Hierro_Serico_38_Esp

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Finalidad . Sistema para la determinación del hierro sérico en
muestras de sangre con reacción de punto final.
[Unicamente para uso diagnóstico in vitro.]
Principio . Los iones férricos se disocian de la transferrina por la
acción de un tampón de pH ácido y son reducidos a la forma de ion
ferroso por acción de la hidroxilamina.
Después de la añadidura de Ferrozine , se forma un complejo carmínÒ
brillante cuya absorbancia, medida entre 540 y 580 nm, es proporcional a
la cantidad de hierro en la muestra.
Caracteristicas del sistema . El sistema Hierro Sérico - Labtest
asocia sencillez operacional y gran sensibilidad, permitiendo un aumento
del 20% en el volumen final de la reacción, con significativa reducción del
volumen de la muestra.
El método posee tres características fundamentales para su exactitud y
precisión: excelente complejación del reactivo cromogénico para una
medición colorimétrica adecuada, eliminación de la necesidad de
desproteinización de la muestra y una excelente comparación con un
método establecido, indicando exactitud y especificidad.
Los datos de la recuperación y dilución de la matriz indican que el sistema
presenta una correcta exactitud metodológica y los estudios de
replicación demuestran la robustez del desempeño en el día a día.
El método propuesto utiliza la técnica manual y es fácilmente aplicable a
los analizadores semiautomáticos capaces de medir una reacción de
punto final entre 540 y 580 nm.
Metodologia . Goodwin modificado.
Reactivos
1. -( Tampón - Almacenar entre 15 - 25 ºC.
Contiene tampón 250 mmol/L pH 4,0, hidroxilamina 144 mmol/L.
2. -< Estándar 500 g/dL - Almacenar entre 15 - 25 ºC.m
Después de manipulación, se sugiere almacenar bien cerrado entre
2 - 8 ºC para evitar evaporación.
3. -* Ferrozine - Almacenar entre 15 - 25 ºC.Ò
Contiene ferrozine 28 mmol/L.
Los reactivos no abiertos, almacenados en las condiciones indicadas son
estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo. Durante la
manipulación, los reactivos están sujetos a contaminaciones de
naturaleza química y microbiana que pueden provocar reducción de su
estabilidad.
La vidriería almacenada puede acumular residuos que conllevan a la
obtención de resultados falsamente elevados.
Se deben de aplicar los cuidados habituales de seguridad en la
manipulación del reactivo.
No utilizar los reactivos cuando se muestren turbios o con señales de
contaminación.
Material necesario y no suministrado
1. Baño maría mantenido a temperatura constante (37 ºC).
2. Fotómetro capaz de medir, con exactitud, la absorbancia entre 540 y
580 nm.
3. Pipetas para medir muestras y reactivo.
Influencias preanaliticas . Factores preanalíticos son hoy día la
causa más importante de determinaciones equivocadas de hierro sérico.
La contaminación puede ocurrir en la recogida, en el transporte y en el
procesamiento de la muestra. Estudios indican que el 60% de los errores
acaecidos en el ensayo son debidos a errores preanalíticos.
La muestra debe de ser recogida por la mañana para conseguir las
condiciones óptimas de resultados, porque las variaciones diurnas del
hierro pueden producir reducciones de hasta un 30% en los resultados.
Edad, sexo, período de embarazo, uso de contraceptivos orales y
estrógeno alteran las concentraciones de hierro.
El uso de detergente iónico para la limpieza del material es otra fuente de
contaminación con hierro.
Se debe de crear una instruccione de trabajo que establezca
procedimientos adecuados para recogida, preparación y
almacenamiento de la muestra. Subrayamos que los errores debidos a la
muestra pueden ser bastante mayores que los errores acaecidos durante
el procedimiento analítico.
Usar suero (sin hemólisis) obtenido en ayuna. El analito es estable por 4
días entre 15 - 25 ºC y por 6 días entre 2 - 8 ºC.
Como ningún test conocido puede asegurar que las muestras de sangre
no transmiten infecciones, todas ellas deben ser consideradas como
potencialmente infecciosas. Por lo tanto, al manipularlas, se deben seguir
las normas establecidas para bioseguridad.
Para deshacerse de los reactivos y el material biológico sugerimos aplicar
las normativas locales, regionales o nacionales de protección ambiental.
HIERRO SERICO
Instrucciones de Uso
Ref.: 38
01 Español - Ref.: 38
Precauciones y cuidados especiales
Muestra
02 Español - Ref.: 38
Valores de bilirrubina de hasta 19 mg/dL y triglicéridos hasta 900 mg/dL
no producen interferencias significativas.
Valores de bilirrubina mayores que 19 mg/dL y triglicéridos mayores que
900 mg/dL producen resultados falsamente elevados.
Véase observaciones 1, 2 y 3.
El material usado en el procedimiento debe estar libre de contaminación
con hierro para evitar la obtención de resultados incorretos.
