BITACORA_REACCIONES DE PROTEÍNAS

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
PRACTICA: REACCIONES DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS 1
ALUMNO: LINARES CERÓN BRUNO JAIR
01/09/2021
GRUPO: 3IM1
Introducción 
Las reacciones de identificación y cuantificación para aminoácidos y proteínas tienen como fundamento las características químicas que les confieren sus grupos R reaccionaran o no con determinados reactivos dependiendo de la naturaleza de sus grupos R contienen grupos arilo, grupos indol, presencia de grupos sulfhídrico, etc.
Reacción del plomo para la cisteína. Cuando los aminoácidos y las proteínas que contienen grupos tiólicos se calientan en medio fuertemente alcalino, el azufre presente reacciona para formar sulfuros. Este sulfuro puede detectarse por la formación de un precipitado negro de sulfuro de plomo por adición de acetato de plomo. Los grupos tioles también reaccionan con el nitroprusiato de sodio en presencia de un exceso de amoníaco para dar un complejo de color rojo.
Reacción de la ninhidrina. La ninhidrina es un poderoso agente y reactivo común para visualizar las bandas de separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis, también es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos. Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloración producida por la ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido. Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos. En aquellos casos donde no da positiva la prueba de Biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay proteínas, pero si hay aminoácidos libres.
Reacción de Hopkins-Cole. Es específica del grupo indol característico del Triptófano. El anillo del indol se hace reaccionar con ácido Glioxálico en presencia de ácido Sulfúrico concentrado para formar un compuesto violeta que se forma en la interfase entre la solución de proteína y el ácido sulfúrico. La estructura exacta del compuesto violeta no se conoce, pero parece estar relacionado con el producto de condensación del aldehído del ácido Glioxálico con los nitrógenos de dos anillos indólicos, como se muestra en la reacción, ya que también se pueden formar complejos con otros aldehídos. La reacción de Hopkins Cole es positiva sólo para las proteínas que contienen Triptófano. Se supone que el ácido concentrado hidroliza las proteínas en la interfase liberando el Triptófano para dar el producto violeta. Sin embargo, el Triptófano puro en solución no da positiva la reacción, a menos que se agreguen agentes oxidantes, por lo que es de suponer que el Triptófano de las proteínas no se libera como tal, por lo cual la reacción presentada es sólo parcialmente correcta.
Reacción de Millón. Es específica para el grupo fenólico por lo tanto, la dan positiva todas las sustancias que poseen esta función, como la Tirosina y todas las proteínas que contengan Tirosina. El primer paso de la reacción de Millón consiste en la nitración del anillo fenólico de la Tirosina, por el ácido Nítrico del reactivo. La Tirosina nitrada forma complejos con los iones Mercurioso Hg (I) y Mercúrico Hg (II) del reactivo produciendo un precipitado o una solución rojos, ambos resultados positivos. Algunas proteínas pueden formar el precipitado rojo desde el inicio, mientras que otras primero forman un precipitado blanco, que se debe calentar para dar el color rojo indicativo de la presencia de Tirosina. Cualquier sustancia con un grupo fenólico dará positiva la reacción de Millón y puede interferir con la detección de Tirosina.
Reacción Xantoprotéica. Algunos aminoácidos como Fenilalanina, Tirosina y Triptófano tienen anillos aromáticos derivados de benceno y por ello tiene las propiedades químicas del benceno y sus derivados. Una de estas propiedades es la reacción de nitración del anillo bencénico con ácido Nítrico concentrado. Los anillos Benceno de Tirosina y Triptófano están activados y reaccionan fácilmente, mientras que el benceno de la Fenilalanina no tiene sustituyentes que lo activan y reacciona con más dificultad.
Reacción de Biuret. La reacción debe su nombre al Biuret, una molécula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción la presencia de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la reacción del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos presentando un máximo de absorción a 540 nm. La producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminoácidos. Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada Biuret. Debido a dicha reacción fue que observamos que al agregar el reactivo de sulfato de cobre más solución de proteína precipitó una coloración violeta. Quedando en el fondo del tubo una tonalidad azul cielo reacción positiva. Precipitando a una coloración amarilla la reacción nos torna negativa al no haber presencia de proteínas.
Objetivos
· Identificar los aminoácidos con grupos R específicos que componen a una proteína por medio de reacciones coloridas.
· Conocer la metodología y uso de las reacciones que identifican y cuantifican las proteínas en solución.
· Observar y determinar de forma cualitativa, las muestras con el fin de identificar las proteínas que se encuentren en ellas.
· Apreciar la forma en que las proteínas reflejan las propiedades químicas de los residuos de aminoácidos que contienen.
Diagramas de flujo 
Bibliografía
· http://biokimik2011.blogspot.mx/2011/09/objetivos-aplicar-pruebas-cualitativas.html
· Fundamentos De Bioquímica, Donald Voet, JudithG. Voet, Charlotte W. Pratt; Ed. Médica Panamericana, pag 216.
· Fundamentos de bioquímica estructural; José María Teijón; Editorial Tebar pag (65-68).