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EVALUACIÓN DE LA OBTENCIÓN DE BIOETANOL A PARTIR DEL ALMIDÓN DE ÑAME (DIOSCOREA ROTUNDATA, DIOSCOREA ALATA Y DIOSCOREA TRÍFIDA) MEDIANTE LA HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA Y POSTERIOR FERMENTACIÓN. JOSE DAVID MURGAS TORRES MIGUEL ANGEL VASQUEZ MONTERROSA UNIVERSIDAD DE SAN BUENAVENTURA FACULTAD DE INGENIERÍAS, ARQUITECTURA, ARTE Y DISEÑOS PROGRAMA DE INGENIERÍA QUÍMICA CARTAGENA 2012 EVALUACIÓN DE LA OBTENCIÓN DE BIOETANOL A PARTIR DEL ALMIDÓN DE ÑAME (DIOSCOREA ROTUNDATA, DIOSCOREA ALATA Y DIOSCOREA TRÍFIDA), MEDIANTE LA HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA Y POSTERIOR FERMENTACION. JOSE DAVID MURGAS TORRES MIGUEL ANGEL VASQUEZ MONTERROSA Trabajo de grado presentado como requisito para optar al título de Ingeniero Químico Asesora Externa Adriana Alejandra Pérez Bacterióloga UNIVERSIDAD DE SAN BUENAVENTURA FACULTAD DE INGENIERÍAS, ARQUITECTURA, ARTE Y DISEÑOS PROGRAMA DE INGENIERÍA QUÍMICA CARTAGENA 2012 Nota de aceptación Firma del Presidente del jurado Firma del jurado Firma del jurado Cartagena,Mayo de 2012 DEDICATORIA Celebramos el fin de una etapa importante en nuestra vida dando las gracias, principalmente a nuestro señor Dios que nos permitió compartir este tiempo de enseñanza necesaria para nuestra formación. A mi querida madre María Lourdes por luchar junto a mí en la búsqueda de mis objetivos, por su educación y valores inculcados a lo largo de mi vida. A mis amigos y todos lo que hicieron parte de esta formación, por brindarme siempre palabras de aliento y el apoyo en los momentos difíciles. Dedico esto a una persona muy especial que ha sido una fuente inagotable de luz para mí, que me ha brindado su confianza y que siempre estuvo ahí, para apoyarme cuando lo necesite, la persona que considero como mi padre; por ese motivo gracias te doy mi querido tío Jonny Torres Saurith, gracias por su apoyo incondicional. JOSE DAVID MURGAS TORRES DEDICATORIA A dios principalmente ya que gracias a él todo esto fue posible A mí querida madre Milagros Monterrosa quien con mucho sacrificio me saco adelante durante todos estos años, siempre estuvo apoyándome en las buenas y en las malas, le doy las gracias por su comprensión y paciencia, por creer en mí en la adversidad, por darme tú ejemplo y educación me ayudaste a ser una mejor persona. A mi tía Carmenza Monterrosa quien siempre estuvo a lo largo del desarrollo de mi carrera apoyándome. A mi tía Marina quien a pesar de la distancia me dio su apoyo y consejo. A mis demás tías Clara y Raquel quienes siempre estuvieron pendientes de mi proceso y me brindaron su cariño y comprensión. A mi hermana Gina por ser fuente de alegría en todo momento. A mis amigos María, Carlos y Fabián con quienes pude compartir alegrías y tristezas, gracias por su amistad incondicional. Miguel Ángel Vásquez Monterrosa AGRADECIMIENTOS El desarrollo y culminación de este proyecto se debe al apoyo de todas aquellas personas que nos brindaron sus conocimientos y experiencia. Expresamos nuestros más sinceros agradecimientos: A nuestros padres, familiares y amigos que estuvieron siempre presente en cada uno de nuestros felices y difíciles, brindándonos su apoyo de manera incondicional. A la Universidad de San Buenaventura por la excelente formación académica brindada, logrando formar profesionales integrales. A Adriana Alejandra Pérez, Bacterióloga quien estuvo asesorándonos en el desarrollo del proyecto de grado. Al personal de los laboratorios: Aissa Rodríguez, Rosa Rangel, Carmen Muskus y Alma Estrada por brindarnos su ayuda incondicional. A todos muchas gracias. I CONTENIDO Pag 1 PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN 1 1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 1 1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA 4 1.3 JUSTIFICACIÓN 4 1.4 OBJETIVOS 5 1.4.1 Objetivo general 5 1.4.2 Objetivos específicos 5 2 MARCO DE REFERENCIA 6 2.1 ANTECEDENTES INVESTIGATIVOS 6 2.1.1 Historia del etanol 6 2.1.2 Estado actual en Latinoamérica 7 2.2 BASES TEÓRICAS 10 2.2.1 Ñame 10 2.2.2 Dioscorea Alata 11 2.2.3 Dioscorea Trífida 12 2.2.4 Dioscorea Rotundata 13 2.2.5 Producción Mundial de Ñame 14 2.2.6 Producción de Ñame en Colombia 15 2.2.7 Almidón 16 2.2.8 Hidrolisis 20 2.2.9 Hidrolisis Química 21 2.2.10 Hidrolisis Enzimática 22 2.2.11 Fermentación 24 2.2.12 Etanol 38 2.2.13 Destilación 40 2.3 MARCO LEGAL 42 2.4 MARCO CONCEPTUAL 44 3 DISEÑO METODOLÓGICO 46 3.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN 46 3.2 POBLACIÓN Y MUESTRA 48 3.3 METODOLOGÍA UTILIZADA EN EL PROYECTO 48 3.3.1 Obtención de la harina de ñame 48 3.3.2 Hidrólisis enzimática 50 3.3.3 Fermentación 52 3.3.4 Destilación 56 3.4 RECOLECCION DE LA INFORMACION 56 3.4.1 Fuentes primarias 56 3.4.2 Fuentes secundarias 56 3.5 INSTRUMENTOS 57 3.5.1 Instrumentos y equipos 57 3.5.2 Materias primas y reactivos 57 3.6 HIPOTESIS 58 3.6.1 Hipótesis nula 58 II 3.6.2 Hipótesis alternativa 58 3.7 VARIABLES 58 3.7.1 Variables Independientes 58 3.7.2 Variables Dependientes 58 3.8 OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES 59 3.9 PROCESAMIENTO DE LA INFORMACIÓN 59 4 RESULTADOS 60 4.1 Comportamiento de Dioscorea Alata en la hidrólisis enzimática 60 4.2 Comportamiento de Dioscorea Trífida en la hidrólisis enzimática 62 4.3 Comportamiento de Dioscorea Rotundata en la hidrólisis enzimática 64 4.4 Lectura de pH 66 4.4.1 Lectura de pH para Dioscorea Alata 66 4.4.2 Lectura de pH para Dioscorea Trífida 67 4.4.3 Lectura de pH para Dioscorea Rotundata 68 4.5 Lectura de °BRIX 69 4.5.1 Lectura de °BRIX para Dioscorea Alata. 69 4.5.2 Lectura de °BRIX para Dioscorea Trífida 70 4.5.3 Lectura de °BRIX para Dioscorea Rotundata 71 4.6 Lectura de azucares reductores en la fermentación. 72 4.6.1 Lectura de azucares reductores para Dioscorea Alata 72 4.6.2 Lectura de azucares reductores para la Dioscorea Trífida 73 4.6.3 Lectura de azucares reductores para Dioscorea Rotundata 74 4.7 Conteo de microorganismos 75 4.7.1 Conteo de microorganismos para Dioscorea Alata 75 4.7.2 Conteo de microorganismos para Dioscorea Trífida 76 4.7.3 Conteo de microorganismos para Dioscorea Rotundata 77 4.8 Producción de etanol 78 4.8.1 Producción de etanol de Dioscorea Alata 78 4.8.2 Producción de etanol de Dioscorea Trífida 80 4.8.3 Producción de etanol de Dioscorea Rotundata 82 4.9 Rendimientos del proceso 84 4.9.1 Rendimiento para Dioscorea Alata . 84 4.9.2Rendimiento para Dioscorea Trífida 84 4.9.3 Rendimiento para Dioscorea Rotundata 85 4.10 ANÁLISIS ESTADÍSTICO 85 5 CONCLUSIONES 87 6 RECOMENDACIONES 88 BIBLIOGRAFÍA 89 ANEXOS 92 III LISTA DE FIGURAS Pag Figura 1. Línea de tiempo de utilización de bioetanol a nivel mundial. 6 Figura 2. Imagen sobre hojas de Dioscorea (izquierda) y morfología 10 del ñame (derecha) Figura 3. Hojas D. Alata (izquierda) y tubérculo (derecha) 12 Figura 4. Hoja de D.Trífida (izquierda) y tubérculo (derecha) 13 Figura 5. Hojas de D. Rotundata (izquierda) y tubérculo (derecha) 14 Figura 6. Producción de ñame en los departamentos de 16 Colombia año 2010 Figura 7. Estructura del almidón 18 Figura 8. Esquema del proceso de glucolisis. 27 Figura 9. Esquema de distintas formas de levadura 34 Figura 10. Diagrama de la estructura de una levadura 35 Figura 11. Curva de crecimiento de un microorganismo 37 Figura 12. Diagrama de flujo de un proceso de destilación 42 Figura 13. Equipo de destilación simple 42 Figura 14. Proceso de extracción de harina de ñame 49 Figura 15. Esquema general del proceso de hidrólisis 52 Figura 16. Hidrolizados Esterilizados 53 Figura 17. Fermentadores usados 54 Figura 18. Toma de muestras 55 Figura 19. Lecturas de pH 55 Figura 20. Montaje del equipo de Destilación 56 IV LISTA DE GRAFICAS. Pag Gráfica 1. Comportamiento de azucares reductores en la hidrólisis 61 enzimática de D. Alata Gráfica 2. Comportamiento °Brix en la hidrolisis enzimática 62 de D. Alata Gráfica 3. Comportamiento azucares reductores en la hidrólisis 63 enzimática de D. Trífida. Gráfica 4. Comportamiento °Brix en la hidrólisis enzimática 64 de D. Trífida. Gráfica 5. Comportamiento azucares reductores en la hidrólisis 65 enzimática de D. Rotundata. Gráfica 6. Comportamiento °Brix en la hidrólisis enzimática 66 de D. Rotundata. Gráfica 7. Comportamiento del pH durante la fermentación 67 de D. Alata. Gráfica 8. Comportamiento del pH durante la fermentación 68 de D. Trífida. Gráfica 9. Comportamiento del pH durante la fermentación 69 de D. Rotundata. Gráfica 10. Comportamiento del descenso de °Brix durante 70 la fermentación de D. Alata. Gráfica 11. Comportamiento del descenso de °Brix durante 71 la fermentación de D. Trífida. Gráfica 12. Comportamiento del descenso de °Brix durante 72 la fermentación de D. Rotundata. Gráfica 13. Comportamiento del descenso de azucares 73 reductores durante la fermentación de D. Alata. V Gráfica 14. Comportamiento del descenso de azucares 74 reductores durante la fermentación de D. Trífida Gráfica 15. Comportamiento del descenso de azucares 75 reductores durante la fermentación de D. Rotundata Gráfica 16. Comportamiento del crecimiento de biomasa 76 durante la fermentación de D. Alata Gráfica 17. Comportamiento del crecimiento de biomasa 77 durante la fermentación de D. Trífida Gráfica 18. Comportamiento del crecimiento de biomasa 78 durante la fermentación de D. Rotundata Gráfica 19. Comportamiento de la producción de alcohol 79 durante la fermentación de D. Alata Gráfica 20. Gráfico de medias variedad Dioscorea Alata 80 Gráfica 21. Comportamiento de la producción de alcohol 81 durante la fermentación de D. Trífida. Gráfica 22. Gráfico de medias de la variedad Dioscorea Trífida 82 Gráfica 23. Comportamiento de la producción de alcohol 83 durante la fermentación de D. Rotundata Gráfica 24. Gráfico de medias de la variedad Dioscorea Rotundata 83 VI LISTA DE TABLAS Pag Tabla 1. Producción de Ñame A nivel Mundial año 2005. 