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UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRÉS FACULTAD DE INGENIERÍA INGENIERÍA QUÍMICA, INGENIERÍA AMBIENTAL, INGENIERÍA DE ALIMENTOS E INGENIERÍA PETROQUIMICA PROYECTO DE GRADO PRESENTADOR POR: WARA MANIGEH CONRADY ARIAS PARA OPTAR AL TÍTULO DE INGENIERA DE ALIMENTOS ¨ELABORACIÓN DE UNA BEBIDA NUTRACÉUTICA DE ALOE VERA (SÁBILA) Y MELAZA UTILIZANDO Lactobacillus casei Shirota¨ TUTORA: MSc. ING. VIRGINIA ROJAS MERCADO LA PAZ – BOLIVIA 2019 UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRÉS FACULTAD DE INGENIERIA LA FACULTAD DE INGENIERIA DE LA UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRÉS AUTORIZA EL USO DE LA INFORMACIÓN CONTENIDA EN ESTE DOCUMENTO SI LOS PROPÓSITOS SON ESTRICTAMENTE ACADÉMICOS. LICENCIA DE USO El usuario está autorizado a: a) Visualizar el documento mediante el uso de un ordenador o dispositivo móvil. b) Copiar, almacenar o imprimir si ha de ser de uso exclusivamente personal y privado. c) Copiar textualmente parte(s) de su contenido mencionando la fuente y/o haciendo la cita o referencia correspondiente en apego a las normas de redacción e investigación. El usuario no puede publicar, distribuir o realizar emisión o exhibición alguna de este material, sin la autorización correspondiente. TODOS LOS DERECHOS RESERVADOS. EL USO NO AUTORIZADO DE LOS CONTENIDOS PUBLICADOS EN ESTE SITIO DERIVARA EN EL INICIO DE ACCIONES LEGALES CONTEMPLADAS EN LA LEY DE DERECHOS DE AUTOR. II Dedicatoria A Dios por su amor y fortaleza que obra día a día en mí. A mí amada madre Beatriz. A mi querido padre Lucas, a mis hermanos, a mis sobrinos, amigos por la paciencia, apoyo, afecto, confianza y la fé brindada en mi persona, fueron cruciales en el desarrollo de este proyecto. III AGRADECIMIENTOS Y RECONOCIMIENTOS Quiero expresar mi gratitud a Dios, quien con su bendición llena mi vida y a mi familia por estar siempre presentes, mis hermanos Isela, Lucas y Badi, en especial a la lucesita de mi vida mi adorada sobrina Waira gracias por creer en mí, rendirse no es una opción. El esfuerzo y las metas alcanzadas, refleja la dedicación, el amor brindado por los padres. Gracias a mis padres son quien soy, orgullosamente y con la cara muy en alto agradezco a Lucas Conrady Vallejos y Beatriz Arias Pinto, mi mayor inspiración. A mi querida Universidad Mayor de San Andrés (UMSA), Facultad de Ingeniería especialmente a la carrera Ing. de Alimentos y a todas las autoridades, por permitirme concluir con una etapa, por la paciencia, orientación y formación durante los años de estudio. Al Instituto de Investigaciones de Procesos Químicos (IIDEPROQ) por permitirme usar las instalaciones, equipos y reactivos necesarios para el trabajo. Un agradecimiento especial a la Msc. Ing Virginia Rojas, principal colaboradora durante todo este proceso, por su entereza, conocimiento, guía, empatía y paciencia brindada con total desprendimiento, permitió la culminación de este proyecto. A mis compañeros y amigos de laboratorio Anita, Carmensita, Lupita, Clau, Marce y Nelson que me ayudaron de una manera desinteresada, gracias infinitas por toda su ayuda y buena voluntad. A mis queridos amigos Tephy, Yamil, Anchu, Cris y Mari gracias a su apoyo moral me permitió permanecer con empeño y dedicación, por su amistad y consejos en todo momento. A todos quienes contribuyeron con un granito de arena para culminar con éxito la meta propuesta. IV RESUMEN El presente proyecto de grado tuvo como objetivo desarrollar un prototipo de bebida nutracéutica de aloe vera y melaza utilizando Lactobacillus casei Shirota, como una nueva alternativa contra los problemas gastrointestinales con diversos beneficios para la salud, el aloe vera tiene de forma natural: cicatrizantes, antimicrobianos y acelera el proceso digestivo; la melaza sustituyó el uso de azúcar refinada además es un producto residual de la industria azucarera, finalmente la bacteria ácido láctica utilizada Lactobacillus casei Shirota es capaz de modificar la flora intestinal entre otras propiedades probióticas. Es así que se evaluó el consumo de azucares (ART), además se realizó el control de calidad y propiedades organolépticas de la bebida por el proceso propuesto. Por último, la viabilidad de la bacteria en la matriz vegetal propuesta. Primero se identificó la bacteria a ser utilizada en función a su capacidad de adaptación y potencial probiótico. Posteriormente, se caracterizó las materias primas, seguidamente se elaboró el jugo de aloe vera y adecuación de la melaza en medio ácido. Se evaluó el medio compuesto por aloe vera y melaza, siendo este el sustrato del Lactobacillus casei Shirota para la fermentación. Como es de interés del proyecto, obtener un medio viable se realizó un estudio experimental factorial 23 con una réplica planteado en la matriz de diseño con ayuda del software Design Expert 7.0 , se logró encontrar las condiciones para el crecimiento de las bacterias ácido lácticas, estimando una producción máxima simultanea de melaza 192.5 [g/l],aloe vera 200 [g/l] y sulfato de amonio 7.2 [g/l] entre estos tres factores en estudio, los factores de mayor efecto fueron el aloe vera y melaza. Finalmente, se evaluó mediante análisis sensorial las muestras A, B, C, y se encontró la mejor formulación de la bebida siendo la muestra B (25% aloe vera y 20% melaza) con una aceptabilidad del 78.50%, presentó un pH igual a 4.3, ° Brix 15.5 y % de ácido láctico 0.16%. Se evaluó la viabilidad el mismo, comenzando en 109.52 [UFC/ml] y finalizando a los 28 días en 109.13 [UFC/ml]. Estos resultados sugieren que es posible el desarrollo de una bebida nutracéutica de aloe vera, melaza con el Lactobacillus casei Shirota, beneficiosa para la salud, considerando los valores de viabilidad para la bacteria acido láctica estudiada. V ABSTRACT The purpose of this degree project was to develop a prototype of nutraceutical aloe vera and molasses using Lactobacillus casei Shirota, as a new alternative against gastrointestinal problems with various health benefits, aloe vera has naturally: healing, antimicrobial and accelerates the digestive process; Molasses substituted the use of refined sugar is also a residual product of the sugar industry, finally the lactic acid bacterium used Lactobacillus casei Shirota is able to modify the intestinal flora among other probiotic properties. Thus, the consumption of sugars (ART) was evaluated, as well as the quality control and organoleptic properties of the beverage by the proposed process. Finally, the viability of the bacteria in the proposed matrix. First, the bacterium to be used was identified based on the adaptive capacity and probiotic potential. Subsequently, the raw materials were characterized, then the aloe vera juice was prepared and the molasses was adapted in an acid medium. The medium composed of aloe vera and molasses was evaluated, this being the substrate of Lactobacillus casei Shirota for fermentation. As it is of interest to the project, to obtain a viable medium, a 23 factorial experimental study was carried out with a replica raised in the design matrix with the help of the Design Expert 7.0 software, it was possible to find the conditions for the growth of lactic acid bacteria , estimating a maximum simultaneous production of molasses 192.5 [g / l], aloe vera 200 [g / l] and ammonium sulfate 7.2 [g / l] among these three factors under study, the factors with the greatest effect were aloe vera and molasses. Finally, samples A, B, C were evaluated by sensory analysis and the best formulation of the beverage was found being sample B (25% aloe vera and 20% molasses) with an acceptability of 78.50%, presented a pH equal to 4.3, Brix 15.5% and 0.16% lactic acid. The viability was evaluated,beginning at 109.52 [CFU / ml] and ending at 28 days at 109.13 [CFU / ml]. These results suggest that it is possible to develop a nutraceutical drink of aloe vera, molasses with Lactobacillus casei Shirota, beneficial for health, considering the viability values for the lactic acid bacteria studied. VI ÍNDICE DE CONTENIDO DEDICATORIA II AGRADECIMIENTOS Y RECONOCIMIENTOS III RESUMEN IV ABSTRACT V CAPÍTULO I. 1 1. GENERALIDADES 1 1.1. INTRODUCCIÓN 1 1.2. ANTECEDENTES 1 1.3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 2 1.4. JUSTIFICACIÓN 3 1.4.1. JUSTIFICACIÓN TÉCNICA 3 1.4.2. JUSTIFICACIÓN ECONÓMICA 3 1.4.3. JUSTIFICACIÓN SOCIAL 4 1.4.4. JUSTIFICACIÓN AMBIENTAL 4 1.5. OBJETIVOS 5 1.5.1. OBJETIVO GENERAL 5 1.5.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS 5 CAPÍTULO II. 6 2. MARCO TEÓRICO 6 2.1. DESARROLLO DE NUEVOS PRODUCTOS 6 2.2. FASES PARA EL DESARROLLO DE UN NUEVO PRODUCTO ALIMENTICIO 6 2.3. ALIMENTOS FUNCIONALES 7 2.3.1. PRODUCTOS NUTRACÉUTICOS 7 2.4. SITUACIÓN ACTUAL DE LOS ALIMENTOS FUNCIONALES Y NUTRACÉUTICOS 9 2.5. BACTERIAS ACIDO LACTICAS 10 VII 2.5.1. PROBIÓTICOS COMO ALIMENTO FUNCIONAL 10 2.5.2. MICROORGANISMOS PROBIÓTICOS 11 2.5.3. LACTOBACILLUS CASEI SHIROTA 13 2.5.3.1. Características. 13 2.5.3.2. Taxonomía 14 2.5.3.3. Requerimientos nutricionales y micronutrientes para Lactobacillus casei 15 2.5.3.4. Micronutrientes 15 2.5.3.5. Factores que afectan el crecimiento del Lactobacillus y la eficiencia de producción de ácido láctico 15 2.5.3.6. Beneficios atribuidos a Lactobacillus casei Shirota. 