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DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 1 Determinación de Títulos de Anticuerpos Anti-Moquillo en Caninos de Bucaramanga y su Área Metropolitana Cruz Barajas María Camila Universidad de Santander Facultad de Ciencias Exactas, Naturales y Agropecuarias Medicina Veterinaria Bucaramanga 2022 DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 2 Determinación de Títulos de Anticuerpos Anti-Moquillo en Caninos de Bucaramanga y su Área Metropolitana Cruz Barajas María Camila Trabajo de Grado Presentado Como Requisito Para Optar al Título de Médico Veterinario Director Goyeneche Patiño Diego Andrés PhD Universidad de Santander Facultad de Ciencias Exactas, Naturales y Agropecuarias Medicina Veterinaria Bucaramanga 2022 DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 3 DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 4 DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 5 DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 6 DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 7 Agradecimientos Les agradezco a mis papás que siempre me apoyaron en todas mis decisiones y sueños, a mi director Diego Goyeneche por este proyecto que creamos juntos, a todos los caninos y sus dueños que permitieron que este estudio fuera posible. A las clínicas veterinarias que me apoyaron, el Centro de Salud Veterinario que me formó en mis primeros años como médico veterinario, la doctora Luz Marina Cortés mi maestra en la clínica, a la clínica veterinaria los Perritos por su apoyo en el muestreo y la clínica veterinaria Impacto animal. A todos los docentes que hicieron parte de mi formación académica de los cuales he aprendido, entendido y vivido experiencias increíbles, especialmente a aquellos que han apoyado mi proyecto de vida y de grado. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 8 Dedicatoria A mi familia que siempre me apoyó en mis sueños y a todos los animales que me llevaron a elegir y enamorarme de esta carrera, principalmente a Mauricio Cruz, mi compañero de cuatro patas incondicionales. A mi mamá la cual siempre me impulsó a cumplir mis metas y me motivó incondicionalmente en cada aventura y nuevas enseñanzas que me dejó la carrera. A Guissepe, Muñeca, Lupita, Obelisco, Aquiles, Martina y Manchas. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 9 Tabla de Contenido pág. Introducción .................................................................................................................................. 13 Planteamiento del Problema ......................................................................................................... 20 Descripción del Problema ............................................................................................................. 20 Pregunta de Investigación ............................................................................................................. 23 Justificación .................................................................................................................................. 24 Objetivos ....................................................................................................................................... 26 Objetivo General ........................................................................................................................... 26 Objetivos Específicos.................................................................................................................... 26 Metodología .................................................................................................................................. 27 Tipo de Estudio ............................................................................................................................. 27 Población y Muestra ..................................................................................................................... 27 Determinación Títulos de Anticuerpos Anti-Moquillo IgG.......................................................... 28 Determinación Títulos de Anticuerpos Anti-Moquillo IgM ......................................................... 29 Análisis Estadístico ....................................................................................................................... 30 Análisis Para la Determinación de Títulos de Anticuerpos IgG .................................................. 30 Análisis Para la Determinación de Títulos de Anticuerpos IgM .................................................. 31 Análisis Estadístico Para la Determinación de Asociaciones ...................................................... 31 Consideraciones Éticas ................................................................................................................. 31 Resultados ..................................................................................................................................... 34 Descripción Poblacional de los Caninos Muestreados ................................................................. 34 Determinación de Anticuerpos por IgG ........................................................................................ 35 DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 10 Determinación de Anticuerpos por IgM ....................................................................................... 36 Asociación de Variables Poblacionales con Títulos de Anticuerpos IgG ..................................... 37 Asociación de Variables Poblacionales con Títulos de Anticuerpos IgM .................................... 41 Discusión....................................................................................................................................... 45 Conclusiones ................................................................................................................................. 50 Referencias Bibliográficas ............................................................................................................ 51 Apéndices ...................................................................................................................................... 56 DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 11 Lista de Tablas pág. Tabla 1 Variables Poblacionales de Caninos Muestreados en Bucaramanga y su Área Metropolitana ................................................................................................................................ 34 Tabla 2 Determinación de Títulos de Anticuerpos Anti-Moquillo IgG en Caninos de Bucaramanga y su Área Metropolitana................................................................................................................ 36 Tabla 3 Determinación de Títulos de Anticuerpos Anti-Moquillo IgM en Caninos de Bucaramanga y su Área Metropolitana................................................................................................................ 37 Tabla 4 Asociación de Variables Poblacionales con Títulos de Anticuerpos IgG y Chi Cuadrado (Χ2) ................................................................................................................................................ 37 Tabla 5 Asociación de Variables Poblacionales con Títulos de Anticuerpos IgM y Chi Cuadrado (Χ2) ................................................................................................................................................ 41 DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO12 Lista de Apéndices pág. Apéndice A. Consentimiento Informado a los Propietarios Acerca de la Participación del Canino en el Estudio .................................................................................................................................. 56 Apéndice B. Encuesta Epidemiológica Realizada a los Propietarios de los Caninos ................... 57 Apéndice C. Placa Antigénica IgG Posterior a la Realización del ELISA .................................. 59 Apéndice D. Placa Antigénica IgM Posterior a la Realización del ELISA ................................. 60 Apéndice E. Matriz de Resultados ELISA ................................................................................... 