Tomar 3 cubetas del colorímetro y proceder como expuesto a
continuación:
Mezclar y determinar la absorbancia de la prueba en 560 nm o filtro verde
(540 a 580) ajustando el cero con el blanco. Se obtiene la absorbancia A .1
Mezclar e incubar en baño maría a 37 ºC por 10 minutos. El nivel del agua
en el baño debe de ser superior al nivel de los reactivos en los tubos de
ensayo. Determinar las absorbancias de la prueba y del estándar en
560 nm o filtro verde (540 a 580) ajustando el cero con el blanco. La
absorbancia de la prueba será A .2
El procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros
cuyo volumen mínimo de solución para lectura es igual o menor que
1,25 mL. Se debe de hacer una verificación de la necesidad de ajuste del
volumen para el fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivo
pueden ser modificados proporcionalmente sin perjuicio para el
desempeño de la prueba y el procedimiento de cálculos se mantiene
inalterado. En caso de reducción de los volúmenes, es fundamental que
se observe el volumen mínimo necesario para la lectura fotométrica.
Calculos . Véase linealidad
A - A2 1
Hierro ( g/dL) = x 500m
Absorbancia del Estándar
Ejemplo
A Prueba = 0,0381
A Prueba = 0,1322
Absorbancia del Estándar = 0,490
0,132 - 0,038
Hierro ( g/dL) = x 500 = 96m
0,490
Debido a la gran reproducibilidad que puede obtenerse con la
metodología, se puede utilizar el método del factor.
500
Factor de Calibración =
Absorbancia del Estándar
Hierro ( g/dL) = (A Prueba - A Prueba) x Factorm 2 1
Ejemplo
500
Factor = = 1020
0,490
Hierro ( g/dL) = (0,132 - 0,038) x 1020 = 96m
Calibración
El estándar es trazable al Standard Reference Material (SRM) 937 del
National Institute of Standards and Technology (NIST).
Calibraciones manuales
Obtener el factor de calibración al usar nuevo lote de reactivos o cuando el
control interno de la calidad indicar.
El resultado de la medición es lineal hasta 1000 g/dL. Para valoresm
mayores, diluir la muestra (1:5) con agua desionizada, realizar nueva
medición y multiplicar el resultado obtenido por 5.
Control interno de la calidad . El laboratorio debe mantener un
programa de control interno de calidad que defina con claridad los
reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para
especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones
correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados
para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. Se sugiere que
las especificaciones para el coeficiente de variación máximo y el error
total sean basados en los componentes de la variación biológica (VB) .
6,8,9
Se sugiere utilizar las preparaciones estabilizadas de la línea Qualitrol -
Labtest para el control interno de la calidad en ensayos de química clínica.
Intervalo de referencia .
10,11
Los intervalos deben ser usados
sólo como orientación. Se recomienda que cada laboratorio establezca,
en la población atendida, sus propios intervalos de referencia.
Conversión . Unidades Convencionales ( g/dL) x 0,179 = Unidades SIm
( mol/L).m
Interferencias
Procedimiento
Blanco
1,0 mL
0,25 mL
Muestra
1,0 mL
0,25 mL
Estándar
1,0 mL
0,25 mL
Suero
Estándar (Nº 2)Agua desionizada
Tampón (Nº 1)
Blanco
0,025 mL
Muestra
0,025 mL
Estándar
0,025 mLFerrozine (Nº 3)®
Hierro Sérico ( g/dL)m
Neonatos 100 - 250
Lactentes
Pre escolar y escolar
Hombre
Adulto
Mujer
40 - 100
50 - 120
65 - 170
50 - 170
Linealidad
Deficiencia de Hierro
Infecciones Crónicas
Enfermedades malignas
Atransferrinemia
Período menstrual
Embarazo (3º trimestre)
Hemosiderosis pulmonar
Nefrosis
Kwashiorkor
Anticonceptivos orales
Intoxicación por hierro
Anemia hemolítica
Hemocromatosis
Deficiencia de piridoxina
Anemia sideroblástica
Talasemia Mayor
D
D
D
D
D
D
D
D
D
S/E
E
E
E
E
E
E
E
D
D
D
S
E
S
D
D
E
D
S/D
S/D
S
S/D
D
D
D
D
S
D
D
D
E
S
S
E
E
E
E
E
E
A
E
E
E
S
S
A
E
S
S
E
E
E
E
E
E
Hierro
Sérico
Alteraciones
CTFH IST RH
Menstruación abundante, hemorragias gastrointestinales, hemorroides
sangrantes, carcinoma de colon y parasitósis son las causa más
comunes de deficiencia del hierro sérico por pérdida sanguínea en el
adulto.
Transfusiones repetidas, hemocromatosis idiopática, cirrosis, talasemia
y anemia sideroblastica son las causa más comunes del aumento del
hierro sérico.
