Manual_de_laboratorio_de_Inmunologia

•

SIN SIGLA

Álvaro Tetuan

12/6/2024

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Manual de Laboratorio de Inmunología
Básica y Clínica

Aurora Mart ínez Rom ero
José Luis Ortega Sánchez

Libro electrónico Manual de Laborator io de I n m unología Básica y Clín ica . ®
2 0 1 1

A esta obra le ha sido
emitida los Derechos de
Autor por la Secretaría de
Educación Pública del
Instituto Nacional del
Derecho de Autor con el
Nº de Registro 0 3 - 2 0 0 9 -
1 1 1 7 1 3 2 1 5 7 0 0 - 1 4

Se publica en Abril de 2011 como un suplemento de
REDVET Revista e lect r ónica de Veter inar ia
(http://www.veterinaria.org/revistas/redvet) con nº
ISSN 1695-7504 por la editorial Veter inar ia
Organización S.L.® http://www.veterinaria.org,
Inscrita en el BORME de España con el número 2001/0175466 en el
Grupo Servicios, sector Veterinarios. Copyright veterinaria.org 1996-
2011.

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Manual de Laboratorio de In munología Básica y Clínica ® 2011 está protegido por los Derechos de Autor por la
Secretaría de Educación Pública del Instituto Nacional del Derecho de Autor con el Nº de Registro 03-2009-
111713215700-14. Se publica en Abril de 2011 como un suplemento de REDVET Revista electrónica de Veterinaria
(http://www.veterinaria.org/revistas/redvet) con nº ISSN 1695-7504 por la editorial Veterinaria Organización S.L.®
http://www.veterinaria.org, Inscrita en el BORME de España con el número 2001/0175466 en el Grupo Servicios, sector
Veterinarios. Copyright veterinaria.org 1996-2011.
2

Autores

Dra. en C. Aurora Martínez
Romero. División de Estudios
de Postgrado e Investigación de
la Facultad de Ciencias
Químicas. Universidad Juárez
del Estado de Durango. Gómez
Palacio, Durango. México.
quimicaaurora@hotmail.com

C. Dr. en C., M.S.P. José Luis
Ortega Sánchez. Unidad Regional
Universitaria de Zonas Áridas.
Universidad Autónoma Chapingo.
Bermejillo, Durango. México.
jlortega@chapingo.uruza.edu.mx

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INDICE
Presentación.................................................................................................................................................. 7
Introducción ................................................................................................................................................. 8
Manejo, transporte y almacenamiento de materiales en el laboratorio de Inmunología ........ 9
Prácticas generales de seguridad y bioseguridad en el laboratorio..................... 100
Reglamentos ........................................................................................................ 100
Normas de Seguridad específicas de las prácticas ................................................ 10
Manejo de residuos peligrosos biológico infecciosos (RPBI).................................. 13
Los residuos peligrosos biológico infecciosos (RPBI) … ........................................................................13
Cuadro de Competencias........................................................................................... 14
Mapa del sistema de prácticas de Inmunología. Estructura y programa del sistema de
rácticas....................................................................................................................... 14
Contenido de cada práctica en particular ............................................................... 1616

PRACTICA NO. 1...................................................................................................................................... 17
ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN........................................................................ 17
Posición de las inyecciones: a) intravenosa b) intraperitoneal ................................... 19

PRACTICA NO. 2...................................................................................................................................... 25
DILUCIONES ............................................................................................................. 25

PRÁCTICA NO. 3.................................................................................................................................... 300
MÉTODO DE OUCHTERLONY ................................................................................. 30
REACCIONES DE INMUNODIFUSIÓN..................................................................... 30

PRÁCTICA NO. 4...................................................................................................................................... 34
DETERMINACIÓN DE INMUNOGLOBULINAS SÉRICAS ........................................ 34
1° PRUEBA DE PRECIPITACIÓN DEL SULFITO DE SODIO .............................. 34
2° PRUEBA DE TURBIDEZ DEL SULFATO DE ZINC........................................... 36
3° PRUEBA DEL GLUTARALDEHÍDO.................................................................. 39
PRACTICA NO. 5...................................................................................................................................... 40
BRUCELOSIS: Aspectos generales y Serodiagnóstico ............................................. 40
PRUEBA RAPIDA DE AGLUTINACIÓN EN PLACA.................................................. 45
(ROSA DE BENGALA (Card Test))............................................................................ 45

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PRACTICA NO. 6...................................................................................................................................... 48
FUNDAMENTO.......................................................................................................... 48

PRACTICA NO. 7...................................................................................................................................... 53
PRIMERA PARTE...................................................................................................... 53
AGLUTINACION ESTÁNDAR EN TUBO................................................................... 53
SEGUNDA PARTE..................................................................................................... 57
AGLUTINACIÓN EN TUBO EN PRESENCIA DE...................................................... 57
2-MERCAPTOETANOL .............................................................................................57

PRACTICA NO. 8...................................................................................................................................... 61
PRIMERA PARTE...................................................................................................... 61
AGLUTINACIÓN ESTANDAR EN MICROPLACA ..................................................... 61
AGLUTINACIÓN EN PRESENCIA DE 2- Me EN MICROPLACA .............................. 61
SEGUNDA PARTE..................................................................................................... 64

PRACTICA NO. 9...................................................................................................................................... 67
ANTÍGENOS DE SUPERFICIE DE GRUPOS SANGUÍNEOS .................................. 67
SISTEMA ABO........................................................................................................... 67
METODOLOGÍA ........................................................................................................ 68

PRACTICA NO. 10.................................................................................................................................... 71
REACCIONES FEBRILES ......................................................................................... 71

PRÁCTICA NO. 11.................................................................................................................................... 75
ANTIESTREPTOLISINAS.......................................................................................... 75

PRACTICA NO. 12.................................................................................................................................... 81
DIAGNOSTICO PRECOZ DEL EMBARAZO ............................................................. 81

PRACTICA NO. 13.................................................................................................................................... 85
DIAGNOSTICO SEROLÓGICO DE SÍFILIS .............................................................. 85

PRACTICA NO. 14.................................................................................................................................... 89
DETERMINACION DEL FACTOR REUMATOIDE..................................................... 89

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PRACTICA NO. 15.................................................................................................................................... 97
PROCEDIMIENTO PARA LA OBTENCIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES A PARTIR
DE SANGRE TOTAL POR EL MÉTODO FICOLL-HYPAQUE................................... 97
Viabilidad Celular.................................................................................................... 97
CONGELACIÓN Y DESCONGELACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES...... 98
PRACTICA NO. 16.................................................................................................................................. 101
PRUEBAS CRUZADAS ........................................................................................... 101

PRACTICA NO. 17.................................................................................................................................. 104
PRUEBA DE COOMBS............................................................................................ 104
PRUEBA DE COOMBS DIRECTA........................................................................... 104
PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA ....................................................................... 106

