Presentación cromatografía

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Cromatografía
Dr. Paul Vargas Jentzsch
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Introducción
• Cromatografía es una técnica de separación.
• El principio básico está basado en la concentración 
de equilibrio de los componentes de interés entre 
dos fases inmiscibles.
• Una fase es llamada la fase estacionaria, porque está 
inmovilizada dentro una columna o sobre un soporte 
fijo.
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Introducción
• La otra fase, llamada fase móvil, se fuerza a tráves de 
la fase estacionaria.
• La migración diferencial de los componentes resulta 
en su separación.
• La palabra "cromatografía" es derivada de dos 
palabras griegas, chroma que significa “color”, y 
grapho que significa “escribir” o “registrar”. Fue 
empleada originalmente con muestras coloreadas.
3
Introducción
Figura 1. Cromatografía de papel (fase estacionaria: papel; fase móvil: solventes, por ejemplo, 
agua, etanol, etc.) 4
Introducción
https://www.youtube.com/watch?v=CmHFVxTxkGs 5
Introducción
Figura 2. Cromatografía de columna (fase estacionaria: sólido empacado en una columna; fase 
móvil: solventes, por ejemplo, agua, etanol, etc.) 6
Introducción
Figura 3. Este proceso de arrastrar con la fase móvil varios constituyentes de la mezcla se llama 
elución 7
Principio del análisis cromatográfico
El cromatograma es el gráfico esencial de cualquier
análisis cromatográfico.
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Principio del análisis cromatográfico
Registro del cromatograma:
Figura 4. Registrador o 
integrador (en el pasado)
Figura 5. Computador
(en la actualidad) 9
• Un constituyente es caracterizado por su tiempo de 
retención (tR).
• El tiempo de retención representa el tiempo desde la 
inyección de la muestra hasta el máximo en el pico 
cromatográfico del constituyente en cuestión.
• En un cromatograma, el pico con una elución 
perfecta tendría la forma de una curva gaussiana 
con esa base es que se calculan las áreas de los picos.
Principio del análisis cromatográfico
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PLATOS TEÓRICOS
• Para simplificar el funcionamiento de una columna 
cromatográfica se supuso que esta estaba dividida en 
N partes de un largo L en las que se establecían 
equilibrios, de manera similar a los platos de una 
columna de destilación.
• Por eso, para referirse a la eficiencia de la separación 
de los constituyentes se suele referir a los “platos 
teóricos de la columna”.
Principio del análisis cromatográfico
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Clasificación de la cromatografía de acuerdo a la fase 
móvil:
• Cromatografía Líquida: La fase móvil es un líquido
• Cromatografía gaseosa (o de gases): La fase móvil es 
un gas
Clasificación de la cromatografía
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Clasificación de acuerdo a la disposición (o empaque) de 
la fase estacionaria:
• Cromatografía de capa fina, TLC (del inglés "thin-layer
chromatography"): La fase estacionaria es una capa 
delgada sobre placas de vidrio, plástico o aluminio
• Cromatografía de papel: La fase estacionaria es papel
• Cromatografía de columna: La fase estacionaria es un 
sólido adsorbente al interior de una columna vertical 
de vidrio
Clasificación de la cromatografía
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Clasificación de acuerdo a la fuerza de separación:
• Cromatografía de adsorción
• Cromatografía de partición
• Cromatografía de intercambio iónico
• Cromatografía de filtración en gel
• Cromatografía de afinidad
Clasificación de la cromatografía
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• Cromatografía líquida  HPLC
• La cromatografía líquida de alta eficacia o “high
performance liquid chromatography” (HPLC) es un 
tipo de cromatografía en columna utilizada 
frecuentemente en bioquímica y química analítica. 
Cromatografía líquida: HPLC
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Cromatografía líquida: HPLC
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COMPONENTES
• Bomba: Fuerza la fase móvil a través de la columna (1-
2 mL/min). Típicamente pueden alcanzarse presiones 
en el rango de 6000-9000 psi (400-600 bar). Durante 
la corrida cromatográfica, la bomba puede mandar 
una fase móvil con composición constante (isocrático) 
o con composición variable (gradiente). 
