LABORATORIO 5 - METODO DE PROBIT (1)

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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL Y DE RECURSOS NATURALES
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL Y DE RECURSOS NATURALES
Curso: TOXICOLOGÍA Y SALUD AMBIENTAL
Laboratorio: 90G 
Título: Dosis letal media (dl50) del extracto etanólico de Cenchrus echinatus L. “cadillo” en Mus musculus albinos
Profesora: Valderrama Rojas, María Teresa
Alumnos: 
Chamorro Gonzales, Omar Edinson
Guevara Guerra, Sergio Manuel
Nuñez Aguilar, Milagros Xiomara
Pisco Burnes, Luis Antonio
Roque Quispe, Jaime
Callao - 2020 
1
Introducción
La categorización de seguridad de una sustancia para su uso y manejo seguro, depende del grado de toxicidad o nocividad que esta tenga; para lo cual se somete esta sustancia a una serie de pruebas y análisis, con el fin de observar si producen efectos agudos, subagudos y crónicos después de una o varias administraciones. 
Generalmente los primeros estudios que se realizaron para la determinación de la toxicidad de una sustancia, se basaron, en encontrar si produce efectos agudos. Mediante el cual buscaron la mortalidad del 50% de los animales de experimentación después de una única inoculación en un tiempo determinado de máximo 24 horas, también llamada Dosis Letal 50 (DL50). 
Método de Probit 
El Probit se basa en la cuantificación probabilística de la vulnerabilidad, ante efectos físicos de una magnitud determinada que se suponen conocidos. Consiste en la aplicación de correlaciones estadísticas, para estimar las consecuencias desfavorables sobre la población u otros elementos vulnerables a los fenómenos físicos peligrosos. Permite estimar la Dosis letal 50, ajustando los datos de mortalidad mediante una técnica de probabilidad, para estimar los valores que siguen una distribución logarítmica de tolerancias. 
El porcentaje de organismos afectados o muertos por la acción tóxica de una sustancia se transforma a unidades Probit. Una de las restricciones del método es que para el cálculo de la DL50 deben obtenerse valores intermedios entre 0 y 100% de mortalidad.
En las investigaciones el software es utilizado para estimar los valores de DL50 en las pruebas de toxicidad aguda con múltiples concentraciones
CASO
El presente trabajo tuvo como finalidad determinar la DL50 del extracto etanólico de Cenchrus echinatus L. (Cadillo) en ratones albinos cepa Balb/C 57. 
La determinación de la DL50 fue evaluada considerando 5 grupos a los cuales se le administro vía oral y por única vez el extracto etanólico de Cenchrus echinatus L. (Cadillo),en dosis de 12 500, 17 500, 18 750 y 19 375mg/kg de peso corporal respectivamente, los grupos fueron observados durante 14 días para identificar el número de muertos. Se logró determinar que el extracto etanólico de Cenchrus echinatus L. (Cadillo) tiene una DL50 de 17 378.008 mg/kg.
PROCESAMIENTO
 DE DATOS
	Datos experimentales		
	Concentración mg/kg	N° de ratones 	N° de ratones muertos
	12500	7	1
	15000	7	2
	17500	7	3
	18750	7	4
	19375	7	5
Procesamiento de datos
Hallamos el % de Mortalidad
	Datos experimentales			
	Concentración mg/kg	N° de ratones 	N° de ratones muertos	% de Mortalidad
	12500	7	1	14
	15000	7	2	29
	17500	7	3	43
	18750	7	4	57
	19375	7	5	71
Hallamos el Log de la Concentración
	Datos experimentales				
	Concentración mg/kg	Log10 (concentración)	N° de ratones 	N° de ratones muertos	% de Mortalidad
	12500	4.09	7	1	14
	15000	4.18	7	2	29
	17500	4.24	7	3	43
	18750	4.27	7	4	57
	19375	4.29	7	5	71
Relación entre el Probit empírico y el porcentaje de mortalidad.
