4 5 trifosfato y fosforilar cosas en el citosol. Fosforila la proteína Bad, que es un inductor de la apoptosis. Bad se libera de su inhibidora, se fosforila y una chaperona citosólica la inactiva: no produce la apoptosis. Pero a su vez, liberó un inhibidor anterior que se activa al estar sola y sigue inhibiendo la apoptosis. La respuesta final de todo esto es la supervivencia, la célula se mantiene viva.
Para finalizar la acción de la vía, desfosforilo al receptor, inhibo la AKT. La PTEN es una proteína supresora de tumores, que al mutarse está siempre activa y el dominio PH de PDK1 va a mantenerse activo y la célula no va a entrar en apoptosis. Como consecuencia de activación de la PKB, se fosforilan proteínas que inhiben la apoptosis, pero fosforila otras proteínas que estimulan la división celular. Y si fosforila IRS1 y mTOR1 estimula el crecimiento celular. Es super importante que no mute PTEN, porque genera un cáncer muy complicado.
El mTOR es una quinasa, que es capaz de fosforilar a las proteínas para que aumente la síntesis de ribosomas, proteínas. Disminuye la degradación de proteínas, la autofagia. En ausencia de factores de crecimiento, se inhibe la Tsc2 que inhibía la mTOR, lo que generaba que no haya crecimiento celular. Con factor de crecimiento, se inactiva la Tsc2, se activa el completo mTOR y hay crecimiento celular.
Puede ocurrir que la kinasa A pueda exponer un dominio de..., traslocar al núcleo y que el factor de transcripción específico (CREB) y como consecuencia de ello se transcriben genes (RTA LENTA) 
La degradación del AMPc puede ser un inicio de finalización de señal.
CUADRO DE EJEMPLOS DE AMPC
Proteína Gq: Activa a la fosfolipasa C( beta o gamma. La diferencia es el receptor que las activa) que degrada a los polifosfoinositidos fosforilados en 4 y 5. en diacilglicerol y en inositol. El diacilglicerol activa a la proteína quinasa C y el inositol libera Calcio desde el RE (aumenta calcio citosólico). FOTO DIAPO
Una forma de terminar esto sería con una fosfatasa o con una quinasa. 
Cuando aumenta el calcio citosólico puede activarse la calmodulina que degrada calcio. 
min 40 a 70
RTK ACtivos
como se activa la vía de la MAP kinasa (proteína kinasa activada por mitógeno, hay varios tipos): tengo dos subunidades (uno epidérmico \), se van a unir proteínas adaptadoras al dominio citosólico del r excepto cuando este se haya activado y haya expuesto fosfotirosina….. pueden interaccionar con la proteína SPS qué es una proteína GE….
proteína RAS activa lo que hace es activar alostéricamente a otra proteína llamada Raf y está fosforila a la Mek que fosforila a la MAp quinasa qué puede fosforilar proteínas que regulan la expresión génica (presentes en la división celular) y sí RAS está siempre activa entonces siempre hay mitosis y proliferación 
La MAP quinasa puede traslocar el núcleo y fosforilar factores de transcripción qué interacción con el elemento de respuesta sérica, como consecuencia se activa la transcripción de genes de transcripción temprana (c-fos y c-jun) que son proteínas que regulan el ciclo celular. 
RTK activo
· La vía de la fosfolipasa c gamma que termina activando el calcio y la PKC 
· LA PE3K termina actuando sobre los (Min 1:15 hasta el final)
Activación de la vía PI3K: 
SENALIZACION III
RECEPTORES ACOPLADOS A ACTIVIDADES ENZIMÁTICAS: Receptores acoplados a TK citosólicas (receptores para citoquinas): Receptores 	qué en su dominio citosólico una actividad intrínseca de tirosina kinasa. Cuando se activa este receptor se activa una proteína G monomérica y la vía MAP quinasa, pero también se pueden activar otras vías.
La vía MAP quinasa favorece la proliferación, otras vías pueden favorecer la supervivencia o el crecimiento celular. 