61 DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 13 Abreviaturas ABS: Absorbancia ACM: Anticuerpos Monoclonales ARN: Ácido Ribonucleico ARNSS: Ácido Ribonucleico Monocatenario Positivo ELISA: Inmunoensayo enzimático indirecto F: Proteína de Fusión H: Hemaglutinina IgG: Inmunoglobulina G IgM: Inmunoglobulina M L: Proteína Grande M: Proteína de Membrana N: Nucleocápside OR: Odds Ratio P: Fosfoproteína RPM: Revolución por Minuto SLAM: Moléculas de Activación Linfocítica de Señalización TMB: Tetrametilbencidina WSAVA: Asociación Mundial de Veterinarios de Pequeños Animales DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 14 Resumen Título Determinación de Títulos de Anticuerpos Anti-Moquillo en Caninos de Bucaramanga y su Área Metropolitana Autor Cruz Barajas María Camila Palabras Clave Transmisión, estudio epidemiológico, anticuerpos antivirales, prevención, distemper Descripción El distemper canino, es una enfermedad viral altamente contagiosa y patogénica debido a sus altas tasas de morbilidad y mortalidad. El virus es del género Morbillivirus y hace parte de la familia Paramyxoviridae. La prevención es realizada por medio de la vacunación, al ser la respuesta inmune individual y especifica no todos los caninos desarrollan títulos de anticuerpos IgM e IgG protectivos, debido a esto, se presentan caninos vacunados con títulos de anticuerpos bajos por una estimulación pobre de la actividad celular, encontrándose expuestos a contraer la enfermedad. La falla vacunal se debe a una respuesta inmune insuficiente, el estatus sanitario del animal y a un mal manejo vacunal. Debido a esto el objetivo principal de este trabajo es determinar los títulos de anticuerpos anti-moquillo en caninos de Bucaramanga y su área metropolitana. Se tomaron muestras de sangre de 92 caninos mayores a 6 meses de edad con antecedentes de vacunación contra moquillo. Y posteriormente mediante la técnica de inmunoensayo enzimático indirecto (ELISA), se determinaron los títulos de anticuerpos IgG e DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 15 IgM contra al virus en suero. Adicionalmente se realizó una encuesta epidemiológica a los propietarios, con el fin de caracterizar variables poblacionales y su posible relación con los títulos de anticuerpos obtenidos. Se determinó que, de los 92 caninos implementados en el estudio, 28/92 presentaron títulos de anticuerpos IgG altos (31%), 55/92 presentaron títulos de anticuerpos IgG medios (60%) y 9/92 presentaron títulos de anticuerpos IgG bajos (9%) con una asociación estadística significativa con las variables poblacionales edad y refuerzo de vacunación. Los títulos de anticuerpos IgM fueron clasificados en bajos/medios y altos, con un total de 79/92 caninos con títulos de anticuerpos IgM altos (86%) y 13/92 caninos con títulos de anticuerpos IgM medios/ bajos (14%), la clasificación no tuvo asociación estadística con las variables. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 16 Abstract Title Determination of Antibodies Titers Anti-Distemper in Dogs from Bucaramanga and Metropolitan Area Author Cruz Barajas María Camila Keywords Transmition, epidemiological study, antiviral antibodies, prevention, distemper Description Canine distemper is a highly contagious and pathogenic viral disease, due to its high morbidity and mortality rates. The virus belongs to the Morbillivirus genus and Paramyxoviridae family. Prevention is based on vaccination, since the immune response is individual and specific, not all dogs develop protective IgM and IgG antibody titers, due to this, vaccinated dogs present low antibody titers explained by poor stimulation of celular immunity and are exposed to contracting the disease. Vaccine failure is the result of insufficient immune response, animal health status and poor vaccination management. Therefore, the aim of this work is to determine the titers of anti-distemper antibodies (IgG and IgM) in dogs from Bucaramanga and its metropolitan area. Blood from of 92 dogs older than 6 months of age with a history of vaccination against distemper was taken. After serum extraction samples were analyzed using indirect enzyme immunoassay (ELISA) technique. Additionally, an epidemiological survey was carried out to the owners, in order to characterize population variables and their possible relationship with the antibody titers obtained. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 17 that the results showed that, out of the 92 canines implemented in the study, 28/92 presented high IgG antibody titers (30.43%), 55/92 presented medium IgG antibody titers (59.78%) and 9/92 presented titers of low IgG antibodies (9.78%) with a significant statistical association in the population variables age and vaccination reinforcement. IgM antibody titers were classified as low/medium and high, with a total of 79/92 canines with high IgM antibody titers (85.86%) and 13/92 canines with medium/low IgM antibody titers (14, 13%) without significant statistical association. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 13 Introducción El Distemper canino o Enfermedad de Carré es una enfermedad altamente patogénica y contagiosa debido a sus altas de mortalidad, morbilidad y a su fácil transmisión. El distemper es ocasionado por un agente viral perteneciente a la familia Paramyxoviridae del género Morbillivirus, conformado por una cadena simple de ARN monocatenaria negativa no segmentada cápside y envoltura en la cual se encuentran proteínas para la adherencia e infección celular (Del Puerto et al., 2010). La estructura del genoma incluye seis unidades de trascripción, cada una con una función específica pues traducen proteínas como nucleocápside (N), encargada de encapsular y proteger el ARN viral, la proteína grande (L) y la fosfoproteína (P), las cuales trabajan en conjunto componiendo el complejo ribonucleoproteico encapsulado en la proteína N (Rendon-Marin et al., 2019). La ribonucleoproteína es rodeada por una proteína de matriz no glicosilada la cual aporta estabilidad al virión así mismo cuenta con la proteína de matriz (M) y dos proteínas glicosiladas en la envoltura, la proteína de fusión (F) y la proteína de unión o hemaglutinina (H), las cuales se unen a la membrana de las células del hospedero (Maclachlan et al., 2017). La infección de una célula susceptible inicia cuando la proteína H interacciona con la molécula de activación de los linfocitos señalizadores (SLAM o CD150), siendo principalmente afectados los linfocitos, células dendríticas y macrófagos debido al tropismo celular del receptor viral (Kapil & Yeary, 2011). Posteriormente la proteína F es encargada de la fusión de la envoltura viral con la membrana plasmática de las células del hospedero con el fin de infectarla y ejercer su replicación (Maclachlan et al., 2017). La trasmisión se da principalmentepor vía aerógena o mediante el contacto directo de exudados nasales. Sin embargo, también puede ser trasmitida mediante heces, orina o por DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 14 trasmisión transplacentaria (Riascos Gómez, 2019). Esta enfermedad presenta un tropismo celular múltiple, generando una infección del sistema respiratorio, gastrointestinal, cutáneo y nervioso (Rendon-Marin et al., 2019). El virus ingresa a la cavidad oro-nasal por medio de aerosoles y se replica en los macrófagos y linfocitos de tejidos linfoides como las tonsilas, los ganglios linfáticos orales y bronquiales, ocasionando la viremia primaria para posteriormente en el cuarto a sexto día post infección diseminarse hacia otros tejidos linfoides y hematopoyéticos tales como el bazo, timo, nódulos linfáticos, células de Kupffer en hígado, placas de Peyer en intestino y medula ósea generando una linfopenia e inmunosupresión del animal (Riascos Gómez, 2019). Entre el octavo y noveno día inicia la viremia secundaria diseminándose por vía hematógena a las células del tracto urinario, gastrointestinal, respiratorio, endocrino y sistema nervioso central (Canales K’ana, 2020). Cuando el canino presenta títulos de anticuerpos protectivos y en general una buena respuesta inmunológica, el animal puede eliminar el virus de la mayoría de los tejidos sin presentar manifestaciones clínicas de la enfermedad (Canales K’ana, 2020). Sin embargo, en aquellos caninos que no presentan una respuesta inmune celular y humoral apropiado, el virus es diseminado hacia los tejidos mucosos, epiteliales y el sistema nervioso central presentando signos multisistémicos y cuadros clínicos graves debido a las infecciones secundarias (Martella et al., 2008). Las manifestaciones clínicas suelen iniciar con signos respiratorios y gastrointestinales como descargas nasales o secreciones mucopurulentas, rinitis serosa, neumonía intersticial, dificultad respiratoria, tos, anorexia, inapetencia, fiebre, vómito, enteritis catarral y diarrea (Kapil & Yeary, 2011). Posteriormente se pueden apreciar algunos signos cutáneos como DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 15 pústulas, vesículas en piel, dermatitis pustular, hiperqueratosis nasal y plantar; en algunos casos se presentan signos como hipoplasia del esmalte dental, uveítis y nistagmos (Martella et al., 2008). En las fases avanzadas de la enfermedad se pueden presentar signos neurológicos como convulsiones, parálisis, hiperestesia, paraparesis y tetraparesis debido a la desmielinización del sistema nervioso central (Riascos Gómez, 2019). La sintomatología clínica suele ser altamente variable, sin embargo, la gravedad de las manifestaciones clínicas dependerán del estado inmunológico, la edad del animal y la virulencia de la cepa (Martella et al., 2008). El virus es eliminado de 60 a 90 días post infección, afectando a caninos de cualquier edad con mayor prevalencia en cachorros de entre tres y seis meses debido a la caída de anticuerpos maternales (Greene, 2012). Los animales que se encuentran en estado de calle o hacinamiento suelen ser más propensos a contagiarse. Algunos autores han reportado menor prevalencia en razas braquicéfalas que en las dolicocéfalas, siendo el Pastor Alemán el más predisponente, seguido por las razas Weinmaraner, Samoyedo y el Alaska Malamute. También se ha reportado mayor prevalencia en los machos, sin embargo, otros autores difieren en cuanto si el sexo es un aspecto relevante (Pinotti, 2011). Debido a esto se han realizado asociaciones de variables poblacionales como edad, sexo, raza, condición corporal, hábitat e incluso época de recolección de la muestra (Dorji et al., 2020). Este agente patógeno multi-huésped ocasiona gran cantidad de muertes en caninos siendo este su principal reservorio; en Brasil fue reportado un estudio longitudinal de las enfermedades en caninos con las principales tasas de muerte y eutanasia del cual se obtuvo como resultado el distemper canino con un promedio de 12,4% de