Hallamos el Probit empírico
	Datos experimentales					
	Concentración mg/kg	Log10 (concentración)	N° de ratones 	N° de ratones muertos	% de Mortalidad	Probit
	12500	4.09	7	1	14	3.92
	15000	4.18	7	2	29	4.45
	17500	4.24	7	3	43	4.82
	18750	4.27	7	4	57	5.18
	19375	4.29	7	5	71	5.55
Gráfica
	Intercepción	-28.21083627
	Variable X 1	7.827480149
Probit
4.0969100130080562	4.1760912590556813	4.2430380486862944	4.2730012720637376	4.2872417111783481	3.92	4.45	4.82	5.18	5.55	Log10 (Concentración)
Probit
Hallamos la DL50
y= a*x + b
Y= 7.83*x – 28.21
Reemplazamos Y=5
5= 7.83*x – 28.21
X= 4.24
DL50 = antilog (4.24)
DL50 = 17378.008 mg/kg
Una ves obtenido el calculo del Probit esperado o calculado(Y) pasamos a completar los valores correspondientes para cada concentración .
Y=7.38X-28.21
Ejm:
Para x=4.097
Y=7.38(4.097)-28.21
Y=3.869
Para hallar el NP(Mortalidad esperada) : se calcula multiplicando el número de organismos en cada prueba (N) por el porcentaje de efecto esperado (P’).
El porcentaje de efecto esperado se obtiene de la tabla de relacion de Probit empírico con el % de mortalidad , en este caso a la tabla se ingresa con el valor Probit calculando anteriormente para obtener el Porcentaje esperado.
El cálculo de la desviación de la mortalidad se obtiene hallando la diferencia entre la mortalidad observada y la esperada
Para el chi-cuadrado : La contribución al Chi-cuadrado de cada uno de los valores se calcula: 
(r – NP’)2 / NP’ (1 – P’)
Una ves obteniendo los datos anteriores se paso a calcular el valor de chi-cuadrado para cada concentración 
CONCLUSIONES
Una forma de abordar este problema es transformando x a una escala logarítmica (X = log10 (x)), lo cual mostro una relación dosis-respuesta de forma S o sigmoidea normal
 El porcentaje de mortalidad va influir directamente para calcular el Probit empírico por lo cual de acuerdo a nuestros resultados obtenemos un PE Y Probit Calculado que cuentan con la mínima diferencia entre si.
El Probit calculado nos demostró que el PE es muy inexacto.
La DL50 es nuestro resultados obtenidos fue de 1738mg/kg
BIBLIOGRAFIA
G. Castillo Morales, Ensayos toxicológicos y métodos de evaluación de calidad de aguas. Estandarización, intercalibración, resultados y aplicaciones, México: Centro Internacional de Investigaciones para el Desarrollo, 2004.
Cisneros Hilario, Cesar B; Loyola Lara, Ingrid L; Miranda Aguilar, Freddy A, Dosis letal media (dl50) del extracto etanólico de Cenchrus echinatus L. “cadillo” en Mus musculus albinos, Perú, 2012.
C. M. Gamez Rojas y E. J. Ramirez Riveros, Determinación de la concentración letal media (CL50-48) del herbicida Roundup 747 sobre ecosistemas acuáticos mediante pruebas toxicológicas con Daphnia magna, Bogotá: Universidad de la Salle; Facultad de Ingeniería Ambiental y Sanitaria, 2008.
Concentración mg/KgLog 10 (Concentración)N° de ratonesR (N° de ratones muertos)% de Mortalidad (P)PEP calculado(Y)
125004.09771143.923.869
150004.17672294.454.488
175004.24373434.825.013
187504.27374575.185.248
193754.28775715.555.357
Concentración mg/KgX(Concentracion)P calculado(Y)P`(Porcentaje Esperado)N(Numero de ratones)NP'(Mortalidad esperada)
125004.0973.8690.13070.91
150004.1764.4880.30572.135
175004.2435.0130.50573.535
187504.2735.2480.60074.2
193754.2875.3570.64074.48
X(Concentracion)P calculado(Y)P`(Porcentaje Esperado)N(Numero de ratones)R(Numero de ratones muertos)NP'(Mortalidad esperada)Desviacion 
4.0973.8690.130710.910.09
4.1764.4880.305722.135-0.135
4.2435.0130.505733.535-0.535
4.2735.2480.600744.2-0.2
4.2875.3570.640754.480.52
X(Concentracion)P calculado(Y)P`(Porcentaje Esperado)N(Numero de ratones)R(Numero de ratones muertos)NP'(Mortalidad esperada)Desviacion Contribuye al X^2
4.0973.8690.130710.910.090.0102
4.1764.4880.305722.135-0.1350.0123
4.2435.0130.505733.535-0.5350.1636
4.2735.2480.600744.2-0.20.0238
4.2875.3570.640754.480.520.1677