Cromatografía líquida: HPLC
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COMPONENTES (Cont.)
• Inyector: Permite introducir la muestra líquida en el 
flujo de fase móvil. Volúmenes típicos de muestra son 
5-20 µL. Actualmente, los equipos HPLC vienen 
equipados con automuestradores que permiten 
inyectar múltiples muestras de forma consecutiva y 
automática. 
Cromatografía líquida: HPLC
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COMPONENTES (Cont.)
• Columna: Es considerado el "corazón del 
cromatógrafo". Separa los componentes de interés de 
la muestra Las columnas analíticas tienen un diámetro 
de 1,0-4,6 mm y largo de 15-250 mm. El tamaño de 
partículas llega a ser tan bajo como 3,5 mm.
Cromatografía líquida: HPLC
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COMPONENTES (Cont.)
• Detector: Identifica las moléculas individuales que 
salen de la columna. Sirve para cuantificar los 
constituyentes a la salida de la columna. Típicamente 
se usa detectores UV y de fluorescencia.
• Computador: No solo controla los módulos del equipo 
HPLC, sino que también usa la señal del detector para 
obtener el tiempo de retención y permitir la 
cuantificación de los constituyentes. 
Cromatografía líquida: HPLC
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CROMATOGRAFÍA DE FASE NORMAL
• La fase estacionaria es polar y la fase móvil es un 
solvente no polar (deshidratado), por ejemplo, 
isooctano, diclorometano, metanol, acetonitrilo, etc. 
• La fase móvil también puede ser una mezcla de dos o 
tres solventes orgánicos.
• Sílica es la fase estacionaria más usada. 
Cromatografía líquida: HPLC
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CROMATOGRAFÍA DE FASE REVERSA
• En la cromatografía de fase reversa, las polaridades de 
la fase móvil y estacionaria son las opuestas que de la 
cromatografía de fase normal (fase estacionaria no 
polar y fase móvil polar).
• El material de empaque de las columnas es sílica
covalentemente modificada con grupos funcionales 
C18(octadecil) C8(octil), C6(hexil), etc. 
Cromatografía líquida: HPLC
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FASE NORMAL VS. FASE REVERSA
Cromatografía líquida: HPLC
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FASE NORMAL VS. FASE REVERSA
Cromatografía líquida: HPLC
Figura 6. Comparación del funcionamiento de la Fase Normal con la Fase Reversa 24
• IMPORTANTE: La muestra inyectada debe ser soluble 
en la fase móvil. Si hubiera dudas, debe comprobarse 
tal solubilidad antes de realizar la inyección. 
Cromatografía líquida: HPLC
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• En el año 2004, se lograron avances en 
instrumentación y columnas de cromatografía líquida, 
mismos que permitieron mejoras en la resolución, 
velocidad y sensibilidad.
• Se lograron columnas con partículas más pequeñas 
(1,7 mm) y instrumentos capaces de enviar la fase 
móvila presiones de 15000 psi (1000 bar)  ultra-
performance liquid chromatography (UPLC). 
Cromatografía líquida: UPLC
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• Respecto del HPLC, con el UPLC se logra:
– Mejores resoluciones (eficiencias de separación).
– Corridas más rápidas.
– Incremento en la sensibilidad debido a picos más 
estrechos y altos. 
Cromatografía líquida: UPLC
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Cromatografía líquida: UPLC
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Cromatografía líquida: UPLC
Figura 7. Comparación entre corridas con columnas UPLC y HPLC 29
Cromatografía de gases
Figura 8. Esquema de un sistema de cromatografía gaseosa 30
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Cromatografía de gases
Figura 9. Tamices moleculares para 
limpieza de gas portador
Figura 10. Generador de H2 Figura 11. Columna capilar para 
cromatografía gaseosa
COLUMNA
• La columna es donde se separan los constituyentes de 
la muestra.