PRACTICA No. 18................................................................................................................................... 108
PODER BACTERICIDA DEL SUERO NORMAL ..................................................... 108

Glosario de términos ................................................................................................ 111

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Presentación

Este manual de prácticas de Inmunología se propone iniciar al estudiante en el
estudio de la inmunología. Su contenido es teórico y esquematizado, redactado
de tal manera que facilite su comprensión. Su planeación intenta seguir el
trayecto que realiza una sustancia extraña a través del organismo, con los
diversos mecanismos de defensa que opone a su penetración y en algunos casos
limitar su replicación a través de la respuesta inmune. Se plantea la realización
de 17 prácticas correspondientes a la aplicación de la inmunología clínica,
implementadas de tal manera que el estudiante las pueda realizar sin la
necesidad de material ni equipo sofisticado, únicamente con el material necesario
para realizar las pruebas convencionales, de rutina en cualquier laboratorio de
análisis clínicos, con fines didácticos se proporcionan a los estudiantes muestras
de fluidos corporales “positivas”, trabajando siempre con ética profesional, en el
manejo de este tipo de muestras.

La base para la realización del presente Manual fue la visualización de la
importancia que tiene que el estudiante de inmunología, tenga una formación
sólida sobre su conocimiento práctico y que ingrese al ámbito laboral con las
habilidades para resolver problemas en el área de la inmunología, además los
estudiantes adquieren el conocimiento sobre la importancia de desarrollar su
trabajo con ética y responsabilidad, con el compromiso de otorgar a los
individuos que requieran de su servicio, la confianza de saber que cuentan con un
laboratorio comprometido con la calidad y de esta manera puedan ser partícipes
del mejoramiento de la calidad de vida de los pacientes.

Esta obra enfrenta la aplicación de otorgar un servicio de calidad, proporcionando
diagnósticos oportunos y confiables, es de fundamental importancia para quienes
trabajamos sobre los problemas que aquejan la salud, tengamos conciencia de
ser profesionales de calidad. Este Manual de prácticas de Laboratorio de la
Cátedra de Inmunología, representa una revisión exhaustiva destinada a la
enseñanza de la inmunología. La elaboración de este proyecto inicia con la
construcción de las técnicas de laboratorio implementadas en el trabajo diario de
un laboratorio clínico.

Como criterios de selección de las prácticas, se consideró la necesidad sobre el
conocimiento de las mismas frente al desempeño en el campo laboral. Además,
las prácticas desarrolladas en su metodología se manejan el uso de material
accesible en nuestro laboratorio, implementado de tal manera que se puedan
aplicar en un laboratorio clínico, sin necesidad de equipo sofisticado,en donde el
principio en su aplicación es el conocimiento del fundamento de cada uno de los
exámenes de diagnóstico realizados.
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La problemática que se presenta es la necesidad de que los estudiantes procesen
muestras positivas, para esto se les adiestra a trabajar con responsabilidad,
puesto que al procesarlas están bajo el factor de riesgo inminente de infectarse.
Es necesario trabajar con este tipo de fluidos corporales para que conozcan la
interpretación real de los resultados que serán de suma importancia en la
orientación al médico tratante sobre el estado de salud de los pacientes, el
plasmar un diagnóstico presuntivo certero en la hoja de reporte dará credibilidad
a nuestro desempeño como profesionales de la salud. Todo el personal
involucrado en el sector salud tiene que manejar todo el material biológico
teniendo en mente que es potencialmente infectante. Al egresar de la carrera
tenga una sólida formación con base en sus estudios de inmunología, para aplicar
sus conocimientos en el mundo del desempeño laboral, resolviendo problemas en
el área de serología o inmunología, otorgando a los pacientes que requieran de
su servicio, otorgar un elevado nivel de competitividad en cuanto al trabajo de
calidad en su desempeño, colaborando con el equipo del personal de salud
pública en el uso racional y oportuno de las sustancias, solamente para otorgar el
mejor servicio a los usuarios. Desarrollando con ética y responsabilidad
profesional su trabajo con el propósito de mejorar la calidad de vida del paciente.
Incluso, este manual genera el interés del alumno a incursionar en el área de la
investigación básica y aplicada relacionada a las áreas de la salud.

Para comprender la terminología utilizada en inmunología, se anexa un glosario
de términos. Además se recomienda al estudiante que busque la relación entre
sus actividades diarias y conocimientos adquiridos anteriormente, para que lo
logre en ellos un aprendizaje significativo y en vez de memorizar que analicen la
terminología utilizada en inmunología buscando su significado etimológico, de
esta manera lo que se estudie durante el curso jamás se olvide.

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Int roducción

Por definición, la Inmunología tiene como objetivo el estudio de los fenómenos
relacionados con la inmunidad, por inmunidad se entiende el conjunto de
mecanismos de defensa que protegen contra los microagresores que se
encuentran en el medio ambiente. Inmunología, palabra de origen latino,
etimológicamente significa, privilegio, exención. Actualmente, la Inmunología ya
no puede limitarse al estudio de los medios de lucha contra los agentes
infecciosos: su dominio, mucho más amplio, reagrupa las diversas reacciones que
utiliza el organismo para mantener su integridad.

La Inmunología es el estudio del mecanismo y de las consecuencias de las
modificaciones específicas producidas en un organismo por introducción de una
sustancia llamada antígeno; se llama reacción inmunitaria a la reactividad nueva
y específica que el organismo adquiere después de la introducción de este
antígeno, tanto si se trata de un agente infeccioso como de una molécula de peso
molecular elevado o de una célula.

Es importante generar la conciencia de trabajar con calidad, para que el médico
siempre tenga confianza en el químico para apoyarse en él, con la certeza que se
le apoyará para poder otorgar al paciente un diagnóstico definitivo. En cada
práctica se realizó un análisis en la metodología de trabajo e interpretación de los
resultados obtenidos.

Se deben promover y coordinar esfuerzos de los diferentes constituyentes del
sector salud para preservar la salud, combatir las enfermedades, prolongar la
vida y estimular el desarrollo físico, mental y social de sus habitantes. Otorgar un
servicio de calidad a la comunidad, “nuestro trabajo nos respaldará y será
nuestra carta de presentación”. Los objetivos del presente manual de prácticas
son exponer de manara clara las prácticas elementales implementadas en la
medicina cotidiana en un laboratorio de diagnóstico del área de serología de un
laboratorio de análisis clínicos, desarrollar habilidades y aptitudes necesarias para
el manejo adecuado de muestras biológicas, realizar técnicas y métodos
inmunológicos que apoyarán en el diagnostico certero y oportuno de
padecimientos inmunes.