Receptores para citoquinas; caso vía JAK-STAT. Son también dímeros, que a diferencia de los RTK en el dominio citosolico no tienen actividad citoquina quinasa, tiene un sitio de unión para una citoquina quinasa citosólica. Entonces cuando se une el ligando específico (citoquina) los receptores dimerizan, cambian su conformación e interactúan con la proteína quinasa citosólica, en este caso la JAK. Entonces, se activa y eso permite que fosforile a la quinasa del dominio de al lado y así sigue: una trans auto fosforilación y van a fosoforilar tirosinas en el dominio citosolico del receptor. A esas tirosinas fosforiladas se va a unir (en la vía clásica) la proteína STAT (signal transducers and activators of transcription) tiene un dominio que reconoce la fosfotirosina e interacciona con ese dominio y la proteína JAK al ver esta interacción la fosforila. Cuando STAT se fosforila, forma un dímero que va a exponer la señal de localización nuclear y se va a traslocar al núcleo: es un factor de transcripción específico y activa la expresión del gen 
Qué ligados operan a través de está via de Receptores para citoquinas? Interdferon, eritropoyetina, trombopoyetina, hormona de crecimiento, etc. 
La vía clásica es la JAK-STAT, pero sí este receptor tiene citosimasas fosforiladas a ese recpetor también se van a poder unir las proteínas qué van a activar Ras y las vías qué se activan la RAS-RAF-Map quinasa ( porque tiene tirosina fosforilafa, permite qué se una todo lo qué ya vimos qué tiene un dominio SH2), vos PLC gamma (porque tiene dominio SH2, activa vía), la vía IRS-PI3K o vos PI3k-AKT. 
Una cosa es la activacion del receptor y otras son las vías qué se activan a partir del receptor
Cómo finaliza la vía?
Finaliza la vía a través de fosfatasas. Se puede desactivar la JAK por la fosfatasa SHP1 (una regulación a tiempos cortos) o se puede bloquear la señal y degradar la proteína inducida por SOCs, se va a ubicuitinizar y así endocitar el receptor (regulación a tiempos largos, sila vía está activa hace mucho tiempo). Hay muchas JAK y STAT, lo que genera respuestas más específicas. Por ejemplo, la hormona de crecimiento sobre el hígado, interacciona con un receptor de citoquinas; activa un JAK que fosforila a STAT1, 3 y 5, que forman homodímeros o heterodímeros. Se unen a elementos de respuesta diferentes en el ADN, estimulan la transcripción de distintos genes. La GH (growth hormone) no hace más que activar la vía JAK-STAT. 
La fosfotirosina puede ser reconocida por otro complejo con SH2, la Shc que es reconocida por SOS (intercambiador de guanina, es un GEF), lo que activa la vía Ras-Raf-MapK que estimula la proliferación celular.
Receptores para citoquinas; caso vía JAK-STAT. Son también dímeros, que a diferencia de los RTK no tienen actividad citoquina quinasa, tiene un sitio de unión para una citoquina quinasa citosólica. Entonces cuando se une el ligando (citoquina) los receptores dimerizan, cambian su conformación e interactúan con la proteína quinasa citosólica. Al hacerlo, se activa y eso permite que fosforile a la quinasa del dominio de al lado y así sigue: una trans auto fosforilación. A esas tirosinas fosforiladas se va a unir (en la vía clásica) la proteína STAT (signal transducers and activators of transcription) tiene un dominio que reconoce la fosfotirosina y la proteína JAK al ver esta interacción la fosforila. Cuando STAT se fosforila, forma un dímero que va a exponer la señal de localización nuclear y se irá al núcleo: es un factor de transcripción específico.
Por los receptores RTK citosólicas se puede activar una vía Ras-Raf-MAPK (porque tiene tirosina fosforilada, permite que se una todo lo que ya vimos que tiene dominio SH2), vía PLC gamma (porque tiene dominio SH2, activa la vía), la vía IRS-PI3K o Vía PI3k-AKT. Una cosa es la activación de un receptor, otra la activación de las vías a partir del receptor.