• Las columnas pueden ser:
– Empacadas, o
– Capilares
• En la mayoría de las aplicaciones actuales, las 
columnas empacadas han sido reemplazadas por 
columnas capilares más eficientes y rápidas.
Cromatografía de gases
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Cromatografía de gases
Figura 12. Columnas: a) empacadas, y b) capilares
a) b) 
COLUMNA (Cont.)
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COLUMNA (Cont.)
• Las columnas se colocan en un horno, que permite 
regular la temperatura con mucha precisión.
• Se puede variar la temperatura en un rango muy 
amplio dependiendo de las especificaciones del 
fabricante.
• Se generan rampas de temperatura para asegurar una 
buena separación de los analitos.
Cromatografía de gases
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COLUMNA (Cont.)
Efecto de la temperatura de lacolumna:
a) Isotérmico a 45 °C.
b) Isotérmico a 145 °C.
c) Programado de 30 hasta 180 °C.
Cromatografía de gases
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COLUMNA (Cont.)
• De acuerdo al o los analitos que son objeto de 
cuantificación, se tienen columnas de distintas 
características.
• Se tienen columnas:
– No polares: Para compuestos no polares (como alcanos) que 
contienen 1) solo átomos de carbono e hidrógeno, y 2) Solo 
enlaces simples entre átomos de carbono.
Cromatografía de gases
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COLUMNA (Cont.)
– Polaridad intermedia: Para una selectividad alternada de 
compuestos no polares y polares.
– Polares: Para compuestos polares (como alcoholes, aminas, 
ácidos carboxílicos, dioles, ésteres, éteres, cetonas, y tioles) 
que contienen 1) carbono primario y átomos de hidrógeno, 
y 2) también átomos de bromo, fluor, nitrógeno, oxígeno, 
fósforo y/o azufre. 
Cromatografía de gases
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COLUMNA (Cont.)
– Columnas altamente polares: Para compuestos 
polarizables (como alquenos, alquinos e hidrocarburos 
aromáticos) que contienen 1) solo átomos de carbono 
e hidrógeno, y 2) algunos dobles o triples enlaces entre 
átomos de carbono.
– Columnas extremadamente polares: Para selectividad 
adicional de compuestos polarizables.
Más datos sobre columnas y equivalencias en https://www.sigmaaldrich.com/technical-
documents/articles/analytical/gc-column-selection-guide.html. 
Cromatografía de gases
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COLUMNA (Cont.)
Cromatografía de gases
Figura 13. Sección de una columna capilar
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• La fase móvil es un gas. 
• El H2 es un gas muy 
apropiado pero, dado 
que puede ser 
peligroso su uso, se 
suele preferir He.
Cromatografía de gases
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• El gas transportador o portador (carrier gas), es decir, 
la fase móvil, debe ser de alta pureza.
• El gas transportador o portador debe estar libre de 
trazas de hidrocarburos, vapor de agua y oxígeno 
porque estos pueden deteriorar las fases estacionarias 
polares o reducir la sensibilidad de los detectores. Por 
eso se disponen filtros que contienen tamices 
moleculares en las líneas de alimentación de los gases 
al cromatógrafo.
Cromatografía de gases
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• La inyección es una etapa crítica; los 
volúmenes que se suelen inyectar son 
muy pequeños (0,1-2,0 mL) y en ese 
instante empieza a contar el tiempo 
(tiempo de retención). Cuando se hacen 
inyecciones manuales, el simple cambio 
del analista puede resultar en variaciones 
en el tiempo de retención. Por eso se 
prefiere equipos automuestreadores.
Cromatografía de gases
Figura 14. Microjeringa
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MODOS DE INYECCIÓN: SPLIT/SPLITLESS
• Aun el volumen de muestra más pequeño que se 
pueda inyectar (0,1 mL) puede saturar la columna.
• Inyectores especiales pueden operar en dos modos, 
con y sin división de flujo (también llamado split o 
splitless).
