Pràctica 6 Hidrolisis de una proteìna

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Resultados
	Tabla 1. Reacción Xantoproteica
	Sustrato
	Observaciones
	Solución “A”
	Positivo 
	Solución “B”
	Positivo
	Tabla 2. Reacción de precipitación
	Sustrato
	Observaciones
	Solución “A”
	Formación de precipitado blanco
	Solución “D”
	Formación de precipitado gris
	Tabla 3. Reacción de Biuret
	Sustrato
	Observaciones
	Solución “A”
	Positivo
	Solución “C”
	Negativo
	Solución “D”
	Negativo 
	Tabla 4. Reacción con Ninhidrina
	Sustrato
	Observaciones
	Solución “B”
	Positivo
	Solución “C”
	Negativo
	Solución “D”
	Negativo 
	Sol. Patrón de A.A.
	Positiva
	Tabla 5. Reacción con Ácido Nitroso
	Sustrato
	Observaciones
	Solución “A”
	Positivo
	Solución “C”
	Negativo
	Solución “D”
	Negativo 
	Agua
	Negativo
Discusión
· Reacción Xantoproteica
La reacción xantoproteica es una reacción que reconoce los aminoácidos que poseen anillos aromáticos como la tirosina, fenilalanina y triptófano, incluyendo a las proteínas que contienen en su composición a estos aminoácidos. La prueba se tomará como positiva por la aparición de un color amarillo debido a la formación de compuestos nitro. La intensificación del color se da al agregar hidróxido de sodio que, además de neutralizar la reacción este desprotonara al grupo hidroxilo de los aminoácidos aromáticos, quedando un alcóxido donde el par de electrones entrara en resonancia intensificando el color amarillo intenso, esto es por el aumento de la conjugación de la molécula.
Para efectos de la práctica se utilizaron dos muestras la solución “A” que contiene a la grenetina hidrolizada y la solución “D” que contiene albumina proveniente de huevo. La prueba fue positiva para ambas soluciones, esto es porque la gelatina contiene fenilalanina para el caso de la albumina, está contiene 8 de los aminoácidos esenciales incluyendo tirosina, fenilalanina y triptófano.
· Reacción de precipitación
Esta reacción pone de manifiesto a los aminoácidos azufrados. Se basa en la reacción en medio básico del azufre con una solución de acetato de plomo, formando el sulfuro de plomo que se evidenciara por un precipitado negro o gris. 
La prueba solo fue positiva para la solución “D” ya que la albumina contiene cisteína y metionina. 
· Reacción de Biuret
La prueba de Biuret es una prueba general para polipéptidos y proteínas, debido a que reconoce las uniones peptídicas de más de 3 unidades. La positividad se expone por la aparición de una coloración violeta, gracias a la formación de un complejo de coordinación entre los cationes cúpricos en medio alcalino con las uniones peptídicas.
Esta prueba fue positiva para la solución “C” y ”D” donde se encontraron proteínas sin hidrolizar.
· Reacción con Ninhidrina
La prueba de ninhidrina sirve para identificar grupos amino libres como los α-aminoácidos, aminas primarias y amoníaco. Al añadir ninhidrina a una solución con aminoácidos se experimenta una reacción de oxidación y reducción en los grupos amino libres, desdoblándolos en grupos carbonilo y amoniaco por desaminación oxidativa. La prueba positiva varía de color azul a violeta. Los péptidos darán una reacción positiva débil debido a que presentan menos grupos amino libres en comparación a los aminoácidos. 
Este ensayo fue positivo para la solución con grenetina hidrolizada y con la solución de aminoácido patrón.
· Reacción con Ácido Nitroso
El grupo amino de un aminoácido reacciona con el ácido nitroso, que es un agente oxidante fuerte, para liberar N2. Esta reacción al ser estequiométrica resulta fundamental en la estimación de los grupos α-amino. La prueba es positiva al visualizarse un burbujeo continuo.
La prueba fue positiva para la solución de grenetina hidrolizada, dando por sentado que su hidrolisis fue parcial, quedando aminos libres que pudieron reaccionar con el ácido nitroso pudiéndose observar la liberación de nitrógeno gaseoso.
Bibliografía
1. Vázquez-Jorge, Yanira G., & Guerra-Molina, Leticia, & Quintana-Tamayo, Jabiel F., & Ramírez-Arzuaga, J., & Fernando-Ballestero, Rafael, & Vázquez-Jorge, Yahumara (2014). Caracterización físicoquímica y contenido de proteínas de extractos fluidos del ostión de mangle (Crassostrea rizophorae). Revista Cubana de Química, XXVI(1),66-74.[fecha de Consulta 12 de Octubre de 2021]. ISSN: 0258-5995. Disponible en: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=443543737009
2. Sayar, R. (2006). Nutrientes del huevo, composición química, buenas prácticas. CIN Centro de Información Nutricional, 12(1).
3. FCN. (2010). Proteínas generalidades. FCN-UNP. http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/uploads/2010/08/TP-Proteinas-generalidades.pdf
4. Reacciones de identificación de aminoácidos y proteínas. (s. f.). CDigital UANL. Recuperado 10 de octubre de 2021, de http://cdigital.dgb.uanl.mx/la/1020111502/1020111502_023.pdf
5. Valenzuela, K. (2000). Implementación y Evaluación de una técnica de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) para determinar el patrón de aminoácidos en alimentos. Guatemala. 100p (Doctoral dissertation, Tesis de Licenciada en Química Biológica. Universidad de San Carlos de Guatemala. Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia. Escuela de Química Biológica).