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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE QUÍMICA FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL Mancilla Arellano María Luisa No. de Cuenta: 303083993 Dra. Maricarmen Quirasco Baruch Vo.Bo. México, D.F. 2011 T E S I S QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: Q U Í M I C A DE A L I M E N T O S P R E S E N T A: MARÍA LUISA MANCILLA ARELLANO UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. i JURADO ASIGNADO Presidente: Maricarmen Quirasco Baruch Vocal: Aleida Mina Cetina Secretario: Rodolfo Fonseca Larios 1° Suplente: Jesús Antonio Beaz Rivera 2° Suplente: Verónica García Saturnino SITIO DONDE SE DESARROLLÓ EL TEMA: L-312, Departamento de Alimentos y Biotecnología, Conjunto E, Facultad de Química, Universidad Nacional Autónoma de México ASESOR DEL TEMA: Dra. Maricarmen Quirasco Baruch _____________________________________________ SUPERVISOR TÉCNICO: Q.A. Verónica García Saturnino _____________________________________________ SUSTENTANTE: María Luisa Mancilla Arellano _____________________________________________ ii “I believe the children are our are future Teach them well and let them lead the way Show them all the beauty they possess inside Give them a sense of pride to make it easier Let the children's laughter remind us how we used to be Everybody searching for a hero People need someone to look up to I never found anyone who fulfill my needs A lonely place to be So I learned to depend on me I decided long ago, never to walk in anyone's shadows If I fail, if I succeed At least I'll live as I believe No matter what they take from me They can't take away my dignity Because the greatest love of all Is happening to me I found the greatest love of all Inside of me The greatest love of all Is easy to achieve Learning to love yourself It is the greatest love of all And if by chance, that special place That you've been dreaming of Leads you to a lonely place Find your strength in love” Whitney Huston iv AGRADECIMIENTOS Son muchas las personas especiales a las que me gustaría agradecer su amistad, cariño, apoyo, ánimo y compañía, en las diferentes etapas de mi vida. Algunas están conmigo y otras en mis recuerdos y en mi corazón. Sin importar en donde estén o si alguna vez llegan a leer estas líneas, quiero darles las gracias por formar parte de mi, por todo lo que me han brindado y por todas sus bendiciones. A Dios, gracias por permitirme hacer realidad este sueño, y por llevarme a tu lado a lo largo de esta vida, por escucharme cuando te necesito y por siempre llenar mi alma de alegría. A mis papás, Raúl y Blanca, gracias por compartir conmigo risas, abrazos, lagrimas y por qué no, también los regaños. Por darme su amor, apoyo y confianza, además de enseñarme que con paciencia y perseverancia se puede alcanzar cualquier meta, sin importar si es loca o descabellada. A mi hermana, Sabrina, gracias por ser mi amiga, mi confidente y mi mejor consejera. Por todos esos días compartidos |y los que faltan|, por tu apoyo en todo momento, por las miradas de complicidad al ver a un chico guapo, jajaja. Por las bobas competencias y las mas bobas discusiones. A los tres, gracias por aguantarme y dejarme ser como soy, simplemente… LOS AMO! A mis abuelitos(as), tíos(as) y primos(as), gracias por enseñarme que el significado de la palabra familia no se queda en cuatro personas. A mi asesora, Dra. Maricarmen, gracias por darme la oportunidad de desarrollar este proyecto. Por compartir conmigo sus conocimientos, brindarme su confianza y orientación para que esta tesis quedara con los menos errores posibles. A Vero García, gracias por tu apoyo y amistad que me permitieron aprender mucho más de lo estudiado en el proyecto. A la Dra. Mariana Rodríguez, gracias por su disposición y apoyo en la realización de las pruebas reológicas. A mis amigos: Sebastián, Adriana, Vero, Erick, J. Hiram, José Luis, Raúl, Hiram, Axel, Martin, Daniel, Luis, Alejandro, César, en fin gracias a todos por enseñarme que la amistad es invaluable e irremplazable, por compartir estos años de nuestras vidas, sin su compañía y amistad mi vida no sería la misma. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL v Sebastián, contigo he compartido gran parte de mi vida. Te adoro por siempre estar conmigo a pesar de la distancia, por crecer conmigo y por tooooodos los años que nos faltan por compartir. “Al infinito…. Y MAS ALLÁ! Adriana, tu más que nadie conoce el camino que recorrimos juntas, desde el inicio de esta etapa, supiste como estar conmigo en cada momento, compartiendo varias tazas de café, los desayunos, muchas lagrimas e incontables risas; tu manera tan especial de ser permitió que pudiéramos empezar y terminar juntas nuestra carrera. No importa como caigamos, lo importante es hacerlo CON ESTILO! A mis compañeros de carrera, Lizbeth, Paulina, Miriam, Violeta, Pedro, Gaby, Luis Ángel, Rocío, Eduardo, Alma, Javier, Chabela (Mónica), Fernando, Viri; gracias a todos por las tardes de estudio, las tareas, prácticas, reportes y exámenes, a veces compartidos, jajaja, por permitirme convivir con ustedes dentro y fuera de clase, por las risas en los laboratorios, en clases y a veces (muy a veces ;) ) por no permitir que me durmiera mucho tiempo en las mismas. A mis compañeros del Lab. 312, Laura V., Cinthya, Hugo, gracias por compartir conmigo las tardes de chisme y crítica constructiva. Laura V., Cinthya |y Rodrigo|, y Fer, gracias por su apoyo en la aplicación de las incontables pruebas sensoriales que se realizaron para este proyecto. Ales, José Luis, Bety, Eva, Gaby, Isaac, Katia, Laura S., Mary, Myrna, Lalo, Sergio, Israel, Aline y Ximena, gracias por compartir sus conocimientos y experiencias. A la UNAM, mi alma mater, que a través de la Facultad de Química me permitió crecer como persona y profesionista. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL vi ÍNDICE GENERAL Símbolos y abreviaturas ix 1. Resumen 1 2. Introducción 3 3. Marco teórico 4 3.1. Yogurt 4 3.1.1. Definición de yogurt 4 3.1.2. Tipos de yogurt 4 3.1.3. Parámetros de calidad 5 3.1.4. Estabilizantes 6 3.1.5. Beneficios del yogurt 7 3.2. Ingredientes funcionales 8 3.2.1. Definición de ingrediente funcional 8 3.2.2. Clasificación de los ingredientes funcionales 8 3.3. Probióticos y prebióticos 10 3.3.1. Probiótico 10 3.3.2. Requerimientos para ser clasificados como probióticos10 3.3.3. Microorganismos probióticos 10 3.3.4. Prebióticos 10 3.3.5. Relación probiótico/prebiótico 12 3.3.6. Beneficios en la salud 12 3.4. Inulina 14 3.4.1. Definición de inulina 14 3.4.2. Fuentes de inulina 14 3.4.3. Funcionalidad de la.inulina en alimentos 15 3.4.4. Beneficios en la salud 15 3.5. Descomposición de alimentos 16 3.5.1. Mecanismos de descomposición de alimentos 16 3.5.2. Factores que afectan la descomposición de alimentos 17 3.5.3. Descomposición de yogurt 18 3.6. Vida de anaquel 18 3.6.1. Definición de vida de anaquel 18 3.6.2. Factores que afectan la vida de anaquel 19 3.6.3. Tipo de estudios de vida de anaquel 19 3.6.4. Vida de anaquel de yogurt 19 3.7. Reología 20 3.7.1. Definición de reología 20 3.7.2. Aplicaciónes de la reologia 20 FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL vii 3.7.3. Reología de yogurt 20 4. Justificación 22 5. Objetivos 24 5.1. Objetivos generales 24 5.2. Objetivos particulares 24 6. Estrategia Experimental 25 7. Materiales y metodología 27 7.1. Materias primas 27 7.2. Elaboración de yogurt 27 7.2.1. Fermentación 28 7.2.2. Análisis sensorial 28 7.3. Vida de anaquel 29 7.3.1. pH 29 7.3.2. Acidez 29 7.3.3. Microbiológicos 30 7.3.3.1. Mesófilos aerobios 30 7.3.3.2. Bacterias ácido-lácticas 30 7.3.3.3. Coliformes totales 32 7.3.3.4. Hongos y levaduras 33 7.3.4. Sensoriales 33 7.3.4.1. Color 33 7.3.4.2. Olor 34 7.4. Reología 34 8. Resultados y Análisis 35 8.1. Elaboración de yogurt 35 8.1.1. Fermentación 35 8.1.2. % Sólidos Totales 36 8.1.3. Estabilizantes 37 8.1.4. Análisis sensorial 39 8.1.4.1. Cantidad de edulcorante 39 8.1.4.2. Cantidad de preparado de fruta 40 8.1.4.2.1. Comparación del producto desarrollado contra uno comercial similar 43 8.1.4.2.2. Yogurt Natural 43 8.1.4.2.3. Yogurt Endulzado 44 8.1.4.2.4. Yogurt con Fresa 45 8.1.4.2.5. Yogurt con Manzana 45 8.1.4.2.6. Yogurt con Durazno 45 8.1.4.2.7. Yogurt con Mango 46 8.1.4.2.8. Yogurt