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Manejo, t ranspor te y a lm acenam iento de m ater ia les en e l laborator io de
I nm unología

Se implementa un programa de eco-eficiencia, que se logra a través de la
generación de productos y servicios que satisfacen las necesidades humanas y
generan calidad de vida, al mismo tiempo que se reducen en forma progresiva
los impactos ambientales y el uso de recursos no renovables, reducción de la
energía y de las emisiones tóxicas, aumento de la cultura del reciclaje y
durabilidad del producto/servicio, entre otros.

Se llevan a cabo estrategias de gestión ambiental, por lo que, se cuenta con
servicio de recolección, transporte y disposición final de residuos biológico-
infecciosos procedentes de las actividades relacionadas con la prevención y
cuidado de la salud implementada en la Facultad de Ciencias Químicas.

En las áreas de laboratorio hay rótulos de información y los contenedores
necesarios para eliminar los residuos biológico-infecciosos:

1. Patológicos (Clave CRETIB (B) RPNE 1-2/03)
2. Punzocortantes (Clave CRETIB (B) RPNE 1-2/05)
3. Misceláneos (Clave CRETIB (B) RPNE 1-2/06)

Las actividades implementadas para monitorear el desempeño en el cuidado y
mantenimiento del medio ambiente son:

- Capacitar al personal en el manejo adecuado de residuos biológico-
infecciosos.
- Inspeccionar el sitio donde se generan los residuos y los programas
de recolección, tipos de equipo, material y procedimientos adecuados.
- Mantener los suministros de material necesario para la selección,
clasificación y empaque de residuos (contenedoresplásticos, bolsas, cajas de
cartón, etc.).
- Monitorear que se respete la programación de las fechas de
recolección de residuos, en función de sus volúmenes de generación de los
mismos y realizar los ajustes y seguimientos necesarios.
- Vigilar que el transporte de los residuos biológico-infecciosos
generados sea el adecuado y bajo las normas de confinamiento para éste objeto.
- Garantizar que el destino final de los residuos biológicos generados
sea el adecuado según las disposiciones de la Secretaría de Medio Ambiente,
Recursos Naturales y Pesca (SEMARNAP).
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Prácticas generales de seguridad y bioseguridad en el laboratorio.
Reglamentos
El presente manual está sustentado bajo normas oficiales mexicanas y reglamentos de los
Laboratorios de la Facultad de Ciencias Químicas de la UJED, así como,
Normas de Seguridad específ icas de las prácticas

a) Cuadro de Detección de Riesgos Particulares.
Tipo de peligro Como evitarlo Como proceder en caso de
un accidente
Cortaduras Utiliza guantes de asbesto y/o
acerados en caso de manejar equipo
cortante, así como solicitar al
laboratorista y/o a tu docente las
recomendaciones en el manejo del
mismo.
Si el sangrado es intenso,
aplica presión o una
compresa directamente
sobre la herida y consiga
atención médica. Si la
cortadura es pequeña deja
que sangre un poco y lávala
con agua y jabón.
Descarga eléctrica Utiliza como tapete de piso un
material aislante (madera) al
encender o conectar electricidad; no
tomes cables expuestos o dañados
visiblemente.
Procura que la persona
respire aire fresco.
acomódala de modo que su
cabeza quede debajo del
cuerpo
Desmayo Cerciorarte de la ventilación en el
área de trabajo (extractores) y evita
llevar a cabo la práctica en caso de
sentirte débil y/o mareado.
Procura que la persona
respire aire fresco.
Acomódala de modo que su
cabeza quede debajo del
cuerpo.
Incendio Apaga el equipo en caso de
sobrecalentamiento y así mismo,
desconéctalo en forma inmediata. No
uses material no equipo visiblemente
dañado.
Cierra todas las tomas de
gas, desconecta todos los
circuitos eléctricos. Usa una
manta contra el fuego o un
extinguidor para apagarlos.
Lesión de los ojos Utiliza lentes protectores y toma una
distancia de medio metro o más de
ser posible en la actividad a
desarrollar.
Lava de inmediato el ojo con
agua corriente. No permitas
que la víctima se frote el ojo.
Quemaduras Utiliza guantes, camisa de manga
larga y tu bata de trabajo, tomando el
material y el equipo calientes con
pinzas, contenedores, etc.
Lava con agua fría hasta que
la sensación de ardor se
calme.

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b) Cuadro de Disposición de desechos.
Tipo de desechos Como clasificarlos Tipo de contenedor
Orgánicos e inorgánicos Orgánica: cáscaras de frutas,
sobras de comida, cabello y
uñas, pasto y hojas, y esto
es lo que usas para hacer la
composta.
Inorgánica: latas de aluminio
y acero, pero deben de estar
limpias. Al acabarse su
contenido, se lavan como
trastes normales y se dejan
secar. Papel, cartón,
envases de vidrio, de
plástico.
El indicado para cada caso

c) Norm as oficia les m exicanas.

NOM-025-STPS-1999:5.1, 5.2, 5.3: NOM-001-STPS-1999:5.5. Condiciones
de iluminación en los centros de trabajo http://info4.juridicas.unam.mx/
NOM-017.STPS-2001:NOM-114-STPS-1994:NOM-022-STPS-1999

Sistema para la identificación y comunicación de riesgos para proporcionar
seguridad a los trabajadores de los centros de trabajo, como una solución a los
problemas de riesgos de trabajo por esas sustancias.

Se considera que existe una responsabilidad general para proporcionar seguridad
a los trabajadores en los centros de trabajo. La comunicación sobre riesgos es
una parte importante de esta responsabilidad, ya que las empresas pueden llegar
a utilizar sustancias químicas y los trabajadores deben estar capacitados para
reconocer el riesgo potencial de los diversos productos químicos, en los
procedimientos de operación y saber usar el equipo de protección personal.

Este sistema ha sido diseñado para llenar la necesidad de una comunicación
efectiva y proporcionar información del uso seguro de sustancias químicas por los
trabajadores, a través de la capacitación de los elementos que componen el
sistema.

La parte central de este sistema es la identificación de los riesgos inherentes de
una sustancia:

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NOM-002-STPS-1993 Relativa a las condiciones de seguridad para la
prevención y protección contra incendios en los centros de trabajo.
http://www.dif.gob.mx/edif/sad/SGC_CHN/EXTERNOS/NOM-002-STPS-
1993.pdf
NOM-005-STPS-1993 Relativa a las condiciones de seguridad en los centros
de trabajo para el almacenamiento transporte y manejo de sustancias
inflamables y combustibles.
http://www-
economia.gob.mx/work/normas/noms/kpronoman/p005stps.pdf
NOM-008-STPS-1993 Relativa a las condiciones de seguridad e higiene
para la producción, almacenamiento y manejo de explosivos en los centros
de trabajo.
http://www-
economia.gob.mx/work/normas/noms/kpronoman/p005stps.pdf
NOM-009-STPS-1993 Relativa a las condiciones de seguridad e higiene
para la producción, almacenamiento y manejo de sustancias corrosivas,
irritantes y tóxicas en los centros de trabajo.
http://www-
economia.gob.mx/work/normas/noms/kpronoman/p005stps.pdf
NOM-010-STPS-1993 Relativa a las condiciones de seguridad e higiene en
los centros de trabajo donde se produzcan, almacenen y manejen
sustancias químicas capaces de generar contaminación en el ambiente
laboral.
http://www.fabregat.com/catalogo/NOMs/NOM-010-STPS-1993.doc
NOM-028-STPS-1993 Seguridad-código de colores para la identificación de
fluidos conducidos por tuberías.
http://www.celorio.com/vapor/norma.htm
NOM-026-STPS-1993 Seguridad colores y su aplicación.
http://www.dif.gob.mx/edif/sad/SGC_CHN/EXTERNOS/NOM-026-STPS-
1993.pdf
CONVENIO 170 (OIT) Convenio sobre la seguridad en la utilizaciónde los
productos químicos en el trabajo.
NOM-008-SCFI-1993 Sistema General de Unidades de Medida.
http://www.ine.gob.mx/ueajei/publicaciones/nom-008a.html
NOM-022-STPS-1999 Relativa a las condiciones de seguridad en los centros
de trabajo en donde la electricidad estática representa un riesgo.
Electricidad estática en los centros de trabajo. Condiciones de seguridad e
higiene.
http://www.steps.gob.mx/DGSST/normatividad/noms/Nom-022.pdf
NOM-114-STPS-1994 Sistema para la identificación y comunicación de
riesgos por sustancias químicas en los centros de trabajo.
http://www.facmed.unam.mx/deptos/salud/strabajo/pdf/nom-114.pdf
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Manejo de residuos peligrosos biológico infecciosos ( RPBI )
Los residuos peligrosos biológico infecciosos (RPBI), son los que contienen
bacterias, hongos, virus, parásitos, microorganismos capaces de causar
infecciones, efectos nocivos para la salud y el medio ambiente.

NOM-087-ECOL-1995 Establece los requisitos para la separación, envasado,
almacenamiento, recolección, transporte, tratamiento y disposición final de los
RPBI que se generan en establecimientos que prestan atención médica (Diario
Oficial de la Federación 07/11/1995). Dicha Norma es de observancia obligatoria
para los establecimientos que presten atención médica, tales como: hospitales,
clínicas, laboratorios clínicos, laboratorios de producción de agentes biológicos,
de enseñanza e investigación, tanto humanos como veterinarios en pequeñas
especies y centros antirrábicos, cuando estos generen más de 25 kg/ mes o 1
kg/día de RPBI.
http://bvs.insp.mx/artículos/2/11/06032001.pdf

Los RPBI se clasifican en:
1. Residuos de sangre y sus derivados: plasma, suero, etc.
2. Cultivos y cepas almacenadas de agentes infecciosos: vacunas, placas
de cultivo, etc.
3. Residuos patológicos: residuos de tejidos, órganos, partes y fluidos
corporales, etc.
4. Residuos no anatómicos derivados de la atención a pacientes y de los
laboratorios: torundas, guantes, cubrebocas, tubos, etc.
5. Residuos de objetos punzocortantes usados o sin usar: navajas,
jeringas, pipetas Pasteur, porta y cubreobjetos, etc.

El siguiente cuadro muestra el color y tipo de envase requerido para cada uno de
los tipos de RPBI:

Tipo de residuos Estado físico Envasado Color
Sangre Sólidos Bolsas de plástico Rojo
Cultivos y cepas de
agentes infecciosos
Residuos no
anatómicos
Líquidos Recipientes
herméticos
Rojo
Patológicos Sólidos Bolsas de plástico Amarillo
Patológicos Líquidos Recipientes
herméticos
Amarillo
Objetos
punzocortantes
usados y sin usar
Sólidos Recipientes rígidos Rojo
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Cuadro de Com petencias

Ubicar dentro del siguiente cuadro las competencias profesionales donde se ubica
la cátedra de inmunología, identificando los diferentes ámbitos del desempeño
profesional y laboral, el contenido requerido, así como también, las habilidades y
actitudes que serán adquiridas durante el desarrollo de las prácticas de
inmunología.

Competencia a
adquirir
Objetivo Intención o
finalidad
Contexto o
restricciones
Rangos
(s) o
situacione
s
Aplicar Aplicar en el
laboratorio clínico
las prácticas
realizadas en el
laboratorio de
Inmunología
Para realizar
exámenes de
diagnóstico
certeros y
confiables
Utilización de los
laboratorios,
material y equipo
correspondiente,
en cada práctica
En los
procesos
académic
os,
relativos a
la
inmunolog
ía básica

Mapa del sistem a de práct icas de I nm unología. Est ructura y
program a del sistem a de práct icas.
El presente manual forma parte esencial de la cátedra de Inmunología, la
cual se imparte en la Facultad de Ciencias Químicas dentro del plan de
estudios del octavo semestre de la carrera de Químico Farmacéutico Biólogo.
Se desarrolla de manera secuencial, acorde al programa temático de la parte
teórica de inmunología, y es parte del sistema formativo básico de los
estudiantes de la carrera de Q.F.B.

LABORATORI O

Duración: 6 sesiones (2
horas en cada una) que corresponden
al 33.34% del curso.

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Competencia o unidad de
competencia
Semana Prácticas Tipo Pre-requisitos
Encuadre 1ª. Introducción a la parte
práctica de la cátedra de
Inmunología
Laboratorio
(2 horas)
Lectura de reglamento
de Laboratorio
1ª. Unidad
Generalidades sobre
inmunidad y medios de
defensa
2ª. Práctica No. 1
Animales de
experimentación
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
2ª. Unidad
Células involucradas en el
fenómeno de fagocitosis
3ª. Práctica No. 2
Diluciones
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
3ª. Unidad
Inmunidad celular y humoral
4ª. Práctica No. 3
Método de Ouchterlony
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
4ª. Unidad
Complemento
5ª. Práctica No. 4
Determinación de
Inmunoglobulinas séricas
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
5ª. Unidad
Anormalidades del sistema
inmune e inmunidad frente a
diferentes microorganismos
6ª. Práctica No. 5
Brucelosis: Aspectos
generales y serodiagnóstico
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
6ª. Unidad
Autoinmunidad
7ª. Práctica No. 6
Prueba de Rivanol
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
7ª. Unidad
Reacciones de
hipersensibilidad
8ª. Práctica No. 7
Primera parte. Aglutinación
estándar en tubo
Segunda parte. Aglutinación
en tubo en presencia de 2-
Mercaptoetanol (2-Me)
Primera parte. Aglutinación
estándar en microplaca
Segunda parte. Aglutinación
en microplaca en presencia
de 2-Mercaptoetanol (2-Me)
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
8ª. Unidad
ComplejoPrincipal de
histocompatibilidad (MHC)
9ª. Práctica No. 8
Antígenos de superficie de
grupos sanguíneos
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
9ª. Unidad
Reacciones inmunológicas
10ª. Práctica No. 9
Reacciones febriles
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
10ª. Unidad
Inmunidad y terapia génica:
beneficios y riesgos
11ª. Práctica No. 10
Antiestreptolisinas
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
11ª. Unidad
Bioética en Inmunología
12ª. Práctica No. 11
Diagnóstico precoz del
embarazo
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
12ª. Unidad 13ª. Práctica No. 12
Diagnóstico serológico de
sífilis
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
13ª. Unidad 14ª. Práctica No. 13
Determinación del factor
reumatoide
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
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14ª. Unidad 15ª. Práctica No. 14
Procedimiento para la
obtención de células
mononucleares a partir de
sangre total por el método
de Ficoll-Hypaque
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
15ª. Unidad 16ª. Práctica No. 15
Pruebas cruzadas
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
17ª. Práctica No. 16
Prueba de Coombs directa
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo
Poder bactericida del suero
normal
Laboratorio
(2 horas)
Elaboración de
cuestionario previo con
diagrama de flujo