15 Tabla 2. Almidón presente en diferentes alimentos. 19 Tabla 3. Compuestos producidos por el proceso de fermentación. 29 Tabla 4. Metabolitos microbianos comerciales. 29 Tabla 5. Tamaño de células en procesos Biotecnológicos. 34 Tabla 6. Cantidad de ñame utilizada en el proceso 49 Tabla 7. Condiciones de la enzima α Amilasa 51 Tabla 8. Condiciones de la enzima AMG (Amiloglucosidasa) 51 Tabla 9. Condiciones en el proceso de la fermentación 53 Tabla 10. Equipos e instrumentos laboratorio 57 Tabla 11.Lista de materias primas y reactivos 57 Tabla 12. Operacionalización de las variables 59 VII RESUMEN Hoy en día la búsqueda de energías alternativas y su utilización se ha convertido en una de las principales preocupaciones y desafíos para la humanidad. De seguir así, con el consumo desaforado de los combustibles fósiles, el futuro de la humanidad y del planeta se prevé desastroso debido al acelerado ritmo de contaminación y al gran impacto que se ha generando en la capa de ozono por su combustión. Por lo planteado anteriormente esta investigación tiene como finalidad realizar la evaluación de la obtención de etanol a partir de tres variedades de ñame como sustrato,mediante el proceso de hidrólisis enzimática y posterior fermentación, teniendo en cuenta las propiedades que posee este tubérculo y sualta producción en las zonas regionales, con lo que se busca darle un valor agregado al uso de este producto agrícola. De acuerdo a lo planteado anteriormente, en el primer capítulo del proyecto se realizó el planteamiento y la formulación del problema, en donde se destaca la importancia de evaluar un nuevo sustrato (ñame) para la obtención de etanol y utilizarlo como alcohol carburante y así minimizar las emisiones de gases en la atmósfera reduciendo así el impacto ambiental, también se proponen los objetivos los cuales deben ser alcanzables para que la investigación sea valedera. En el segundo y tercer capítulo, se recopilaron las investigaciones realizadas previamente a esta investigación, las bases teóricas que fundamentan la investigación y se planteo la metodología empleada para la obtención de los resultados, además se establece las fuentes de información utilizadas y la descripción de las variables implicadas en el proceso. En el capítulo 5 y 6 se encuentran las conclusiones y recomendaciones que se pudieron extraer del proyecto, que servirán como punto de referencia a futuros investigadores que decidan indagar o explorar en este campo o que deseen llevar a cabo el proceso a escala piloto o industrial 1 ESTUDIO DE LA OBTENCIÓN DE BIOETANOL A PARTIR DEL ALMIDÓN DE ÑAME (DIOSCOREA ROTUNDATA, DIOSCOREA ALATA Y DIOSCOREA TRÍFIDA), MEDIANTE LA HIDRÓLISIS ENZIMATICA Y POSTERIOR FERMENTACIÓN. 1. PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN 1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Históricamente las fuentes de energía que se han utilizado en el desarrollo de muchos procesos (el transporte, las fábricas, la calefacción y las industrias de generación de energía eléctrica) son los combustibles fósiles (petróleo, carbón y gas natural). Por eso estos compuestos son claves en el desarrollo de la vida y sociedad de nuestro planeta. Debido al agotamiento progresivo de los combustibles fósiles, en los últimos años se ha generado una gran preocupación por parte de los países de todo el mundo por buscar nuevas fuentes de energía, pero hasta el momento no se ha desarrollado una fuente de energía que reemplace por completo a los combustibles fósiles, debido a que poseen un gran potencial energético.Sin embargo, se han desarrollado innumerables estudios a lo largo de estas cuatro últimas décadas y en la literatura científica se reporta que una potencial fuente nueva energía es la biomasa, que supone la obtención de combustibles desde fuentes vivas (plantas, microorganismos, incluso algunos residuos de animales), como el etanol o alcohol etílico, producido a partir de la fermentación de los azucares que se encuentran en los productos vegetales (cereales, caña de azúcar, remolacha, maíz entre otros). Este combustible debidamente procesado poco a poco comienza a penetrar como combustible en el mercado internacional1. Cada día que pasa se hace más evidente la necesidad de encontrar nuevas alternativas que puedan reemplazar a los combustibles fósiles, que ayuden a la conservación y recuperación del medio ambiente. Es por esto que la energía a partir de la biomasa, es sin lugar a duda una fuente importante a tener en cuenta, porque se puede reducir la contaminación proveniente de la utilización de energía a partir de los combustibles fósiles. Teniendo en cuenta esto, para la investigación se utilizó como biomasa un producto vegetal(ñame), que por su composición permite la obtención de bioetanol, que se puede utilizar como combustible o como aditivo de la gasolina. 1 Estudio realizado por Global Bioenergy Partnership (Asociación Global de Bioenergía) [GBEP (2007)] 2 El ñame pertenece a la familia DIOSCOREACEA, género Dioscorea. Se encuentra distribuido en las regiones tropicales de alta pluviosidad, contiene fécula abundante y constituye un importante alimento en las regiones tropicales. Las especies más cultivadas corresponden a Dioscorea Alata, D. Rotundata, D. Cayenensis, D. Esculenta, D. Bulbífera y D. trífida, de los cuales la primera es la preferida en la producción de tubérculos para el consumo humano. El área mundial cultivada comprende tres regiones principales: África occidental, sur de Asia incluyendo parte de China, Japón, Oceanía y los países del Caribe. En América, el ñame es solo importante en Brasil, Colombia, Haití, Venezuela y Antillas Francesas. En Colombia se pueden encontrar varias especies de ñame, como el ñame criollo (D. Alata), ñame espino (D. Rotundata), ñame papa (D. Bulbífera), ñame azúcar (D. Esculenta) y ñampin (D. Trífida). D. Alata y D. Rotundata son las especies de mayor importancia tanto por el área sembrada como por la demanda del tubérculo, seguidas por D. Trífida. El cultivo del ñame se considera abundante en la Costa Atlántica, las áreas de mayor producción en Colombia son: la zona costera del departamento de Córdoba, la subregión natural de los montes de María en los departamentos de Sucre y Bolívar, y algunos municipios de los departamentos del Cesar y la Guajira. Aun cuando actualmente se le conoce en todo el mundo, en Colombia el ñame se ha caracterizado como producto de cultivo y consumo tradicional en la Costa Atlántica2. El uso del ñame se ve en reflejado en las comidas cotidianas como (mote de ñame, dulce de ñame y sancocho). El cultivo de este tubérculo involucra a 9.000 familias de pequeños productores cuyos sistemas de comercialización se caracterizan por bajos volúmenes, escasa infraestructura de acopio, transporte y almacenamiento y una reducida transformación, donde el 78% de la producción se dirige al mercado en fresco; además en la región de la Costa Atlántica, donde se cultivan alrededor de 29.757 ton/año3; a pesar de la alta producción en el año el ñame no es utilizado con otros fines a parte del alimenticio, ya que no se conocen transformaciones tecnológicas que permitan generar otro uso para este. Su condición de alimento regional que no se sitúa como de primera necesidad ha estancado su explotación, que se realiza generalmente en predios de economía campesina con bajo nivel de tecnificación. Es necesario realizar un análisis sobre cómo afecta la producción de biocombustible al campo, y hay que tener presente que se necesitan alimentos para vivir, pero también se necesitan combustibles para atender las necesidades 2 Evaluación De Propiedades Tecnofuncionales De Variedades De Ñame De La Costa Atlántica. Disponible en: http://www.unicordoba.edu.co/pregrado/copia%20alimentos/proyectos/pba.pdf fecha:13/03/2012 3 ALVIS, Armando y VELEZ, Carlos. Información Tecnológica-Vol. 19 N°5-2008, pág.: 11-18 Disponible en: http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0718-07642008000500003&script=sci_arttext 3 de transporte, industria, vivienda, comercio, etc. La elección entre alimentos y biocombustibles no se puede plantear en términos absolutos, porque no se puede renunciar a ninguno. La demanda de alimentos y la demanda de combustibles van en aumento, tanto por el desarrollo económico, como por el crecimiento poblacional. Ambos mercados, el de alimentos y el de combustibles, existen y van a seguir existiendo; están y seguirán compitiendo por los productos agrarios que son materia prima para la fabricación de biocombustibles. Se necesita tanto de los alimentos como de los combustibles. Esta competencia exige volcar la vista al campo, a la agricultura. En el mundo son aproximadamente 5.000millones de hectáreas las que se ocupan en agricultura. Sin embargo, todavía queda superficie cultivable, aproximadamente 4.000 millones de hectáreas, la que actualmente está cubierta por