16 2.5.4. BACTERIAS ÁCIDO LÁCTICAS EN PRODUCTOS NO LÁCTEOS 16 2.6. ALOE VERA 18 2.6.1. TAXONOMÍA 18 2.6.2. ESTRUCTURA Y COMPOSICIÓN QUÍMICA DEL ALOE VERA 20 2.6.3. CARBOHIDRATOS 23 2.6.3.1. Mono y polisacáridos 23 2.6.4. LÁTEX DE ALOE 23 2.6.4.1. Antraquinonas 24 2.6.5. POTENCIAL NUTRACÉUTICO 25 2.6.6. CONTROL DE CALIDAD DEL ALOE VERA 26 2.6.7. TRATAMIENTO 27 2.6.7.1. Aloe vera jugo de la hoja 27 2.6.7.2. El aloe vera jugo de la hoja interior 27 2.7. MELAZA 28 2.7.1. DEFINICIÓN 28 2.7.2. CLASIFICACIÓN 28 2.7.3. PROCESO DE OBTENCIÓN 29 2.7.4. COMPOSICIÓN 29 2.7.4.1. Azúcares 30 2.7.4.2. No azúcares 31 2.7.4.3. Cenizas 31 2.7.4.4. Compuestos nitrogenados 31 VIII 2.7.4.5. Ácidos 32 2.7.4.6. Vitaminas 32 2.7.4.7. Fenoles y Compuestos volátiles 32 2.7.5. VALOR NUTRICIONAL 32 2.7.6. PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS 33 2.7.6.1. Viscosidad 33 2.7.6.2. pH 33 2.8. EVALUACIÓN SENSORIAL 34 2.9. DISEÑO EXPERIMENTAL 34 2.9.1. DISEÑO FACTORIAL 35 2.10. TIEMPO DE VIDA ÚTIL 36 CAPÍTULO III. 37 3. MATERIALES Y MÉTODOS 37 3.1. MATERIA PRIMA 37 3.1.1. CARACTERIZACIÓN DE LA MATERIA PRIMA 37 3.1.1.1. Aloe vera 37 3.1.1.2. Melaza 38 3.1.1.3. Cepa utilizada 38 3.1.2. DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES TOTALES (ART) EN EL ALOE VERA Y MELAZA 39 3.2. VIABILIDAD DEL LACTOBACILLUS CASEI SHIROTA 39 3.2.1. DETERMINACIÓN DE PORCENTAJES DE ALOE VERA Y MELAZA PARA EL MEDIO DE CULTIVO 39 3.2.1.1. Preparación de los cultivos 39 3.2.1.2. Preparación de los Cultivos madre 39 3.3. RECUENTO DE MICROORGANISMO PROBIÓTICOS EN LOS CULTIVOS MADRE 40 3.3.1. SIEMBRA Y RECUENTO DE L. CASEI SHIROTA 40 3.3.2. CONTEO DE MICROORGANISMOS 41 3.3.3. TINCIÓN DE GRAM 41 3.4. DETERMINACIÓN DE LA COMPOSICIÓN DEL MEDIO 42 3.4.1. DETERMINACIÓN DE LA RELACIÓN DE ALOE VERA Y MELAZA 42 IX 3.4.2. DISEÑO EXPERIMENTAL 42 3.4.2.1. Variables 42 3.5. ELABORACIÓN DE LA BEBIDA NUTRACÉUTICA 42 3.5.1. ANÁLISIS DE ACEPTABILIDAD DE LA BEBIDA NUTRACÉUTICA MEDIANTE EVALUACIÓN SENSORIAL HEDÓNICA 45 3.6. CARACTERIZACIÓN DEL PRODUCTO TERMINADO 45 3.6.1. ANÁLISIS FISICOQUÍMICO 45 3.6.1.1. Determinación de acidez titulable 45 3.6.1.2. Determinación de pH 46 3.6.1.3. Determinación de solidos solubles 47 3.6.2. ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO 48 3.7. TIEMPO DE VIDA ÚTIL 48 3.7.1. ESTUDIO DE LA VIABILIDAD DE LAS BACTERIAS ÁCIDO LÁCTICAS 48 CAPÍTULO IV. 49 4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 49 4.1. CARACTERIZACIÓN DE LA MATERIA PRIMA 49 4.1.1. DETERMINACIÓN DE PARÁMETROS DEL ALOE VERA 49 4.1.2. CARACTERIZACIÓN DE LA MELAZA 51 4.1.3. CLARIFICADO DE LA MELAZA 51 4.2. COMPARACIÓN DE NUTRIENTES DEL ALOE VERA- MELAZA CON EL MEDIO SINTÉTICO 52 4.2.1. FERMENTACIONES REALIZADAS 53 4.3. RESULTADOS DE LOS ENSAYOS EXPERIMENTALES 54 4.4. DISEÑO EXPERIMENTAL EN LA PRODUCCIÓN DE LA BEBIDA NUTRACÉUTICA 61 4.4.1. VARIABLES INDEPENDIENTES (FACTORES) PARA EL CRECIMIENTO DE LA BACTERIA 62 4.4.2. VARIABLES RESPUESTA 62 4.4.3. MATRIZ EXPERIMENTAL 62 4.4.4. RESULTADOS DE LAS VARIABLES RESPUESTA 63 4.5. CÁLCULO DE LOS PORCENTAJES DE ALOE VERA Y MELAZAS RECOMENDABLES, USADOS EN EL CRECIMIENTO DE LA BACTERIA ACIDO LÁCTICA. 64 4.5.1. ANÁLISIS DE RESULTADO: CRECIMIENTO DE BACTERIAS ÁCIDO LÁCTICAS 64 X 4.6. MÁXIMO SIMULTANEO 69 4.7. ANÁLISIS SENSORIAL DE LA BEBIDA NUTRACÉUTICA 71 4.7.1. ELABORACIÓN DEL PRODUCTO FERMENTADO 75 4.8. CARACTERIZACIÓN DE LA BEBIDA NUTRACÉUTICA 76 4.8.1. PROPIEDADES ORGANOLÉPTICAS DEL PRODUCTO 76 4.8.2. DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE ACIDEZ 77 4.8.3. DETERMINACIÓN DEL PH 77 4.8.4. DETERMINACIÓN DE SOLIDOS SOLUBLES DEL PRODUCTO 78 4.8.5. REQUISITOS MICROBIOLÓGICOS 78 4.8.6. DISEÑO DE LA ETIQUETA DEL PRODUCTO 79 4.8.7. DETERMINACIÓN DE LA VIABILIDAD DE LAS BACTERIAS ÁCIDO LÁCTICAS 79 4.8.7.1. Sobrevivencia de L.casei Shirota en el tiempo. 80 4.8.7.2. Estudio de los °Brix en el tiempo 81 4.8.7.3. Estudio del pH en el tiempo 82 CAPÍTULO V. 83 5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 83 5.1. CONCLUSIONES 83 5.2. RECOMENDACIONES 86 6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 88 7. ANEXOS 91 XI ÍNDICE DE FIGURAS FIGURA 2.1 FASES PARA EL DESARROLLO DE UN NUEVO PRODUCTO ALIMENTICIO ............................................................... 6 FIGURA 2.2 DESARROLLO DE LA TENDENCIA EN EVOLUCIÓN DE LOS ALIMENTOS.................................................................. 8 FIGURA 2.3 EVOLUCIÓN EN EL NUEVO CONCEPTO DE ALIMENTACIÓN ............................................................................. 10 FIGURA 2.4 VISTA MICROSCÓPICA DEL LACTOBACILLUS CASEI SHIROTA.......................................................................... 13 FIGURA 2.5 ALOE VERA (L.) BURM. F, PLANTA Y FLOR. .............................................................................................. 19 FIGURA 2.6 REPRESENTACIÓN ESQUEMÁTICA DE LA PLANTA DE ALOE VERA Y UNA SECCIÓN TRANSVERSAL A TRAVÉS DE UNA HOJA DE ALOE VERA. ........................................................................................................................................ 20 FIGURA 2.7 COMPOSICIÓN QUÍMICA DE GEL DE ALOE VERA (SOBRE BASE DE PESO SECO) .................................................... 21 FIGURA 2.8 SECCIÓN DE LA HOJA DE ALOE BARBADENSIS MILLER. ................................................................................ 24 FIGURA 2.9 PROCESO DE OBTENCIÓN DE LAS MELAZAS ............................................................................................... 29 FIGURA 3.1 L. CASEI 431® ................................................................................................................................ 38 FIGURA 3.2 PREPARACIÓN DEL CULTIVO MADRE ....................................................................................................... 40 FIGURA 3.3 MICROORGANISMOS CARACTERÍSTICOS .................................................................................................. 41 FIGURA 3.4 FLUJOGRAMA DE LA PREPARACIÓN DE ALOE VERA ..................................................................................... 43 FIGURA 3.5 FLUJOGRAMA DE LA ELABORACIÓN DE LA BEBIDA...................................................................................... 44 FIGURA 3.6 BURETA SCHILLING PARA DETERMINACIÓN DE ACIDEZ ................................................................................46 FIGURA 3.7 POTENCIÓMETRO UTILIZADO ................................................................................................................ 46 FIGURA 3.8 REFRACTÓMETRO DIGITAL ................................................................................................................... 47 FIGURA 4.1 COMUNIDAD DE INCAPAMPA - COROICO. ............................................................................................... 49 FIGURA 4.2 MUESTRA DE ALOE VERA DE LA COMUNIDAD ........................................................................................... 50 FIGURA 4.3 PRUEBAS PRELIMINARES DE LAS FERMENTACIONES .................................................................................... 54 FIGURA 4.4 PRUEBAS PRELIMINARES ..................................................................................................................... 55 FIGURA 4.5 MUESTRAS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO EN FUNCIÓN DEL TIEMPO ................................................................. 56 FIGURA 4.6 MUESTRAS ANALIZADAS MEDIANTE EL MÉTODO DE FOLIN WU ..................................................................... 56 FIGURA 4.7 PRUEBAS PRELIMINARES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO ................................................................................. 60 FIGURA 4.8 MATRIZ EXPERIMENTAL 2^3 VARIABLE RESPUESTA: CRECIMIENTO DE LAS BACTERIAS ÁCIDO LÁCTICAS. .................. 63 FIGURA 4.9 ANOVA CRECIMIENTO DE LAS BACTERIAS ACIDO LÁCTICAS ......................................................................... 65 FIGURA 4.10 ANOVA RECALCULANDO CRECIMIENTO DE LAS BACTERIAS ACIDO LÁCTICAS .................................................. 66 FIGURA 4.11 INTERACCIÓN DE LOS FACTORES ALOE VERA Y MELAZA PARA EL CRECIMIENTO DE LAS BACTERIAS ACIDO LÁCTICAS .. 67 FIGURA 4.12 VERIFICACIÓN DE LOS SUPUESTOS DEL MODELO ..................................................................................... 68 FIGURA 4.13 MÁXIMOS DE LAS VARIABLES RESPUESTAS ............................................................................................. 69 FIGURA 4.14 MÁXIMO SIMULTANEO DE LAS VARIABLES RESPUESTA: NÚMERO DE COLONIAS. ............................................. 70 FIGURA 4.15 ASPECTO DE LA BEBIDA NUTRACÉUTICA ................................................................................................ 76 FIGURA 4.16 ETIQUETA DEL PRODUCTO FINAL “NUTRIVERA” ................................................................................... 79 XII FIGURA 7.1 CURVA DE CALIBRACIÓN .................................................................................................................... 104 FIGURA 7.2 PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO DE LAS BACTERIAS ACIDO LÁCTICAS EN EL TIEMPO .............. 118 FIGURA 7.3 FERMENTO MADRE CALDO MRS ......................................................................................................... 119 XIII ÍNDICE DE TABLAS TABLA 2.1 MICROORGANISMOS CON PROPIEDADES PROBIÓTICOS................................................................................. 12 TABLA 2.2 TAXONOMÍA Y PROPIEDADES METABÓLICAS DE LACTOBACILLUS CASEI SHIROTA................................................. 14 TABLA 2.3 RESUMEN DE LOS PRODUCTOS QUÍMICOS COMPOSICIÓN DE A. VERA .............................................................. 22 TABLA 2.4 PARÁMETROS ESTABLECIDOS POR ASC .................................................................................................... 26 TABLA 2.5 COMPOSICIÓN DE LA MELAZA DE CAÑA DE AZÚCAR. .................................................................................... 