Contenido de cada práctica en particular

Se recomienda que la cantidad de alumnos por equipo para poder trabajar
óptimamente en el laboratorio en la cátedra de Inmunología, sea de 4 a 5 alumnos por
mesa de trabajo, para un mejor desempeño personal y participativo de cada
integrante.

En el desarrollo de las prácticas se pretende que se conceptualicen y apliquen los
términos de respuesta inmune celular y humoral, fagocitosis, aglutinación,
precipitación, inmunoglobulinas, diluciones, reacciones febriles, etc., asociándolos con
la solución de problemas enfocados a resolver problemas relacionados con la salud.
Se pretende que con el presente manual el estudiante adquiera las habilidades y
conocimientos necesarios para el buen desempeño en un laboratorio clínico y que
con el conocimiento del fundamento de cada procedimiento den un razonamiento
lógico al diagnóstico presuntivo otorgado al médico solicitante del estudio con un
espíritu crítico y resolutivo frente a los problemas que se puedan enfrentar en el
ejercicio de su profesión.

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PRACTI CA NO. 1
ANI MALES DE EXPERI MENTACI ÓN

I nt roducción

La bioética tiene como objetivo conectar la reflexión ética con la investigación
científica con la finalidad de construir una ciencia con conciencia al servicio
integral del hombre, la experimentación clínica, constituye un valor en sí misma
que debe ser buscado lícitamente por los científicos y que no se contrapone con
la instancia ética en cuanto al objetivo común de ambas que es la búsqueda de la
verdad para el hombre y para su salud. La Ley Federal de sanidad animal,
publicada el 18 de Junio de 1993 (vigente) trata la prevención y control de las
enfermedades de los animales, la cual fija las bases para el diagnóstico,
prevención, control y erradicación de enfermedades y plagas de los animales
terrestres, establece atribuciones de la Secretaría en cuestiones de medidas
zoosanitarias. Normas oficiales para productos, subproductos animales,
productos químicos, farmacéuticos, biológicos y alimenticios para uso en
animales o consumo por éstos, así como envases y rótulos. Normas que deben
reunir los siguientes establecimientos: ferias, frigoríficos, fábricas de productos o
subproductos animales para consumo humano, los que fabriquen o expendan
alimentos procesados para consumo animal y productos químicos y
farmacológicos para uso en animales, hospitales y clínicas vegetarianas. Desde
el punto de vista bioético, la experimentación clínica es objetada en base al uso
de los pacientes y el investigador y puede aplicarse en varias etapas de la
investigación: la selección de pacientes y su reclutamiento. La Ley Federal de
Sanidad Animal contempla los laboratorios de prueba o diagnóstico en cuanto al
trato humanitario, cuidado zoosanitario y técnicas de sacrificio.

La elección de especies animales se basa en diversas consideraciones. Se debe
tomar en cuenta si la especie en cuestión es susceptible a la enfermedad contra
la cual estamos elaborando el producto. Es importante, además considerar el
costo de los animales así como el de su mantenimiento, el tamaño y docilidad de
los mismos, etc. Un factor importante en bioterios (unidades en donde se crían
estos animales) y en laboratorios, es el manejo adecuado, tanto para evitar
heridas por mordeduras y arañazos, etc., como para evitar el excesivo
sufrimiento de los mismos.

El manejo de estos animales varía de especie a especie. En las figuras 1-7 se
muestra el manejo adecuado de las especies más comunes en el laboratorio. Las
especies que más se utilizan en el laboratorio son el cobayo, ratón albino, rata
albina y el Hamster, ofrecen mayor dificultad la rata y el ratón porque al sentirse
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capturados muerden. El cobayo y Hamster son sumamente dóciles, la manera
más fácil de tomar una rata es con una mano y de la cola y con la otra sujetar la
piel del cuello, así queda inmovilizada.

El ratón se toma boca arriba, tomando la cola con los dedos medio e índice
(como se toma un cigarro), y rodearlo con el resto de la mano. Para inyecciones
o inoculaciones deberá tomarse de la piel del dorso con el pulgar y el índice,
sosteniéndolo de la cola con el meñique y el anular apoyados en la palma de la
mano. El Hamster únicamentese utiliza la sujeción por la piel del dorso, ya que.
Tienen la cola muy pequeña. Los cobayos no ofrecen dificultad, basta con
rodearlos por el dorso con una mano y ejerciendo poca presión porque fácilmente
se asfixian.

El uso de los animales de granja en investigación científica debe estar sujeto a
las mismas consideraciones éticas que el uso de otros animales para el mismo
propósito, sin importar los objetivos científicos del investigador ni las fuentes de
financiamiento. Los sistemas de alojamiento para los animales de granja
empleados en investigación biomédica pueden o no ser diferentes de los usados
en investigación agrícola. Los animales utilizados tanto en investigación
biomédica como agrícola pueden alojarse en jaulas, pesebres, o pastizales.
Algunos estudios agrícolas necesitan condiciones uniformes para minimizar la
variabilidad medio ambiental y algunos estudios biomédicos se llevan a cabo en
circunstancias de granja. Las guías para la utilización de los animales en estudios
de campo preparadas por las sociedades profesionales son útiles siempre que se
adhieran a los principios humanitarios.

OBJETI VO

Aprender el manejo adecuado de los animales más comunes de laboratorio.

METODOLOGÍ A

1) Después de observar el manejo de cada animal de laboratorio, tomarás
cada uno de ellos y practicarás su manejo, con mucho cuidado, evitando
molestar a los animales y evitar salir lesionado (Figuras 1-7).

2) Se llevará a cabo toma de muestra (venopunciones) a cada animal.