bosques. Pero mejor si no los tomamos en cuenta. Si hoy en día de una hectárea se puede obtener aproximadamente 3.000 – 9.000 litros de bioetanol/año y 1.000 – 5.000 litros de biodiesel, entonces se necesitarían entre 220 y 800 millones de hectáreas para producir un volumen de bioetanol y biodiesel igual al volumen de gasolina y diesel consumidos actualmente. Si se mantiene la superficie agrícola actual solamente para la producción de alimentos, entonces se necesitará incrementar las hectáreas arriba mencionadas. ¿Habrá otras alternativas? Sí, elevar la productividad y hacer más eficiente el uso de combustibles. Fuera de ampliar la frontera agrícola, elevar los rendimientos de producción agraria y reducir el consumo de combustibles por persona son alternativas viables para enfrentar la crisis. Para elevarla productividad agraria se tiene que aplicar nuevas tecnologías en la producción. Las nuevas tecnologías incluyen riego, semillas mejoradas, técnicas más eficientes, mecanización, mejoramiento del empresariado, créditos, etc. La reducción del consumo de combustibles por persona tiene mucho que ver con el tipo de vehículos que se utilizan4. Debido a la creciente necesidad en el país para la producción de bioetanol, es relevante realizar investigaciones relacionadas con la evaluación de nuevos sustratos y metodologías para la obtención de azucares fermentables por medio de hidrólisis. El ñame en su composición química posee almidón, que es un componente importante de los tubérculos encontrándose en una concentración aproximada de 15,5 %5, por lo que se puede considerar una buena fuente de dicho polisacárido6, 4 BARRIENTOS, Juan Carlos. Alimentos o combustible ¿Sinergia o dilema? Revista “Análisis” ISSN 1999‐6233vol 1 Nr 1 2008.Disponible en www.ibepa.org 5 TREADWAY, R. H. Manufacture of potato starch. In Whistler & Paschal (Eds.), Starch: Chemistry and Technology (pp 87-101). New York: Academic Press Inc.1984. fecha: 30/11/2011 6 GONZALES, Jorge y MOLINA, Manuel. Estudio de los factores que afectan la hidrolisis enzimática y el proceso fermentativo para la producción de alcohol a partir de la papa. Revista de ingeniería vol. 16(1), Enero/Julio 2006. 4 Por tal razón en esta investigación se evaluará un sustrato rico en almidón. Es necesario realizar este estudio ya que busca dar un uso diferente a este alimento, utilizándolo como materia prima para la obtención de etanol a partir de la hidrolizacióndel almidón mediante el uso de enzimas como la alfa amilasa, Amiloglucosidasa y posteriormente la fermentación con la Saccharomyces cerevisiae. 1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA ¿Se podrá obtener bioetanol a partir de la hidrólisis de almidón de ñame a concentraciones de 10.5, 13.5 y 15 en %m/v utilizando las enzimas alfa amilasa, Amiloglucosidasa y la fermentación con Saccharomyces cerevisiae? 1.3 JUSTIFICACIÓN Los recursos no renovables (combustibles fósiles) en el país día a día se están agotando debido a la gran demanda que estos generan a nivel mundial por las diferentes aplicaciones y usos que estos tienen en procesos industriales. Este proyecto se hace necesario para la búsqueda de alternativas energéticas viables con el fin de disminuir el consumo de los combustibles fósiles debido a la contaminación que estos generan y con el tiempo poder llegar a remplazarlos. Por otra parte generaría desarrollo en las investigaciones del país cerrando poco a poco la brecha tecnológica con los países industrializados de Suramérica como Brasil. Este proyecto es importante para investigadores y la comunidad científica porque se aplican las bases y conocimientos prácticos adquiridos a lo largo del proceso de aprendizaje, para enfrentar los retos que se nos presenten a lo largo de nuestra carrera profesional. Esto permite tener una visión más amplia del papel que ocupa el profesional formado en la Universidad de San Buenaventura en la sociedad. La Ingeniería Química como ciencia está a la expectativa de nuevas investigaciones, teorías o procesos de fabricación las cuales conforman una ciencia más competitiva frente al ámbito laboral ya que el papel del ingeniero químico en la industria es fundamental en el desarrollo de muchos procesos. Mediante la obtención de etanol a nivel de laboratorio se desarrollaran los pasos adecuados para realizar el proceso en mayores proporciones. Este proyecto se caracterizó por su proyección social, debido a la generación de oportunidades para personas de escasos recursos que pueden desempeñarse en la siembra y recolección de la materia prima, mejorando así su calidad de vida, razón por la cual se identifica con las políticas de la Universidad de San Buenaventura planteado en su PEB “ La Universidad de San Buenaventura concibe 5 la proyección social como la relación permanente que la institución establece con la comunidad o medio externo para articularse en ella; influir en los procesos de transformación social y en las realidades de su propio desarrollo, comunidades regionales y nacionales.”7 En la realización de este proyecto se hizo necesaria la utilización de conocimientos, información, adquiridos durante la formación universitaria las áreas de operaciones unitarias, biotecnología, tecnología ambiental, ética, evaluación de proyectos entre otras. Y con ellas se desarrollaran todas las actitudes y destrezas necesarias para la gestión del proyecto, ayudando por medio de estas a la conservación del medio ambiente en busca del mejoramiento de su entorno. Además en esta investigación se ponen al servicio de la sociedad los conocimientos adquiridos para mejorar la calidad de vida del hombre sin causar daño a la naturaleza. Dentro de la trascendencia de esta investigación, se hace necesaria relacionarlas con la orientación y aplicación de los programas académicos vistos en la Facultad de Ingeniería, Arquitectura, Arte y Diseño de La Universidad de San Buenaventura. 1.4 OBJETIVOS 1.4.1 Objetivo general Evaluar la obtención bioetanol a partir del almidón de ñame (Dioscorea Rotundata, Dioscorea Alata y Dioscorea Trífida) mediante la hidrolisis enzimática y posterior fermentación. 1.4.2 Objetivos específicos Realizar la hidrólisis enzimática de las tres variedades de harina de ñame a las concentraciones 10.5, 13.5y 15% m/v utilizando la enzima α amilasa y la amiloglucocidasa. Realizar la fermentación del hidrolizado obtenido, mediante la utilización de la levadura Saccharomyces cerevisiae. Determinar los parámetros (azucares reductores, crecimiento microbiano y etanol producido) de las 3 variedades a las concentraciones 10.5, 13,5 y 15% m/v. 7 Proyecto Educativo Bonaventuriano. 2010. P49 6 2. MARCO DE REFERENCIA 2.1 ANTECEDENTES INVESTIGATIVOS La producción de alcohol existe desde que el hombre conoce el fenómeno de la fermentación. Una de las primeras menciones, se han hallado en papiros egipcios que datan de 3.500 A.C, sin embargo, la preparación de vinos y cervezas se sugiere desde la prehistoria. La figura 1 ilustra la evolución del uso de bioetanol a nivel mundial en el siglo 20. Figura 1. Línea de tiempo de utilización de Bioetanol a nivel mundial. Fuente:http://www.epn.edu.ec/bio2008/Documentos/BIOETANOLPPT.pdf fecha: 28/10/2011 2.1.1 Historia – etanol El Programa PROALCOHOL, iniciado en 1975 por el gobierno brasileño a raíz de la crisis del petróleo, tenía por finalidad reducir la dependencia del país respecto a las importaciones del combustible fósil. Este programa se basó en los siguientes conceptos: Un volumen de compras y precio garantizados de etanol por parte de Petrobras. El establecimiento de incentivos a la inversión en nuevos centros de producción. Una subvención a la compra de vehículos impulsados por etanol puro. A mediados de los 80’s, el descubrimiento de yacimientos de Petrobras, debilitaron el argumento de la independencia del petróleo y la caída de los precios 7 de este, hizo que el apoyo a la producción de etanol decayera por el diferencial elevado de precios. Por otro lado, la evolución del mercado del azúcar, hizo para los productores de caña más atractivo la producción de éste que del etanol. Durante la década del 90, el programa fue revisado a fondo y a partir de 1999 se produjo la apertura del mercado de etanol y el fin de los precios garantizados y con las siguientes modificaciones: Orientación hacia el sistema de mezcla. Desgravación fiscal prácticamente total para la venta de etanol. La obligación de añadir a la gasolina una proporción mínima de etanol del 22-24%, determinada por el gobierno8. 