30 TABLA 3.1 MÉTODOS DE ANÁLISIS PARA CARACTERIZAR EL ALOE VERA ........................................................................... 37 TABLA 3.2 MÉTODOS DE ANÁLISIS PARA CARACTERIZAR LA MELAZA ............................................................................... 38 TABLA 3.3 METODOLOGÍA DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO .......................................................................................... 48 TABLA 4.1 RESULTADOS DE LA CARACTERIZACIÓN DEL ALOE VERA ................................................................................ 50 TABLA 4.2 RESULTADOS DE LA CARACTERIZACIÓN DE MELAZA ..................................................................................... 51 TABLA 4.3 CUANTIFICACIÓN DE LOS NUTRIENTES PARA EL MEDIO DE CULTIVO VOLUMEN 1 [LITRO]. ..................................... 52 TABLA 4.4 MUESTRAS DE PRUEBAS PRELIMINARES DEL MEDIO DE CULTIVO PARA 100 [ML]. ............................................... 53 TABLA 4.5 ESTANDARIZACIÓN DE LAS MUESTRAS DEL MEDIO DE CULTIVO PARA 100 [ML]. ................................................. 53 TABLA 4.6 PARÁMETROS DEL CALDO MRS .............................................................................................................. 59 TABLA 4.7 FACTORES PARA EL DISEÑO EXPERIMENTAL................................................................................................ 60 TABLA 4.8 DETERMINACIÓN DE LOS °BRIX PARA LAS PRUEBAS DE DISEÑO EXPERIMENTAL. .................................................. 61 TABLA 4.9 FORMULACIÓN DETERMINADA PARA LA MAYOR ACEPTABILIDAD ..................................................................... 75 TABLA 4.10 PROPIEDADES ORGANOLÉPTICAS DEL PRODUCTO FINAL .............................................................................. 76 TABLA 4.11 DATOS DE ACIDEZ DEL PRODUCTO FINAL ................................................................................................. 77 TABLA 4.12 DATOS DE PH DEL PRODUCTO FINAL ..................................................................................................... 77 TABLA 4.13 DATOS DE SOLIDOS SOLUBLES DEL PRODUCTO FINAL .................................................................................. 78 TABLA 4.14 DATOS MICROBIOLÓGICOS DEL PRODUCTO FINAL ...................................................................................... 78 TABLA 4.15. DATOS DE LA VIABILIDAD EN EL PRODUCTO............................................................................................. 80 TABLA 4.16. DATOS DE LOS °BRIX EN EL PRODUCTO .................................................................................................. 81 TABLA 4.17. DATOS DEL PH EN EL PRODUCTO ......................................................................................................... 82 TABLA 7.1 DATOS DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN .................................................................................................... 104 TABLA 7.2 PRUEBAS PRELIMINARES PARA LA DISPOSICIÓN DEL MEDIO ......................................................................... 105 TABLA 7.3 NUTRIENTES CALCULADOS EN VOLUMEN DE 100 ML ................................................................................. 105 TABLA 7.4 DATOS DE AZUCARES REDUCTORES EN FUNCIÓN DEL TIEMPO PARA LA MUESTRA 1. ........................................... 106 TABLA 7.5 DATOS DE AZUCARES REDUCTORES EN FUNCIÓN DEL TIEMPO PARA LA MUESTRA 2. ........................................... 107 TABLA 7.6 DATOS DE AZUCARES REDUCTORES EN FUNCIÓN DEL TIEMPO PARA LA MUESTRA 3. ........................................... 108 TABLA 7.7 DATOS DE AZUCARES REDUCTORES EN FUNCIÓN DEL TIEMPO PARA LA MUESTRA 4. ........................................... 109 TABLA 7.8 DATOS DE AZUCARES REDUCTORES EN FUNCIÓN DEL TIEMPO PARA LA MUESTRA 5. ........................................... 110 TABLA 7.9 DATOS OBTENIDOS EN LA VARIACIÓN DE PH CON DATOS DEL DISEÑO EXPERIMENTAL ......................................... 112 XIV TABLA 7.10 DATOS OBTENIDOS DE LA VARIABLE RESPUESTA NÚMERO DE COLONIAS PARA EL DISEÑO EXPERIMENTAL ............. 113 TABLA 7.11 DATOS OBTENIDOS DE ART (AZUCARES REDUCTORES)PARA EL FINAL DE LA FERMENTACIÓN CON DATOS DEL DISEÑO EXPERIMENTAL ...................................................................................................................................... 114 TABLA 7.12 CUANTIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS ACIDO LÁCTICAS EN EL FERMENTO ........................................................ 119 XV ÍNDICE DE GRÁFICOS GRÁFICO 4.1 PRUEBAS PRELIMINARES DEL CONSUMO DE AZÚCARES .............................................................................. 57 GRÁFICO 4.2 AZUCARES REDUCTORES TOTALES DE LAS MUESTRAS 1 Y 2 ......................................................................... 57 GRÁFICO 4.3 AZÚCARES REDUCTORES TOTALES DE LA MUESTRA 5 ................................................................................ 58 GRÁFICO 4.4. ART [G/L] EN EL TIEMPO [HORAS] PARA EN EL CALDO MRS ..................................................................... 59 GRÁFICO 4.5 VARIACIÓN DE LAS PROPIEDADES EVALUADAS EN LAS MUESTRAS ................................................................. 71 GRÁFICO 4.6 ANÁLISIS SENSORIAL MUESTRA A......................................................................................................... 72 GRÁFICO 4.7 ANÁLISIS SENSORIAL: MUESTRA B ........................................................................................................ 73 GRÁFICO 4.8 ANÁLISIS SENSORIAL: MUESTRA C ........................................................................................................ 73 GRÁFICO 4.9 ANÁLISIS SENSORIAL DE LAS MUESTRAS ................................................................................................. 74 GRÁFICO 4.10 VIABILIDAD DEL L. CASEI SHIROTA EN EL PRODUCTO .............................................................................. 80 GRÁFICO 4.11 CONTROL DE LOS °BRIX EN EL PRODUCTO ............................................................................................ 81 GRÁFICO 4.12 CONTROL DEL PH EN EL PRODUCTO.................................................................................................... 82 GRÁFICO 7.1 ART [G/L] EN EL TIEMPO [HORAS] PARA LA MUESTRA 1.......................................................................... 106 GRÁFICO 7.2 ART [G/L] EN EL TIEMPO [HORAS] PARA LA MUESTRA 2.......................................................................... 107 GRÁFICO 7.3 ART [G/L] EN EL TIEMPO [HORAS] PARA LA MUESTRA 3.......................................................................... 108 GRÁFICO 7.4 ART [G/L] EN EL TIEMPO [HORAS] PARA LA MUESTRA 4.......................................................................... 109 GRÁFICO 7.5 ART [G/L] EN EL TIEMPO [HORAS] PARA LA MUESTRA 5.......................................................................... 110 GRÁFICO 7.6 ART [G/L] EN EL TIEMPO [HORAS] PARA EL CALDO MRS ........................................................................ 111 XVI ÍNDICE DE ANEXOS ANEXO A: FICHA TÉCNICA DE LA BACTERIA ............................................................................................................. 91 ANEXO B: FICHA TÉCNICA DE LA CARACTERIZACIÓN BOTÁNICA DEL ALOE VERA ................................................................ 94 ANEXO C: DETERMINACIÓN DE LA ACIDEZ TITULABLE (% DE ÁCIDO ACONÍTICO) ............................................................ 95 ANEXO D: ADECUACIÓN DE LA MELAZA PARA LOS ENSAYOS EXPERIMENTALES ................................................................ 96 ANEXO E: FICHA TÉCNICA DEL AGAR M.R.S........................................................................................................... 97 ANEXO F: CÁLCULO DE NUTRIENTES PARA EL MEDIO DE CULTIVO............................................................................... 101 ANEXO G: DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES TOTALES (ART) .................................................................... 103 ANEXO H: CURVA DE CALIBRACIÓN .................................................................................................................... 104 ANEXO I: RESULTADO DE LAS PRUEBAS PRELIMINARES ............................................................................................ 105 ANEXO J: DATOS USADOS EN EL DISEÑO EXPERIMENTAL .......................................................................................... 112 ANEXO K: ANÁLISIS SENSORIAL ......................................................................................................................... 115 ANEXO L: VIABILIDAD DE BACTERIAS ACIDO LÁCTICAS EN EL TIEMPO ........................................................................... 118 ANEXO M: CUANTIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS ACIDO LÁCTICAS EN EL FERMENTO MADRE .............................................. 119 1 CAPÍTULO I. 1. GENERALIDADES 1.1. Introducción Actualmente, en Bolivia varias comunidades del valle y altiplano producen aloe, estas se dedican a ofertar el insumo a microempresarios para su procesamiento en diferentes productos. Así se pretende incrementar los cultivos de sábila en las regiones como Sorata, Consata, Huatajata, Incapampa y otros municipios del departamento de La Paz, también se tomarán en cuenta regiones del departamento de Cochabamba, siendo éste el que tiene el mayor número de unidades agropecuarias que se podrían tomar en cuenta para la producción de aloe vera y así cubrir la demanda del mercado. La contribución a la seguridad alimentaria en nuestro país es necesaria, viendo que existe poblaciones donde se tiene una necesidad, debido a las limitaciones en la producción de alimentos, a razón de esto se buscan alimentos con calidad nutricional de fácil acceso como ser la bebida nutracéutica de aloe vera que esté a disposición de niños, jóvenes y adultos. 