Cromatografía de gases
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MODO SPLIT
• En el modo split, una 
alta razón de flujo 
llega a la cámara de 
vaporización donde se 
mezcla con vapores de 
la muestra inyectada. 
Cromatografía de gases
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MODO SPLIT (Cont.)
• Una válvula de ventilación, regulada entre 50-100 mL, 
separa este flujo en dos fracciones de las que la 
porción más grande es sacada del inyector llevándose 
consigo la mayor parte de la muestra introducida.
• La razón de separación (split ratio) varía entre 1:20 y 
1:500. Solo la porción más pequeña entra en la 
columna.
Cromatografía de gases
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MODO SPLITLESS
• Se prefiere para muestras 
muy diluidas.
• En este modo, un volumen 
pequeño de muestra es 
inyectado.
Cromatografía de gases
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MODO SPLITLESS (Cont.)
• La válvula split es mantenida cerrada por 0,5 a 1 min para 
que el solvente y la mezcla de componentes se concentre 
en la primera porción de la columna. 
• Programa  columna empieza con una temperatura baja.
• La apertura de la válvula split hace que el exceso de 
solvente diluido se elimine (algunos compuestos volátiles 
también son eliminados, esto puede afectar los resultados).
Cromatografía de gases
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DETECTORES
• La salida de la columna esta conectada al detector, 
cuya misión es la de generar una pequeña señal 
eléctrica cuando pase un analito por él. 
• La señal, proporcional a la cantidad de analito, es 
amplificada y enviada a un registro, donde es 
representada en función del tiempo transcurrido 
desde la inyección de la muestra  Cromatograma.
Cromatografía de gases
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DETECTORES (Cont.)
• También puede el detector enviar su señal a un 
ordenador donde es almacenada y procesada 
adecuadamente.
Cromatografía de gases
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DETECTORES (Cont.)
• En cromatografía de gases, un detector ideal tiene las 
siguientes características: 
– Adecuada sensibilidad. Lo que constituye una adecuada 
sensibilidad no se puede evaluar de forma cuantitativa.
– Buena estabilidad y reproducibilidad. 
– Una respuesta lineal para los analitos que se extienda a 
varios órdenes de magnitud. 
Cromatografía de gases
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DETECTORES (Cont.)
– Un intervalo de temperaturas de trabajo comprendido 
desde la temperatura ambiente hasta al menos 400°C.
– Un tiempo de respuesta corto que lo haga independiente 
del caudal.
– Alta fiabilidad y manejo sencillo. Hasta el punto de estar a 
prueba de la impericia de operadores inexpertos. 
Cromatografía de gases
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DETECTORES (Cont.)
– Respuesta semejante para todos los analitos, o por el 
contrario, una respuesta selectiva y altamente predecible 
para una o más clases de analitos. 
– No destructivo de la muestra.
Cromatografía de gases
No hay detector que reúna 
todas esas características.
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DETECTORES (Cont.)
• Los detectores, según su grado de selectividad, pueden 
ser:
– Universales: Generan señal para cualquier sustancia eluida.
– Selectivos: Detectan solamente sustancias con determinadas 
propiedades fisicoquímicas.
– Específicos: Detectan sustancias que poseen determinado 
elemento o grupo funcional en sus estructuras. 
Cromatografía de gases
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DETECTORES (Cont.)
• Detector de Conductividad Térmica (TCD)
– TCD viene del nombre en inglés, “Thermal conductivity
detector”.
– Se basa en los cambios en la conductividad térmica de la 
corriente de gas portador debido a la presencia de 
moléculas del analito.
– Responde a la concentración del soluto en el gas portador.
– No es destructivo.
Cromatografía de gases
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DETECTORES (Cont.)
• Detector de Conductividad Térmica (TCD)
Cromatografía de gases
Utiliza un puente de 
Wheatstone para determinar 
la resistencia
55
DETECTORES (Cont.)
• Detector de Conductividad Térmica (TCD)
– Se usa gas He o H2 porque sus conductividades térmicas son 
mucho mayores que la de la mayoría de los analitos (6 a 10 
veces mayores).
