GUÍA_PRACTICA_02_TINCION_GRAM_RECUENTO_COMPLETO3 (1) (1)

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ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO
VICERRECTORADO ACADÉMICO DIRECCIÓN DE DESARROLLO ACADÉMICO
FACULTAD: CIENCIAS
CARRERA: INGENIERÍA AMBIENTAL 
GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIOS
MICROBIOLOGÍA (AMBIP18) MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA (AGRTP20)
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA (ZOOTP20)
DOCENTE	RESPONSABLE: SANDRA PAOLA POZO GARCÍA
LUGAR:
LABORATORIO DE CIENCIAS BÁSICAS Y ESPECIALIZACIÓN (EX SEPAC)
SEDE ORELLANA
Integrantes :
Yessenia Torres
Jessenia Elizalde
Kerly Rivas
PRÁCTICA No. 02
TÉCNICAS DE OBSERVACIÓN: TINCIONES, RECUENTOS Y MEDICIONES.
LUGAR: Laboratorio de la Sede Orellana (Ex – CECAP) FECHA INICO:	2021-12-22
FECHA FIN:	2021-12-23
HORA: 07H00 A 12H00
OBJETIVOS:
1. Identificar los tipos de tinciones para observaciones microscópicas
2. Identificar las etapas comparativas de tinción GAM
3. Realizar un recuento y medición de la muestra más adecuada para la observación.
MÉTODOS
Modalidad: Trabajo grupal
Materiales y equipos
MATERIALES QUE APORTAN LOS ESTUDIANTES
· Papel de Sticker pequeños
· Tijeras
· Hisopos de algodón esterilizado
· Alcohol y gel de manos
· Papel toalla pequeño
VESTIMENTA ADECUADA
· Mandil blanco
· Gorro de bioseguridad
· Guantes quirúrgicos
· Zapatos cerrados
· Camisa manga larga algodón
· Pantalones basta larga
· Mujeres con el cabello recogido
MATERIALES Y EQUIPOS DEL LABORATORIO
	Equipos
	Materiales
	Reactivos y muestras
	Bombona a gas
	Porta y cubre objetos
	Agua esterilizada
	Microscopio
	Asa metálica
	Aceite de inmersión
	Estufa para baño
María
	Pinzas
	Placa AN (Bacterias; Basillus sp.;
Klebsiella sp.; Azobacter sp.)
	
	Cubeta para recoger
Colorantes
	Placas de King B (Pseudomonas
fluorescens)
	
	Frasco de desechar de colorantes
	Placas con colonias de actinomycetes (Streptomycetes sp.)
	
	Vaso de precipitación
	Baterías de GRAM
	
	Cámara de recuento Petroff
Hauser
	Baterías de ZIEHL- NEELSEN
	
	Cámara de recuento
Neubaver
	Baterías de SHAEFFER Y FULTON
	
	
	Colorante: Cristal violeta
	
	
	Colorante: Solución de yodo
ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIOS, TALLERES Y CENTROS DE SIMULACIÓN
ASIGNATURA MICROBIOLOGÍA
	
	
	Decolorante: alcohol – acetona
	
	
	Colorante: Safrina
PROCEDIMIENTO:
PASOS GENERALES
1. Preparación del montaje de la muestra de microorganismos para la tinción.
2. Aplicación de tinción GRAM en muestras de bacterias
3. Observación en el microscopio con una amplificación de 10X y 100X
4. Elaboración de las gráficas de las observaciones.
5. Selección de la muestra para el recuento directo (concentración de células/ml)
6. Observaciones de recuento con las cámaras Petroff-Hauser y de Neubaver
7. Realizar los cálculos y determinar las mediciones
8. Graficar las observaciones del recuento
PASOS A PASO PREPARACIÓN DEL MONTAJE DE MUESTRA
Colocar una gota de agua esterilizada sobre el portaobjetos
Esterilizar el asa y tomar una muestra de la colonia
Dispersar la muestra en la gota, y dejar secar al aire 3-5 minutos
Fijar con calor la muestra, usando pinzas, flameo 3 veces
PASO A PASO TINCIÓN DE GRAM
Aplique el colorante Cristal Violeta por 1 minuto
Lavar y dejar escurrir el exceso de agua
Cubrir con solución de yodo, por 30 seg y lavar
Aplicación del decolorante, por 10 seg. y lave.
Colorante contraste, por 1 minuto. y lave, secar por absorción
PASO A PASO LA OBSERVACIÓN DE MUESTRAS
				