1.2. Antecedentes Tal como dice Guerra ¨El Aloe vera es un sustrato no tradicional para el uso de estos microorganismos, pero es interesante comprobar su potencial, ya que contiene vitaminas y la mayoría de sus carbohidratos se encuentran en forma de polímeros de manosa. Presenta capacidad bacteriostática y bactericida contra patógenos de infecciones, altos niveles de enzimas como catalizadores de células vivas, posee 8 aminoácidos esenciales y 9 aminoácidos no esenciales para la formación y estructuración de las proteínas y también minerales como el calcio, fósforo, cobre, hierro, magnesio, potasio y sodio; fungicida, antibiótico y regenerativo¨. Todos estos elementos son indispensables para el metabolismo y actividad celular. Siendo una alternativa para la elaboración de la bebida nutracéutica de aloe vera e incluirla en nuestra dieta. (Guerra, 2011) También se ha informado que por los componentes nutricionales que aporta puede considerarse como materia prima para la elaboración de alimentos funcionales y en la 2 actualidad como alimentos del futuro, por lo que el Aloe vera pudiera convertirse en una excelente fuente de productos nutricionales para el desarrollo y comercialización de nuevos productos como el que se desea realizar en la industria alimentaria en Bolivia. En la actualidad la producción de jugo de aloe vera ha crecido de manera exponencial, razón de la cual nace la necesidad de conocer sobre el proceso, este es versátil y se involucran varias operaciones tales como: triturado, mezclado, pasteurización y biotransformación de la bebida. 1.3. Planteamiento del problema Se debe explorar alternativas con otras materias primas, como la melaza de caña, que contiene componentes esenciales que favorecen el crecimiento de las BAL( Bacterias ácido lácticas) y proporcionan alternativas en la relación costo-beneficio, a nivel de producción y de rentabilidad, incrementando la proliferacióndel microorganismo, un primer acercamiento a evaluar las condiciones favorables para el incremento de Lactobacillus casei Shirota en melaza de caña puede generar nuevas iniciativas de alcance para producción (Vargas et al. 2004; Ortiz et al. 2008). Este proyecto está orientado a desarrollar un alimento funcional como ser una bebida “nutracéutica” ,añadiendo la melaza de caña un residuo azucarero como sustrato para el crecimiento de Lactobacillus casei Shirota un probiótico, en el jugo de aloe vera, el mismo es adaptado a las necesidades de nuestro país debido a que en los últimos seis años, las consultas por enfermedades gastrointestinales se han incrementado en un 50 por ciento según el Instituto Gastroenterológico Boliviano Japonés, además los pacientes son cada vez más jóvenes debido a los malos hábitos alimenticios (Paredes, 2017). El desarrollo de este nuevo producto se espera que presente un impacto en la industria boliviana ayudando al crecimiento tecnológico e industrial; en el consumidor generará una oferta de probióticos sin lácteos a precio accesible y al alcance de todo público, conociendo estas necesidades se detectó la oportunidad de fomentar el consumo de alimentos funcionales como ser la bebida nutracéutica para crear hábitos más saludables y combatir las enfermedades gastrointestinales. 3 1.4. Justificación 1.4.1. Justificación técnica Este proyecto se realiza con el fin de incentivar el cultivo de sábila en la comunidad boliviana para elevar el índice de su producción y así incorporarla en el mercado. Al ser una bebida nutracéutica que emplea residuos azucareros como ser la melaza y Lactobacillus el cual le confiere un carácter probiótico al producto siendo innovador en nuestro país, gracias a los conocimientos adquiridos en la Universidad Mayor de San Andrés, se espera una investigación integra y satisfactoria, hasta obtener el producto deseado, se prevé un futuro en el área de alimentos funcionales. El proyecto será impulso para nuevas investigaciones y desarrollo de alimentos funcionales, brindando información a las nuevas generaciones. 1.4.2. Justificación económica Para mejorar las condiciones de vida a través de mayores ingresos familiares en comunidades rurales de los valles interandinos de Bolivia, el Aloe Vera (sábila) se constituye en una alternativa con proyecciones de alta demanda en el contexto de la industria alimenticia, cosmética y médica, y en una buena salida económica; lo que garantiza un trabajo de gran rentabilidad. Actualmente se percibe una sociedad desarrollada que se vuelve más consciente de la salud y como mantenerla, en este intento existe un marcado interés por la adopción de dietas saludables que generen beneficios en cuanto al tratamiento y prevención de enfermedades, en respuesta a la creciente epidemia mundial y nacional de obesidad además otras enfermedades crónicas no trasmisibles (ECNT) relacionadas con el metabolismo. Consecuentemente la comunidad científica y la industria de alimentos realizan importantes esfuerzos por el desarrollo de alimentos funcionales especialmente productos probióticos, prebióticos y simbióticos con reconocido efecto beneficio sobre la salud. El mercado mundial de alimentos funcionales aumentó 1,5 veces entre 2003 - 2010, se predice que el mercado alcanzará 75 millones de euros en el año 2017 (HERNANDEZ, 2007). 4 La promoción económica del cultivo del aloe vera ofrece alternativas ventajosas para desarrollar la diversificación de la producción rural de los valles bolivianos, la bebida nutracéutica de aloe vera y melaza, proporciona alternativas en el costo, este mismo podría presentar una gran demanda coadyuvando una mejora de la economía y comercio. 1.4.3. Justificación social La bebida vegetal de Aloe vera es saludable ya que es una excelente opción desde el punto de vista nutrimental porque proporcionan nutrientes que son indispensables y en si no tienen ninguna contraindicación. Puede presentar un sabor muy agradable además de ser fácilmente tolerada a nivel digestivo. Cabe aclarar que, a pesar de ser un producto probiótico, no contiene leche en la actualidad existe un gran número de personas en Bolivia que por algún motivo no pueden o no quieren consumir leche de vaca por lo que la bebida nutracéutica de Aloe Vera, además de no contener colesterol ni grasas saturadas tiene una gran versatilidad, por lo que puede ser parte de nuestra dieta habitual o dieta diaria sin comprometer nuestra salud. Actualmente en Bolivia los estudios indican que 8 de cada 10 personas presentan enfermedades gastrointestinales, ulceras o gastritis (Paredes, 2017) motivo por el cual esta bebida cuyo extracto del aloe vera cuenta con propiedades hidratantes y cicatrizantes, puede ayudar en la prevención y el tratamiento de dichas enfermedades. 1.4.4. Justificación ambiental El cultivo de aloe vera requiere riego al menos una vez a la semana, sobre todo cuando el suelo está seco. Se necesita luz solar y agua suficiente para su propio desarrollo. De igual forma se requiere una suficiente cantidad de agua para la elaboración de esta bebida sin embargo, se vigila que no haya dispendio o desperdicio de agua en el proceso de elaboración. Usaremos la melaza de caña que es el subproducto de la refinación del azúcar bruto para obtener azúcar blanca, la misma se produce en grandes cantidades en el país, por esto es necesario el desarrollo de nuevas tecnologías de aprovechamiento de los propios residuos, además melaza de caña, que contiene componentes esenciales que favorecen el crecimiento 5 de las BAL y proporcionan alternativas de usar materias primas innovadoras a menor costo como endulzante y fuente de carbohidratos, a nivel de producción y de rentabilidad, incrementando la proliferación del microorganismo, valiéndose de sustratos disponibles para su uso. Con la utilización de este sustrato, se pretende minimizar los costos de producción a mayor escala y hacer buen uso de subproductos de los procesos de la industria azucarera, los cuales son actualmente utilizados para la producción de etanol y ácido cítrico entre otros. (Vargas et al. 2004; Ortiz et al. 2008). La elaboración del producto nos ayuda a ser amigables con el planeta. 1.5. Objetivos 1.5.1. Objetivo general Desarrollar un prototipo de bebida nutracéutica de aloe vera y melaza utilizando Lactobacillus casei Shirota, como una nueva alternativa contra los problemas gastrointestinales. 1.5.2. Objetivos específicos ➢ Caracterización de la materia prima a emplear en el producto. ➢ Determinar la relación recomendable entre aloe vera y melaza mediante el paquete informático Design Expert 7.0.0. ➢ Desarrollar y establecer la formulación para obtener la bebida funcional. ➢ Evaluar la aceptabilidad del producto a través de un análisis sensorial. ➢ Realizar los análisis fisicoquímicos y microbiológicos tendientes a verificar la calidad y vida útil del producto. ➢ Determinar la viabilidad de las bacterias probióticas respecto al tiempo. 6 CAPÍTULO II. 2. MARCO TEÓRICO 2.1. Desarrollo de nuevos productos El desarrollo de nuevos productos implica una compleja interacción de factores. Desde el punto de vista técnico, nos enfrentamos a cuestiones tales como la interacción de los ingredientes con la matriz alimentaria, para obtener por ejemplo un producto más saludable, o las tecnologías de conservación a emplear para conseguir : ¨un producto de elevadas cualidades nutricionales pero a la vez sensorialmente apetecible por los consumidores durante un amplio periodo de vida útil¨.