– Es popular para la detección de gases permanentes y 
compuestos inorgánicos.
Cromatografía de gases
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DETECTORES (Cont.)
• Detector de Ionización de Llama 
(FID)
– FID viene del nombre en inglés, 
“Flame Ionization Detector”.
– El gas portador y el gas 
combustible se mezclan para dar 
soporte a una llama (en el 
ánodo).
Cromatografía de gases
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DETECTORES (Cont.)
• Detector de Ionización de Llama (FID)
– El analito se quema en la llama y produce cationes que se 
mueven hacia el cátodo produciendo una muy pequeña 
corriente.
– Esta señal es amplificada y registrada como pico 
cromatográfico.
Cromatografía de gases
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DETECTORES (Cont.)
• Detector de Ionización de Llama (FID)
– Se requieren tres gases:
• Combustible: típicamente H2
• Oxidante: Típicamente aire
• Makeup: Típicamente N2 o He.
– Detecta todo compuesto que se queme.
Cromatografía de gases
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DETECTORES (Cont.)
• Detector de Nitrógeno Fósforo (NPD)
– NPD viene del nombre en ingles, “Nitrogen
Phosphorous Detector”.
– Es un detector de ionización como el FID 
pero con otro principio.
– Muestra una sensibilidad mejorada para 
compuestos que contienen nitrógeno y 
fosforo.
Cromatografía de gases
60
DETECTORES (Cont.)
• Detector de Nitrógeno Fósforo (NPD)
– Tiene una perla alcalina (silicato de rubidio) que es 
calentada.
– El flujo de hidrógeno es muy bajo, yno permitiría sostener 
una llama.
– Plasma del gas combustible, oxidante, portador y makeup
es formado y es parcialmente combustionado alrededor de 
la perla.
Cromatografía de gases
61
DETECTORES (Cont.)
• Detector de Nitrógeno Fósforo (NPD)
– Si moléculas que contienen N o P entran en contacto con el 
plasma, sufren una reacción catalítica en la superficie de la 
perla produciendo electrones termoiónicos. 
– Se forman iones que son atraídos al colector cargado 
positivamente.
– La señal es amplificada y se genera el pico cromatográfico.
Cromatografía de gases
62
DETECTORES (Cont.)
• Detector de Captura de Electrones (ECD)
– Inventado por James Lovelock.
– ECD viene del nombre en ingles, “Electron
Capture Detector”.
– Mide la conductividad eléctrica del efluente 
(lo que sale de la columna) después de ser 
expuesto a radiación ionizante.
Cromatografía de gases
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DETECTORES (Cont.)
• Detector de Captura de Electrones (ECD)
– Es especialmente sensible a especies que "capturan 
electrones" (halógenos).
– El radionucleido 63Ni emite electrones de baja energía 
(partículas beta).
– Partículas beta chocan con el gas portador produciendo 
electrones de alta energía.
Cromatografía de gases
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DETECTORES (Cont.)
• Detector de Captura de Electrones (ECD)
– Esto establece una alta corriente entre el cuerpo del detector y 
el colector ubicado al centro.
– Analitos halogenados capturan algunos electrones: A + e- A-
– Los iones negativos formados tienen baja energía y no son 
colectados por el cátodo, lo que produce una reducción en 
la corriente que puede ser amplificada y registrada.
Cromatografía de gases
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DETECTORES (Cont.)
• Detector de Captura de Electrones (ECD)
– Dependiendo del analito, un detector ECD puede ser 
10-1000 veces más sensible que un detector FID, y un 
millón de veces más sensible que un detector TCD.
– Se usa para plaguicidas clorados y PCBs.
– Pueden lograrse límites de detección del orden de ppt.