2.1.2 Estado actual Latinoamérica El sector mundial de la producción de etanol se encuentra en plena expansión, ejemplo claro de esto se ve en su parque automovilístico que suma hoy casi tres millones de vehículos “dedicados” (solo etanol) y cerca de 16 millones de vehículos que consumen mezcla etanol – gasolina. En los últimos años, la industria automovilística brasileña desarrolló vehículos que operan con flexibilidad en el tipo de combustible, popularmente conocidos como "Flex", ya que el motor funciona con cualquier proporción de gasolina (mezcla E20-E25) y etanol anhidro (E100), disponibles en el mercado a partir de 2003. En agosto de 2008 la flota de carros "Flex" ya había alcanzado 6 millones de vehículos, incluyendo automóviles y vehículos comerciales livianos, representando un 23% de la flota de vehículos livianos de Brasil. En Colombia desde el 2005 se usa E10 en el 70% del territorio y a finales de 2009 estará el 100% del país usando esta mezcla. La legislación sobre producción y uso de biocombustibles también se está aplicando en países como: Argentina, Bolivia, Costa Rica, Guatemala, Honduras, Nicaragua, Paraguay, Perú9. En Colombia las investigaciones para utilizar el etanol como combustible comenzaron en 2001, año en que el gobierno aprobó la ley 693 que obligaba al enriquecimiento en oxígeno de la gasolina. Esto se hizo inicialmente para reducir las emisiones de monóxido de carbono de los coches. Regulaciones más recientes eximieron al etanol elaborado a partir de biomasa de algunos impuestos que gravan la gasolina, haciendoasí más barato el etanol que la gasolina10. Al principio todo el interés en la producción del etanol vino de la industria de azúcar existente, 8 LEÓN, José Guillermo. Los Biocombustibles. Conferencia ARPEL 2009. Punta del Este. Uruguay p.6 9 Ibíd. p.7 10 Ley 788 de 2002 articulo 88 “Exención de impuestos para el alcohol carburante” disponible en:http://www.alcaldiabogota.gov.co/sisjur/normas/Norma1.jsp?i=7260 8 ya que es relativamente fácil añadir un módulo para desarrollar etanol al final de una fábrica de azúcar, y las necesidades energéticas son similares a las que se necesitarían para producir el azúcar. El gobierno alienta a convertir gradualmente las fuentes de combustible de los coches a una mezcla del 10 por ciento de etanol y de 90 por ciento de gasolina. Las plantas del etanol están siendo incentivadas por tratos fiscales. Ha habido interés en plantas de etanol de yuca (mandioca) y de nuevas plantaciones de la caña de azúcar, pero aún no se ha conseguido producir carbohidratos a bajo precio. Las investigaciones sobre el bioprocesamiento de ñame y de tubérculos afines son escasas debido a que por lo general su estudio va más dirigido como alimento.En la industria del alcohol el ñame es muy poco empleado, pero este es de los tubérculos con mayor presencia de almidón, lo que lo convierte en materia disponible para el procesamiento de etanol, algunos de los que se han utilizado con estos fines son la yuca y la papa, por lo tanto se realizó una recopilación de estudios e investigaciones afines con esta proyecto y que presentamos a continuación: CASTAÑO y colaboradores, (2011) Evaluaron la producción de etanol a partir de harina de yuca en un sistema de hidrolisis enzimática y fermentación. Se obtuvo una concentración de etanol de 14,6% v/v con una productividad de 2.5 g/h (48 horas de proceso) y con una concentración de harina de ñame de 28% m/v empleando la enzima STARGENTM0.01 (mezcla de alfa amilasa y glucoamilasa) en la hidrolisis y la Saccharomyces cerevisiae en la fermentación. ASTURIZAGA y BOCANEGRA, (2008) Evaluaron los rendimientos en el proceso de obtención de alcohol a partir de harina de Ñame (Dioscorea Bulbífera, Trífida) por vía enzimática. Los resultados en la producción de alcohol demostraron que la variedad D. Trífida en las concentraciones 10% y 13% m/v presentó mayores rendimientos en cuanto a volúmenes de alcohol, con valores de 786,87 y 792,96 L/Tm de harina respectivamente. De forma similar se demostró que la variedad D. Bulbífera en las concentración 16% m/v arrojo los menores rendimientos con un valor de 520,66 L/Tm de harina. Empleando las enzimas comerciales Pectinex UltraSP-L, Termamyl 120 L y la AMG 300 L de la Novo Nordisk en la hidrólisis y Saccharomyces cerevisiae en la fermentación. Assis. T, (2007), en el estudio para la cuantificación de alcohol a partir de harina de batata obtuvo una concentración de etanol del 9.4% v/v y un rendimiento de 129 L de etanol/Tm de harina de batata, durante un tiempo de fermentación de 56 horas, empleando como microorganismo Saccharomyces cerevisiae. González y Molina en el 2006, estudiaron la hidrólisis enzimática y la fermentación de la papa (Solanum tuberosum), a fin de determinar las mejores condiciones para producir alcohol, quienes en el seguimiento del proceso de fermentación alcanzaron una concentración máxima de alcohol de 10,33% v/v. El rendimiento 9 de etanol del proceso fue de 94,5 L de etanol/Tm de papa, utilizando una concentración de 20% m/v de sustrato. BRINGHENTI. L y CABELLO. C, también en el 2006, en el estudio de la fermentación alcohólica de sustrato amiláceo hidrolizado enriquecido con melaza de caña, obtuvieron concentraciones de etanol del 1.6% v/v; 2% v/v; 2.4% v/v; 3.6% v/v y4% v/v a partir de un hidrolizado de almidón residual de harina de yuca del 10%m/v, enriquecido con concentraciones de melaza de caña del 5, 10, 15 y 20% v/v respectivamente, en un volumen de reacción de 500 ml, usando como microorganismo Saccharomyces cerevisiae. BRINGHENTI. L y CABELLO. C en el 2005, obtuvieron una concentración de etanol del9.76% v/v a partir de residuos del proceso de obtención de harina y almidón de yuca usando una concentración del 18% m/v y enriquecido con un 12% de melaza residual del proceso de producción de sacarosa de caña de azúcar. MAGALY L. CEREDA M., en Brasil 2004.Desarrollaron un estudio sobre la utilización del residuo sólido obtenido en la extracción de almidón de yuca que es usado fundamentalmente en la alimentación animal, el objetivo de este trabajo fue desarrollar la evaluación técnica económica de la producción de alcohol a partir del subproducto de la obtención del almidón de yuca. Para esto se usó como enzima complementaria la pectinasa para la hidrólisis del mosto, la caracterización del subproducto presentándolos siguientes resultados en base seca: 80% de almidón, 11.5% de fibra, 1.14% de cenizas, 0.85% de proteínas y 0.45% de azucares. El proceso de hidrólisis tuvo una conversión de 86.31% del almidón inicial y un 80% de rendimiento de azucares totales. Un análisis mostró que cerca del 75% de la materia seca inicial fue hidrolizado y el residuo presento 37% de almidón, 30% de azucares totales, 30% de fibra en base seca, el mosto obtenido presentó una concentración de 13 ºBrix siendo necesario concentrarlo, la fermentación alcohólica se realizó en 48 horas, el análisis económico demostró un proceso viable, necesitando un ajuste para su realización comercial. GRISALES. P. A, et, al., (2001). En el diseño de un proceso de producción de etanol anhidro a partir de jugo de caña, obtuvieron una concentración de 6 - 8% v/v de etanol. El jugo de caña contenía una composición de 14% de sólidos solubles (14 ºBrix) y en la fermentación el microorganismo utilizado fue Saccharomyces cerevisiae. En el trabajo “Estudio preliminar para la obtención de jarabe de glucosa a partir de la hidrólisis enzimática del almidón de yuca utilizando extractos crudos de alfa amilasa (B. Licheniformis) y glucoamilasa (A. Níger)”, aplicaron extractos crudos enzimáticos a una solución de almidón de yuca 20% (m/v). Se ensayaron tres relaciones enzimas /sustrato 10, 20 y 30 ml/Kg. de almidón para el extracto de alfa amilasa y 15, 20, 45 ml/ Kg. de almidón para el extracto de glucoamilasa. Los 10 mejores resultados de la hidrólisis del almidón de yuca se lograron con las relaciones de 30 ml/ Kg. de almidón en la, licuefacción y 45 ml/Kg de almidón en la licuefacción, con lo que se obtuvo un jarabe de glucosa de 83.34% de equivalente de dextrosa (Lujan D. Alvarino N. Salcedo J., Revista Temas Agrarios, SIN 012- 7610, 2001)11. 2.2 BASES TEÓRICAS 2.2.1 Ñame Nombre Científico: Dioscorea spp En la figura 2 se puede observar la forma de las hojas y del tubérculo de una de las especies de este género. Figura 2. Imagen sobre hojas de Dioscorea (izquierda) y Tubérculo (derecha) Fuente: www.infojardin.com y www.elapuron.com/blogs/cocina/9/el-ame/ fecha: 13/06/2011 Identificación del Producto El ñame es una de varias especies de plantas del género Dioscorea (de la familia Dioscoreácea), nativo a regiones cálidas de ambos hemisferios. Este tubérculo tropical cuya parte expuesta es en forma de enredadera, es muy popular en centro y sur América, al igual que en el Caribe, África y partes de Asia. Diversas variedades de ñame se cultivan a través de los trópicos y en parte de las regiones sub-tropicales y templadas. En África occidental y en Nueva Guinea el de ñame es uno de los principales cultivos primarios. 11 ASTURIZAGA AVILEZ, Yajaira y BOCANEGRA AMAYA, Carmen. Evaluación de los rendimientos en el proceso de obtención de alcohol a partir de harina de Ñame (Dioscorea Bulbífera, Trífida) por vía enzimática. Sincelejo. Universidad de Sucre. Facultad de Educación Y Ciencias.Programa de Biología, 2008. 108 p. 11 Aunque el Camote "SweetPotato" y el ñame son similares en muchas formas, (y por ello en países como los EE.UU. y Canadá se presta a confusión), estas son plantas de diferentes especies. Existen más de 150 especies de ñames en el mundo, dependiendo de la variedad del ñame, la parte carnosa puede ser de diferentes tonalidades de blanco, amarillo, púrpura o rosado, y la piel desde blancuzca a chocolate oscuro. La textura de este tubérculo puede variar de suave y húmedo a áspero, seco y harinoso. En nuestro medio el ñame se presenta por regla general en trozos y se vende por masa. Ecología El ñame requiere para su cultivo temperaturas entre 18º C y 34º C y condiciones de precipitación de entre 1,200 mm y 1,300 mm Y suelo franco arenoso (más arenoso que arcilloso), con altura máxima de 800 más. Sobre el nivel del mar. Características El ñame es un planta (tubérculo) cuya raíz comestible es muy apetecida por su valor alimenticio y rico sabor. La parte superficial de la planta es una enredadera trepadora con tallos (bejucos) que pueden alcanzar hasta más de 3 m, estas especies tienen hojas de forma acorazonada y se propagan por rajas (trozos), cada una con dos o tres yemas. Variedad Dioscorea spp., Dioscorea Alata (ñame de agua), Dioscorea Rotundata (ñame blanco), Dioscorea Cayenensis (ñame amarillo), Dioscorea Japónica, Diamante 22, Baboso de Ocú, Culebra, Mano de Tigre. 