Finaliza la vía a través de fosfatasas. Se puede desactivar la JAK por la fosfatasa SHP1 (una regulación a tiempos cortos) o se puede bloquear la señal y degradar la proteína inducida por SOCs, se va a ubicuitinizar y así endocitar el receptor (regulación a tiempos largos, si la vía está activa hace mucho tiempo). Hay muchas JAK y STAT, lo que genera respuestas más específicas. Por ejemplo, la hormona de crecimiento sobre el hígado, interacciona con un receptor de citoquinas; activa un JAK que fosforila a STAT1, 3 y 5, que forman homodímeros o heterodímeros. Se unen a elementos de respuesta diferentes en el ADN, estimulan la transcripción de distintos genes. La GH (growth hormone) no hace más que activar la vía JAK-STAT. 
La fosfotirosina puede ser reconocida por otro complejo con SH2, la Shc que es reconocida por SOS (intercambiador de guanina, es un GEF), lo que activa la vía Ras-Raf-MapK que estimula la proliferación celular.
LA ACTIVACIÓN DE UN RECEPTOR NO ES EXCLUSIVO PARA UNA SOLA VÍA. A esto se llama comunicación entre vías de señalización. Cuando una de estas proteínas se descontrola, puede haber mucho daño en la célula porque involucra muchos procesos. 
Le eritropoyetina es sintetizada cuando tenemos una baja en la concentración de oxígeno: lo que hace es impactar sobre receptores para citoquinas, activar todas las vías posibles y favorecer la diferenciación de las células madre eritroides a eritrocitos y glóbulos rojos maduros. Es una hormona/ligando que favorece la producción de glóbulos rojos. No sólo es sintetizada por el riñón, sino también el hígado. Es una glucoproteína que debe ser producida por ADN recombinante (si la quiero vender, yo también la hago naturalmente) en células de mamíferos. Hay gente que se inserta EPO (eritropoyetina) ya que hace vasodilatación, más glóbulos rojos, se oxigena más la sangre y por eso se puede generar más masa muscular y más tonicidad. La producción de eritropoyetina es impulsada por andrógenos y la hormona de crecimiento. De forma terapéutica se le aplica eritropoyetina a las personas con insuficiencia renal, porque en el riñón está la mayoría de la producción de EPO. Una persona en diálisis casi siempre está anémica: porque el riñón no funciona y porque el proceso de diálisis destruye los glóbulos rojos. 
El otro receptor asociado a enzimas es el factor de crecimiento tumoral beta; en general, pertenece a una superfamilia de factores como activina, inhibina, BMP, que participan en procesos de diferenciación. El receptor es un dímero, pero a diferencia de lo que vimos ahora, son dímeros de proteínas diferentes: tipo1 y tipo2. Cuando se une el ligando, se dimerizan pero el receptor de tipo2 va a activar su actividad quinasa al unirse. A diferencia de otros receptores, no fosforila en tirosina, sino en otros aminoácidos con oxidrilos como serina o tironina. Es una serina-tironina quinasa. Fosforila en el receptor de tipo1, lo que genera que se active el receptor completo. Por eso se une una proteína citosólica SMAD. Las SMAD asociadas al receptor (1,2,3,5 y 8) son fosforiladas por el receptor. La co-SMAD 4 trasloca al núcleo. Esta vía se relaciona con transcripción de genes. Hay distintas subunidades que se arman de receptor para recibir un ligando específico, que entonces me va a permitir armar una diferenciación diferente y muy específica. Como consecuencia de la fosforilación de la SMAD acoplada al receptor, se forma un dímero o trímero entre la SMAD fosforilada por el receptor activo y la co-SMAD 4. El complejo trasloca al núcleo y se activa la transcripción. En general, dentro de la transcripción de la proteína se activan proteínas inhibidoras de la replicación, porque es opuesta a la diferenciación. Se arresta el ciclo celular. Las metaloproteinasas y colágenos también se activan, por ejemplo, en heridas, ya que reconstruyen la matriz extracelular y eso ayuda a recuperar lo que perdimos en la herida.