Colocar la placa con el lente de menor amplificación 10X
Aplicamos un agota de aceite de inmersión y rotamos a 100X sin pasar por 40X
Para retirar la placa, rote al lente 10X, sin bajar la platina.
PASO A PASO MEDICIÓN Y RECUENTO DIRECTOColocar la muestra en la cámara de recuento, cubrir y dejar reposar unos minutos
La rejilla tiene 25 cuadrados ocupando un área de 1 mm2, y un volumen de
0.02 mm3
Contar las células de cada cuadrado grande y promediar
# de células por ml:
n X 25 X 50 X
1000 =
PREGUNTAS
1. Qué es una colonia de Bacterias GRAM POSITIVAS
La mayoría de las bacterias se multiplican rápidamente y son visibles como colonias cuando se las
siembra en medios de cultivo sólidos adecuados, requieren una incubación de aproximadamente
24 horas en una atmósfera que favorezca su desarrollo, a temperatura óptima
Como se pudo ver en la primera muestra la cual correspondía a la caja Petri nombrada AN se pudo observar una colonia los cuales tenían una forma en cocos (esféricas u ovaladas) de bacterias Gram positivos que se agrupan en forma de racimo después de su tinción su observo de un color azul. Figura 1 
Figura1.Autoria propia
2. ¿Qué color marcó a las bacterias Gram positivas?
Después de haber realizado los respectivos procedimientos, nos dimos cuenta de que la bacteria GRAN POSITIVA, tuvo un marco de color azul, esta coloración se debe gracias a la Función de GRAM, ya que consiste en detectar la presencia de microorganismos, especialmente bacterias y hongos.
3. ¿Qué color marcó a las bacterias Gram negativas?
4. ¿Cuál es la diferencia entre la cámara de recuento Petroff- Hauser y la de Neubaver?
RESULTADOS ESPERADOS
1. Los estudiantes identifican claramente los tipos de tinciones
2. Los estudiantes diferencian adecuadamente las etapas de la tinción GAM positiva y negativa
3. Los estudiantes desarrollan la capacidad de realizar un recuento y cálculos para la medición de las muestras.
CONCLUSIONES 
Se concluye que la tinción de Gram se apoya en una técnica de laboratorio con la cual se distingue los diferentes conjuntos de bacterias para de esta forma poder estudiarlas y clasificarlas en Gran negativas y Gram positivas 
El cristal violeta se une a la pared bacteriana, la mezcla alcohol disuelve la membrana externa de las bacterias Gram negativas “más fina que la de las Gram positivas” extrayéndose el cristal violeta después se tiñen con safranina.
Según el color que tomen las bacterias después de su tinción se clasifican Gram positivas si su color es azul o gran negativas si su color es rojo
RECOMENDACIONES
GRÁFICO 
Observaciones de la muestra 1 y 2 con los lentes 10X y 100X en la muestra uno vimos una colonia agrupada de forma de racimos con una coloración azul por lo que se puede asumir que es Gram positiva 
 
En la muestra dos se observó formas de bacilos y cocos con una coloración roja por lo que se asume que eran las Gram negativas 
BIBLIOGRAFÍA
Hernández, N. (2008). Manual de Microbiología. Área de Laboratorio intensivos. Universidad Rural de Guatemala.
Valencia, H. (2009) Manual de Prácticas de Microbiología Básica. Universidad Nacional de Colombia.
Elaborado por:
SANDRA
Firmado digitalmente por SANDRA PAOLA
PAOLA POZO POZO GARCIA
GARCIA
Fecha: 2021.12.13
05:06:39 -05'00'
----------------------------------------------- SANDRA PAOLA POZO GARCÍA
Docente - Investigador
Revisado por:
Firmado electrónicamente por:
MIRIAN YOLANDA JIMENEZ GUTIERREZ
----------------------------------------------- ING. MIRIAN JIMENEZ
COORDINADOR DE LA CARRERA DE AMBIENTAL
Firmado digitalmente por DANIEL DAVIDDANIEL DAVID
ESPINOZA
CASTILLO
ESPINOZA CASTILLO Fecha: 2021.12.14
12:18:22 -05'00'
----------------------------------------------- ING. DANIEL DAVID ESPINOZA CASTILLO
COORDINADOR DE LA CARRERA DE AGRONOMÍA
Firmado electrónicamente por:
JULIO CESAR BENAVIDES LARA
-----------------------------------------------
ING. JULIO BENAVIDES COORDINADOR DE LA CARRERA DE ZOOTECNIA
Nota. Se recomienda que los Técnicos Docentes tengan acceso a las Guías de Laboratorio con el objeto de coordinar con el profesor de asignatura las necesidades de recursos, materiales y equipos necesarios para el desarrollo de las prácticas.
ANEXOS (Dibujos)