(AINIA, 2012) Por otro lado, desde un punto de vista comercial o de mercado, debemos presentar al consumidor nuevos productos adaptados a sus gustos y a sus necesidades. Tomando en cuenta estos factores se pretende desarrollar un nuevo productopara el mercado boliviano. 2.2. Fases para el desarrollo de un nuevo producto alimenticio Por lo tanto, ¿cómo abordamos este reto?, aplicando una metodología de trabajo en la que incorporamos todas las posibles variables a tener en cuenta en este proceso creativo y que nos permite transformar la idea de producto en una realidad tecnológica de producto.(AINIA, 2012). Para ello seguimos las siguientes etapas: Figura 2.1 Fases para el desarrollo de un nuevo producto alimenticio Fuente: (AINIA, 2012) 7 2.3. Alimentos funcionales El término Alimento Funcional fue propuesto por primera vez en Japón en la década de los 80’s con la publicación de la reglamentación para los “Alimentos de uso específico de salud” (Foods for Specified Health Use o FOSHU). ILSI Europa (2006), define a los alimentos funcionales como “alimentos que se consumen como parte de una dieta normal y que contienen componentes biológicamente activos que ofrecen beneficios para la salud y reducen el riesgo de sufrir enfermedades”. Como alimentos funcionales destacan aquellos que, en forma natural contienen aminoácidos, minerales, vitaminas, antioxidantes como es el caso del Aloe Vera. De igual forma se tiene otro tipo de alimentos funcionales aquellos que han sido enriquecidos con componentes bio-activos, como fitoquímicos, antioxidantes, pre o probióticos como será en el desarrollo de la bebida propuesta. Estos alimentos pueden estar destinados a toda la población o a grupos determinados, que se pueden definir, por ejemplo, según su edad o su constitución genética. Además proporcionan beneficios fisiológicos adicionales más allá de satisfacer las necesidades nutricionales básicas.(Araya L & Lutz R, 2003) 2.3.1. PRODUCTOS NUTRACÉUTICOS Nutracéutico es una palabra creada en 1990 por el endocrinólogo y farmacólogo clínico norteamericano Stephen De Felice, quien fue durante varios años presidente de la Fundación para la Innovación en Medicina. Se trata de una nueva categoría de sustancias para el cuidado de la salud y cuyo efecto se sustenta en los beneficios, científicamente comprobados, de algunos nutrientes y/o ciertos componentes de los alimentos de origen principalmente vegetal, aunque también se identifica a algunos de origen animal. Ya en la década de los 80 muchos investigadores médicos, bioquímicos y nutricionistas habían comenzado a reconocer los beneficios aportados por el consumo de algunas sustancias de origen vegetal principal- mente, a través de un aporte distinto del derivado de nuestra propia alimentación. (Valenzuela B, Valenzuela, Sanhueza, & Morales I, 2014). 8 Este mismo concepto ha sido utilizado por el ser humano desde el período Paleolítico, procedente del conocimiento de la relación inseparable entre alimentación y salud. Igualmente, Hipócrates, hace más de 2500 años, planteó que la alimentación puede ser una alternativa terapéutica contra la enfermedad, sintetizando esta noción en la frase: “deja que la comida sea tu medicina, y la medicina sea tu comida”, la cual hoy se aplica ampliamente a los productos nutracéuticos (Rojas Jiménez, 2015). Los nutracéuticos no son nutrientes asociados con deficiencias en la dieta, sin embargo, son compuestos cuyo consumo se ha relacionado con la prevención y/o el tratamiento, en algunos casos, de ciertas enfermedades y como complemento de fármacos. Para el caso de algunos nutracéuticos la evidencia científica sobre los beneficios en la salud humana es tan sólida y reconocida por la comunidad científica internacional, que su o sus componentes han sido avalados por agencias reguladoras gubernamentales, como el FDA de los Estados Unidos, la Agencia Alimentaria de la Unión Europea o el Ministerio de Salud y Bienestar Social de Japón.(Valenzuela B et al., 2014). Figura 2.2 Desarrollo de la tendencia en evolución de los alimentos. Fuente: (Valenzuela B et al., 2014) 9 2.4. Situación actual de los alimentos funcionales y nutracéuticos Actualmente, los nutracéuticos juegan un papel importante en el diario vivir de un gran número de personas, siendo más prevalente en aquellas que presentan enfermedades crónicas(Rojas Jiménez, 2015). Las diversas razones por las cuales se induce el consumo de estos productos varían según edad, sexo, nacionalidad y costumbres. La razón principal que fundamenta el consumo de vitaminas, minerales y suplementos dietarios, es la prevención de enfermedades; esta práctica se ha hecho tan frecuente que es común observar personas que prefieren el reemplazo de la terapéutica occidental por el uso de nutracéuticos. (Rojas Jiménez, 2015). Según la Sociedad Española de Cardiología: El país de Francia, ofrece azúcar adicionada con fructooligosacáridos para fomentar el desarrollo de la flora benéfica intestinal. Otros ejemplos como el consumo de productos de origen vegetal (frutas, verduras, granos integrales y leguminosos) son considerados como medio de protección contra enfermedades crónicas como el cáncer, la presencia de fitoquímicos contribuye a la reducción de este riesgo. Compuestos como los terpenos de los vegetales verdes y granos, funcionan como antioxidantes, protegiendo a los lípidos, a la sangre y a otros fluidos corporales. Diferentes productos como la leche, lácteos fermentados (yogur, quesos, etc.) y otros derivados lácteos aportan cantidades aceptables de ácido linoleico que mejoran la composición de las células corporales y reducen el riesgo de ciertos tipos de cáncer. Los microorganismos fermentadores de los lácteos y los productos de la fermentación que producen en estos alimentos mejoran la flora y motilidad intestinal y reducen la presencia de ciertos tipos de úlceras en el tracto gastrointestinal. La miel tiene acción bactericida y antiinflamatoria en uso externo, con excelentes resultados en tratamientos de lesiones gástricas, necesarias para la prevención de enfermedades producidas por el Helicobacter pylori y como antifúngico en general. (Luengo, Sociedad Española de Cardiología, & Sección de Cardiología Preventiva y Rehabilitación, 2007) Actualmente, el mercado de los alimentos funcionales y nutracéuticos a nivel mundial es de varios billones de dólares. En países como Estados Unidos, Japón, Corea, India y China, y en menor medida en varios países europeos, la tendencia al consumo de alimentos 10 funcionales y nutracéuticos crece fuertemente. En Latinoamérica aún constituye un mercado incipiente, pero también de fuerte crecimiento. (Valenzuela B et al., 2014). Figura 2.3 Evolución en el nuevo concepto de alimentación Fuente: (Valenzuela B et al., 2014) 2.5. BACTERIAS ACIDO LACTICAS 2.5.1. Probióticos como alimento funcional Los probióticos son ingredientes funcionales de características físicas y químicas distintas, capaces de modificar la flora intestinal y producir un efecto beneficioso sobre el sistema inmune. Los microorganismos con estos efectos deberían cumplir con una serie de condiciones: ❖ Existencia natural en la flora microbiana intestinal. ❖ Pueden subsistir durante el tránsito por el intestino delgado y el colon. ❖ Tienen capacidad de adherencia al epitelio intestinal. ❖ No son patógenos, los más comunes son los Lactobacillus y Bifidobacterias. La mayoría de cepas usadas como probióticos, son especies de Lactobacillus y Bifidobacterias, sin embargo, también se han utilizado cepas de levadura como ingredientes 11 probióticos en los alimentos. Desde la antigüedad se han empleado bacterias del género Lactobacillus como agentes fermentadores debido a que otorgan propiedades únicas a los alimentos y sirven como conservantes debido a la producción de ácido láctico, esta genera un descenso del pH y así provoca un ambiente desfavorable para algunos patógenos. Estudios realizados por el Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos de la Universidadde Chile (INTA), indican que el consumo de probióticos contribuye a disminuir la colonización de la bacteria causante de acidez y, por dicha vía, la gastritis crónica o úlcera. La viabilidad de los microorganismos en un producto probiótico durante toda la vida útil es imprescindible, porque condiciona su actividad, aun cuando no hay acuerdos generales en cuanto a la concentración mínima necesaria del probiótico para alcanzar ventajas terapéuticas. Según varias investigaciones se sugieren niveles de concentraciones mayores a 106 UFC/ml, otros estipulan concentraciones mayores a 107 UFC/ml y 108 UFC/ml como niveles satisfactorios. La preferencia de los consumidores por productos que contengan microorganismos probióticos ha contribuido a una extensión de la variedad de productos probióticos disponibles en el mercado durante los últimos años. Se ha estimado que hay aproximadamente 70 productos en el mundo que tienen registrado en su contenido probióticos y la lista está en continua expansión (Shah, 2004). 2.5.2. Microorganismos probióticos Gran parte de los microorganismos utilizados en la industria de alimentos están relacionados con las bacterias ácido-lácticas (BAL), empleándolas para fermentar o crear cultivos de alimentos y han despertado gran interés al ser empleadas en la industria farmacéutica y de alimentos para la obtención de ácido láctico, componentes saborizantes, espesantes y bacteriocinas, así como el considerable valor nutritivo y el bajo coste energético de su producción. Los géneros más importantes son: Lactobacillus, Lactococcus, Enterocococcus, Streptococcus, Pediococcus, Leuconostoc, y Bifidobacterium. Su uso más corriente en todo el mundo se ha aplicado a los productos lácteos fermentados, como el yogurt, el queso, la mantequilla, la crema de leche, el kéfir y el kumis. 