con Frutas del bosque 46 FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL viii 8.2. Vida de anaquel 47 8.2.1. Experimentos preliminares 47 8.2.2. Determinación de la vida de anaquel 52 8.2.2.1. Yogurt Natural 53 8.2.2.2. Yogurt Endulzado 55 8.2.2.3. Yogurt Mango 57 8.2.2.4. Yogurt con Frutas del bosque 58 8.3. Reología 60 9. Conclusiones 68 10. Perspectivas 69 11. Anexos 70 11.1. Anexo I: Hojas de vaciado de datos de evaluación sensorial 70 12. Bibliografía 99 FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL ix SÍMBOLOS Y ABREVIATURAS Máx. Máximo Mín. Mínimo % Porciento t Tiempo s Segundo h Hora mL Mililitro L Litro g Gramo °C Grado Centigrado % (m/m) Porciento masa/masa % (m/v) Porciento masa/volumen UFC Unidades Formadoras de Colonias UFC/ml Unidades Formadoras de Colonia por mililitro UFC/g Unidades Foramdoras de Colonias por gramo BAL Bacterias Ácido Lácticas Agar MRS Agar Man, Rogosa y Sharpe Agar LM17 Agar Lactose+Medium 17 ASLT Acelerated Shelf Life Test %ST Porcentaje de Sólidos Totales FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 1 1. RESUMEN En el presente trabajo se elaboró una línea de yogurts funcionales, bajos en grasa y sin azúcar, a los que se les adicionó fibra soluble y probióticos. Estudios previos indican que la fibra soluble utilizada participa en el control de diabetes, reduce el estreñimiento y el nivel de colesterol en sangre, ayuda a la absorción de minerales y favorece el desarrollo de la microbiota intestinal benéfica. Debido a la adición de probióticos y de un prebiótico. Los yogurts desarrollados entran en la categoría de alimentos funcionales. Se desarrollaron las siguientes formulaciones de yogurt batido: natural, natural endulzado y con fruta (fresa, manzana, durazno, mango y frutos del bosque). En la primera parte del trabajo, se realizó el desarrollo de la formulación. Para lo cual se caracterizó la fermentación en términos de tiempo, temperatura y cantidad de cultivos iniciadores (S. thermophilus y L. delbrueckii), para cumplir con la normatividad mexicana vigente, encontrándose que la ideal 1 x 108 UFC de inóculo por mililitro de leche. El porcentaje de sólidos totales requerido se ajustó con una mezcla de fibra soluble y leche descremada en polvo y sin fibra. Posteriormente, se probaron diferentes estabilizantes en concentraciones variables para evitar la sinéresis que se presentó durante el almacenamiento. Se realizaron diversas pruebas sensoriales para saber la cantidad de edulcorante y de preparado de fruta más aceptados por los consumidores. Finalmente, se realizó una prueba de preferencia comparando los yogurts desarrollados con productos comerciales similares. Se encontró que las muestras desarrolladas fueron menos dulces y menos espesas. Los consumidores dijeron que cambiarían la consistencia de los yogurts desarrollados por una más espesa y cremosa; pero que no cambiarían el dulzor, ya que debido al bajo contenido de sacarosa en los productos desarrollados, se mantuvo la nota ácida característica de un yogurt. En la segunda parte, se determinó el tiempo de vida de anaquel de las siguientes formulaciones: natural, endulzado y con pulpa de fruta (mango y frutas del bosque, las que corresponden a las formulaciones con el pH más alto y más bajo, respectivamente). Se prepararon dos lotes de yogurt y se tomaron muestras por duplicado de cada lote, FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 2 semanalmente durante 51 días. A dichas muestras se les determinó el pH, acidez, volumen de suero liberado (sinéresis), parámetros sensoriales (olor y color) y microbiológicos (mesófilos aerobios, bacterias ácido-lácticas, coliformes totales, hongos y levaduras). Los resultados indicaron que la vida de anaquel de las muestras analizadas fue mayor a 30 días. Además, se determinó el efecto del tiempo de almacenamiento sobre la viscosidad del yogurt natural, con y sin estabilizante y fibra soluble; también se realizó el mismo análisis reológico a un yogurt batido comercial que contenía pectina como estabilizante, con fines comparativos. En el que se encontró que las muestras desarrolladas tienen mayor viscosidad y % de histéresis, que las muestras comerciales. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 3 2. INTRODUCCIÓN Últimamente, en México, hay un creciente interés por consumir alimentos con bajo aporte calórico y que, además de su valor nutrimental intrínseco, promuevan beneficios en la salud del consumidor. Dentro de los alimentos con bajo aporte calórico está el consumo de productos lácteos. Un producto lácteo que puede tener bajo contenido calórico y aportar beneficios para la salud es el yogurt. En diversos estudios se ha observado que los yogurts bajos en grasa tienen problemas en su textura, ya que la grasa de la leche tiene un papel muy importante en la misma. Para contrarrestar estos problemas se ha optado por el uso de diversos estabilizantes o de sustitutos de grasa, los cuales pueden estar constituidospor proteínas o por carbohidratos complejos. Los sustitutos de grasa además de funcionar para mejorar los problemas que se pudieran presentar en la textura de un yogurt, mantienen el bajo contenido calórico del producto (Guven, 2005). Uno de los carbohidratos más empleados como sustituto de grasa es la inulina, que es un polímero con enlaces β-2,1 de fructosa, los cuales resisten el paso a través del tracto digestivo, por lo que se le considera, como fibra soluble. La inulina tiene diversas propiedades como mejorar la textura y la palatabilidad en yogurts bajos en grasa, y su consumo tiene beneficios en la salud ya que es prebiótico, es decir que favorece el crecimiento de bacterias benéficas (probióticos) en el intestino, mejora la absorción de minerales y disminuye los niveles de colesterol en la sangre (Guven, 2005). Los probióticos son microorganismos que al ser consumidos en cantidades suficientes (108 UFC/g de alimento), se establecen en el intestino grueso del consumidor y confieren diversos beneficios en su salud. Las más comunes en los alimentos son Lactobacillus sp y Bifidobacterium sp (Sanz, 2003). FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 4 3. MARCO TEÓRICO 3. 1. Yogurt 3.1.1. Definición Según la NOM-181-SCFI-2010 se entiende por yogurt al producto obtenido de la fermentación de leche pasteurizada; estandarizada o no, entera o parcialmente descremada, por medio de la acción de microorganismos Streptococcus thermophilus y Lactobacillus delbrueckii subespecie bulgaricus, y teniendo como resultado la reducción del pH. Dichos microorganismos deben mantenerse viables, activos y en una cantidad mínima de 107 UFC/g, hasta la fecha de caducidad del producto. 3.1.2. Tipos de yogurt El yogurt puede clasificarse en diferentes tipos dependiendo de su formulación, del contenido de grasa, del tipo de materias primas empleadas y de la presentación que tenga para el consumidor. A continuación se describe cada uno de los yogurts que se clasifican dependiendo su formulación: Natural. Es el yogurt que cumple con lo mencionado en el apartado 3.1.1, el cual no tiene sabor ni azúcar añadidos. Endulzado. Es un yogurt natural al que se le añaden azúcares o edulcorantes naturales o artificiales, con el fin de disminuir un poco la nota ácida que tiene el yogurt. Aromatizado. Es un yogurt al que se le añaden saborizantes y colorantes naturales o artificiales. Con Fruta. Es un yogurt al que se le añade fruta, ya sean trozos de fruta, pulpa de fruta o la mezcla de ambos. Según la NOM-181-SCFI-2010 un yogurt saborizado o con fruta puede contener hasta el 50% (m/m) de ingredientes no lácteos, los cuales pueden ser añadidos antes o después de la fermentación. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 5 Los yogurts antes mencionados además se clasifican como: De leche entera. Es un yogurt que contiene mínimo 2.5% de grasa de leche. De leche parcialmente descremada. Es un yogurt que contiene mínimo 1% de grasa de leche, también es llamado yogurt bajo en grasa. De leche descremada. Es un yogurt que contiene máximo 0.5% de grasa de leche, también es llamado yogurt sin grasa. Bebible. Es un yogurt que sufre un proceso de batido en el cual el coágulo formado es destruido por completo, y la textura es lo suficientemente fluida para poderlo beber. Batido. Es un yogurt que sufre un proceso de batido en el cual el