Cromatografía de gases
66
ANÁLISIS CUALITATIVO
Cromatografía de gases
Aplicaciones cualitativas de 
la cromatografía de gases
Fuentes de información cualitativa:
• Retención: Uso de datos del tiempo de retención de un analito para su identificación
• Detección: Detectores que generan información estructural sobre las sustancias 
eludidas (por ejemplo, espectrómetro de masas)
Determinación de la identidad de 
la muestra propiamente dicha
Identificación individual de las 
especies presentes en la muestra
67
ANÁLISIS CUALITATIVO
Cromatografía de gases
68
tR DE SERIES HOMÓLOGAS
Cromatografía de gases
69
ESPACIO DE CABEZA (HEADSPACE)
Cromatografía de gases
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ESPACIO DE CABEZA (HEADSPACE) (Cont.)
Cromatografía de gases
71
• Describe una técnica utilizada en química que 
consiste en transformar un compuesto químico en un 
producto que posee un estructura química similar, 
llamado derivatizado o derivativo.
• Se aprovecha un grupo funcional específico del 
compuesto parental en la reacción de derivatización
transformando el educto en un derivado que posee 
propiedades específicas.
Derivatización
72
• Las propiedades específicas incluyen una reactividad 
química, solubilidad, punto de ebullición, punto de 
fusión, estado de agregación o polaridad diferentes a 
las originales.
• Estas nuevas propiedades químicas pueden ser 
utilizadas para la cuantificación del educto. 
Derivatización
73
• En cromatografía gaseosa:
– Los grupos polares (por ejemplo, con enlaces N-H y O-H) 
en los cuales un determinado enlace con el hidrógeno 
puede ser convertido en un grupo relativamente no polar 
de un compuesto relativamente no volátil. 
– El producto resultante, puede ser menos polar, y por lo 
tanto más volátil, permitiendo el análisis por medio de 
cromatografía gaseosa. 
Derivatización
74
• En cromatografía líquida:
– Se puede llevar a cabo una reacción del analito con alguna 
especie de tal manera que se adicionen grupos funcionales 
al analito.
– Estos grupos funcionales adicionados pueden aportarle 
ciertas propiedades como la fluorescencia y permitir su 
detección por detector de fluorescencia de un equipo 
HPLC.
Derivatización
75
Caso de estudio 1
76
Caso de estudio 1
Polettini et al. (1993) Biological Mass Spectrometry 22, 457-461
Clenbuterol  NO volátil (no se 
puede analizar por CG), pero su 
producto de derivatización sí.
77
Caso de estudio 2
DETERMINACIÓN DE GLIFOSATO POR HPLC
Son múltiples los métodos reportados para determinación 
de glifosato a partir de la derivatizacion de este herbicida 
con cloroformiato de 9-fluorenilmetila (FMOC-Cl).
A continuación se muestran las reacciones (Catrincket et al., 
2014)
78
DETERMINACIÓN DE GLIFOSATO POR HPLC
Caso de estudio 2
El producto de la derivatización (GLY-FMOC) da muy buena señal con el detector de fluorescencia.
79
Caso de estudio 2
DETERMINACIÓN DE GLIFOSATO POR HPLC (Cont.)
Aplica al principal producto de degradación del glifosato: 
AMPA
80
Caso de estudio 3
81
Caso de estudio 3
• Los lípidos son reservas de energía de las plantas. 
Están constituidos fundamentalmente por 
triglicéridos. Un ejemplo:
Se busca determinar la 
composición de ácidos grasos 
presentes en los triglicéridos.
82
Caso de estudio 3
• Ni los triglicéridos, ni los ácidos grasos pueden ser 
medidos por cromatografía gaseosa.
• Es necesario una reacción de transmetilación para 
obtener los metil esteres de los ácidos grasos, los 
cuales si se pueden medir por cromatografía gaseosa.
83
• El derivatizante es 2,2-
dimetoxi propano.
• El derivatizante es añadido 
en una pequeña cantidad y 
reacciona al mismo tiempo 
que se procede a la 
extracción de los lípidos.
Caso de estudio 3
84
• En cromatografía, se 
prepara una curva de 
calibración. Se sabe que el 
área del pico es 
proporcional a la 
concentración. De esta 
manera es posible obtener 
la concentración de una 
muestra problema.