2.2.2 Dioscorea Alata (Ñame Diamante) Tipos silvestres de esta especie se encuentran aún en las selvas húmedas de malasia. En el viejo continente su área de distribución solo incluye zonas de alta humedad. A América fue introducido por los esclavos africanos y navegantes portugueses en el siglo XVII. En la actualidad el ñame es el más difundido especialmente en las Antillas, Brasil y Venezuela. Esta especie se caracteriza por sus tallos cuadrangulares, con las alas membranosas de borde irregular, con frecuencia manchadas de morado. La lámina es acorazonada, con 3 a 5 nervios principales que salen de la inserción del peciolo. Como es una planta de cultivo muy antiguo se conocen numerosos clones, estos se caracterizan principalmente por la forma de los rizomas (esféricos, planos, cilíndricos, 12 encorvados y alargados) son de forma irregular generalmente. El color de la pulpa varía de blanco a amarillento12. La figura 3 ilustra el tipo de hojas y la forma del tubérculo de la especie Dioscorea Alata Figura 3. Hojas D. Alata (izquierda) y tubérculo (derecha) Fuente:http://www.stuartxchange.org/Ubi.html y http://www.flickr.com.Fecha: 13/06/2011 2.2.3 Dioscorea Trífida (Ñame Baboso). D. trífida es una planta de tallos volubles, delgados que enrollan hacia la izquierda, provistos de dos a ocho alas membranosas, generalmente en mayor número y desarrollo en la parte inferior del tallo. Las hojas miden hasta 25 cm de largo, son digitadas, con tres a siete segmentos o lóbulos, con el central más grande. Las plantas son unisexuales. Las inflorescencias estaminadas son racimos simples o muy ramificados, con flores verduzcas de 4 a 6 mm de diámetro; mientras que las inflorescencias pistiladas consisten de dos racimos simples qué nacen de la misma axila con flores de 12 a 24 mm de largo. Esta especie florece más regularmente que las otras especies del genero Dioscorea spp cultivadas. El fruto es una cápsula, con tres lóculos, cada uno con dos semillas diminutas, aladas. El tallo subterráneo es un órgano irregular y corto del que emergen los tallos aéreos, raíces y estolones, estos últimos en círculos sucesivos. El estolón que mide hasta 70 cm de largo, se ensancha formando el tubérculo. Los tubérculos varían mucho en forma y tamaño, aun en la misma planta; se observa forma esférica, fusiforme, claviforme y a menudo con ramificaciones muy cortas. La superficie es rugosa, a veces con raicillas. La pulpa es uniforme, compacta y varía de 12LEÓN, Jorge. Fundamentos Botánicos de los Cultivos Tropicales. Costa Rica. 1968. 92p. 13 color blanco, amarillo hasta morado, con un sabor y apariencia muy agradable después de cocinado. El peso de los tubérculos está entre 300 y 400g cada uno13. La figura 4 muestra ejemplares que corresponden a las características descritas anteriormente. Figura 4. Hoja de Dioscorea Trífida (izquierda) y tubérculo (derecha) Fuente:http://www.tramil.net/fototeca/imageDisplay.php?id_elem=160&famil=DIOSCOREACEAE fecha: 06/05/2012 2.2.4 Dioscorea Rotundata (Ñame Espino) El ñame espino (Dioscorea rotundata) es un cultivo de pequeños y medianos agricultores, que constituye en muchas regiones la principal fuente de ingresos, de empleo rural y de oferta de alimento a sus pobladores y también es un producto de exportación. En Colombia, el ñame se usa para alimentación de la población de la Costa Atlántica; es cultivado por pequeños y medianos agricultores y constituye la principal fuente de ingresos y de empleo rural en muchas zonas. Además su exportación a los mercados de Estados Unidos y Europa le genera al país más de US$2.5 millones anuales14. La planta de ñame tiene un sistema de raíces fibroso. Los tubérculos durante el período de almacenamiento, presentan puntos elevados semejantes a pústulas que van a dar origen a raíces. El tubérculo es una estructura del tallo y no de la raíz cuya función es el almacenamiento de gránulos de almidón. Los gránulos de almidón son 13 ASTURIZAGA AVILEZ, Yajaira y BOCANEGRA AMAYA, Carmen. Evaluación de los rendimientos en el proceso de obtención de alcohol a partir de harina de Ñame (Dioscorea Bulbífera, Trífida) por vía enzimática. Sincelejo. Universidad de Sucre. Facultad de Educación Y Ciencias. Programa de Biología, 2008. 108 p. 14 SÁNCHEZ, C., HERNÁNDEZ, L., “Descripción de aspectos productivos, de postcosecha y de comercialización del ñame en Córdoba, Sucre y Bolívar”, Corpoica, 2003. 14 redondeados o elípticos y algunas especies de ñame (D. rotundata) los concentran más que otras especies (D. Alata). Además de almidones los tubérculos de ñame, dependiendo de la especie, tienen concentraciones de sustancias urticantes, de taninos, fenoles y otras sustancias como esteroides o corticoides15. En la figura 5 se observa la forma de las hojas y el tubérculo de la especie Dioscorea Rotundata. Figura 5. Hojas de D. Rotundata (izquierda) y tubérculo (derecha) Fuente:http://insumosdeamecoloso.blogspot.com/y species.wikimedia.org.fecha: 13/06/2011 2.2.5 Producción de Ñame a nivel Mundial La mayoría de los ñames cultivados pertenecen a la familia Dioscoreácea, y al género Dioscorea. Es el principal alimento cultivado en África occidental, el Caribe, islas del Pacifico sur, sur este de Asia, India y partes de Brasil)16. Esta planta se presenta como una enredadera y se caracteriza por la presencia de tubérculos subterráneos y aéreos, los cuales junto con la papa, la yuca, la arracacha y la batata ocupan un lugar importante en la alimentación humana. Está estimado que existen más de 600 especies en el mundo. Las especies más cultivadas son: D. Alata, D. Rotundata, D.Cayenensis, D.Esculenta, D.Bulbífera y D. trífida, de los cuales la primera es la preferida en la producción de tubérculos para el consumo humano. La mayor producción de ñame y los mejores rendimientos de los cultivos se dan en el continente africano, en donde en una escala de mayor a menor productor los primeros 9 países constituye a este continente, siendo Nigeria el mayor productor con 26587000 toneladas; Colombia ocupa el séptimo lugar con una producción de 333532 y en el último lugar se encuentra se encuentra la República Democrática del Congo, con una producción de 84900. Todas las estadísticas están reflejadas en la tabla 1. 15 GAMERO, Galo. “Consideraciones sobre fisiologíade la planta de ñame”, Corpoica, 2004 16 ADELUSI A, LAWANSON AO. (1987). Disease induced changes in carotenoid content of edible yam (Dioscorea spp) infected by Botryo diploid theobromaeandAspergillusNiger. Mycopathologia 98:49-58. 15 Tabla 1. Producción de Ñame A nivel Mundial año 2005 Fuente: www.fao.org - dirección estadística, “principales productores de alimentos y productos agrícolas. Fecha: 06/05/2012 2.2.6 Producción de ñame en Colombia De acuerdo con las cifras del Ministerio de Agricultura y el Instituto Colombiano Agropecuario (2009), en el país se cultivan 25,000 hectáreas en ñame y se producen 200,000 Tm, con un rendimiento medio de 12 a 15 Tm/ha entre las variedades espino y diamante17. La producción se realiza principalmente en las regiones de las costas Atlántica y Pacífica, siendo los principales productores los 17 Articulo exportadores de ñame de la mano del ICA (2009) disponible en: www.ica.gov.co 16 departamentos de Córdoba, Bolívar y Sucre, como se ilustra en la figura 6. Figura 6. Producción de ñame en los departamentos de Colombia año 2010 Fuente: Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural. Anuario estadístico (2010) fecha de actualización 27/03/2012 En Colombia el ñame es cultivado por pequeños y medianos agricultores, con bajo nivel tecnológico, generalmente asociado con cultivos de yuca y maíz, y constituye la principal fuente de ingresos y de empleo rural en muchas zonas de la Costa Atlántica. La comercialización de ñame es regional para consumo en fresco, aunque una parte se exporta a Estados Unidos, España y Alemania para alimento de la población latina y uso farmacológico. Además su exportación a los mercados de Estados Unidos y Europa le genera al país más de US$2.5 millones anuales. En el anexo A se observa la superficie cosechada, producción y rendimiento obtenido por los departamentos de Colombia entre los años 1997 – 2008. 