coágulo formado es destruido ligeramente por lo que la textura es más espesa. Congelado. Es yogurt mezclado con helado sin grasa hasta que se obtiene un pH de 6, para después batirlo hasta obtener un sobrerendimiento del 50%. Natural. Es yogurt para el cual se emplean solo ingredientes naturales. Generalmente no contiene estabilizantes, colorantes ni saborizantes artificiales. Orgánico. Es yogurt para el cual se emplean solo ingredientes certificados como orgánicos. (Chandan,2006) 3.1.3. Parámetros de calidad Para que un yogurt sea considerado como de buena calidad debe cumplir con las siguientes especificaciones: Sabor. Debe tener un sabor ácido, libre de sabores indeseables como amargo, rancio, oxidado, podrido, etc. Textura. Deber tener una textura firme y homogénea, con un cuerpo (tipo flan). Una cucharada debe mantener su forma. Apariencia. Debe tener un color agradable y suave. El yogurt sin sabor debe tener un brillante color blanco. La superficie debe ser suave y no tener sinéresis excesiva o con una decoloración. (Chandan, 2006) El yogurt debe cumplir las especificaciones microbiológicas presentadas en la Tabla 3.1., los microorganismos correspondientes al cultivo iniciador y a las bacterias acido lácticas FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 6 alternativas deben estar viables, además debe estar libre de materia extraña, ya sea fragmentos de insectos, pelos y/o excretas de roedores. Además debe estar libre de contaminantes químicos (NMX-F-444-1983). Tabla 3.1. Especificaciones microbiológicas Microorganismos Límite S. thermophilus, L. delbruekii Mínimo 107 UFC/g Bacterias ácido lácticas alternativas Mínimo 106 UFC/g Coliformes totales Máximo 10 UFC/g Hongos Máximo 10 UFC/g Levaduras Máximo 10 UFC/g (NOM-181-SCFI-2010; NMX-F-444-1983) 3.1.4. Estabilizantes Un estabilizante es un ingrediente que en general se utiliza en la industria de los lácteos para retener el agua, mejorar la viscosidad, contribuir a la cremosidad y proteger la leche en caso de que exista un tratamiento térmico excesivo (Stephan, 2009). En la Tabla 3.2 se nombran los estabilizantes más empleados y su función, los cuales se pueden emplear solos o en mezcla, dependiendo la función que desempeñara en el producto final, el costo, el proceso y condiciones de almacenamiento del alimento. Tabla 3.2. Función de los estabilizantes más empleados en yogurt Estabilizante Función Almidón Se emplea como espesante, aglutinante de agua, estabilizador de emulsiones y agente gelificante. Grenetina Es el más empleado por su capacidad para formar un gel termo- reversible con un punto de fusión cercano a la temperatura del cuerpo humano. Goma guar Se emplea por que se disuelve fácilmente a bajas temperaturas frías, tiene una excelente capacidad de retención de agua y mejora la palatabilidad del yogurt. Pectina Aumenta la viscosidad, previene la sinéresis y estabiliza las proteínas contra la precipitación ácida o térmica. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 7 Tabla 3.2. Función de los estabilizantes más empleados en yogurt (Continúa) Estabilizante Función Xantana Es relativamente resistente de corte y el ácido. Así como a la congelación / descongelación. Puede formar grumos en el yogurt. Carragenina Hay tres tipos de carrageninas (kappa, iota y lambda). Kappa produce un gel rígido, termorreversible y tiene el más alto grado de reactividad en leche. Iota producir un gel elástico también termorrerverisble, tiene una tolerancia a la sal. Lambda no forma geles y aumenta la viscosidad. (Stephan, 2009) 3.1.5. Beneficios de yogurt El yogurt es considerado como un producto con alto valor nutricional, ya que aporta nutrimentos adicionales a los de la leche, además de aportar diversos beneficios en la salud. Mayor cantidad de vitaminas, como la vitamina B2, B6, B12, ácido fólico y pantoténico, debido a que la leche se enriquece con sólidos de leche. Mayor cantidad de proteínas y de aminoácidos con alto valor biológico, principalmente valina, histidina, serina y prolina, metionina, lisina, triptófano, etc; debido al enriquecimiento de la leche con sólidos de leche (Farnworth, 2003; Chandan, 2006). Las proteínas más