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TECNI CAS DE VENOPUNCI ÓN ( SANGRADO) E I NOCULACI ÓN

1. Venopunción o Inoculación intravenosa en conejos. El conejo se
inmoviliza como se muestra en la figura 2, se limpia la oreja en el
margen exterior con una torunda y agua caliente, para favorecer la
dilatación de la arteria central; posteriormente, con una torunda se
desinfecta la zona, con la ayuda de una jeringa tipo tuberculina con
aguja delgada, se procede a tomar una muestra sanguínea o
inoculación, según sea el caso.
2. Inoculación intravenosa en ratas macho y cobayos. Anestesie al
animal en cámara de éter. Después colóquelo en posición ventral,
localice la vena dorsal del pene y administre con una aguja delgada
la sustancia deseada.
3. Inoculación intravenosa en ratón. Introduzca al ratón en un tubo
de paredes lisas y con un orificio de salida en la tapa donde se
extrae la cola. Limpie la cola con una torunda y agua caliente, para
que la vena caudal se dilate e inocule con una jeringa de tipo
tuberculina usando una aguja del 25. No debe forzarse la jeringa
en ningún momento. Para la venopunción se procede de la misma
manera e incluso se puede cortar un pedazo de la cola.
4. Inoculación o venopunción intraperitoneal en ratón. Sujete al
animal con la mano, como se muestra en la figura 6, con la parte
ventral hacia arriba, incline la cabeza hacia abajo, con la idea de
que las viseras se desplacen hacia abajo, limpie la región
peritoneal con una torunda y agua caliente; posteriormente, con
una torunda desinfecte la zona, con la ayuda de una jeringa tipo
tuberculina con aguja delgada, se procede a tomar una muestra
sanguínea o inoculación, al introducir la aguja debe percibir que
perfora los dos planos (piel y pared abdominal).
5. Inoculación subcutánea en rata o ratón. Con la ayuda de unas
pinzas, se inmoviliza al animal por atrás de las orejas, fije las
pinzas del lado opuesto y jale la cola. Con los dedos pulgar e índice
forme un pliegue de la piel e introduzca la guja por este pliegue.
6. Inoculación con sonda gástrica. Se usa para administrar líquidos en
estómago y para eso se una aguja roma, del tipo de las que se
utilizan para anestesia raquídea en humanos. Sujete al animal con
la parte cefálica hacia arriba con el dedo índice y medio realice
extensión del cuello e introduzca lentamente la sonda sin lastimar
al animal. No es necesario anestesiar.
7. Sangrado en aves. Se inmoviliza el animal como muestra la figura
1. Se sube una de las alas y abajo se localiza la vena alar, es la
vena más irrigada y se utiliza para realizar un sangrado
exitosamente. Se limpia la zona con una rotunda y agua caliente,
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así se estimula la dilatación, posteriormente se desinfecta con
alcohol y se procede a tomar la muestra.
8. Para realizar punción cardiaca. Anestesiar al animal, limpiar la zona
izquierda del tórax , localizar el corazón y extraer lentamente la
sangre usando una jeringa con aguja del número 20 x 32
9. Sangrado de yugular. En chivos y en carneros es relativamente
fácil de realizar. Derribe al animal e inmovilícelo, córtele el pelo en
un lado del cuello y localice la yugular, limpie con benzal el área y
ligue en la base del cuello lo que hace que se vea mejor la vena.
10. Corte de vena axilar. Este sangrado se puede realizar en ratón,
rata, cobayo. Se anestesia el animal, colóquelo en posición ventral
y con un bisturí realice una incisión en el área axilar, corte plexo
axilar y colecte la sangre con una pipeta Pasteur.
11. Plexo venoso oftálmico. Es una técnica para obtener pequeñas
cantidades de sangre en ratones y ratas. Anestesie al animal,
introduzca una pipeta Pasteur en la parte interna del ojo girándola,
después se retira un poco para que la sangre suba por capilaridad.

I NVESTI GACI ÓN PREVI A AL EXPERI MENTO

1. ¿Por que es importante en Inmunología conocer el manejo de animales
de experimentación?

2. ¿Qué es la bioética?

3. Investiga la Ley Federal de Sanidad Animal

CUESTI ONARI O PARA ANEXAR AL REPORTE

1) ¿Que animales encontraste más fácil de manejar, y porqué?

2) ¿Que animales encontraste más difícil de manejar, y porqué?

3) Realiza una lista de los animales manejados de acuerdo a su docilidad.

4) ¿Cuál es tu opinión acerca de la bioética y de la Ley Federal de Sanidad
animal? Explica

5) ¿Para que se realiza la inmunización de los animales y cuales son las
prácticas de inmunización usando modelos en animales?

6) ¿Cuáles son las especies que se usan con más frecuencia?

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Manual de Laboratorio de In munología Básica y Clínica ® 2011 está protegido por los Derechos de Autor por la
Secretaría de Educación Pública del Instituto Nacional del Derecho de Autor con el Nº de Registro 03-2009-
111713215700-14. Se publica en Abril de 2011 como un suplemento de REDVET Revista electrónica de Veterinaria
(http://www.veterinaria.org/revistas/redvet) con nº ISSN 1695-7504 por la editorial Veterinaria Organización S.L.®
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21

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Posición de las inyecciones: a) intravenosa b)
intraperitoneal

1.- Observar la
manipulación
adecuada del animal
en cuestión.
2.- Evitar molestar
a los animales,
practicar su manejo
con mucho cuidado.
Metodología
DIAGRAMA DE
FLUJO
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PRACTI CA NO. 2
DI LUCI ONES
En el laboratorio de Inmunología constantemente estarás realizando diluciones.
Esto obedece a que, para determinar la cantidad de anticuerpos que tiene un
animal, o la cantidad de antígeno que contiene una vacuna, etc., es necesario
diluir éstos hasta el punto donde ya no es posible detectar actividad. A este
proceso se le denomina titulación, y la última dilución que todavía muestra
actividad se le denomina título. Aunque existen muchas maneras de efectuar
diluciones, dos de ellas son las más utilizadas. Diluciones dobles Para iniciar una
serie de diluciones dobles se mezcla una parte del líquido que se va a diluir en
una parte del diluyente (por ejemplo, una parte de suero en una parte de
solución salina fisiológica). A esta primera dilución se le denomina 1:2, porque
hay en este caso, una parte de suero en dos partes de líquido. Una vez mezclado
esto se pasa una parte de la mezcla a una nueva parte de diluyente, la dilución
ahora es de 1:4 (Figura 1). Este tipo de diluciones son las más utilizadas en
Inmunología, puesto que nos dan divisiones pequeñas entre un tubo y el
siguiente, permitiendo así determinar con bastante exactitud el título de la
muestra.

Diluciones Logarítmicas: Estas diluciones se hacen de la misma manera que las
dobles, pero en este caso, la muestra se mezcla cada vez con nueve partes
(Figura 2). De esta manera se obtienen diluciones de 1:10, 1:100, 1:1000, etc.
Este tipo de diluciones no se usan mucho en Inmunología pero en ocasiones se
recurre a ellas cuando se sospecha que el título será muy elevado, como por
ejemplo, se titulan sueros de individuos sospechosos de Leptospirosis.