2.2.7 ALMIDÓN Historia del almidón Exactamente no se sabe desde que época es conocido como el almidón. Los griegos los llamaron Anylon quizás debido a que el contrario de lo que sucede con la harina, se obtenía no por el molino, sino por el lavado18.Según rastros arqueológicos hallados en las tumbas de los reyes egipcios, presentan muestras 18 ULLMAN, F, enciclopedia de química industrial. tomo VI. Barcelona: Gustavo Gill, 1954 p. 17 de pegantes a base de almidón, los cuales datan aproximadamente de año 3500 A.C. En la industria de almidón se conoce muy poco acerca de su aparición. Se admite probablemente que los holandeses en el siglo XVI habían fabricado almidón a gran escala, pero usando como materia prima el trigo; el desarrollo debió efectuarse muy lentamente al igual que en otros países. Después de la celulosa, el almidón es la sustancia orgánica más ampliamente distribuida en la naturaleza; la celulosa forma parte del armazón de las plantas, mientras que el almidón representa su reserva de carbohidratos, transformándolos por hidrolisis en glucosa la cual es transformada por medio de la savia, aprovechando su solubilidad. En las plantas existen tres clases de almidón: Almidón de asimilación, transitorio y de reserva. El almidón de asimilación es aquel que ha de hervir en la nutrición de la planta y el cual se encuentra en forma de almidón soluble. El almidón en el interior de la planta, es transformado en azucares por medio de enzimas diastáticas; pasando primero por la fase de almidón soluble, el cual puede transformarse algunas veces en gránulos muy finos, formando así el almidón transitorio. El resto de almidón es transportado a los sitios de almacenamiento donde tiene como función servir de alimento para los brotes jóvenes; es llamado almidón de reserva. El almidón se halla en forma de gránulos con la forma y tamaño característicos de la planta de la cual se obtiene, por lo que un análisis microscópico es muy útil para confirmar el origen del almidón; además ayuda a determinar la presencia de materiales extraños, afrecho, insectos o residuos de estos. Cuando los gránulos están intactos, son insolubles en agua fría; si su membrana externa se rompe al ser molidos, estos gránulos se hinchan en agua fría y si se calienta por encima de 55 ºC, forma un gel19. El almidón es un polisacárido de reserva alimenticia predominante en las plantas, y proporciona el 70-80% de las calorías consumidas por los humanos de todo el mundo. Tanto el almidón como los productos de la hidrólisis del almidón constituyen la mayor parte de los carbohidratos digestibles de la dieta habitual. Del mismo modo, la cantidad de almidón utilizado en la preparación de productos alimenticios, sin contar el que se encuentra presente en las harinas usadas para hacer pan y otros productos de panadería. En la figura 7 se ilustra la estructura química del almidón. 19 FERMEMA, O. Química de los Alimentos, 2 da ed. Editorial ACRIBIA, Zaragoza, España 2000. P. 228-240 18 Figura 7. Estructura del almidón. Fuente: http://www.biologia.edu.ar/botanica/tema8/8-4plastidios.htm. Fecha: 24/04/2011 Los almidones comerciales se obtienen de las semillas de cereales, particularmente de maíz (Zea mays), trigo (Triticum spp.), varios tipos de arroz (Oryza sativa), y de algunas raíces y tubérculos, particularmente de patata (Solanum tuberosum), batata (Ipomoea batatas) y mandioca (Manihot esculenta). Tanto los almidones como los almidones modificados tienen un número enorme de posibles aplicaciones en los alimentos, que incluyen las siguientes: adhesivo, ligante, enturbiante, formador de películas, estabilizante de espumas, agente anti- envejecimiento de pan, gelificante, glaseante, humectante, estabilizante, texturizante y espesante. Propiedades del almidón El almidón es un polvo blanco, amorfo, plástico, cuya densidad es 1,6 mg/ml, que a veces se caracteriza por un brillo peculiar. Es insoluble en agua, alcohol y éter. Al microscopio presenta características definidas, pudiéndose identificar fácilmente. Químicamente, es un hidrato del carbono (oxigeno, nitrógeno y carbono). Su procedencia se distingue por el tamaño y la forma de los granos. En virtud de su forma podemos dividir los almidones en 5 clases: Almidones de gránulos en forma de óvalos grandes formando anillos concéntricos y con el núcleo (hilum) colocado excéntricamente. Ejemplo: la papa. Almidones de gránulos ovoides usualmente formando anillos concéntricos, con núcleo irregular. Ejemplo: las leguminosas. Almidones de gránulos ovoides con núcleo central. Ejemplo: el trigo. Almidones de gránulos truncos en uno de los extremos. Grupo del sagú. Ejemplo: la yuca. Almidones cuyos gránulos forman ángulos pequeños y poligonales. Ejemplo: el arroz. 19 La tabla 2 muestra la concentración en masa seca de almidón presente en varios alimentos. Tabla 2. Almidón presente en diferentes alimentos Fuente: FAO (1999). Los carbohidratos en la nutrición humana, estudio de alimentación y nutrición año 1997. Estructura y composición Todos los almidones tienen fórmula empírica (C6H10O5)n. el factor n tiene por lo menos un valor igual a 4; llegándose a encontrar fórmulas con 100 a más átomos de carbono. La diferencia entre la celulosa y el almidón radica en que en el almidón, los restos de glucosa están unidos entre sí por uniones glucosidicas 1-4, con orientación α, mientras que la celulosa tiene uniones 1-4 glucosidicas con orientación β. Además de esto se sabe que el almidón contiene alrededor del 20 % de una fracción soluble en agua llamado Amilosa y el 80% de una solución insoluble conocida como amilo pectina. En el granulo de almidón podemos distinguir tres partes: La primera es una envoltura de amilopectina y α-amilosa o un almidón a menos solubley que contiene un Ester fosfórico, el cual es un Ester amilofosfórico. Es difícilmente atacada por enzimas, necesitándose para ello un calentamiento. Con dicho calentamiento forma una pasta y con una solución alcohólica de yodo- yoduro da una coloración violeta La segunda parte es una sustancia inerte formada por β-amilosa, granulosa o β- almidón. Esta parte es más soluble que la anterior y no forma una pasta, ni da color con el yodo-yoduro. La tercera parte es hallada solo en los cereales, pero no como constituyente del granulo, la hemicelulosa. Químicamente es una mezcla de dos polisacáridos muy Alimento % en masa de Almidon Cereal 65-75 Edulcorantes 10-12 Raices y Tuberculos 70-75 Frutas 5-8 Hortalizas 8-15 Legumbres 50-60 Cantidad de almidon presente en algunos alimentos 20 similares, la amilosa y la amilopectina; contienen regiones cristalinas y no cristalinas en capas alternadas. Puesto que la cristalinidad es producida por el ordenamiento de las cadenas de amilopectina, los gránulos de almidón céreo tienen parecido grado de cristalinidad que los almidones normales. La disposición radial y ordenada de las moléculas de almidón en un gránulo resulta evidente al observar la cruz de polarización (cruz blanca sobre un fondo negro) en un microscopio de polarización cuando se colocan los polarizadores a 90° entre sí. El centro de la cruz corresponde con el hilum, el centro de crecimiento de gránulo20 Amilosa La α- amilosa está constituida por cadenas largas no ramificadas en las que todas las unidades de D- glucosa se encuentran unidas mediante enlaces glucosidicos α (1,4); por lo tanto la unidad que se repite es la maltosa. El peso molecular de la amilosa depende de su origen botánico, su aislamiento y el método utilizado. Entre los valores aceptados para la amilosa están entre 1,1 y 1,9 millones de daltons. Amilopectina Presenta una cadena lineal de tipo α como en la amilosa; además tiene alrededor de 4-5% de las unidades de glucosa unidas por enlaces α (1,6) dando una estructura ramificada creciente. El peso molecular de la amilopectina es muy variable; las mejores valoraciones del peso molecular promedio (pro difracción) es de 10 a más de 20 millones de daltons21. 2.2.8 Hidrólisis Se denomina hidrólisis a las reacciones de la química inorgánica, en donde el agua efectúa una doble descomposición con otro compuesto, (el H+ va en un componente y el OH- va en el otro). Este término también puede aplicarse a reacciones en donde un ácido se añade al agua, en mayor o menor cantidad para acelerar la reacción; esta hidrólisis puede llevarse a cabo con ácidos inorgánicos, ácidos orgánicos o por acción enzimática, la cual es la más utilizada industrialmente22. 20 Disponible en: http://www.eis.uva.es/~macromol/curso08-09/pls/quees.htm 21 MORRISON, Robert. Y BOYD, Robert.Química Orgánica. 5 ta Ed. Addison–Wesley Iberoamericana. USA. 1996. 22 FERMEMA, O. Química de los Alimentos, 2 da ed. Editorial ACRIBIA, Zaragoza, España 2000. P. 228-240 21 Reacción de hidrólisis enzimática: Con la finalidad de transformar las moléculas del almidón en azucares fermentables los cuales son asimilados por las levaduras o bacterias. El almidón es sometido a un proceso de hidrolisis mediante la cual ocurre un desdoblamiento ya sea por un exceso de agua o por la presencia de una pequeña cantidad de fermento o acido. 2.2.9 Hidrólisis Química. El almidón tratado con ácidos se rompe en cadenas cortas de dextrina. El grado de degradación depende de la concentración del ácido, la temperatura, y el tiempo de hidrolisis. A medida que actúa el ácido, el peso molecular y la viscosidad de los productos decrecen y el poder reductor aumenta. Los ácidos utilizados para la producción de dextrinas son el Ácido clorhídrico y el Ácido Nítrico. Si hervimos el almidón con ácido Clorhídrico 1N durante 1 hora, el almidón se rompe totalmente y se reduce a glucosa esta reacción es conocida como hidrolisis intensa. Los productos de degradación son principalmente el hidroximetulfurtutal, el ácido levulinico, y el ácido fórmico, que da al jarabe un sabor amargo. La recombinación de unidades de D-glucosa o de esta con fragmentos como maltosas, conducen a la formación de productos de reversión los cuales pueden ser hidrolizados, un ejemplo de estos productos en la Genciobiosa. Mediante este procedimiento se logra el desdoblamiento de las moléculas de almidón por la acción de ácido sulfúrico o ácido clorhídrico diluidos. La clase de ácido, su concentración, la cantidad empleada referida a la cantidad de almidón, así como la presión y la temperatura ejercen gran influencia en la duración de la sacarificación. Por lo general, la cantidad de ácido empleado es tal que el valor de pH se ajuste a 1.5 paz una solución al 33% de almidón. El agua utilizada, de ser lo más pura posible y libre de hierro, ya que el ácido fosfórico que existe en el almidón forma después de neutralizarse fosfatos de hierro insolubles, finamente dividido, quedando en suspensión en el jarabe y es muy difícil su separación por filtración23. 