digeribles; debido a una disminución en el tamañode partículas y a un aumento en la cantidad de nitrógeno soluble, de nitrógeno no proteínico y de aminoácidos libres, debido al tratamiento térmico de la leche y a la proteólisis que se lleva a cabo por L. bulgaricus y a S. thermophilus (Farnworth, 2003). Fuente de calcio, fósforo y potasio, ya que para la fermentación la leche pasteurizada es enriquecida con sólidos de leche (Farnworth, 2003; Chandan, 2006). Vida de anaquel mayor que la de leche, ya que el ácido láctico actúa como conservador. Al disminuir el pH, se inhibe el crecimiento de bacterias de descomposición y bacterias patógenas (Chandan, 2006). Disminuye los síntomas relacionados con la intolerancia a la lactosa; ya que del 20 al 30% de la lactosa presente en la leche es hidrolizada por la β-galactosidasa microbiana presente en el producto. Adicionalmente, los microorganismos iniciadores, al llegar al intestino grueso producen más β-galactosidasa, que hidroliza la lactosa residual, con lo FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 8 cual se disminuye la diarrea, las flatulencias y el dolor abdominal causados por la malabsorción de la lactosa (Farnworth, 2003; The Dairy Council, 2011). Tiene propiedades bacteriostáticas; ya que las bacterias lácticas producen ácidos orgánicos, bacteriocinas y H2O2, con lo cual se suprime la multiplicación de bacterias patógenas (Farnworth, 2003). Ayuda en el tratamiento del estreñimiento; ya que el ácido láctico presente en el yogurt aumenta el movimiento peristáltico en el intestino. (Farnworth, 2003). Tiene actividad anticancerígena; ya que las bacterias ácido lácticas presentes en el yogurt inhiben el crecimiento de células tumorosas, dicha inhibición se debe a un decremento en la actividad mutagénica o a una modificación de la microbiota intestinal (Chandan, 2006). Se reducen los niveles de colesterol en sangre; ya que L. bulgaricus y S. thermophilus, producen hidroximetilglutarato, el cual inhibe la hidroximetilglutaril-CoA-reductasa, que es la enzima requerida para la síntesis de colesterol (Chandan, 2006). Mejora el sistema inmune; ya que el yogurt estimula la producción de citoquinas en las células y la activación de macrófagos (Chandan, 2006). 3.2. Ingredientes Funcionales 3.2.1. Definición Son ingredientes, que además de aportar nutrientes, afectan benéficamente una o varias funciones del organismo, de manera que proporcionan un mejor estado de salud al consumidor; además ejercen un papel preventivo; ya que al consumirlos periódicamente, reducen los factores de riesgo que provocan la aparición de enfermedades. Pueden ser adicionados a los alimentos para formar alimentos convencionales, fortificados o enriquecidos (Granato, 2010). 3.2.2. Clasificación de los ingredientes funcionales Los ingredientes funcionales más relevantes son los probióticos, los prebióticos, fibra soluble e insoluble, fitoestéroles, fitoestrógenos, ácido grasos Ω-3 y Ω-6, compuestos fenólicos o antioxidantes (Silveira, 2003). FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 9 Probióticos: Son microorganismos inocuos que una vez ingeridos, sobreviven en el tubo digestivo del consumidor, se establecen en el intestino donde regulan la microbiota y ejercen efectos beneficiosos para su salud. Ejemplos estos son Lactobacillus casei y Bifidobacterium bifidum (Cáceres, 2010). Prebióticos: Son componentes alimenticios, no digeribles que estimulan selectivamente el crecimiento y/o la actividad de una o varias bacterias benéficas en el intestino, con lo que la salud del consumidor se ve beneficiada. Ejemplos de este grupo son los fructoligosacáridos, la inulina y otros fructanos (Salminen, 1998). Fibra soluble: son polisacáridos solubles, resistentes a la hidrólisis enzimática de la digestión, que tienen la característica de formar geles, por lo que dan volumen al contenido intestinal y reducen el tiempo de tránsito. También se reducen los niveles de glucosa y colesterol en la sangre. Ejemplos de este grupo son los β-glucanos, fructanos y algunas pectinas. (Fennema, 2000). Fibra dietética: son polisacáridos insolubles de las paredes celulares vegetales, resistentes a la