12 Las BAL son un conjunto de bacterias Gram-positivas, no esporuladas, en forma de cocos o bastones y catalasa negativa (aunque en algunos casos pueden encontrarse una pseudo- catalasa), con un metabolismo estrictamente fermentativo produciendo ácido láctico como el mayor producto final de la fermentación de los azúcares vía Embden-Meyer –glucólisis- (homofermentación), y en otras ocasiones producen además etanol, acetato y CO2 por la vía del ácido-6- fosfoglucónico (heterofermentación), (Larpent, 1995). Tabla 2.1 Microorganismos con propiedades probióticos Lactobacillus Bifidobacterium Otras bacterias ácido – lácticas Bacterias no ácido – lácticas L. acidophilus L. amylovorus L. casei L. crispatus L. delbrueekii Subsp Bulgaricus L. gallinarum L. gasseri L. johnssonil L. paracasei L. plantarum B. adolescentes B. animalis B. bifidum B. breve B. infantis B. lactis B. longum Enterococcus Faecalis Enterococcus Faecium Lactococcus lactis Leuconstoc Mesenteroides Pediococcus Acidilactiel Sporolactobacillus Inulinus Streptococcus Bacillus cereus Var. Toyol Escherichia coli Cepa nissle Propionibacterium Freudenreichii Saccharomyces Cerevisiae Saccharomyces boulardii Fuente: (Carrillo H, 2014) En términos generales estas bacterias tienen complejas necesidades de factores de crecimiento: vitamina B, aminoácidos, péptidos, bases púricas y pirimídicas. Esta es una de las razones del porqué abundan en un medio tan rico nutricionalmente como la leche. A nivel de laboratorio se deben emplear medios enriquecidos que posean estas características para su aislamiento (por ej., el caldo o agar MRS, agar Rogosa). Otra característica de este grupo de 13 bacterias es su tolerancia al pH ácido (pH = 5, incluso a veces menores), pero conforme el medio se va acidificando, resultan inhibidas un mayor número de especies (Cabeza, 2006). Durante la última década se ha incrementado el número de estudios sobre el rol que algunas cepas de BAL pudieran ser empleadas como cultivos probióticos, debido al creciente interés específicamente en la utilización de microorganismos probióticos en los alimentos por sus acreditados beneficios. (Vasiljevic & Shah, 2008). 2.5.3. Lactobacillus casei Shirota 2.5.3.1. Características. Lactobacillus casei Shirota es una bacteria Láctica, gram-positiva, no esporulada. El metabolismo de L. casei Shirota es hetero-fermentativo gracias a que posee una enzima llamada fosfocetolasa, que le permite poder seguir la vía de las pentosas convirtiendo hexosas (principalmente glucosa) en pentosas. Figura 2.4 Vista microscópica del Lactobacillus casei Shirota Fuente: («Lactobacillus-casei-Shirota.jpg (886×833)», s. f.) Es una bacteria anaerobia facultativa; es decir crece de manera óptima en condiciones anóxicas, pero puede presentar crecimiento si la concentración de oxígeno es baja, debido a 14 que posee enzimas como NADH oxidasa, NADH peroxidasa que minimizan la toxicidad de compuestos activados por el oxígeno. En un estudio realizado por Tuohy (2007) se comprobó la habilidad de Lactobacillus casei Shirota de sobrevivir el paso del tracto gastrointestinal humano, comprobando su presencia aún después de una semana sin consumir el producto probiótico. Además, en otro estudio realizado por Maragkoudakis et al, (2006), este microorganismo sobrevivió a pH = 3 durante 3 horas y pH = 2 durante 1 h, es resistente a la pancreatina y a las sales biliares, no presenta actividad hemolítica. 2.5.3.2. Taxonomía En forma taxonómica, L. casei, es reconocida como un grupo de varias especies, dado a que ellas son genéticamente similares, diferenciándose en ciertas características como son, temperatura óptima de crecimiento y habilidad para fermentar distintos tipos de carbohidratos. El Lactobacillus casei Shirota tiene forma de bastón, con un rango de tamaño entre: 0.7-1.1 x 2.0-4.0 μm, tolerantes a medios ácidos, incapaces de sintetizar porfirinas y su producto metabólico principal es el ácido láctico. El L. casei puede crecer entre 15 y 45 º C y requiere riboflavina, ácido fólico, pantotenato de calcio y factores de crecimiento de niacina. (Kandler y Weiss, 1986) Tabla 2.2 Taxonomía y propiedades metabólicas de Lactobacillus casei Shirota Fuente: (DANONE WORLD NEWSLETTER ,1995) 15 2.5.3.3. Requerimientos nutricionales y micronutrientes para Lactobacillus casei Los lactobacilos presentan particularidades para cada especie respecto a los requerimientos nutricionales complejos para los aminoácidos, péptidos, derivados de ácidos nucleicos, vitaminas, sales, ácidos grasos o ésteres de ácidos grasos y carbohidratos fermentables. Requieren no sólo carbohidratos como fuentes de Carbono y energía, sino también: aminoácidos, vitaminas y nucleótidos. Generalmente estos requerimientos variados suelen suplirse cuando el medio de cultivo de los lactobacilos contiene carbohidratos fermentables, peptona, extracto de carne y extracto de levadura, aunque una suplementación con jugo de tomate, manganeso, acetato y ésteres del ácido oleico, resulta estimulador y hasta esencial para muchas especies. Por eso, estos compuestos se incluyen en el medio MRS. Existen especies que se adaptan a sustratos muy particulares y necesitan factores de crecimiento especiales (Bergey,1992). 2.5.3.4. Micronutrientes Como su nombre lo dice los micronutrientes se requieren en pequeñas cantidades sin embargo, son de suma importancia en el crecimiento celular, además que, funcionan como cofactores y sirven de estructura para varias enzimas (Madigan et al, 2004) Por ejemplo, el manganeso, es un cofactor de crecimiento esencial para el Lactobacillus Casei debido a su función como constituyente de la enzima lactosa deshidrogenasa por consiguiente debe ser añadido al medio de cultivo en forma de 𝑀𝑛 𝑆𝑂4 𝐻2𝑂. Esto es necesario junto con la suplementación de extracto de levadura paramejorar la productividad de ácido láctico y el consumo de lactosa (Fitz Patrick et al., 2010, Ghaly, 2004). 2.5.3.5. Factores que afectan el crecimiento del Lactobacillus y la eficiencia de producción de ácido láctico La efectividad del proceso biotecnológico de producción de ácido láctico puede ser medida como la concentración de ácido láctico producido, el rendimiento de ácido láctico basado en el sustrato consumido y como la velocidad de producción del ácido láctico (Serna y Rodriguez, 2005). Esto depende de varios factores que pueden afectar el crecimiento del 16 Lactobacillus casei en el medio de fermentación, algunos de estos son: la fuente de carbono y nitrógeno, el tipo de fermentación, el pH, la temperatura, la formación de subproductos, entre otros (Panesar, 2007; Hofvendahl y Hanh, 2000). 2.5.3.6. Beneficios atribuidos a Lactobacillus casei Shirota. - Se ha demostrado capacidad para eliminar microorganismos patógenos del intestino, como cepas enterotoxigénicas de E. coli, Lysteria monocitogenes, Shigella sunnei y Salmonella typhimurium, tanto en estudios in vitro como con animales de experimentación. - Ha mostrado su eficacia frente a infecciones intestinales en niños producidas por rotavirus, y tienen efectos antitumorales en ratón. Estos efectos pueden ser debidos a las glicoproteínas secretadas por las propias bacterias. - Las primeras experiencias indican que en niños tratados con L. casei la cantidad de anticuerpos circulante es más elevada que en los no tratados y que su respuesta ante infecciones del tracto digestivo es mucho mejor. - En el organismo son capaces de sobrevivir a los jugos gástricos biliares y del duodeno llegando así al tracto intestinal donde desarrollan gran parte de sus benéficos como lo están la recuperación de la diarrea en los niños y problemas de intolerancia a la lactosa. Por la secreción de enzimas se crea un proceso llamado inmunomodulador que estimulan el sistema inmunológico del huésped en este caso el cuerpo humano activando a los macrófagos y modulando la respuesta de los anticuerpos que sirven como una barrera protectora secundaria. Con estos mecanismos de acción del Lactobacillus casei Shirota el cuerpo humano se libra de algunas enfermedades como diarreas, control de enfermedades inflamatorias de colon, fortalecimiento del sistema inmune, y reducción de alergias. 