23 FERMEMA, O. Química de los Alimentos, 2 da ed. Editorial ACRIBIA, Zaragoza, España 2000. P. 228-240 22 2.2.10 Hidrólisis enzimática (sacarificación de materiales amiláceos) La sacarificación es el proceso que tiene por objeto la transformación del almidón de las materias primas amiláceas en azucares. Dicha transformación es catalizada por enzimas. Estas enzimas se encuentran en la saliva, los jugos pancreáticos, las células de la sangre, las semillas y granos de muchas plantas, en hongos y bacterias. La función de estas enzimas se encuentra en la saliva, los jugos pancreáticos, las células de la sangre, las semillas y granos de muchas plantas, en hongos y bacterias. La función de estas enzimas es de romper las moléculas de almidón, dando productos semejantes a los obtenidos por hidrólisis acida. Las dos clases de amilasas más conocidas actualmente son: Alfa-amilasas: las cuales desdoblan el almidón en glucosa y maltosa, se caracteriza por la facilidad de fragmentación de los almidones en dextrinas reductoras, que no dan color con el yodo. Beta-amilasas: convierten el almidón en glucosa. Las amilasas actúan muy lentamente sobre el almidón, por lo que debe ser sometido a un proceso de cocción para obtener una buena dispersión y rompimiento de los granos de almidón llevándose a cabo una hidrolisis rápida. La acción de las amilasas sobre el almidón depende del origen del mismo; ya que el almidón consta de una mezcla de 75-80% de amilopectina y el recto de amilosa. Esta última se compone de cadenas longitudinales que contienen unidades de glucosa unidas por enlaces α-1,4 glucosídicos. Una cadena lineal puede contener de 70 a 100 unidades de glucosa aproximadamente24 Enzimas. Las enzimas son piezas esenciales en el funcionamiento de todos los organismos vivos, actuando como catalizadores de las reacciones de síntesis y degradación que tienen lugar en ellos25.La utilización de estas en la hidrolisis del almidón presenta una serie de ventajas, además de las de índole económica o tecnológica, su gran especificidad de acción hace que no se produzcan reacciones laterales imprevistas26. Asimismo se puede trabajar en condiciones moderadas, especialmente de temperatura, lo que evita alteraciones de los componentes. La producción de jarabes de glucosa a partir de almidón se realiza en dos pasos, primero la 24 DE RAFOLS, W. Aprovechamiento Industrial de los productos agrícolas. Barcelona. 1964 25 MONTES, M y MAGANA, I. Enzimas con Aplicación Industrial. Disponible en: http://www.cinvestav.mx/publicaciones/avaype/sepoct02/HORCASITAS.PDF.2004. 26 TUCKER, G y WOODS, L. Eds.Enzymes in Food Processing. Blackie and Son Ltd.London.1991. 23 licuefacción del almidón y segundo la sacarificación (conversión de la molécula de almidón en moléculas de glucosa). La licuefacción se realiza utilizando como catalizador las enzimas α-amilasas ó β- amilasas, y la sacarificación se realiza utilizando como catalizador la glucoamilasa o la pollulanasa y también se puede utilizar mezclas de enzimas27. Enzimas degradadoras de almidón (amilasas). Se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza, son las enzimas responsables de la degradación del almidón, hidrolizan los enlaces glucosídicos α 1-4. Las amilasas se pueden dividir en tres grupos: α amilasas, las cuales rompen al azar enlaces α 1-4 glucosídicos presentes en la parte interior del sustrato o de la cadena de amilasa y amilopectina (endo amilasas); β amilasas o examilasas, que rompen enlaces α 1-4 y enlaces α1-6 glucosídicos ordenadamente a partir de los extremos no reductores del sustrato28. Actúan sobre los residuos de glucosa externos de la amilasa y amilopectina produciendo solamente glucosa (glucoamilasa y glucosidasa) o maltosa y dextrinas y glucoamilasa que liberan unidades de glucosa a partir de los extremos no reductores del sustrato. Existen otras enzimas que degradan almidón tales como las desramificantes que hidrolizan enlaces α 1-6 glucosídicos. La isoamilasa hidroliza enlaces α 1-6 en la amilopectina y la pollulanasa tipo I hidroliza enlaces α 1-6 glucosídicos en pululan y amilopectina29. Estas enzimas degradan amilopectina obteniéndose así polisacáridos de longitud lineal. Enzimas α – amilasas. La familia de la α- amilasas puede ser dividida en dos grupos. Las enzimas que hidrolizan el almidón y las que lo modifican o enzimas transglicolisantes30. Las enzimas hidrolizadas prefieren la hidrolisis acida, en los procesos de industria del almidón y de un número de ventajas tales como: especificidad de la reacción, estabilidad de los productos generados, bajo requerimientos de energía y eliminación de la etapa de neutralización. Estas enzimas se caracterizan por actuar sobre los enlaces α glucosídicos e hidrolizan estos enlaces para producir mono u oligosacáridos α-anomericos (hidrolisis), de enlaces α 1-4 o α 1-6 glucosídicos (transglicosilación), o una combinación de ambas actividades; poseen una estructura (β/α) o barril TIM conteniendo residuos 27 FRAZIER, W. y WESTHOFF D. Microbiología de los alimentos. Zaragoza, España. Acribia S.A 1993, p. 431-438 28 ARTIME, R. Aplicaciones de las enzimas. Universidad de Salamanca. 2005 29 SATYANARAYANA, T; RAO, J; EZHILVAN NAN, M. 2005. a- Añilases. In: Enzyme Technology, A. Pandey, C. Webb, CR. Soccol, C. La roche (Eds.), Asiatech Publishers Inc; New Delhi, India pp 189 – 220. 30 CARRERA, J. Módulos de Biotecnología. Enzimas industriales, Universidad del Cauca, 1ª edición. 24 del sitio catalítico y tienen cuatro regiones altamente conservadas en su secuencia primaria que contienen los aminoácidos que forman el sitio catalítico31. La acción de la α- amilasas sobre la fracción de amilasa del almidón, se da en dos etapas. Inicialmente, tiene lugar una rápida degradación de la amilasa para dar maltosa y maltotriosa. En la segunda fase, más lenta ocurre hidrolisis de los oligosacáridos, formando glucosa y maltosa como productos finales. La acción sobre la amilopectina produce glucosa, maltosa y una serie de dextrinas y oligosacáridos de cuatro o más residuos de glucosa todos con enlaces glucosídicos α 1-632. Enzimas β- Amilasas.AMG 300L. Es una Amiloglucosidasa de grado alimenticio, producida a partir de una cepa seleccionada de Aspergillus Níger. La enzima hidroliza los enlaces α 1-4 y α 1-6 del almidón licuado. Durante la hidrolisis, elimina gradualmente las unidades de glucosa de los extremos no reductores desacarificado. La velocidad de hidrolisis depende del tipo de enlace y del rompimiento de la cadena. La AMG es recomendada para la sacarificación del almidón y la producción de glucosa33. 2.2.11 Fermentación. Una fermentación es una reacción de oxidación-reducción interna equilibrada en la que algunos átomos de la fuente de energía (donador de electrones) se reducen mientras otros se oxidan34, y la energía se produce por fosforilación a nivel sustrato. Una ruta bioquímica muy usada para la fermentación de la glucosa es la glucolisis, también denominada vía de Embdem-Meyerhof en atención a sus descubridores. El proceso, simplificado, de la fermentación es: Ahora bien la glucolisis se puede dividir en tres etapas principales, cada una de las cuales comprende una serie de reacciones individuales catalizadas enzimáticamente. 31 KURIKI, T; IMANAKAT, T. The concept of the a-amylase family: structure Similarity and common catalytic mechanism. J. Biosci, Bioeng. 1999, p.p87, 557 – 565. 32 LOPEZ, J. Semilla vegetativa de yuca. En: Ospina, B y Ceballos, H. La yuca en el tercer milenio. Sistemas modernos de producción, procesamiento, utilización y comercialización, 2002. pp. 49-75. CIAT. Cali, Colombia. 586 pp. 33 CARRERA, Jorge y MERA, Ingrid. Obtención de glucosa a partir de almidón de yuca Manihot sculenta. Facultad de Ciencias Agropecuarias Vol 3 No.1 Marzo 2005. 34 BROCK y MADIGAN. Michael. Biología de los Microorganismos. 2004. Editorial prentice hall. 10 edición. 