la población (Fighera et al., 2008). Algunos autores reportan que el 50% de los caninos infectados fallecen después de la presentación clínica de la enfermedad (Riascos Gómez, 2019). Lo cual genera un riesgo constante para la trasmisión DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 16 de esta, sin embargo, también se encuentra en diferentes familias de los carnívoros, siendo una amenaza para la conservación de algunas especies debido a la diseminación por caninos criados en libertad, no vacunados o vacunados de manera incorrecta (Martinez-Gutierrez & Ruiz-Saenz, 2016). Se encuentra incluidos los miembros de la familia Canidae (coyote, lobo, zorro), Mustelidae (hurón, nutria, zorrillo, comadreja), Procyonidae (panda rojo, mapache), Hyaenidae (hienas), Ursidae (osos) y Viverridae (civet de palma) (Kapil & Yeary, 2011). En Europa del 2020 se realizó un estudio en el cual se determinó la prevalencia del distemper canino. Se obtuvo como resultado 56,6% en caninos con signos respiratorios, gastrointestinales y neurológicos. En algunos países como un Hungría 7 de cada 11 perros eran positivos a la enfermedad. Algunos autores indican que en Europa se diagnostican pocos caninos con moquillo, sin embargo, suele ser una enfermedad constante debido a que la población salvaje como los zorros diseminan la enfermedad (Day et al., 2020). En Estados Unidos, 50% de la población en una unidad de cuidados intensivos fue positivo a distemper canino, en Grecia fueron determinadas prevalencias de 33,3% de 57 caninos con signos neurológicos, en China fue reportada una prevalencia de 24,8% ya que 50 de 201 caninos se encontraban infectados. A nivel de Latinoamérica se han reportado prevalencias en Brasil del 15% y 75% en diferentes estudios, en Ecuador se reportaron índices de prevalencia del 36% y en Colombia se han reportado prevalencias del 50% de 46 caninos de diferentes hospitales veterinarios en el Valle de Aburrá- Antioquia (Riascos Gómez, 2019). Existe gran cantidad de factores que pueden llegar a favorecer la transmisión de este agente patógeno. La vacunación es la principal forma de prevención y de control de la enfermedad, sin embargo, los protocolos de vacunación no están siendo implementados correctamente, generando una pérdida de inmunidad y susceptibilidad al virus (Ayala, 2018). DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 17 Actualmente son implementadas las vacunas con virus vivos atenuados, esto con el fin de inocular componentes no patógenos e imitar la función viral, no obstante, se reportado un aumento considerable de casos de caninos infectados (Céspedes et al., 2010). Los protocolos de vacunación han reducido considerablemente la presentación de la enfermedad, sin embargo, existe el riesgo de la propagación de esta por parte de los caninos que no presentan un protocolo completo de vacunación o una adecuada cantidad de títulos de anticuerpos anti-moquillo (Bergmann et al., 2021). Debido a esto se realizó un estudio en Alemania con el fin de determinar títulos de anticuerpos en 97 caninos antes y después de la vacunación para evaluar la efectividad de la respuesta inmune. Los anticuerpos fueron medidos en el día 0, día 7 y día 28; en los resultados se determinó que el 94,8% de los caninos presentaban óptimos títulos de anticuerpos antes del día 0, sin embargo, debido a la variación de la respuesta inmune fueron divididos en cinco grupos, el grupo A (26,8%) presentaba un título de anticuerpos ≥10 el día 0 y estos incrementaron al día 28, el grupo B (5,2%) no presentaron títulos de anticuerpos ni antes ni después de la vacunación, el grupo C (17,5%) presentó un título de anticuerpos ≥10 en el día 0 los cuales disminuyeron considerablemente al día 28, el grupo D (33,0%)presentó un título de anticuerpos ≥ 10 en el día 0 y no manifestaron cambios después de la vacunación, el grupo E (10,3%) en el día 0 presentó un título ≥ 10 con un aumento de estos en el día 7 y una disminución en el día 28 y el grupo F (7,2%) presento un título ≥ 10 en el día 0, una disminución en el día 7 y un aumento de títulos en el día 28 (Bergmann et al., 2021). Bergmann reporta la inadecuada producción de títulos de anticuerpos o falla vacunal en caninos debido a que el antígeno de la vacuna no es reconocido por el sistema inmune, esto es asociado a las variaciones específicas de las razas que pueden versen afectados a los genes del complejo mayor de histocompatibilidad que codifican las proteínas que presentan los antígenos a DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 18 los linfocitos, también reporta que los síndromes de inmunodeficiencia primaria pueden afectar la correcta inmunización, tal como la deficiencia de adhesión de leucocitos caninos. Algunos autores reportan la ineficiencia de la vacunación antes de la sexta semana, debido a que los títulos de anticuerpos maternales se encuentran altamente presentes interfiriendo con la vacunación, estos comienzan a descender a partir de la octava semana y permiten una mejora en la respuesta inmunológica (Ayala, 2018). Para una correcta inmunización se recomienda que los cachorros reciban una serie de tres vacunas a partir de la semana seis a las dieciséis. En los caninos adultos se debe realizar la inmunización anualmente con el fin de mantener los títulos de anticuerpos elevados y una adecuada protección (Kapil & Yeary, 2011). WSAVA (World Small Animal Veterinary Association) recomienda realizar la primera inmunización en cachorros entre la sexta y octava semana de vida con refuerzos cada dos a cuatro semanas hasta las dieciséis semanas y posteriormente administrar una vacuna entre los seis y doce meses de edad. En los caninos adultos hace la recomendación de realizar la inmunización cada tres años (Day et al., s. f.). La falla vacunal puede ser presentada por múltiples factores, principalmente se da por un sistema inmune inmaduro al inicio del protocolo de vacunación, es decir, en animales menores de 6 meses y con títulos de anticuerpos maternales elevados, sin embargo, también influyen factores individuales del canino como factores estresantes, los cuales inmunosuprimen al animal, un inadecuado estado físico, posibles enfermedades secundarias, exposición a otros virus altamente patógenos, presencia de parásitos o caninos desnutridos (Kapil & Yeary, 2011). También deben ser tenidos en cuenta aquellos fallos vacunales por un manejo inadecuado de las vacunas, en el cual no se consideren las instrucciones del fabricante, vía de administración y no respetar su almacenamiento y/o cadena de frio (Céspedes et al., 2010). DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 19 Los caninos necesitan una óptima respuesta inmunológica la cual se logra por medio de la vacunación para prevenir la enfermedad. Sin embargo, al ser esta respuestas variadas e individuales, se presentan caninos con títulos de anticuerpos insuficientes, propensos a enfermar, diseminar o ser portadores asintomáticos de la enfermedad (Vila Nova et al., 2018). Lo que conlleva a una constante circulación del virus en el medio ambiente y un problema en la salud pública animal (Riascos Gómez, 2019). Las medidas higiénicas o de bioseguridad tienen un papel importante en la prevención, la desinfección del medio ambiente con cloruro de benzalconio (0,05%) y etanol al 70% especialmente en lugares con sobrepoblación y hacinamiento de animales es fundamental ya que el virus puede ser trasmitido a través de fómites. El aislamiento estricto de los caninos infectados es fundamental para el control de la enfermedad, la cuarentena para evitar la diseminación de esta enfermedad y de igual manera los cachorros menores a 45 días deben evitar el contacto con otros que aún no han sido vacunados (Kapil & Yeary, 2011). Debido a lo mencionado anteriormente el objetivo principal de la investigación presente es determinar y cuantificar la presencia de títulos de anticuerpos IgG e IgM anti-moquillo en el suero de los caninos vacunados y establecer asociaciones entre variables poblacionales y de manejo. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 20 Planteamiento del Problema Descripción del Problema El virus del moquillo canino es una enfermedad altamente contagiosa debido a su fácil diseminación, la cual puede ser trasmitida por vía oro-nasal y aerógena entrando en contacto con los epitelios de las vías digestivas, respiratorias y adicionalmente se transmite por infección transplacentaria. El virus se elimina por la orina, heces e incluso, secreciones oculares ocasionando altas tasas de morbilidad que varían entre el 25 al 75% y mortalidad del 50 al 90% en caninos con vacunación completa e incompleta y no vacunados. Lo anterior conlleva a la propagación del virus por un periodo de 60 a 90 días post a la remisión de signos clínicos. El moquillo es una enfermedad de curso sistémico que inmunosuprime al animal y ocasiona susceptibilidad a infecciones secundarias. Suele presentarse con mayor prevalencia en los cachorros de 3 a 6 meses de edad debido a la caída de los anticuerpos maternales; también a los animales que se encuentran en hacinamiento y en estado de calle (Greene, 2012). Según la cepa del virus y su virulencia la sintomatología tendrá variaciones, además también influye el ambiente en el que se encuentre el canino, la edad y el estado inmunitario del hospedero. En su forma clínica el animal presentará apatía, disminución del apetito, fiebre e infección del tracto respiratorio superior. La forma grave del virus puede presentarse en perros de todas las edades, pero hay