2.5.4. Bacterias ácido lácticas en productos no lácteos Los probióticos han sido ampliamente desarrollados e incorporados en matrices lácteas. Sin embargo, las personas con intolerancia y alergia a la lactosa, vegetarianos e hipercolesterolémicos, no pueden ingerir este tipo de productos, surgiendo así la necesidad de desarrollar nuevos productos como bebidas no lácteas y suplementos en comprimidos 17 (Prado et al., 2008). Las frutas y verduras son una parte esencial de la nutrición humana. En particular, son ricas en agua, vitaminas (vitamina C y vitaminas del grupo B), provitamina A, fitoesteroles, muestran una gran variedad de minerales y fitoquímicos. (DiCagno et al., 2011). Por todo esto se convierten en una nueva opción para el desarrollo de alimentos funcionales probióticos. En los últimos años se han realizado varias investigaciones en diferentes frutas, tipos de preparaciones y microorganismos para el desarrollo de jugos funcionales: Para el caso de los jugos de fruta, Tuorila y Cardello (2002), lo sugieren como un medio apropiado para fortificarlo con probióticos, debido a su ya reconocido beneficio para la salud y su frecuente consumo por un gran porcentaje de la población. Sin embargo, se ha reportado la presencia de aromas y sabores indeseable conocidos como “off-flavours” para el caso del Lactobacillus plantarum al ser adicionado a jugos de naranja, prefiriendo el consumidor las características sensoriales convencionales del jugo a su contraparte funcional, con la diferencia que, si es dado a conocer la información de los efectos beneficiosos a la salud, se incrementa la preferencia al jugo funcional por encima del convencional. En otro estudio se reporta que la adición de un 10% v/v de jugo de fruta tropical puede enmascarar los sabores indeseables causados por los probióticos (Luckow et al., 2006). Estudios realizados por Sheehan et al. (2007), muestran que hay una amplia diferencia respecto a la resistencia a la acidez de las bifidobacterium con respecto a los lactobacillus cuando son agregados a jugos de naranja, piña y arándano. Las cepas adicionadas al jugo de naranja y piña sobrevivieron por más tiempo comparado con el de arándano; el Lactobacillus casei, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei presentaron cantidades por encima de 7.0 log ufc/ml en jugo de naranja y por encima de 6.0 log ufc/ml en jugo de piña dentro de los primeras 12 semanas almacenadas a 4ºC, muestran algunos resultados obtenidos donde se puede apreciar en forma general una mayor resistencia y viabilidad del género Lactobacillus frente al bifidobacterium. Sin embargo, después de realizar pasteurización a 76ºC por 30 s y 90ºC por 1 min y tratamiento a alta presión por 400 MPa por 5 min L. casei, L. rhamnosus y L. Paracasei no resistieron los tratamientos de tal forma que no alcanzaron un nivel por encima de 6.0 log ufc/ml. 18 2.6. ALOE VERA El aloe vera es el nombre común de una especie en particular del género Aloe. Un miembro de la familia Xanthorrhoeaceae, el aloe vera es una de las aproximadamente 400 o más especies y el más comúnmente utilizado en productos de consumo. El nombre científico adecuado es Aloe vera (L.) Burm. F. El sinónimo Aloe barbadensis o Aloe barbadensis (Mill.) O (Miller) se usa comúnmente para referirse a aloe vera y también se puede ver en muchas etiquetas de productos.(IASC, 2019) 2.6.1. Taxonomía El género más importante de la familia Xanthorrhoeaceae es Aloe, con unas 400 especies caracterizadas por poseer hojas suculentas y con fotosíntesis CAM (metabolismo acido de crasuláceas), aunque sus dimensiones pueden variar entre especies (Newton, 2001). Reino : Vegetal División : Magnoliophyta o Angiosperma Clase : Liliopsida o Monocotiledonea Subclase: Lilidae Orden : Liliales Familia : Xanthorrhoeaceae Género : Aloe Especie : Aloe vera (L.) Burm. F. (Izco et al., 1997) De las 400 especies de aloe que existe en el mundo, sólo dos especies se cultivan comercialmente, es decir Aloe barbadensis Miller (Aloe vera) y Aloe aborescens. Hay al menos otras dos especies que tienen propiedades medicinales, Aloe Perry y Aloe ferox (Atherton 1998). Sin embargo, la especie más utilizada a lo largo de la historia y también actualmente es el Aloe vera L. Burn. F, con el cual trabajaremos debido a esto se describen las características botánicas de esta especie: Aloe vera L. (Aloe barbadensis Miller): es una planta originaria de África del norte, con hojas dispuestas en rosetas. La planta madura cuando es alrededor de 4 años de edad y tiene una vida útil de unos 12 años. Las hojas son de hasta 0,5 m de largo y 8 - 10 cm de ancho en 19 la base, que se estrechan a un punto, con dientes de sierra similar a lo largo de sus márgenes. En una sección transversal, la planta muestra una apariencia ligeramente cóncava en la superficie adaxial y apariencia claramente convexa en la superficie abaxial inferior (Schweizer, 1994).) Las hojas son alargadas, lanceoladas, y parecen brotar directamente del suelo en los ejemplares juveniles; aunque las plantas adultas presentan un tallo corto y robusto. Las flores del Aloe vera L. son pequeñas, tubulares, y se presentan en inflorescencias densas de color frecuentemente amarillo o rojo (ver Figura 2.5). Figura 2.5 Aloe vera (L.) Burm. F, planta y flor. Fuente: Spohn (2013) 20 2.6.2. Estructuray composición química del aloe vera Aloe vera es una planta suculenta tierna que contiene un alto contenido de agua (99 - 99,5%). Contenido de materiales sólidos varían desde 0,5 - 1% y se componen de una variedad de componentes activos, es decir, minerales de grasa y solubles en agua, vitaminas, polisacáridos simples / complejos, ácidos orgánicos, enzimas y compuestos fenólicos (Hamman, 2008).La hoja se compone de tres capas como ser gel, látex y corteza (Figura 2.6). Figura 2.6 Representación esquemática de la planta de Aloe vera y una sección transversal a través de una hoja de Aloe vera. Fuente: Boudreau et al. (2013) • Gel: capa interna que consiste en tejidos blandos, claros, húmedos y resbaladizos que tienen células de parénquima grandes. Esta es una gelatina mucilaginosa transparente como material. Contiene agua (99%), glucomananos, aminoácidos, lípidos, esteroles y vitaminas (Benítez et al.,2015; Hamman, 2008; Ramachandra y Rao, 2008). Capa del medio: Látex La cáscara verde o la corteza de la planta de aloe vera: consiste en múltiples capas intercaladas con cloroplastos. La pulpa interna de la hoja de aloe vera está compuesta por células de parénquima de paredes delgadas y grandes que almacenan el gel de aloe vera 21 • Látex: La capa media contiene antraquinonas, savia amarilla amargo y glucósidos (Hamman, 2008). • Corteza: La capa gruesa exterior que consiste en 15 - 20 células que da protección a la matriz de gel y ayuda en la síntesis de hidratos de carbono y proteínas (Misir et al., 2014). Corteza y gel constituyen la porción principal de peso de hoja entera (20 - 30% y 70 - 80%, respectivamente). En la siguiente figura se observa la composición: Figura 2.7 Composición química de gel de aloe vera (sobre base de peso seco) Fuente: (Luta y McAnalley 2005) Los hidratos de carbono constan de mono y polisacáridos incluyendo glucomananos, xilosa, ramnosa, galactosa y arabinosa. Enzimas presentes en Aloe vera gel incluyen catalasa, amilasa, oxidasa, celulasa, lipasa y carboxipeptidasa. El potasio y el cloruro están presentes en cantidades excesivas mientras sodio, calcio, magnesio, cobre, zinc, cromo y hierro están presentes en pequeñas cantidades. Una serie de glucósidos (antraquinonas) están presentes en Áloe gel con aloína A y aloína B es el más prominente. Antraquinonas y sus derivados son potentes agentes antimicrobianos y agentes analgésicos. Alrededor de 20 aminoácidos están presentes en Aloe vera gel entre las que siete son aminoácidos esenciales la siguiente (Ahlawat y Khatkar de 2011). Ver los compuestos presentes en Aloe vera (ver Tabla 2.3). Proteínas 7% Azucares 17% Polisácaridos 55% Lípidos 4% Compuestos fenolicos 1% Minerales 16% 22 Tabla 2.3 Resumen de los productos químicos composición de A. Vera Clase Compuestos Propiedades Aminoácidos Alina, ácido aspártico, arginina, ácido glutámico, cisteína, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, tirosina, treonina, valina, serina. Antraquinonas Aloe-emodina, Ácido aloético, antranol, ácido cinámico, barbaloína, ácido crisofanico, emodina, ester de ácido cinámico, aloína A & B, isobarbaloína, antraceno, resistanol. Aloína y emodina actúan como analgésicos, antibacterianos y antivirales. Carbohidratos Las ligninas y azúcares tales como arabinosa, celulosa, fructosa, fucosa, galactosa, lactosa, glucosa, maltosa, manosa, sustancia péctica, sacarosa, ácidos urónicos, xilosa, L-ramnosa Una glicoproteína con propiedades antialérgicas, llamado alprogen es un nuevo compuesto anti inflamatorio. Vitaminas Ácido fólico, B1, colina, B2, vitamina C, vitamina E, B6, beta caroteno, tocoferol. La vitamina A, C y E son antioxidantes y estos neutralizan los radicales libres. Minerales Calcio, magnesio, potasio, zinc, sodio, cobre, hierro, manganeso, fosforo, cromo. Son esenciales para el buen funcionamiento de varios sistemas de enzimas en diferentes vías metabólicas y pocos son antioxidantes Enzimas Amilasa, ciclo oxidasa, carboxipeptidasa, lipasa, bradicinesia, catalasa, oxidasa, fosfatasa alcalina, ciclooxigenasa, superóxido dismutasa. Bradicinesia ayuda a reducir la inflamación excesiva cuando se aplica tópicamente a la piel, mientras que otros ayudan en la descomposición de los azúcares y las grasas. Compuestos orgánicos y lípidos Esteroides (campesterol, colesterol, B-sito esterol), ácido salicílico, sorbato de potasio, triglicéridos, lignina, ácido úrico, saponinas, giberelina, triterpenos. Proteínas Lectinas, sustancia de tipo lecitina Lignina, una sustancia inerte, cuando se incluye en preparaciones tópicas, mejora el efecto de penetración de los otros ingredientes en la piel. Saponinas que son las sustancias jabonosas de aproximadamente 3% del gel y tener la limpieza y propiedades antisépticas. Hormonas Auxinas y gibberellins. Que ayuda en la cicatrización de heridas y tienen acción antiinflamatoria. Ácidos Orgánicos ácido acético, ácido cítrico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido láctico, ácido málico, piruvato, ácido succínico y acido tartárico Fuente: Domínguez et al. (2012). 23 2.6.3. Carbohidratos Los hidratos de carbono se derivan de capa de mucílago de la planta bajo la corteza, que rodea el parénquima interior o gel. Ellos comprenden tanto mono y polisacáridos. Los más importantes son los polisacáridos de cadena larga, que comprende glucosa y manosa, conocidos como los glucomananos [β (1, 4) - manano acetilado enlazado]. La xilosa, ramnosa, galactosa y arabinosa también están presentes en cantidades de trazas junto con lupeol (a triterpenoides), colesterol, campesterol y β- sitosterol. Los estudios estructurales de los polisacáridos de gel de aloe vera han demostrado (ver Figura 2.8), al menos cuatro glucomananos parcialmente acetilados diferentes, siendo los polímeros lineales con ninguna ramificación y que tienen enlaces glicosídicos 1,4 con glucosa y manosa en la proporción de 1: 2: 8. La viscosidad de gel reduce tras la hidrólisis de estos azúcares. Cuando se toma oralmente algunos de los azúcares se unen a sitios receptores que recubren el intestino y forman una barrera, posiblemente ayudando a prevenir síndrome de intestino permeable (Atherton, 1997). 