hidrólisis enzimática de la digestión, que tienen la característica de incrementar el volumen del bolo alimenticio y del resto fecal, lo que disminuye el tiempo de tránsito intestinal y ayuda a prevenir el estreñimiento, como ejemplo de este grupo están la celulosa, la hemicelulosa, la pectina y la lignina (Fennema, 2000). Fitoesteróles: son moléculas esteroideas de origen vegetal, similares al colesterol animal. Están presentes principalmente en leguminosas. Tienen un efecto hipolipemiante, es decir inhiben la absorción del colesterol. Ejemplos de este grupo son el β-sitosterol, el campesterol y el estigmasterol (Silveira, 2003). Fitoestrógenos: son moléculas de origen vegetal con una estructura similar a los estrógenos, se comportan parcialmente igual que los receptores de estrógenos y se postulan acciones benéficas a nivel de órganos y tejidos ya que reduce la osteoporosis, y la incidencia de cáncer de mama y de próstata, mejora la sintomatología asociada al climaterio. Ejemplo de este grupo son las isoflavonas (Silveira, 2003). Ácidos grasos Ω-3 y Ω-6: los ácidos grasos Ω-3 están presentes en aceites de pescados grasos, como el salmón o el atún, y sirven como agentes antinflamatorios, anticoagulantes y protectores a nivel cardiovascular. Los ácidos grasos Ω-6 están presentes en aceites de semillas y generan prostaglandinas, y leucotrienos, los cuales FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 10 son estimulantes del sistema inmune y procoagulantes. Ejemplos son el ácido dodecahexanóico (DHA) y el ácido eicosapentanóico (EPA) (Silveira, 2003). Antioxidantes: son sustancias que donan electrones a los radicales formados, con lo que se evita la oxidación celular. Ejemplos de este grupo son la vitamina C y E, los carotenos y los compuestos fenólicos (Fennema, 2000). 3.3. Probióticos y Prebióticos 3.3.1. Probiótico El término probiótico significa literalmente “en pro de la vida”. Según la FAO los probíoticos son microorganismos vivos que cuando se administran en cantidades adecuadas, se establecen en el intestino grueso y confieren un beneficio a la salud del huésped (FAO, 2001). Los lácteos como la leche, yogurt, helado, postres e incluso quesos, son los vehículos más comunes para la administración de los probióticos; sin embargo también están disponibles como suplementos alimenticios, en los cuales los microorganismos se administran en polvo, cápsulas o tabletas (Nollet, 2010). 3.3.2. Requerimientos para ser clasificados como probióticos Para que un microorganismo pueda ser clasificado como probiótico debe cumplir con las especificaciones mencionadas en la Figura 3.1. 3.3.1. Microorganismos probióticos Varios microorganismos son adicionados a los alimentos, por su potencial probiótico. Las bacterias probióticas más utilizadas son del género Lactobacillus y Bifidobacterium (Nollet, 2010). En la Tabla 3.3 se muestran las principales especies de microorganismos probióticos. 3.3.2. Prebiótico Son ingredientes alimenticios que afectan benéficamente la salud del consumidor, estimulando selectivamente el crecimiento y/o la actividad de los probióticos en el colon. De los principales macronutrientes en los alimentos, proteínas, carbohidratos y lípidos, sólo los carbohidratos, en particular los no digeribles, son los que entran en la clasificación de prebióticos. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 11 Los prebióticos más comunes son la oligofructosa, la inulina, los galactoligosacáridos, y los almidones de alta amilosa. Dado que todos son carbohidratos, se lesllama carbohidratos prebióticos (Nollet, 2010). (Salminen, 1998; Chandan, 2006) Figura 3.1. Requerimientos para que un microorganismo se clasifique como probiótico. Tabla 3.3. Principales cepas de microorganismos probióticos Genero Microorganismos probióticos Lactobacillus L. acidophilus, L. casei, L. reuteri, L. brevis, L. helveticus, L. curvatus, L. fermentum, L. plantarum, L. rhamnosus Bifidobacterium B. bifidus, B. adolescentis, B. animalis, B. infantis, B. lactis, B. longum, B. thermophilum, B, essensis Otros Enterococcus faecium, Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Saccharomyces boulardii, Streptococcus