una mayor predisposición a que cachorros de 12 a 18 semanas de edad no vacunados contraigan la enfermedad, estos presentarán una leve conjuntivitis, seguida de una tos seca, que se volverá húmeda con el pasar de los días. Los cachorros presentarán depresión y anorexia, sumado a un cuadro de vómito (Greene, 2012). Al iniciar la primera viremia se afectarán principalmente los linfocitos, sin embargo, debido a que el virus es pantrópico serán implicados en el proceso infeccioso los sistemas respiratorio, gastrointestinal, DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 21 cutáneo y nervioso generando signos clínicos como fiebre, leucopenia y linfopenia. Sin embargo, en estados más avanzados el canino puede presentar hipoglobulinemia, trombocitopenia y una anemia regenerativa (Greene, 2012). Posteriormente cuando la respuesta inmunológica es deficiente y los títulos de anticuerpos son bajos ocurrirá la segunda viremia en la cual los macrófagos y linfocitos infectarán los tejidos linfoides y hematopoyéticos como el bazo, el timo, médula ósea y macrófagos de la lámina propia gastrointestinal. La presentación sintomatológica varía según el estatus inmune y el estatus clínico del animal, entre los principales se encontrará una severa bronconeumonía complicada con infecciones secundarias (tos seca y húmeda), secreción óculo- nasal bilateral, vómito, diarrea profusa, tenesmo, disminución del apetito, letargo y depresión (Greene, 2012). Cuando el cuadro clínico avanza se presentarán signos neurológicos de 1 a 3 semanas post infección tales como hiperestesia, paraparesis, tetraparesis, ataxia, convulsiones y desmielinización del sistema nervioso central, la cual activará una fuerte respuesta de inflamación celular (Riascos Gómez, 2019). Dada la variedad de sistemas implicados, el animal puede morir a causa del virus, de las infecciones oportunistas que disminuyen la capacidad funcional de los sistemas afectados, siendo esta causade la alta mortalidad de la enfermedad. En 2018 en Lisboa, Portugal se reportó un estudio de la valoración de la respuesta inmune humoral inducida por vacunación para parvovirus y moquillo canino, en el cual se incluyeron 20 caninos divididos en 3 grupos: A (cachorros del mismo origen y misma edad vacunados a las 6 semanas), B (cachorros vacunados de 8 a 12 semanas de diferente origen) y C (animales adultos sin vacunar durante 3 años). El estudio evaluó los anticuerpos, por medio de un ELISA indirecto; los resultados en el grupo A fueron: El 80% de los cachorros presentaban una cantidad óptima de anticuerpos después de la primera inmunización; en el grupo B después DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 22 de la primera inmunización solo el 20% de los cachorros se encontraban protegidos, los demás se encontraban con una cantidad insuficiente de títulos de anticuerpos y para finalizar en el grupo C, solamente un canino se encontraba protegido contra el agente infeccioso, otros 3 presentaban una inmunidad protectora pero no la suficiente cantidad de anticuerpos contra distemper canino (Vila Nova et al., 2018). En 2012 en la Escuela de Medicina Veterinaria de Japón se reportó un estudio, en el cual se evaluaron los títulos de anticuerpos en 1031 caninos sanos de 2 a 18 años contra distemper canino. Se valoró el estado inmunológico de los perros, la retención de anticuerpos contra el virus y la tendencia de títulos de anticuerpos, obteniendo como resultado una mayor prevalencia de títulos en caninos de mayor edad debido a una mayor exposición y no necesariamente por un efecto vacunal (Taguchi et al., 2011). Lo anterior demuestra la variabilidad en la respuesta inmune incluso en planes de vacunación completos, lo que posibilita la circulación del virus en el ambiente urbano y la severidad de la enfermedad. De 2017 a 2018 en Risaralda, Colombia se reportó un estudio observacional de corte retrospectivo en el cual se evaluaron los títulos de anticuerpos de 223 caninos con un promedio de edad de 15 meses provenientes de cuatro municipios (Pereira, La virginia, Dosquebradas y Cartago). El estudio se realizó por medio de una prueba inmunocromatográfica usando muestras de conjuntiva, suero y plasma. Se reportaron 32 caninos positivos en los cuales la mayor prevalencia provenía de Pereira, presentada por hembras y caninos menores o iguales a 7 meses (Riascos Gómez, 2019). De 2011 a 2012 en Antioquia, Colombia se reportó un nuevo linaje del virus del moquillo en caninos domésticos por medio de un análisis filogenético en el cual se implementaron 46 DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 23 muestras de caninos de diferentes razas, edades, sexo y estados de vacunación con sintomatología clínica de distemper provenientes de diferentes hospitales veterinarios. El linaje descrito en el presente informe no se encuentra relacionado genéticamente a otros linajes previos, sin embargo, se requiere mayor información y realización de otros estudios filogenéticos en Colombia y países vecinos (Espinal et al., 2014). Actualmente en Colombia existen pocos reportes de la determinación de títulos de anticuerpos contra distemper en caninos, por lo tanto, se hace necesario este tipo de trabajos que permitan entender las respuestas inmunes que normalmente son variadas y entender por qué los títulos de anticuerpos no son siempre protectivos. Adicionalmente el moquillo es una enfermedad que debe ser controlada por medio de la prevención, vacunación y certeza de la eficacia de las vacunas implementadas para evitar su trasmisión y diseminación. Pregunta de Investigación ¿Los perros vacunados en la ciudad de Bucaramanga y su área metropolitana, presentan títulos de anticuerpos protectivos contra el moquillo canino? DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 24 Justificación Es de interés realizar este estudio, debido a que el distemper canino es una enfermedad viral altamente patógena, de fácil diseminación y con alta morbilidad y mortalidad, en la cual, aunque se implementan medidas de prevención como la vacunación, se presentan brotes en la población canina. Los bajos títulos de anticuerpos en la población permiten que ésta esté expuesta a la infección, al ser el moquillo un virus pantrópico, afecta múltiples sistemas con una variada sintomatología y presenta una alta morbilidad y mortalidad. Se ha demostrado que el virus del moquillo canino es una de las principales causas de muerte y eutanasia en perros (Greene, 2012). En los últimos años ha aumentado el número de contagios y muertes ocasionadas por el virus del moquillo. En 2021 se reportó en Montevideo, Uruguay un estudio en el que cuatro caninos de diferente edad, sexo y raza vacunados contra distemper canino, con sintomatología clínica variable, fallecieron entre 7 y 40 días post infección del sistema nervioso. El primer canino hacía referencia a una hembra de 3 meses de edad la cual había sido vacunada contra distemper con una vacuna atenuada. Después de 12 días de la vacunación presentó diarrea y fiebre seguido por secreciones nasales, hiperqueratosis plantar y signos neurológicos (ataxia y paresia). El segundo canino era un criollo de 3 meses de edad el cual se encontraba vacunado con una inmunización inicial seguido en un refuerzo a los 21 días, poco después desarrollo sintomatología clínica y falleció. El tercer canino de 24 meses de edad había sido vacunado anualmente después de la secuencia inicial de la vacuna y poco tiempo después desarrollo disnea, secreción mucopurulenta, tos, hiperqueratosis y finalizó con mioclonías y paresia. El ultimo canino del estudio fue un labrador de 5 años el cual había sido vacunado anualmente hasta DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 25 los 3 años y 2 años después presentó diarrea, vómitos e hiperqueratosis nasal (Feijóo et al., 2021). Esto podría deberse a la existencia de caninos sin vacunar o vacunados con bajos títulos de anticuerpos, caninos menores a cuatro meses quienes son más susceptibles al contagio, ya sea por portadores asintomáticos o enfermos que diseminan las partículas virales por medio de secreciones y excreciones. Para explicar lo anterior se han planteado dos posibles hipótesis, la primera, un inadecuado protocolo de vacunación en el cual no se generan respuestas inmunes de manera eficiente debido a que no se tiene en cuenta variables como la edad, el tipo de vacuna a aplicar y un buen estado clínico en el animal, entre otros, se deben tener en cuenta los fallos relacionados con la vacuna como no respetar su almacenamiento, la cadena de frio y no mezclar productos del mismo fabricante o diferentes en la misma jeringa. La segunda hipótesis se relaciona a una posible alteración del genoma viral en la cual las vacunas no sean protectivas para la cepa circulante como se ha reportado en otros trabajos (Céspedes et al., 2010). Por lo tanto, al determinar la cantidad de anticuerpos presentes en los animales mediante pruebas como el ELISA indirecta se podrá determinar la respuesta inmunológica por los títulos de anticuerpos del animal. Lo anterior permitiría ajustar protocolos de vacunación especifica e identificar cuales caninos son susceptibles a presentar dicha enfermedad (Del Puerto et al., 2010). Lo anterior con el fin de disminuir la trasmisión, la alta incidencia y la exposición de los caninos a posibles contagios. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 26 Objetivos Objetivo General Determinar los títulos de anticuerpos anti-moquillo en caninos de Bucaramanga y su área metropolitana. Objetivos Específicos Cuantificar la presencia de anticuerpos anti-moquillo en el suero de caninos vacunados. Establecer asociaciones entre variablesdemográficas y de manejo con los títulos de anticuerpos IgG e IgM anti-moquillo. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 27 Metodología Tipo de Estudio Se realizó un estudio descriptivo, de corte transversal en la ciudad de Bucaramanga y su área metropolitana (Piedecuesta- Floridablanca) en el departamento de Santander, del año 2022. Población y Muestra Se realizó un muestreo a conveniencia y al azar que incluyó a 92 caninos mayores a seis meses de edad de Bucaramanga y su área metropolitana, con historia de vacunación de distemper canino y sin antecedentes de la enfermedad del moquillo a los cuales se les realizó toma de sangre. Los caninos incluidos en el estudio fueron pacientes del Centro de Salud Veterinario, Impacto Animal, Clínica Veterinaria los Perritos y la clínica Veterinaria de Pequeños Animales UDES. Los propietarios fueron informados acerca del estudio, se explicó que la toma de muestra de sangre no causaría ninguna molestia, aparte de una ligera punción al canino. Posteriormente se diligenció el consentimiento informado por parte del propietario confirmando la participación del canino en el estudio. Se tomaron 5 ml de sangre de la vena cefálica o safena de los caninos con tubo sin anticoagulante, posterior a la toma de muestras, estas se dejaron aproximadamente 40 minutos a temperatura ambiente con el fin de promover la formación del coágulo. Las muestras fueron transportadas al laboratorio de la clínica Veterinaria de Pequeños Animales UDES en neveras portátiles a una temperatura de 4°C para ser centrifugadas en él a 3500 RPM durante 10 minutos en la centrífuga dinámica D-04 (Indulab®, Medellín, Colombia) para la obtención del suero. Este se obtuvo por medio de pipetas Pasteur desechables, las muestras fueron almacenadas a -20 °C en tubos de microcentrífuga de 1,5 – 2 ml para ser analizadas posteriormente. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 28 La recolección de la información para realizar la asociación de variables poblacionales con los títulos de anticuerpos anti-moquillo se realizó mediante una encuesta que fue tramitada por los propietarios a través de Google forms “Determinación de títulos de anticuerpos anti- moquillo en caninos de Bucaramanga y su área metropolitana” https://docs.google.com/forms/d/e/1FAIpQLSczDCyAEpG2nIc5O5kq_5jCL1kLajn7QnBMP9_ ClD66qzYoA/viewform. Esta incluía variables tales como: origen de la muestra, raza (puro- criollo), edad (mayor a seis meses, mayor a un año, mayor a siete años), talla (grande, mediano, pequeño), historia de vacunación contra moquillo (plan vacunal con refuerzo-sin refuerzo), historial del moquillo, origen del paciente, sexo, condición corporal y convivencia con otros caninos. Determinación Títulos de Anticuerpos Anti-Moquillo IgG La determinación de los títulos de anticuerpos anti-moquillo se realizó por medio de una inmunoabsorción ligado a enzimas ELISA indirecto Prod. Ref. 15.CDG.K1 de la marca Ingezim® Moquillo IgG el cual estaba compuesto por placas de poliestireno de 96 pocillos con antígenos , suero de control positivo, suero de control negativo, conjugado de peroxidasa (anti IgG canina peroxidasa), frascos de solución de lavado, frascos de diluyente, frascos de contenido sustrato y frascos de solución de frenado. Según las indicaciones del proveedor los componentes incluidos en el kit se mantuvieron a temperatura ambiente una hora antes de comenzar el ensayo. Se inició haciendo la preparación de las muestras en una dilución 1/100, es decir, se añadieron 3 l de suero a 300 l de diluyente para posteriormente añadir 100 l de las muestras diluidas en las placas (pocillos) según las indicaciones del proveedor y obtener una reacción de unión antígeno-anticuerpo especifico. Las muestras debían cubrirse e incubarse durante diez minutos a temperatura ambiente para luego ser lavadas cuatro veces con solución de lavado. A https://docs.google.com/forms/d/e/1FAIpQLSczDCyAEpG2nIc5O5kq_5jCL1kLajn7QnBMP9_ClD66qzYoA/viewform https://docs.google.com/forms/d/e/1FAIpQLSczDCyAEpG2nIc5O5kq_5jCL1kLajn7QnBMP9_ClD66qzYoA/viewform DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 29 continuación, se debía añadir 100 l de conjugado a cada pocillo e incubar durante diez minutos a temperatura ambiente para repetir el procedimiento de lavado cuatro veces. Seguidamente se agregaron 100 l de sustrato en cada pocillo y se mantuvo la reacción durante 5 minutos a temperatura ambiente con el fin de generar una oxidación. Para finalizar, se agregó la solución de frenado para detener la oxidación y realizar la lectura de la placa en lector de absorbancia Bio-Rad® iMark™ a 450 nanómetros de longitud de onda en los siguientes cinco minutos. Determinación Títulos de Anticuerpos Anti-Moquillo IgM La determinación de los títulos de anticuerpos anti-moquillo se realizó por medio de una inmunoabsorción ligado a enzimas ELISA indirecto Prod. Ref. 15.CDG.K2 de la marca Ingezim® Moquillo IgM el cual estaba compuesto por placas de 96 pocillos antigenadas con Anticuerpos Monoclonales (ACM), suero de control positivo, suero de control negativo, conjugado de peroxidasa, frascos de sustrato tetrametilbencidina (TMB), frascos de solución de lavado, frascos de diluyente, vial con antígeno recombinante y frascos de solución de frenado. Según las indicaciones del proveedor los componentes incluidos en el kit se debían mantener a temperatura ambiente una hora antes de comenzar. Se inició haciendo la preparación de las muestras con una dilución 1/100, es decir, se añadieron 3 l de suero a 300 l de diluyente para posteriormente añadir 100 l de las muestras diluidas en las placas (pocillos) según las indicaciones del proveedor. Las muestras debían cubrirse e incubarse durante quince minutos a una temperatura de 37 °C para luego ser lavadas cuatro veces con solución de lavado. A continuación, se debían añadir 100 l del antígeno previamente preparado a cada pocillo e incubar durante quince minutos a 37 °C para repetir el procedimiento de lavado cuatro veces. Seguidamente se agregaron 100 l de sustrato en cada pocillo y se mantuvo la reacción durante 5 minutos a temperatura ambiente con el fin de generar una oxidación. Para finalizar se agregó la DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 30 solución de frenado para detener la oxidación y realizar la lectura de la placa en lector de absorbancia Bio-Rad® iMark™ a 450 nanómetros de longitud de onda en los siguientes cinco minutos. Análisis Estadístico La información fue registrada en una hoja de cálculo del programa Microsoft® Excel® (2016) junto con los datos obtenidos de la titulación de anticuerpos por la prueba ELISA indirecta. Análisis Para la Determinación de Títulos de Anticuerpos IgG Los títulos de anticuerpos anti-moquillo se clasificaron en altos, medios o bajos de acuerdo con la absorbancia. Se consideraron controles positivos los resultados con absorbancia a 450 nm >1 y negativos con abs a 450 nm < 0,2. El punto de corte (Cut off) fue determinado por medio de la absorbancia del control positivo x 0,2 y según este fueron consideradas positivas aquellas muestras cuando la Abs a 450 nm fue > al cut off y negativas a las que la abs a 450 nm fue < o igual al cut off. Los títulos que presentaron una absorbancia entre los siguientes parámetros fueron considerados títulos de anticuerpos bajos: 0,2 x Abs control positivo y 0,4 x Abs control positivo. Los títulos que presentaron una absorbancia entre los siguientes parámetros fueron considerados títulos de anticuerpos medios: 0,4 x Abs control positivo y 0,8 x Abs control positivo. Los títulos que presentaron una absorbancia entre los siguientes parámetros fueron considerados títulos de anticuerpos altos: > 0,8 x Abs control positivo.DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 31 Análisis Para la Determinación de Títulos de Anticuerpos IgM Los títulos de anticuerpos anti-moquillo se clasificaron en altos y medios/bajos de acuerdo con la absorbancia. Se consideraron controles positivos los resultados con absorbancia a 450 nm >0,8 y negativos con abs a 450 nm < 0,15. El punto de corte (Cut off) fue determinado por medio de la absorbancia del control positivo x 0,2 y según este fueron consideradas positivas aquellas muestras cuando la Abs a 450 nm fue > al cut off y negativas a las que la abs a 450 nm fue < o igual al cut off. Los títulos que presentaron una absorbancia entre los siguientes parámetros fueron considerados títulos de anticuerpos bajos/medios 0,2 x Abs control positivo y 0,7 x Abs control positivo. Los títulos que presentaron una absorbancia entre los siguientes parámetros fueron considerados títulos de anticuerpos altos: > 0,7 x Abs control positivo. Análisis Estadístico Para la Determinación de Asociaciones La información obtenida de las encuestas epidemiológicas se analizó con los resultados obtenidos de la prueba ELISA indirecta con el fin de determinar asociaciones entre las variables y los títulos de anticuerpos. Lo anterior mediante la prueba chi-cuadrado (X2) y la utilización del programa estadístico SPSS® (IMB®, v.21.0). Consideraciones Éticas El presente estudio no atentó contra la vida o bienestar de los caninos participantes, ni generó un riesgo en el animal, sin embargo, se realizó una leve punción que puede generar una pequeña molestia en el perro, esta se realizó con medidas óptimas de bioseguridad para evitar una posible infección o riesgo asociado. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 32 Este trabajo se realizó bajo lo estipulado en la Resolución 8430 de 1993 “Por la cual se establecen las normas científicas, técnicas y administrativas para la investigación en salud” y la Ley 576 del 2000 “Por la cual se expide el Código de Ética para el ejercicio profesional de la medicina veterinaria y la zootecnia”. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 34 Resultados Descripción Poblacional de los Caninos Muestreados Con el fin de determinar y cuantificar los títulos de anticuerpos anti-moquillo en Bucaramanga y su área metropolitana y establecer variables poblacionales y de manejo, se muestrearon 92 caninos a los cuales se les realizó un ELISA indirecto para IgG e IgM. De los 92 caninos muestreados, 24/92 (26.1%) residían en Bucaramanga, 22/92 (23,9%) residían en Floridablanca y 46/92 (50%) residían en Piedecuesta. Tabla 1 Variables Poblacionales de Caninos Muestreados en Bucaramanga y su Área Metropolitana Variable No. Evaluados Porcentaje Origen de las muestras Bucaramanga 24 (26%) Floridablanca Piedecuesta 22 46 (24%) (50%) Raza Pura 48 (52%) Criollo 44 (48%) Edad Mayor a 6 meses 9 (9%) Mayor a 1 año 54 (59%) Mayor a 7 años 29 (32%) Talla del canino Grande 28 (30%) Mediano 44 (48%) Pequeño 20 (22%) Plan vacunal Con refuerzo Sin refuerzo 49 43 (53%) (47%) Sexo Macho Hembra 45 47 (49%) (51%) Condición corporal 1 2 3 4 5 0 10 56 21 5 (0%) (11%) (61%) (23%) (5%) Convivencia con otros caninos Si No 47 45 (51%) (49%) Origen del paciente Casa Calle Albergue 92 0 0 (100%) (0%) (0%) Frecuenta lugares con varios caninos Parques Guarderías Otros Ninguno 31 6 38 17 (34%) (7%) (41%) (18%) DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 35 Fueron determinadas las variables poblacionales de los caninos muestreados respecto a la raza, de la cual se obtuvo un total de 48/92 (52%) de raza pura y 44/92 (48%) criollos. La edad se categorizó en de tres grupos: caninos mayores a 6 meses, caninos mayores a 1 año y caninos mayores a 7 años, los resultados obtenidos fueron 9/92 (9%), 54/92 (59%) y 29/92 (32%) respectivamente. La talla de los caninos se dividió en tres grupos: caninos grandes 28/92 (30%), caninos medianos 44/92 (48%) y caninos pequeños 20/92 (22%). El plan vacunal fue clasificado por medio de la vacunación con refuerzo anual 49/92 (53%) y sin refuerzo anual 43/92 (47%). De los 92 caninos muestreados aleatoriamente 45 (49%) fueron machos y 47 (51%) hembras. La condición corporal se clasificó de 1 a 5 con los siguientes resultados fueron 0/92 (0%), 10/92 (11%), 56/92 (61%), 21/92 (23%) y 5/92 (5%) respectivamente. La convivencia con otros caninos fue reportada según el número de caninos de la misma casa, de los cuales 47/92 (51%) vivían con otros caninos y 45/92 (49%) no vivían con otros caninos. Todos los caninos del presente estudio presentaron un origen de casa 92/92 (100%). La frecuencia en lugares con varios caninos se determinó según si el caninos compartía en parques, guarderías, otros o si no salía de casa (ninguno), los resultados obtenidos fueron 31/92 (34%), 6/92 (7%), 38/92 (41%) y 17/92 (18%) respectivamente. (Tabla 1.). Determinación de Anticuerpos por IgG Los anticuerpos fueron determinados por medio de la prueba ELISA, de acuerdo con las indicaciones del kit, dando como resultado tres niveles títulos de anticuerpos altos, medios y bajos. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 36 Tabla 2 Determinación de Títulos de Anticuerpos Anti-Moquillo IgG en Caninos de Bucaramanga y su Área Metropolitana Variable Títulos de Anticuerpos IgG altos Títulos de Anticuerpos IgG medios Títulos de Anticuerpos IgG bajos Bucaramanga 3 (3%) 15 (17%) 6 (6%) Floridablanca 5 (6%) 16 (17%) 1 (1%) Piedecuesta 20 (22%) 24 (26%) 2 (2%) Total 28 (31%) 55 (60%) 9 (9%) De los 92 caninos muestreados en Bucaramanga y su área metropolitana se determinó que, 28/92 (31%) caninos presentan títulos de anticuerpos altos IgG, estos se encuentran divididos por ciudades de los cuales en Bucaramanga se obtuvo un resultado de 3/92 (3%), en Floridablanca se obtuvo un resultado de 5/92 (6%) y en Piedecuesta se obtuvo un resultado de 20/92 (22%). Los caninos que presentaron títulos de anticuerpos IgG medios corresponden a 55/92 (60%) de los cuales 15/92 (17%) hacen referencia a Bucaramanga, 16/92 (17%) hacen referencia a Floridablanca y 24/92 (26%) hacen referencia a Piedecuesta. Los títulos de anticuerpos IgG bajos reportaron un total de 9/92 (9%) caninos, de los cuales 6/92 (6%) provenían de Bucaramanga, 1/92 (1%) provenía de Floridablanca y 2/92 (2%) provenía de Piedecuesta. (Tabla 2). Los resultados anteriores demuestran que la mayoría de la población presenta títulos de anticuerpos IgG medios. Determinación de Anticuerpos por IgM Los anticuerpos fueron determinados por medio de la prueba ELISA, de acuerdo con las indicaciones del kit, dando como resultado dos categorías (altas y medias/bajas). DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 37 Tabla 3 Determinación de Títulos de Anticuerpos Anti-Moquillo IgM en Caninos de Bucaramanga y su Área Metropolitana Variable Títulos de Anticuerpos IgM altos Títulos de Anticuerpos IgM medios/bajos Bucaramanga 21 (23%) 3 (3%) Floridablanca 21 (23%) 1 (1%) Piedecuesta 37 (40%) 9 (10%) Total 79 (86%) 13 (14%) Se determinó que, con un total de 79/92 (86%) caninos con títulos de anticuerpos IgM altos y con un total de 13/92 (14%) medios/bajos en Bucaramanga y su área metropolitana. Los títulos altos IgM correspondieron a 21/92 (23%) caninos en Bucaramanga, 21/92 (23%) caninos en Floridablanca y 37/92 (40%) caninos en Piedecuesta. Los títulos medios/bajos de IgM correspondieron a 3/92 (3%) caninos en Bucaramanga, 1/92 (1%) caninos en Floridablanca y 9/92 (10%) caninos en Piedecuesta. Los resultados anteriores demuestran que lamayora de la población presentaba títulos de anticuerpos IgM altos. (Tabla 3.) Asociación de Variables Poblacionales con Títulos de Anticuerpos IgG Tabla 4 Asociación de Variables Poblacionales con Títulos de Anticuerpos IgG y Chi Cuadrado (Χ2) Variable Nro. de caninos con Títulos de Anticuerpos IgG altos / (Chi cuadrado) Nro. de caninos con Títulos de Anticuerpos IgG medios / (Chi cuadrado) Nro. de caninos con Títulos de Anticuerpos IgG bajos / (Chi cuadrado) Valor P Raza Pura 13 (0.18) 32 (0.38) 3 (0.61) 0.29 Criollo 15 (0.19) 23 (0.42) 6 (0.67) Edad Mayor a 6 meses 4 (0.61) 3 (1.01) 2 (1.10) 0.01 Mayor a 1 año 10 (2.79)* 39 (1.04) 7 (0.16) Mayor a 7 años 14 (3.68)* 13 (0.76) DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 38 Tabla 4 (Continuación) Variable Nro. de caninos con Títulos de Anticuerpos IgG altos / (Chi cuadrado) Nro. de caninos con Títulos de Anticuerpos IgG medios / (Chi cuadrado) Nro. de caninos con Títulos de Anticuerpos IgG bajos / (Chi cuadrado) Valor P Talla del canino Grande 8 (0.03) 18 (0.09) 2 (0.20) 0.79 Mediano 13 (0.01) 25 (0.06) 6 (0.67) Pequeño 7 (0.14) 12 (0.00) 1 (0.47) Plan vacunal Con refuerzo Sin refuerzo 23 (4.39)* 5 (5.00)* 23 (1.35) 32 (1.54) 3 (0.67 6 (0.76) 0.001 Sexo Macho Hembra 13 (0.04) 15 (0.03) 30 (0.36) 25 (0.34) 2 (1.31) 7 (1.26) 0.18 Condición corporal 2 3 4 5 6 (2.87) 14 (0.54) 7 (0.06) 1 (0.18) 3 (1.48) 36 (0.19) 13 (0.02) 3 (0.00) 1 (0.00) 6 (0.05) 1 (0.54) 1 (0.53) 0.37 Convivencia con otros caninos Si No 15 (0.03) 13 (0.04) 29 (0.03) 26 (0.03) 3 (0.56) 6 (0.58) 0.53 Frecuenta lugares con varios caninos Parques Guarderí as Otros Ninguno 7 (0.63) 2 (0.02) 14 (0.51) 5 (0.01) 19 (0.01) 3 (0.10) 23 (1.99) 10 (0.07) 5 (1.28) 1 (0.29) 1 (1.99) 2 (0.07) 0.55 Nota. *: Significancia estadística P<0.05 Del análisis de asociación de los títulos de anticuerpos con las variables poblacionales se determinó que: según la variable raza, la cual fue dividida en dos grupos: caninos puros (48) y caninos criollos (44), se obtuvo un resultado de 13/48 y 15/44 caninos, respectivamente presentando títulos de anticuerpos altos IgG, 32/48 caninos de raza pura y 23/44 caninos de raza criolla presentando títulos de anticuerpos medios IgG y 3/48 caninos de raza pura y 6/44 caninos de raza criolla presentando títulos de anticuerpos bajos IgG. Al realizar el chi cuadrado se determinó que no hay asociación estadística entre los valores y los títulos de anticuerpos, dado que estos se encontraban menores a 1 y no presentaron valores P menores a 0.05. En cuanto a la variable edad, los caninos fueron divididos en tres grupos: mayores a 6 meses (9), mayores a 1 año (54) y mayores a 7 años (29), de los cuales se evidenció un resultado de títulos de anticuerpos altos IgG 4/9, 10/54 Y 14/29 respectivamente. Los títulos de DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 39 anticuerpos medios IgG determinaron un resultado de 3/9, 39/54 y 13/29 respectivamente y los títulos de anticuerpos bajos IgG evidenciaron un resultado de 2/9 y 7/54 respectivamente. No fueron observados títulos de anticuerpos bajos IgG en caninos mayores a 7 años. El chi cuadrado determinó 2,79 mayor probabilidad de los caninos mayores a 1 año en desarrollar títulos de anticuerpos altos y 3,68 mayor probabilidad de los caninos mayores a 7 años de desarrollar títulos de anticuerpos altos debido a que tienen significancia estadística y su valor P es menor a 0,05. Según la talla del canino, fueron divididos en tres grupos: grandes (28), medianos (44) y pequeños (20), de los cuales los resultados fueron 8/28 caninos de raza grandes presentaron títulos de anticuerpos altos, 18/28 caninos presentaron títulos de anticuerpos medios y 2/28 caninos presentaron títulos de anticuerpos bajos. Posteriormente 13/44 caninos de raza mediana presentaron títulos de anticuerpos altos, 25/44 caninos de raza media presentaron títulos medios y 6/44 caninos presentaron títulos bajos. También 7/20 caninos de raza pequeña presentaron títulos altos, 12/20 caninos de raza pequeña presentaron títulos medios y 1/20 caninos de raza pequeña presentaron títulos altos IgG. El chi cuadrado determinó que no hay asociación estadística debido a que el valor P es mayor a 0,05. La variable del plan vacunal se determinó por medio de dos grupos: caninos con refuerzo anual (49) y caninos sin refuerzo anual (43) de las cuales se obtuvo como resultado 23/49 caninos con refuerzo con títulos de anticuerpos altos, 23/49 caninos con títulos de anticuerpos medios y 3/49 caninos con títulos de anticuerpos bajos. Los caninos sin refuerzo anual reportaron un resultado de 5/43 con títulos altos, 32/43 con títulos medios y 6/43 con títulos bajos. En la prueba chi cuadrado se determinó una asociación estadística entre los valores y títulos de anticuerpos bastante significativa debido al valor P es menor a 0,05. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 40 Según la variable sexo se determinó que, los machos (45) presentaron títulos de anticuerpos altos 13/45, 30/45 presentaron títulos medios y 2/45 presentaron títulos bajos, las hembras (47) representaron 15/47 títulos altos, 25/47 títulos medios y 7/47 títulos bajos. Al realizar la prueba chi cuadrado no se encontró significancia estadística entres los valores y los títulos de anticuerpos. La condición corporal fue dividida en 4 grupos: 2 (10), 3 (56), 4 (21) y 5 (5). Los caninos de condición corporal 2 presentaron 6/10 títulos de anticuerpos altos, 3/10 títulos de anticuerpos medios y 1/10 títulos de anticuerpos bajos. Los caninos con condición corporal 3 presentaron 14/56 títulos de anticuerpos altos, 36/56 títulos de anticuerpos medios y 6/56 títulos de anticuerpos bajos. Los caninos con condición corporal 4 presentaron 7/21 títulos de anticuerpos altos, 13/21 títulos de anticuerpos medios y 1/21 títulos de anticuerpos bajos. Los caninos con condición corporal 5 presentaron 1/5 títulos de anticuerpos altos, 3/5 títulos de anticuerpos medios y 1/5 títulos de anticuerpos bajos. La prueba chi cuadrado evidenció que la condición corporal 2 tiene correlación estadística con altos títulos de anticuerpos, sin embargo, la correlación no es estadísticamente significativa debido al valor P mayor a 0.05. De los 92 caninos encuestados 47/92 convivían con otros caninos y 45/92 no convivían con otros caninos, es decir que, 15/47 caninos presentaron títulos de anticuerpos altos, 29/47 caninos presentaron títulos de anticuerpos medios y 3/47 presentaban títulos de anticuerpos bajos. Sin embargo, 13/45 caninos presentaron títulos de anticuerpos altos, 26/45 caninos presentaban títulos de anticuerpos medios y 6/45 caninos presentaban títulos de anticuerpos bajos. Al realizar la prueba chi cuadrado no se encontró significancia estadística entres los valores y los títulos de anticuerpos. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 41 La frecuencia de los caninos en lugares altamente poblacionales con otros caninos fue dividida en: parques (31), guarderías (6), otros (38) y ninguno (17), es decir, 7/31 caninos que frecuentan parques pertenecen a los títulos de anticuerpos altos, 19/31 pertenecen a los títulos de anticuerpos medios y 5/31 pertenecen a los títulos de anticuerpos bajos. Posteriormente 2/6 caninos que frecuentan guarderías pertenecen a los títulos de anticuerpos altos, 3/6 caninos pertenecen a los títulos de anticuerpos medios y 1/6 pertenece a los títulos de anticuerpos bajos. 14/38 caninos frecuentan lugares diferentes con títulos de anticuerpos altos, 23/38 frecuentan lugares diferentescon títulos de anticuerpos medios y 1/38 caninos frecuenta lugares diferentes con títulos de anticuerpos bajos. Para finalizar 17/92 caninos no frecuentan ningún lugar con otros caninos, de estos, 5/17 presentan títulos de anticuerpos altos, 10/17 presentan títulos de anticuerpos medios y 2/17 presentan títulos de anticuerpos bajos. La prueba chi cuadrado no evidenció significancia estadística entre los valores y los títulos de anticuerpos. En resumen, los análisis de asociación de las variables y niveles de anticuerpos determinaron que solamente las variables “edad” (en los rangos mayor a un año y mayor a 7 años) y “refuerzo anual” presentaron asociación estadística para niveles altos de IgG. Asociación de Variables Poblacionales con Títulos de Anticuerpos IgM Tabla 5 Asociación de Variables Poblacionales con Títulos de Anticuerpos IgM y Chi Cuadrado (Χ2) Variable Nro. de caninos con Títulos de Anticuerpos IGM altos / (Chi cuadrado) Nro. de caninos con Títulos de Anticuerpos IgM medios / bajos (Chi cuadrado) Valor P Raza Pura 40 (0.10) 8 (0.62) 0.21 Criollo 39 (0.12) 5 (0.71) Edad Mayor a 6 meses 8 (0.01) 1 (0.06) 0.95 Mayor a 1 año 46 (0.00) 8 (0.02) Mayor a 7 años 25 (0.00) 4 (0.00) DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 42 Tabla 5 (Continuación) Variable Nro. de caninos con Títulos de Anticuerpos IGM altos / (Chi cuadrado) Nro. de caninos con Títulos de Anticuerpos IgM medios / bajos (Chi cuadrado) Valor P Talla del canino Grande 23 (0.01) 5 (0.04) 0.68 Mediano 36 (0.02) 8 (0.10) Pequeño 18 (0.09) 2 (0.49) Plan vacunal Con refuerzo Sin refuerzo 45 (0.20) 34 (0.23) 4 (1.23) 9 (1.41) 0.17 Sexo Macho Hembra 41 (0.27) 38 (0.25) 4 (1.66) 9 (01.53) 0.51 Condición corporal 2 3 4 5 8 (0.01) 46 (0.09) 20 (0.21) 4 (0.00) 2 (0.06) 10 (0.55) 1 (1.30) 1 (0.30) 0.52 Convivencia con otros caninos Si No 42 (0.12) 36 (0.12) 5 (0.56) 9 (0.68) 0.21 Frecuenta lugares con varios caninos Parques Guarderías Otros Ninguno 28 (0.16) 5 (0.00) 29 (0.25) 15 (0.04) 3 (0.83) 1 (0.03) 9(1.27) 2 (0.21) 0.42 La asociación de las variables poblaciones y los títulos de anticuerpos IgM fueron clasificadas en altas, medias/bajas. La primera variable hace referencia a la raza pura (48) de las cuales 40/48 caninos presentan títulos de anticuerpos altos y 8/48 caninos presentan títulos de anticuerpos medios/bajos. Los caninos criollos (44) presentan 39/44 títulos de anticuerpos altos y 5/39 títulos de anticuerpos medios/bajos. La edad fue clasificada en tres grupos: caninos mayores a 6 meses (9), caninos mayores a 1 año (54) y caninos mayores a 7 años (29). De los caninos mayores a 6 meses 8/ 9 presentaron títulos de anticuerpos altos y 1/9 presentó títulos de anticuerpos medios/bajos. De los caninos mayores a 1 año 46/54 presentaron títulos de anticuerpos altos y 8/54 presentaron títulos de DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 43 anticuerpos medios/bajos. De los caninos mayores a 7 años 25/29 presentaron títulos de anticuerpos altos y 4/29 presentaron títulos de anticuerpos medios/bajos. La variable de la talla del canino se dividió en tres grupos: grande (28), mediano (44) y pequeño (20). De los caninos grandes 23/28 presentaron títulos de anticuerpos altos y 5/28 presentaron títulos de anticuerpos medios/bajos. De los caninos medianos 36/44 presentaron títulos de anticuerpos altos y 8/44 presentaron títulos de anticuerpos medio/bajos. De los caninos de raza pequeña 18/20 presentaron títulos de anticuerpos altos y 2/20 presentaron títulos de anticuerpos medios/bajos. El plan vacunal se determinó por medio del refuerzo anual de los caninos. De los caninos con refuerzo anual 45/49 presentaron títulos de anticuerpos altos y 4/49 presentaron títulos de anticuerpos medios/bajos. De los caninos sin refuerzo anual 34/43 presentaron títulos de anticuerpos altos y 9/43 presentaron títulos de anticuerpos medios/bajos. En la variable del sexo se determinaron que, de los 45 machos, 41/45 presentaron títulos de anticuerpos altos y 4/45 presentaron títulos de anticuerpos medios/bajos y de las 47 hembras, 38/47 presentaron títulos de anticuerpos medios/bajos. La condición corporal se dividió en cuatro grupos; de los caninos bajos de peso 8/10 presentaron títulos de anticuerpos altos y 2/10 presentaron títulos de anticuerpos medios/bajos. Los caninos con peso óptimo 46/56 presentaron títulos de anticuerpos altos y 10/56 presentaron títulos de anticuerpos medios/bajos. Los caninos con sobrepeso 20/21 presentaron títulos de anticuerpos altos y 1/21 presentó títulos de anticuerpos medios/bajos. Los caninos con obesidad 4/5 presentaron títulos de anticuerpos altos y 1/5 presentó títulos de anticuerpos medios/bajos. Los caninos fueron evaluados según la convivencia con otros caninos, de aquellos que convivían con otros 42/47 presentaron títulos de anticuerpos altos y 5/47 presentaron títulos de DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 44 anticuerpos medios/bajos. Los caninos que no convivían con otros presentaron 36/45 títulos de anticuerpos altos y 9/45 presentaron títulos de anticuerpos medios/bajos. Según la frecuencia en que los caninos salían a lugares públicos se dividió en diferentes lugares: parques (31), guarderías (6), otros (38) y ninguno (17). Los caninos que frecuentan parques presentaron 28/33 títulos de anticuerpos altos y 3/33 títulos de anticuerpos medios/bajos. Los caninos que frecuentan guarderías 5/6 presentaron títulos de anticuerpos altos y 1/6 presentó títulos de anticuerpos medios/bajos. Los caninos que frecuentan otros lugares públicos presentaron 29/38 títulos de anticuerpos altos y 9/38 presentaron títulos de anticuerpos medios/bajos. Los caninos que no salían de sus casas presentaron 15/17 títulos de anticuerpos altos y 2/17 títulos de anticuerpos medios/bajos. Del análisis de asociación usando la prueba chi cuadrado se concluyó que ninguna de las variables presentaba asociaciones estadísticas con los niveles de IgM. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 45 Discusión De los 92 caninos muestreados se determinó que, el 31% de los caninos presentaron títulos de anticuerpos IgG altos en Bucaramanga y su área metropolitana, el 60% de los caninos presentaron títulos de anticuerpos IgG medios y el 9% presentaron títulos de anticuerpos bajos IgG. En otros estudios similares se reportan las variadas respuestas inmunes de los caninos representadas en la producción de títulos de anticuerpos. En un estudio en Israel, se determinaron los títulos de anticuerpos IgG en 158 caninos vacunados en un periodo menor a un año, de los cuales, el 84% presentaron títulos de anticuerpos protectivos, el 11% de los caninos presentaban títulos de anticuerpos medios y el 5% presentaban títulos de anticuerpos bajos (Waner et al., 2006). En un estudio en Estados unidos fueron evaluados los 117 caninos que ingresaban a un hospital para la revacunación, de los cuales, se agruparon por edad, raza y peso, se determinó que, el 21% de los caninos no presentaron títulos de anticuerpos óptimos y en cuanto a las variables poblacionales no fueron significativas con los títulos altos, medios o bajos (McCaw et al., 1998). En Alemania se reportó un estudio en el cual se evaluaron 198 caninos para determinar los títulos de anticuerpos protectivos en animales sanos, del cual, se obtuvo como resultado 80% de los caninos con títulos de anticuerpos protectivos (Bergmann et al., 2021). En otro estudio en Estado unidos, se reportó la titulación de anticuerpos en 102 caninos provenientes de dosalbergues debido a un reporte en el cual el 64,5% de los caninos que ingresaban a los refugios presentaban títulos de anticuerpos insuficientes contra el distemper canino (Lechner et al., 2010). En el primer refugio ubicado en Chicago, con un total de 51 caninos entre los 4 y 24 meses los cuales habían sido vacunados después de las primeras 24 horas de ingreso al refugio. Las edades fueron seleccionadas con el fin de que los anticuerpos maternales no influyeran en los resultados del estudio. El segundo refugio ubicado en el estado DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 46 de indiana con 51 caninos menores a 4 meses sin antecedentes conocidos de vacunación con el fin de incluir caninos sanos sin anticuerpos presentes. En los dos refugios se adjuntaron algunas variables poblacionales como raza, sexo y el origen del canino. Posteriormente se realizó la prueba ELISA para determinar los títulos de anticuerpos anti-moquillo en el día 1 y aquellos que presentaron títulos insuficientes fueron analizados de nuevo en los días 13 a 15. Los resultados demostraron que en el primer refugio antes de la primera inmunización el 37,3% de los caninos se encontraba con títulos de anticuerpos óptimos y en el segundo refugio 41,2% presentaban títulos de anticuerpos protectivos. Entre los 13 y 15 días la gran mayoría de los caninos presentaban títulos de anticuerpos protectivos, en el primer refugio con 93,8% y el segundo refugio 97,8% (Litster et al., 2012). Lechner reportó un estudio en el cual evaluó los títulos de anticuerpos de caninos que ingresaron a un refugio con brotes intermitentes de distemper y parvovirosis, la edad de estos oscilaba entre 2 meses y 14 años. Se recolectó información de variables poblacionales como edad, sexo, origen, animal entero o esterilizado y el estado de salud, los cuales fueron divididos en 4 grupos. En el primer grupos se incluyeron 431 caninos de los cuales se determinó un total del (64,5%) en los cuales los caninos no presentaban títulos de anticuerpos protectores contra distemper ni parvovirosis al momento de ingresar al refugio canino y con un total del (35,5%) de los caninos que presentaban títulos óptimos de anticuerpos al momento de ingresar al refugio. En el segundo grupo se incluyeron 33 caninos los cuales presentaban títulos de anticuerpos óptimos para distemper, pero no para parvovirosis. En el tercer grupo se incluyeron 136 caninos que presentaban títulos de anticuerpos óptimos para parvovirosis, pero insuficientes para distemper y en el último grupo se incluyeron 109 caninos los cuales no presentaron títulos de anticuerpos para ninguna enfermedad de los cuales 81 caninos tenían menos de 1 año. DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 47 Los caninos con títulos de anticuerpos anti-moquillo altos, están relacionados con aquellos caninos que ingresaron al refugio y fueron reclamados por sus propietarios, aquellos que se encontraban esterilizados y los caninos de mayor edad, ya que solamente el 8,9% de los caninos menores a 1 año tenían títulos de anticuerpos óptimos en comparación con los caninos mayores a 2 años los cuales presentaban el 62,1% de títulos suficientes (Lechner et al., 2010). Nuestro trabajo y los anteriormente citados demuestran que la población canina presenta una variabilidad en la respuesta inmune, posterior a la vacunación considerando que el virus del moquillo es altamente contagioso, los animales con niveles de anticuerpos medios o bajos podrían diseminar el virus y permitir la circulación de este en el medio ambiente. En el presente estudio se determinó una significancia estadística entre las variables (edad- refuerzo vacunal) y los títulos de anticuerpos IgG altos debido a que los caninos mayores a 1 año y 7 años presentaron mayor probabilidad de tener títulos de anticuerpos altos y los caninos de menor edad tienden a presentar menor cantidad de títulos de anticuerpos, posiblemente debido a la demora de la caída de los anticuerpos maternales, lo cual concuerda con otros estudios que evidencian que los caninos jóvenes tienen mayor probabilidad de carecer de anticuerpos protectivos (Bergmann et al., 2021). El plan vacunal manifestó una asociación estadística bastante significativa debido a que los caninos que se encontraban con refuerzo anual presentaron mayor probabilidad de tener títulos de anticuerpos altos, sin embargo, los caninos que no presentaban refuerzo vacunal anual también manifestaron altos títulos de anticuerpos IgG, lo cual concuerda con un estudio en la ciudad de la Habana en el cual los caninos sin refuerzo vacunal y con acceso a la calle generan una alta circulación del virus, por lo tanto, van a presentar una alta respuesta inmune a este (Álvarez et al., 2006). En otro estudio en Estados unidos se reportaron 55 caninos los cuales habían sido vacunados previamente al ingreso a una DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 48 unidad de cuidados intensivos y posteriormente se les realizó una medición de los títulos de anticuerpos anti-moquillo, de los cuales 40 fueron seronegativos a los títulos de anticuerpos (Mahon et al., 2017). No se evidenció significancia estadística en demás variables, sin embargo en otro estudio en Estados unidos se reporta mayor prevalencia de títulos de anticuerpos anti- moquillo en caninos que se encuentran esterilizados (Lechner et al., 2010). Posteriormente en el presente estudio, fueron evaluados los títulos de anticuerpos IgM en los cuales se obtuvo un resultado del 86% de los caninos con títulos de anticuerpos altos y el 14% de los caninos con títulos de anticuerpos medios/bajos. Aunque se espera que la respuesta de la inmunoglobulina M decaiga con el tiempo e inclusive no sea evidenciable en este trabajo se encontró que esta estaba en valores altos, lo cual implica una mejor respuesta inmune. Lo anterior se correlaciona con un estudio realizado en Manizales, Colombia, en el cual fueron determinados los títulos de anticuerpos IgM en 84 caninos que no presentaban vacunación y presentaban sintomatología clínica de la enfermedad, de los cuales, 47 (55,9%) de los caninos presentaban títulos de anticuerpos IgM (Linares-Villalba et al., 2010). De una manera especulativa podríamos explicar la alta presencia de anticuerpos IgM debido a un desafío constante de los animales según la exposición al virus, esto se podría explicar también por el alto porcentaje de caninos que se encuentran en parques o guarderías en la cual hay una alta exposición al virus y en donde no se toman medidas de desinfección. En este trabajo encontramos que la vacunación si presenta títulos de anticuerpos altos (31%) IgG y (86%) IgM los cuales pueden ser protectivos contra la enfermedad, lo que indica, que hay una situación de protección, sin embargo, se presentan brotes de moquillo en aquellos caninos con un compromiso inmunológico y de manera especulativa se podría pensar en las DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 49 variantes del virus, tal como se reporta en Colombia en donde se encontraron variantes recientes (Duque-Valencia et al., 2019). DETERMINACIÓN DE TÍTULOS ANTICUERPOSANTI-MOQUILLO 50 Conclusiones Se determinó que, de los caninos muestreados, 24/92 (26%) residían en Bucaramanga, 22/92 (23,9%) residían en Floridablanca y 46/92 (50%) residían en Piedecuesta. Las variables poblacionales edad y refuerzo vacunal manifestaron asociaciones estadísticas bastante significativas con los títulos de anticuerpos altos IgG. Las demás variables poblacionales no presentaron ninguna asociación estadística significativa, a excepción de los caninos de condición corporal 2, los cuales son propensos a presentar mayor títulos de anticuerpos altos. De igual manera
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