2.6.3.1. Mono y polisacáridos Son responsables de muchos de los efectos terapeúticos del aloe. Se trata de glúcidos, hidratos de carbono simples (monosacáridos), tales como la glucosa, manosa o galactosa; o bien complejos, constituidos por largas cadenas de azúcares simples, tales como el glucomanano o el acemanano. Protegen las paredes del estómago y el intestino, aumentan las defensas y mantienen hidratados los tejidos. Tienen además un importante valor nutritivo y energético. Entre todos los polisacáridos conviene destacar la acción del acemanano, un potente germicida, fungicida y bactericida, pues se ha demostrado que además fortalece el sistema inmune y tiene un efecto antitumoral, cumpliendo una tarea vital en la prevención y tratamiento de enfermedades muy graves como algunos tipos de cáncer, SIDA o esclerosis múltiple (Atherton, 1997). 2.6.4. Látex de Aloe Es el amarillo-marrón (o, a veces rojizo) de material amargo, se encuentra en entre el tejido parenquimatoso interior de la planta (la hoja interior “de tipo gel” sustancia) y la corteza. Aloe látex “sangra” de la planta cuando se corta la corteza, y se utiliza principalmente en la 24 fabricación de fármacos en bruto. Aloe látex contiene antraquinona y relacionados constituyentes, conocidos principalmente por sus efectos laxantes. La mayoría de farmacopea describe látex de aloe simplemente como “aloe” o “áloe (jugo)”. No es difícil entender por qué tanta confusión puede verse, entre los reguladores, en particular, debido a los nombres utilizados .(IASC_Aloe_vera_A_Scientific_Primer.pdf,s. f.) 2.6.4.1. Antraquinonas Son laxantes naturales y potentes antibióticos y antivirales. Las principales antraquinonas del aloe son: ✓ La aloína: con propiedades laxantes y analgésicas. ✓ La aloemodida: además de laxante es muy eficaz en la lucha contra las infecciones, es bactericida y fungicida. Por medio de determinadas reacciones orgánicas genera ácido salicílico, siendo este último el componente de la aspirina, de ahí su efecto calmante y febrífugo. ✓ El ácido aloético: tiene acción bactericida y antivírica, neutraliza las toxinas bacterianas. ✓ El ácido cinámico: con cualidades fungicidas (combate los hongos) y es un potente limpiador. Resulta especialmente indicado para descomponer tejidos necróticos (muertos) y como calmante del dolor. ✓ El ácido crisofánico: Regula la actividad intestinal actuando directamente sobre la musculatura lisa del colon y dificultando la reabsorción de agua. Es un derivado de la emodina de aloe, se emplea en el tratamiento de las enfermedades de la piel, por ejemplo, en la psoriasis o contra los hongos cutáneos. ✓ Aceite etéreo: posee las mismas cualidades que el éter, pero no su toxicidad. ✓ Resistonoles: alcoholes que derivan del ácido cinámico, tiene propiedades bactericidas. Figura 2.8 Sección de la Hoja de Aloe barbadensis Miller. Fuente: Domínguez et al. (2012). 25 2.6.5. Potencial nutracéutico El uso de Aloe vera extracto de gel en la preparación de los alimentos funcionales se inició en 1970 en Europa y Estados Unidos (Park y Jo, 2006). Actualmente, sus aplicaciones se han ampliado para el desarrollo de una variedad de alimentos funcionales y nutracéuticos. Polímeros de manosa con algunos azúcares, incluyendo la glucosa y acemanos están presentes en áloe gel. Estos, junto con glicoproteínas, enzimas, aminoácidos y vitaminas contribuyen a la funcionalidad de alimentos sin afectar su calidad y aceptabilidad (Rodríguez et al., 2010). Pushkala y Srividya (2011) formularon una bebida funcional Dahi (un producto lácteo fermentado del sur de Asia) mediante la sustitución de la leche descremada con Aloe vera gel. No sólo añade a su potencia nutricional y terapéutico, de igual manera los parámetros de calidad de Dahi (sinéresis suero, capacidad de retención de agua, el rendimiento total, índice de acidez y viscosidad) también se mejoraron. El Gel de Aloe vera también enriquece las bebidas como (jugo de Aloe vera endulzado, jugo listo para servir ha sido reportado y mezclado con calabazas), se dice que tienen potencial para mantener una buena salud (Sharma et al., 2015). Otros alimentos para la salud desarrollados a partir de Aloe vera incluyen helado (Manoharan y Ramasamy, 2013), lassi (una bebida fermentada tradicional de productos lácteos Asia del Sur), néctar mango y bebidas gaseosas (Moore y McAnalley, 1995). Los alimentos anteriormente descritos se dice que son funcionales y nutracéuticos basado en su análisis in vitro que confirme la presencia de compuestos bioactivos (por ejemplo, flavonoides). Sin embargo, su bio funcionalidad puede estar influenciada por sus interacciones con los componentes de los alimentos. Por lo tanto, se recomienda realizar estudios biológicos para confirmar el potencial de dichos productos nutracéuticos. 26 2.6.6. Control de calidad del Aloe vera Según la ASC (Aloe Science Council) y OMS (Organización Mundial de la Salud), respecto al control de calidad, el gel de Aloe, debe cumplir los siguientes requerimientos: Tabla 2.4 Parámetros establecidos por ASC PARÁMETRO VALOR Apariencia Líquido transparente incoloro Olor Característico Sabor Ligeramente Amargo Densidad 1.009 - 1.013 (20°C) [g/cc] 0.99- 1.02 (25°C) [g/cc] Índice de refracción 1.3320 – 1.3380 Residuo Seco (0.75 - 1.50) % Solidos totales (0.85- 1.55) % Humedad 98.50% pH 3.5-6.5 Índice de acidez Máx. 3.0 (mg KOH/g muestra) Calcio (23.3-52.3) mg/dl Magnesio (3.2- 4.7) mg/dl Plomo Máx. 10 mg/Kg Cadmio Máx. 0.3 mg/Kg Aerobios totales Máx. 100 UFC/ ml Hongos y Levaduras Máx. 10 UFC/ ml Enterobacterias Máx. 10 UFC/ ml Salmonella spp Ausente Staphylococcus Spp Ausente Patógenos Ausentes en 1 g Fuente: ASC (Aloe Science Council) 27 Respecto a los compuestos antraquinónicos la Unión Europea ha fijado un límite máximo para la concentración de aloína permitidos en alimentos y bebidas (CEE Directiva del Consejo 88/388). La concentración máxima permitida es de 0,1 [mg/ kg]. (Bozzi, A.; Perrin, S. and Austin, F. 2007). 2.6.7. Tratamiento Como se ha mencionado antes, la parte principal de la planta de aloe vera utilizada es la hoja, que puede ser procesada de dos maneras diferentes para producir jugo de aloe vera. Los diferentes procedimientos de procesamiento se describen a continuación: 2.6.7.1. Aloe vera jugo de la hoja Aloe vera jugo de las hojas se hace utilizando las hojas enteras de aloe vera, seguidamente molerlas para finalmente realizar una maceración. Típicamente se utiliza un tratamiento enzimático (por ejemplo, celulasa) para descomponer los materiales de corteza pesados, a continuación se filtra la suspensión resultante, por lo general con la filtración de carbón activado, para eliminar cualesquiera de los otros materiales no deseados, tales como el látex de aloe (amarillo, amarga degustación exudado que es un poderoso laxante). El resto es el zumo de hoja de aloe vera. 2.6.7.2. El aloe vera jugo de la hoja interior Aloe vera jugo de la hoja interna se hace mediante la eliminación de la cáscara antes de la elaboración, ya sea por la máquina o a mano, y luego enjuagar el látex de aloe. El material del centro de la hoja es un gel este luego molido / triturado es conocido como jugo aloe vera de la hoja interior. (IASC_Aloe_vera_A_Scientific_Primer.pdf, s. f.) En el proyecto que se realizara se pretende utilizar el segundo método obteniendo jugo de aloe vera de la hoja interior, considerando los requerimientos que tiene la bebida deseada. 28 2.7. MELAZA 2.7.1. Definición La miel o también llamada melaza, es un líquido denso y viscoso de color oscuro, es producto final de la fabricación o refinación de la sacarosa procedente de la Caña de Azúcar. Este subproducto se usa para alimentos concentrados para animales y como suplemento alimenticio para el hombre. (Téllez, 2004) Las melazas, mieles finales o melazas “blackstrap”, suelen ser definidas, por muchos autores como los residuos de la cristalización final del azúcar de los cuales no se puede obtener más azúcar por métodos físicos. 2.7.2. Clasificación La Asociación Americana de Control Oficial de Alimentos (AAFCO), recomienda diferentes clasificaciones para las melazas, según el azúcar total y el contenido de humedad, así: - Melaza Superior Blackstrap: Melaza de caña que contiene 23.4% de agua o menos, y 53.5% o más de azúcares totales. - Melaza Blackstrap: Melaza compuesta por 23.5% a 26.4% de agua y 48.5% a 53.5% de azúcares totales (Castro, 1993). Otra clasificación de las melazas, se da por el porcentaje de materia sólida en peso, o grados Brix, de la siguiente manera: - Melaza Blackstrap: Es el subproducto de la elaboración del azúcar, cuyo porcentaje de materia sólida en peso (grados Brix), diluido con igual peso de agua es de 42.5 grados Brix. - Melaza de Caña Alimenticia: Es la melaza blackstrap diluida con agua, hasta una concentración en grados Brix, no menor de 39.75; a este producto no se le ha especificado un valor de concentración de azúcares. 29 - Melaza High Test o Jarabe Invertido: Es el producto obtenido por la concentración del jugo clarificado, hasta un porcentaje de materia sólida en peso de 85% e invertido con ácido o con invertasa (Castro, 1993). 2.7.3. Proceso de Obtención Las melazas se obtienen como un subproducto final en la elaboración del azúcar de caña. Una breve
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