El objetivo de esta práctica es aprender las técnicas de diluciones.

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METODOLOGÍ A

1) En una serie de 10 tubos, pon 0.25 mide agua en cada uno.

2) Deposita 0.25 ml de colorante en el primer tubo y mezcla muy bien.

3) Con una pipeta limpia, toma 0.25 ml del primer tubo y colócalos en el segundo
tubo, mezclando bien.
4) Con una pipeta limpia, pasa 0.25 ml del segundo al tercer tubo, mezclando
bien.

5) Repite el proceso en todos los tubos.

6) Observa y anota tus resultados.

7) En una serie de 10 tubos, coloca 2.25 ml de agua en cada uno.

8) Mezcla 0.25 ml de colorante en el primer tubo.

9) Cambia de pipeta y transfiere 0.25 ml de la mezcla de colorante del primer
tubo al segundo tubo.

10) Repite el proceso en todos los tubos.

11) Observa y anota tus resultados.

Realizar una dilución DOBLE ( 1 :2 ) de ácido clorhídrico (HCl) en agua, en un
volumen de 25 ml

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Realizar una dilución QUI NTUPLE ( 1 :5 ) de ácido clorhídrico (HCl) en agua, en
un volumen de 25 ml
PROPORCION VOLUMEN
Soluto 1 parte de HCl 5 ml
Diluyente 4 partes de agua 20 ml
TOTAL 5 partes en total 25.0 ml

Realizar una dilución 1 :2 5 0 de ácido clorhídrico (HCl) en agua, en un volumen de
25 ml
PROPORCION VOLUMEN
Soluto 1 parte de HCl 0.1 ml
Diluyente 249 partes de agua 24.9 ml
TOTAL 5 partes en total 25.0 ml

De lo anterior se deduce que para obtener el volumen correspondiente a una
parte de la dilución (parte correspondiente al soluto), bastará dividir el volumen
deseado entre el total departes de la dilución:

SOLUTO = VOLUMEN TOTAL / TOTAL DE Partes de la dilución

Posteriormente se multiplicará el valor de “una parte” por el número de partes
que ocupa el diluyente, para determinar el volumen del mismo:

DI LUYENTE = Valor de una par te × No. De par tes del diluyente

I NVESTI GACI ÓN PREVI A AL EXPERI MENTO

1) Investigue que es dilución.

2) ¿Que finalidad tiene el conocer el título en una aglutinación?

3) ¿Que diferencia habrá entre una dilución doble y una logarítmica?

CUESTIONARIO PARA ANEXAR AL REPORTE
1) ¿Hasta que dilución llegaste en la primera serie de tubos?
2) ¿Hasta que dilución llegaste en la segunda serie de tubos?
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3) ¿Porque cambiaste la pipeta en cada uno?

Realizar una dilucion
DOBLE (1:2) de HCl
en agua.
H2O HCl 1
En un volumen de
25 mL.
Realizar una dilucion
QUINTUPLE (1:5) de
HCl en agua, en un
volumen de 25 mL.
H2O HCl 1
20 mL 5 mL

Realizar una dilucion
(1:250) de HCl en
agua, en un volumen
de 25 mL.
H2O HCl 1
24.9 mL 0.1 mL

DIAGRAMA DE
FLUJO
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En una serie de 10 tubos,
coloca 0.25 de agua.
1 2 3 4 5
6 7 8 9 10
H2O
1
En el tubo 1, deposita
0.25 mL de oolorante.
1 2
Con una pipeta limpia,
toma 0.25 mL del
primer tubo y colocalos
en el segundo tubo. Mezclar muy bien.
2
2
Con una pipeta limpia,
toma 0.25 mL del tubo
2, pasa al tercer tubo.
Mezclar muy bien.
3 3
Repite el poceso con
todos los tubos. observa y
anota tus resultados.
En una serie de 10 tubos,
coloca 0.25 de agua.
1 2 3 4 5
6 7 8 9 10
H2O
En una serie de 10 tubos,
coloca 0.25 de agua.
1
En el tubo 1, deposita
0.25 mL de oolorante.Mezclar muy bien.
2 12
Con una pipeta limpia,
toma 0.25 mL del
primer tubo y colocalos
en el segundo tubo.
2
Con una pipeta limpia,
toma 0.25 mL del tubo
2, pasa al tercer tubo.
Mezclar muy bien.
3 3
Repite el poceso con
todos los tubos. observa y
anota tus resultados.
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PRÁCTI CA NO. 3
MÉTODO DE OUCHTERLONY
REACCI ONES DE I NMUNODI FUSI ÓN
Cuando una solución de antígeno soluble, es mezclado con un antisuero
correspondiente, el antígeno se combina muy rápido con el anticuerpo y si las
condiciones son las adecuadas los reactantes forman un precipitado. La velocidad
de la reacción de precipitación está influenciada por factores físicos, químicos e
inmunológicos. Ouchterlony en 1947, introdujo el método de inmunodifusión
doble, es una técnica de doble difusión en agar, se fundamenta en que cuando el
antígeno y el anticuerpo, se difunden en un medio semisólido (agar) forman un
inmunoprecipitado, estable que se visualiza fácilmente. Antígeno y anticuerpo
difunden simultáneamente a partir de pozos cercanos, de modo que a su
alrededor se forme un gradiente de concentraciones que, al alcanzarse y llegar al
punto de equivalencia, formen bandas visibles de precipitación.

METODOLOGÍ A

1. Se disuelve la Solución salina amortiguada y el agar con ayuda de calor, ya
disuelto totalmente, el volumen perdido se debe restituir con agua destilada.
Para evitar la contaminación microbiana se agrega 1 ml de solución de
timerosal 1:1000 en agua destilada.

2. Se disponen de portaobjetos o capas petri. Barnice los portaobjetos con
agarosa al 1% y séquelos al horno. Funda agarosa al 1% y en caliente se
colocan 5 ml de la agarosa al portaobjeto, sin derramar. Deje que gelifique.
Si usa caja petri se llenan hasta una altura de 1 a 2 mm con la solución de
agar aún caliente.

3. Se deja solidificar el agar a temperatura ambiente y si no se van a utilizar el
mismo día, las cajas petri pueden guardarse en cámara húmeda a 4ºC. Al
agar de la caja petri se le hacen varias perforaciones: una central y dos o
más alrededor de ésta. En el pozo central se coloca el antígeno que se desea
investigar, y en los pozos periféricos se colocan los diversos antisueros.
Tanto los antígenos como los antisueros se difunden por el agar,
separándose por su peso molecular, de tal manera que los que tienen menor
peso se difunden más rápidamente. Cuando el antígeno y su anticuerpo
específico se encuentran, se unen y precipitan. Este precipitado se ve como
una estrecha banda blanca en el agar.