La tabla a continuación muestra el comportamiento del hierro sérico, la
capacidad total de fijación de hierro (CTFH), índice de saturación de la
transferrina (IST) y la reserva de hierro medular (RH), evaluada por la
coloración específica del frotis de la médula ósea, en diversas situaciones
relacionadas con la alteración del metabolismo del hierro.
D = E = S =disminuido elevado sin alteración
A = ausente
Observaciones
1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores
fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de
resultados correctos.
2. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos
y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa
potencial de errores analíticos. El agua desionizada o destilada utilizada
en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así,
para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en
enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad 1 megaohm.cm o³
conductividad 1 microsiemens/cm y concentración de silicatos£
<0,1 mg/L. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad
saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones,
silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que
deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los
resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer
un programa de control de la calidad del agua.
Caracteristicas del desempeño
8
Exactitud . En tres muestras con concentraciones de hierro iguales a
63, 216 y 389 g/dL, se añadieron cantidades distintas del analitom
obteniéndose recuperaciones de entre el 95 y 103%. El error sistemático
proporcional medio obtenido en un valor de 50 g/dL fue igual am
0,5 g/dL o 1,0%.m
Especificidad . El método propuesto fue comparado con un método
similar utilizando 80 muestras con valores situados entre 4 y 727 g/dL.m
La comparación resultó en la ecuación de la regresión: y = 1,039x -
2,247 y un coeficiente de correlación (r) igual a 0,999. El error
sistemático total (constante y proporcional) verificado en el nivel de
decisión (50 g/dL) fue igual a 0,3 g/dL o 0,6%.m m
Como las muestras fueron seleccionadas aleatoriamente en pacientes de
ambulatorio y pacientes hospitalizados, se puede inferir que el método
tiene una especificidad metodológica adecuada.
Sensibilidad metodológica . Utilizándose la absorbancia del
patrón como parámetro, la sensibilidad fotométrica es de 1,02 g/dLm
correspondiendo a una absorbancia igual a 0,001.
Efectos de la dilución de la matriz . Dos muestras con valores
iguales a 851 y 1000 g/dL fueron utilizadas para evaluar la respuesta delm
sistema en las diluciones de la matriz con agua desionizada. Usando
factores de dilución que variaron de 2 a 16, se encontraron
recuperaciones de entre el 95 y 103%.
Significado clínico . El hierro es esencial a la mayoría de los
organismos vivos, ya que participa de numerosos procesos vitales,
desde los procesos oxidativos celulares hasta el transporte de oxigeno
hacia los tejidos. La homeostasia del hierro es regulada principalmente
por la absorción y no por la excreción. El hierro es transportado en la
sangre por una proteína la transferrina y almacenado en los tejidos,-
ligado a otra proteína llamada ferritina.
La deficiencia de hierro es consecuencia de suministro inadecuado,
aumento de la demanda, pérdida sanguínea o la combinación de estos
factores. El suministro inadecuado es característico de los niños
alimentados con leche. El aumento de la demanda es característico del
embarazo y de los niños en los primeros cinco años de vida.
03 Español - Ref.: 38
Media
53
219
DE
2,41
5,75
CV (%)
4,5
2,6
N
20
20
Muestra 1
Muestra 2
Repetitividad - imprecisión intra-ensayo
Media
54
226
DE
2,43
6,50
CV (%)
4,5
2,9
N
20
20Muestra 2
Muestra 1
Reproducibilidad - imprecisión total
3. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas de interferência en los
resultados y en la metodología se sugiere consutar “www.fxol.org”.
Referencias
1. Goodwin J, Murphy B, Guillemette M. Clin Chem 1966; 12:47.
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and Technics, 2nd ed. New York, Harper & Row, 1974.
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4. Stookey L. Anal Chem 1970;42:779.
5. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott
Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada,
1972.
6. Westgard J O, Barry PL, Hunt MR. Clin Chem 1981; 27:493-501.
7. Williams HL, Johnson DJ, Haut MJ. Clin. Chem 1977;23:237-240.
8. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular,
Base de Da tos de Var i ac ión B io lóg ica . D ispon ib le
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(acceso en 04/2006).
9. Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest
Diagnóstica 2005.
10. Ferraz MHC, Delgado RB. Valores de Referência para Exames
Laboratoriais. In: Leão E, Corrêa EJ, Viana MB, Mota JAC (Ed).
Pediatria Ambulatorial. 3.ed. Belo Horizonte: Coopmed, 1988. p.837-
848
11. Burtis CA, Ashwood ER. Textbook of Clinical Chemistry, 2ª edição,
Philadelphia: W.B. Saunders, 1986:2175-2211.
12. Labtest: Datos de Archivo.
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instrucciones que figuram em el rótulo.
04 Español - Ref.: 38
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Presentación
Producto Referencia Contenido
38-80Hierro Serico
1 x 80 mL1
1 x 2,5 mL2
1 x 5 mL