Rangos dinámico y lineal
85
Espectrometría de masas
https://www.youtube.com/watch?v=JJN1E0-zGdI
86
Espectrometría de masas
https://www.youtube.com/watch?v=22dr-3XDNmQ 87
Ejercicios:
Espectrometría de masas
Agua
SOLUCIÓN
88
Ejercicios (Cont.):
Espectrometría de masas
Metano
SOLUCIÓN
89
Ejercicios (Cont.):
Espectrometría de masas
Metanol
SOLUCIÓN
90
• La espectrometría de masas se aplica como detector 
en equipos de cromatografía.
• Es un detector específico.
• Hay dos tipos de ionización:
– Ionización dura: Alta proporción de especies ionizadas
– Ionización suave: Baja proporción de especies ionizadas
• El analizador de masas más común acoplado a 
equipos de cromatografía es el cuadrupolo.
Detector de espectrometría de masas
91
CUADRUPOLO
Detector de espectrometría de masas
92
CUADRUPOLO (Cont.)
• Consta de cuatro barras cilíndricas paralelas que 
actúan como electrodos. 
• Las barras opuestas se conectan eléctricamente, un 
par esta unido al polo positivo de una fuente variable 
de corriente continua y el otro par se une al terminal 
negativo. 
Detector de espectrometría de masas
93
CUADRUPOLO (Cont.)
• Además, se aplican a cada par de barras potenciales 
variables de corriente alterna de radiofrecuencia, 
que están desfasados 180 grados.
• Los iones son acelerados a través del cuadrupolo. 
Detector de espectrometría de masas
94
CUADRUPOLO (Cont.)
• Las tensiones de corriente continua y alterna se 
incrementa simultáneamente manteniendo 
constante su relación, solo aquellos iones que tienen 
una adecuada relación m/z consiguen tener una 
trayectoria estable y pasan al detector, el resto 
termina colisionando con las barras.
Detector de espectrometría de masas
95
CUADRUPOLO (Cont.)
• Pueden trabajar en dos modos:
– Modo SIM: Se fijan la condiciones para que solo pase un 
ion con una determinada m/z.
– Modo SCAN: Se hacer un barrido de masas entre un 
determinado intervalo de m/z.
Detector de espectrometría de masas
96
Caso de estudio 4
97
Bisfenol A:
• Es un contaminanteoriginado en muchos plásticos.
• Por su capacidad de unirse a los receptores de 
estrógenos se le conoce como un potencial disruptor
endocrino.
Caso de estudio 4
98
• Procedimiento de análisis:
– Arroz precocinado fue homogeneizado y 20 g añadidos a 
un tubo Falcon de 50 mL.
– Se agregó el estándar sustituto bisfenol F.
– La extracción se hizo con acetonitrilo (agitador Vortex).
– Centrifugación y separación del sobrenadante.
– Adición de NaCl al sobrenadante separado  formación de 
tres fases.
Caso de estudio 4
99
– Separación de la fase de acetonitrilo y lavado con n-hexano 
(para remover trazas de grasa).
– Evaporación del solvente hasta secado y redisolución con 
acetato de etilo.
– Evaporación del acetato de etilo, adición de una mezcla 
acetato de etilo/BSTFA/piridina (2:1:1; v/v/v). Después de 
1 min de reacción, inyección al GC-MS.
Caso de estudio 4
100
• Bisfenol A (BPA):
– Tiempo de retención del derivatizado 
trimetilsilil: 10,7 min
– Pico base: 357 m/z
– Ion molecular: 372 m/z
BSTFA
(derivatizante)
Caso de estudio 4
101
Figura 12. Cromatogramas de muestras a las que se añadió bisfenol A: a) Modo SCAN, b) Modo SIM.
Caso de estudio 4
102
Figura 13. Espectros de masas del bisfenol A y del bisfenol F
Caso de estudio 4
103
¡Muchas gracias por su atención!
104