4. Perfore los portaobjetos con un sacabocados, distribuya los agujeros
alrededor de un pozo central (3 mm de diámetro aproximadamente), en

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donde se colocará el anticuerpo, el antígeno se coloca en pequeños pozos
laterales. Se debe mantener una distancia de aproximadamente 0.5 cm
entre pozo y pozo.

5. Incube en una cámara húmeda, a temperatura ambiente por 24 h. Observe
las bandas de precipitación, los portaobjetos también se dejan reposar en
una cámara húmeda y se deja proseguir la difusión a temperatura ambiente
durante 24 h.

I NTERPRETACI ÓN

Se busca la presencia de bandas opalescentes entre ambos pozos. El número
de bandas indica la cantidad de sistemas antígeno-anticuerpo presentes en las
preparaciones. Si se trata de comparar dos antígenos, habrá identidad total
entre ambos si se establece la continuidad en el punto donde se alcanzan las
bandas correspondientes a uno y otro; no hay identidad si ambas bandas sólo
se cruzan y cada una continua en línea recta; identidad parcial si hay un
fenómeno mixto. Si al cabo del períodode incubación no aparecen las bandas
de precipitación o éstas aún no son muy claras, puede proseguirse la
incubación durante el tiempo que sea necesario. Debe siempre vigilarse que el
agar no se deshidrate. Las bandas pueden teñirse con algún colorante de
proteínas (amido negro, eosina, fucsina, etc.) para ser mejor observadas.

VENTAJAS DE LA PRUEBA DE OUCHTERLONY

a. Se puede ver de cuantos antígenos está compuesto un producto
(embutido, bacteria, etc.).

b. Se pueden comparar antígenos y antisueros entre sí. En efecto, cuando
en dos pozos adyacentes existe un mismo anticuerpo contra el antígeno
central, la línea de precipitación se une. A esta línea se le denomina
identidad total. Cuando los anticuerpos son diferentes y reaccionan contra
antígenos del pozo central, las líneas de precipitación se cruzan y se les
denomina no identidad. Existe también la posibilidad de que se
encuentren dos o más antígenos diferentes que tengan el mismo peso
molecular y que uno de ellos tenga anticuerpos específicos en dos pozos
adyacentes y el otro solo en uno. En este caso, la línea estará al mismo
tiempo, unida y cruzada, denominándose a este fenómeno identidad
parcial.

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I NVESTI GACI ÓN PREVI A AL EXPERI MENTO

1. ¿A que se le llama precipitación?

2. Investigue el sistema de difusión de Oudin (1947)

3. Investigue las aportaciones de Grabar y Williams (1953)

4. Investigue el método de Manzini

5. Investigue el método de Ouchterlony

CUESTI ONARI O PARA ANEXAR AL REPORTE

A. Realiza un esquema de las perforaciones que realizaste señalando los
diferentes antisueros y el antígeno que utilizaste

B. Efectúa un esquema de las líneas obtenidas en la precipitación en gel.

C. Enumera las fuerzas fisicoquímicas que son responsables de la unión
antígeno-anticuerpo

D. ¿Consideras que esta prueba puede utilizarse para la identificación de los
grupos sanguíneos en manchas de sangre en Medicina Legal, y porque?

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Soluciòn
salina
Se disulve la soluciòn
salina amortiguadora y
el agar con ayuda del calor. Ya que este disuleto
totalmente, el volimen
perdido se restituye con
agua destilada.
H2O
Destilada
Agrega 1 mL de soluciòn
timerosal 1:1000 en agua
destilada, p/evitar
contaminaciòn microbiana. H2O
Destilada

Barnizar las cajas petri
con agarosa al 1% y
secarlos al horno.

Fundir agarosa al 1% y en
caliente se colocan de 1 a 2
mm en la caja petri con una
soluciòn de agar caliente.
Se seja solidificar el agar a
temperatura ambiente, al
agra de la caja de petri se le
hacen varias perforaciones.

En el pozo central se coloca
el antigeno que se desea
investigar, y en los pozos
perifericos se colocan se
colocan los diversos
antisueros.
Antigeno
Incube en una camara
humeda, a temperatura
ambiente por 24 horas,
observe las bandas de
precipitaciòn.

DIAGRAM A DE FLUJ O
Antisuero
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PRÁCTI CA NO. 4
DETERMI NACI ÓN DE I NMU NOGLOBULI NAS SÉRI CAS
1 ° PRUEBA DE PRECI PI TAC I ÓN DEL SULFI TO DE SODI O

OBJETI VO

El alumno determinará la presencia de inmunoglobulinas (Ig’s) séricas llevando a
cabo la prueba de precipitación de sulfito de sodio.

FUNDAMENTO

Esta prueba se basa en la precipitación de Ig’s del suero
por sales de sulfito de sodio. Esta prueba es útil cuando se
determina la presencia de Ig’s en recién nacidos hasta tres
semanas de edad. Su interpretación es de tipo objetivo y
tiene un porcentaje de confiabilidad de aproximadamente
93%. Es indispensable que la muestra sea de suero y no
plasma, ya que este contiene proteínas que se
precipitarían con las Ig’s, dando falsos resultados. La
hemólisis parcial de la muestra parece no afectar los
resultados de esta prueba. Esta prueba permite
diagnosticar la Falla en la Transferencia de Ig’s (FTI).

METODOLOGÍ A

Se preparan tres soluciones de sulfito de sodio al 14, 16 y
18% en agua destilada. Se colocan 1.9 ml de cada solución en tres tubos de
ensaye (con capacidad de 3 a 5 ml) y se añade 0.1 ml de suero a cada uno de los
tubos, mezclando perfectamente bien el contenido.

I NTERPRETACI ÓN

En caso de haber titulación de Ig’s, se observará turbidez en forma inmediata y
la formación de un precipitado al cabo de 30 - 60 min. Los resultados se
interpretan de la siguiente manera:

Precipitación en los tubos con 14, 16 y 18%: ≥ 15 mg Ig/ml de suero.

Precipitación en los tubos con 16 y 18%: 5 - 15 mg Ig/ml de suero.

Precipitación en los tubos con 18% o ninguna precipitación: ≤ 5 mg Ig/ml de
suero.
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ZnSO4
7H2O
Se preparan tres disoluciones
de sulfito de sodio al 14, 16 y
18 % en agua destilada.
1
2
Sulfito de
sodio
14 %
Sulfito de
sodio
16 %
Sulfito de
sodio
18 %
Sulfito de
sodio
14 %
Colocar 1.9 de cada solucion y
colocar 0.1 ml de suero en
cada tubo.
Mexclar
perfectamente
el contenido.

DIAGRAMA DE FLUJO
Prueba de precipitación
del sulfito de sodio
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