114 p. 25 La etapa 1 incluye una serie de reacciones preparatorias que no implican ni oxidación ni reducción y que no liberan energía, pero que conducen a la producción a partir de glucosa de dos moléculas del intermediario clave gliceraldehido-3-fosfato. En la etapa 2 ocurre un proceso redox, la energía se conserva en forma de ATP, y se forman dos moléculas de piruvato. En la etapa 3 tiene lugar una segunda reacción redox y se originan los productos de fermentación (etanol y CO2 o ácido láctico) Etapas I y II: reacciones preliminares y reacciones redox. En la etapa 1, la glucosa es fosforilada por el ATP dando lugar a glucosa-6-fosfato, que es convertida a continuación a una forma isomérica, la fructosa-6-fosfato, que mediante una segunda fosforilación se convierte en fructosa-1,6-difosfato, que es un metabolito intermediario clave de la glucolisis. Si se fermentan otros azucares distintos a la glucosa, se convierte antes a fructosa-1,6-difosfatopara poder ser utilizados por la ruta de Embdem-Meyerhof. La enzima aldolasa cataliza la rotura de la fructosa-1,6-difosfato en dos moléculas de tres átomos de carbono, el gliceraldehido-3-fosfato y su isómero dihidroxiacetona-fosfato. Existe una enzima que cataliza la interconversión de dihidroxiacetona-fosfato a gliceraldehido-3- fosfato pero, para simplificar, se considera solo este último ya que es el que será metabolizado. En esta primera etapa no ha ocurrido ninguna reacción redox y que todas las reacciones, incluyendo las del consumo de ATP, tienen lugar sin transferencia de electrones. La primera reacción redox de la glucolisis tiene lugar en la etapa 2 durante la conversión del gliceraldehido-3-fosfato a acido 1,3-difosfoglicerico. En esta reacción (que ocurre dos veces, una por cada molécula de gliceraldehido-3- fosfato), una enzima cuyo coenzima es NAD+ acepta 2 átomos de hidrogeno y el NAD+ se convierte en NADH; la enzima que cataliza esta transformación se llama gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa. Simultáneamente, cada molécula de gliceraldehido-3-fosfato es fosforilada por la acción de una molécula de fosfato inorgánico se convierte en orgánico, prepara el escenario para la conservación de la energía por fosforilación a nivel de sustrato; la formación de ATP es posible porque cada uno de los fosfatos de la molécula de ácido 1,3-difoglicerico y cuando más tarde se convierte en acido 1,3-fosfoglicerico y cuando más tarde en la vía, cada molécula fosfoenol piruvato se convierteen piruvato. En la glucolisis, se consumen dos moléculas de ATP en las dos fosforilaciones de la glucosa y se sintetizan cuatro moléculas de ATP (dos por cada molécula de ácido 1,3-difosfoglicerico convertida a piruvato). Por tanto, la ganancia neta del organismo es de dos moléculas de ATP por cada molécula de glucosa. 26 Etapa III Producción de productos de fermentación Durante la formación de dos moléculas de ácido 1-3, difosglicerico, se reducen dos moléculas de NAD+ a NADH. Sin embargo, las células contienen solo una pequeña cantidad de NAD+, y si todo se convirtiera en NADH se detendría la oxidación de la glucosa, la oxidación continuada del gliceraldehido-3-fosfato solo se puede proseguir si está presente una molécula de NAD+ para aceptar los electrones liberados. Este bloqueo se supera en la fermentación mediante la nueva oxidación de NADH a NAD+, a través de reacciones que suponen la reducción del piruvato a una extensa variedad de productos de fermentación. Se conocen muchas rutas para la oxidación del piruvato en procariotas fermentativos, pero el resultado final es el mismo; el NADH debe volver a la forma oxidada NAD+, a fin de que las reacciones que liberan energía en la fermentación puedan continuar. Como coenzima difusible, el NADH puede soltarse de la enzima gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa y unirse a una enzima que reduzca el piruvato de nuevo, haciendo que le ciclo de reconversión del NADH a NAD+ y de NAD+ a NADH se repita otra vez. En cualquier proceso que produzca energía, la oxidación debe acompañarse de una reducción y debe haber un aceptor de electrones por cada electrón cedido. En este caso, la reducción del NAD+ en un paso enzimático de la glucolisis se equilibra con su oxidación en otro paso. Los productos finales deben estar también en equilibrio redox con el sustrato inicial, la glucosa. De aquí que los productos que aquí se generan, etanol más CO2 o lactato más protones, estén en equilibrio atómico y electrónico con la glucosa inicial35. En la figura 8 podemos ver una descripción del proceso de glucolisis. 35 BROCK y MADIGAN. Michael. Biología de los Microorganismos. 2004. Editorial prentice hall. 10 edición.120-123 p. 27 Figura 8. Esquema del proceso de glucolisis. Fuente: BROCK y MADIGAN. Michael. Biología de los Microorganismos. 2004. Editorial Prentice hall. 10edición. 28 Concepto Microbiológico de la fermentación Se entiende por fermentación aquel proceso en el que los microorganismos producen metabolitos o biomasa, a partir de la utilización de sustancias orgánicas en ausencia o presencia de oxígeno. La descomposición de los sustratos es llevada a cabo por enzimas producidas por microorganismos para tal finalidad. Se debe observar que el concepto llega a excluir a los microorganismos del proceso, siempre y cuando estén presentes sus enzimas; sin embargo, en estos casos, la velocidad de obtención y los rendimientos del producto son menores. Clasificación de los primeros procesos de fermentación La gran cantidad de procesos y productos que involucra el termino fermentación hace difícil no solo la definición del concepto si no también su clasificación. En general, se establecen divisiones con base en: El tipo de producto final por obtener La presencia o ausencia de oxígeno en el proceso. Productos Finales de la fermentación Desde el punto de vista comercial se pueden clasificar tomando en cuenta los productos que se obtendrán entre ellos, se pueden mencionar: Células microbianas (biomasa) Metabolitos microbianos: metabolitos primarios y secundarias (enzimas, etanol, butanol, acetona, ácidos orgánicos, etc. Células Microbianas (biomasa). Esto ocurre en el proceso de fermentación cuando hay un sobre crecimiento de células, y solo utilizan el sustrato para su crecimiento y hay poca producción de metabolitos36. Metabolitos primarios microbianos. Son moléculas de bajo peso molecular que se forman en la fase exponencial o tropofase e intervienen como productos finales o intermediarios, en las distintas rutas anabólicas y catabólicas del proceso. Algunos ejemplos de éstos, Que poseen importancia comercial se encuentran en la tabla 3. 36 HERNÁNDEZ, Alicia. Microbiología industrial. 2003. Editorial EUNED. Edición 1 pág. 37-39 29 Tabla 3. Compuestos producidos por el proceso de fermentación Fuente: Hernández, Alicia. Microbiología industrial. 2003. Editorial EUNED. Edición 1. pág. 39 Metabolitos Secundarios Microbianos. Son moléculas orgánicas complejas que para su formación requieren un gran número de reacciones enzimáticas específicas. Estos se forman durante la ideofase (fase durante la cual un cultivo sintetiza productos distintos a los Metabolitos primarios, sustancias que no tienen un papel significativo en el metabolismo celular) y donde los metabolitos secundarios tienden a ser sintetizados de los productos intermedios y finales del metabolismo primario, en la tabla 4 podemos ver algunos de estos metabolitos. Tabla 4. Metabolitos microbianos comerciales Fuente: WALKER, J.M. Gingold. Biotecnología Molecular. Edición, Acribia, SA. Pág. 5-6 Tipo de Sustancia Productos acético, cítrico fumarico, gluconico, itaconico, láctico Aminoácidos lisina, metionina, triptófano, valina acetona, butanol, 2,3-butanodiol etanol, glicerol bacitracina, estreptomicina, neomicina Penicilina, tetraciclina Esteroides cortisona, hidrocortisona, testosterona acido ascórbico, cianocobalamina caroteno, riboflavina Células de hongos, levaduras, bacterias y algas Alcaloides, Enzimas, insecticidas, Biológicos, metano, polisacáridos y saborizantes Algunos compuestos de interés comercial producidos por fermentación Ácidos orgánicos Alcoholes y Solventes Antibióticos Vitaminas Proteína Unicelular (biomasa) Otros Metabolito Secundario Utilidad Comercial Penicilina Antibiotico Cefalosporina Antibiotico Tretraciclina Antibiotico Estreptomicina Antibiotico Griseofulvina Antibiotico (antifungico) Actinomicina Antitumoral Pepstatina Tratamientos antiulcerosos Ciclosporina A Inmunosupresor Krestina Tratamiento de cancer Betatina Tratamiento de cancer Gibberelina Regulador de crecimiento vegetal Metabolitos microbianos secundarios comercializados 30 A simple vista puede resultar extraño que los microorganismos elaboren compuestos que no parecen tener ninguna función metabólica y que, en realidad no constituyen productos intermediaros del catabolismo, como por ejemplo, el etanol y la acetona. Sin embargo, muchos Metabolitos secundarios poseen propiedades anti-microbianas y por lo tanto, en el medio ambiente natural podrían ser implicados en procesos competitivos37. Oxígeno en el proceso de fermentación También es posible clasificar las fermentaciones con base en la presencia o ausencia de oxigeno molecular durante el proceso. De acuerdo con esta división, los procesos se denominan: Fermentación aerobia. En este tipo de fermentación el aceptor final de electrones es el oxígeno; es imprescindible su presencia para el desarrollo del microorganismo y la producción del compuesto deseado. En este tipo de procesos, se produce fundamentalmente biomasa, dióxido de carbono y agua. Fermentación anaerobia. En este tipo de fermentación el proceso de producción de metabolito de interés se desarrolla en ausencia de oxigeno; los productos finales son sustancias orgánicas, por ejemplo, ácido láctico, ácido propionico, ácido acético, butanol, etanol, y acetona. Sin embargo, en la mayoría de las fermentaciones anaeróbicas se requiere un poco de oxígeno al principio del proceso para favorecer el crecimiento y la reproducción del microorganismo. En los procesos anaerobios, los microorganismos producen mucho menos energía que en los aerobios y, para suplir sus necesidades
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