VÍAS QUE INVOLUCRAN DEGRADACIÓN DE PROTEÍNAS. 
Activación de la vía dependiente de NF-kB. Puede ser activada por múltiples ligandos y receptores. Participa en la inflamación y estrés. La interleuquina 1 es una citoquina, por ende, hay receptores para citoquinas. El TOLL es un receptor que se activa en respuesta a infección por bacterias y hongos. Todos esos receptores activan la p65 y p50. Son factores de transcripción que promueven muchas enzimas inflamatorias, enzimas e inhibidores de su propia vía. 
El P65-50 normalmente llamada NF-kB tiene que exponer su señal de localización nuclear. No lo expone porque está unido a la I-kB alfa, que es un inhibidor. Al estar interaccionando, no puede entrar al núcleo y no puede transcribir. Una vez que termina de actuar, se vuelve a unir el inhibidor porque se sintetiza por la misma vía. Para sacar el inhibidor, se fosforila por una quinasa, lo que genera que sea reconocido por una ubiquitina quinasa y entonces es degradado el inhibidor.
¿Quién fosforila a I-kB alfa? La IKK, que está unida a NEMO, una proteína con muchas subunidades. Como consecuencia de la activación de los receptores como la interleuquina 1, se activa un complejo de señalización que termina activando la i-kB quinasa, que fosforila al inhibidor del NF-kB (que no olvidemos que es la unión del p65 y p50). El inhibidor (I-kB) una vez fosforilado es marcado para ubiquitinación y ser degradado, entonces el NF-kB queda libre y entra al núcleo.
Para la inflamación necesito vasodilatación, consecuencia de la activación de la ácido nitrico sintetasa inducible (iNOS) que me produce además de inflamación, tener más sangre. También se produce la expresión de COX-2, donde actúa el ibuprofeno o aspirina, que son nefro tóxicas (puede dar enfermedad renal). 
VÍA DEL WNT. Opera sobre receptores Frizzled. Hay muchas isoformas de WNT y receptores; acorde al ligando y receptor, se activan diferentes vías. La vía clásica es la WNT/beta catenina. Hay otras de polaridad plana y calcio citosólico (relacionadas a diferenciación). Esta vía es importante para supervivencia durante diferenciación. En la célula existe una proteína llamada beta catenina, relacionada a interacciones célula célula, pero también interaccionacon un complejo caseína quinasa, GSK3 y axina. Todas unidas a la beta catenina, lo que genera que sea degradada. Esto es en caso de que no haya WNT. Al unirse la WNT, interacciona la LRP, una proteína citosólica, con el complejo mediante fosforilación: así se libera la beta catenina de forma estable (ya no está fosforilada, antes sí). Produce la beta catenina la transcripción de genes de proliferación, diferenciación y supervivencia. 
Hay otras 2 vías relacionadas a este receptor y ligando; polaridad plana: hay una proteína co-receptora, LPR (esta en todas) y activa una Dvl, proteína intermediaria, pero no actúa sobre el complejo GSK3 etc. Cuando se actúa la vía de polaridad plana, se actúan la proteína Rac y Rho, quinasas que va a favorecer la reorganización del citoesqueleto de actina, la célula por ejemplo va a poder migrar. La vía WNT calcio, su receptor y la proteína Dvl está asociado a una proteína G, que activa a la fosfolipasa C, por ende una proteína Gq. Pasa lo mismo que si se activa un GPCr. 
Receptores que liberan calcio: RTK (activa fosfolipasa C gamma), los GPCr. El calcio es un mensajero celular, cuando se libera se activan un montón de vías metabólicas: por eso es muy guardado dentro del RE, ya que no sólo se contra el músculo, sino que se activan fosfatasas, proteasas, fosfolipasas, y más. Es un modular metabólico por excelencia, su liberación puede ser por diferentes receptores y diferentes vías de señalización ya que es necesario para muchos procesos.