diacetylactis (Sadler, 1998) Probióticos Origen humano e inócuo Estabilidad al ácido gástrico y sales biliares Adherencia a células intestinales Colonización del tracto intestinal humano Antagonista de bacterias patógenasEstable en el alimento Efectos benéficos validados y documentados Estable durante el proceso y almacenaje de alimentos Capacidad inmunomodulatoria Viable en grandes cantidades (106-108 UFC/g) FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 12 3.3.3. Relación probiótico/prebiótico La combinación de probióticos con prebióticos es definida como simbiótico, ya que esta relación aumenta la supervivencia de las bacterias en el tracto gastrointestinal, por lo que se aumenta la potencialidad para ejercer sus beneficios. Los prebióticos constituyen el sustrato fundamental de los probióticos, estimulan su crecimiento, por lo tanto, contribuyen a los efectos beneficiosos para la salud provocados por la presencia de estos microorganismos en el intestino (Cagigas, 2002). La composición fisicoquímica de los carbohidratos prebióticos es importante. Dependiendo del tipo de azúcar, el tipo de enlaces glicosídicos presentes y el peso molecular del carbohidrato, se determina la selectividad que tienen los probióticos para fermentarlos (Nollet, 2010). 3.3.4. Beneficios en la salud Para que los microorganismos probióticos otorguen beneficios a la salud deben administrarse en cantidad suficiente y sobrevivir el paso por el tracto gastrointestinal e implantarse en las células epiteliales del intestino (Nollet, 2010). Ya que los microorganismos deberán llegar vivos al intestino se ha estipulado la cantidad mínima de probióticos en el alimento debe ser de 106-108 UFC/g (NOM-181-SCFI-2010; Ruiz, 2009). Este rango se determinó como medida de seguridad, ya que los microorganismos pueden morir a lo largo del proceso de elaboración y el tiempo de vida de anaquel del alimento, así como el paso a través del estómago y del intestino delgado. El agregar prebióticos se estimula el crecimiento de los probióticos, con lo que se mejora la viabilidad de los mismos. Dentro de los beneficios en la salud ocasionados por la simbiosis entre los probióticos y los prebióticos, están: Actividad antimicrobiana: tanto los lactobacilos y las bifidobacterias tienen esta actividad en contra de Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Staphylococcus FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 13 aureus y de Clostridium perfringens; debido a la producción de bacteriocinas y sustancias antibacterianas como el H2O2. Protección contra infecciones gastrointestinales: algunas cepas pueden inhibir la adhesión y el crecimiento de bacterias enteropatogénicas, mediante la competencia por los sitios de adhesión o produciendo sustancias antibacterianas. Además las bacterias probióticas amplían la respuesta inmune. Mejoramiento en la absorción de minerales: debido a que el principal producto del metabolismo de los probióticos es el ácido láctico, el pH intestinal se disminuye, con lo que los minerales aumentan su digestibilidad (Kayanush, 2007). Mejoramiento del metabolismo de la lactosa: debido a que los probióticos resisten el paso por el tracto gastrointestinal, colonizan el intestino y ahí la β-galactosidasa es liberada y la lactosa es hidrolizada, con lo que se disminuyen los síntomas causados por la intolerancia de la misma. Propiedades antimutagénicas y anticancerígenas: las bacterias probióticas disminuyen el pH intestinal y la actividad de enzimas bacterianas como la β-glucuronidasa, la azoreductasa y la nitroreductasa, las cuales son responsables de la activación de procarcinógenos, con lo que se logra disminuir el riesgo de desarrollar tumores. Reducción de los niveles de colesterol en sangre: algunas cepas de Lactobacillus, producen hidroximetilglutarato, el cual inhibe las hidroximetilglutaril-CoA-reductasas, que es la enzima que se requieren para la síntesis de colesterol. Además otras bacterias probióticas desnaturalizan las sales biliares, las cuales pierden su capacidad de absorber lípidos con lo que se reducen los niveles de colesterol. Estimulación del sistema inmune: las bacterias probióticas estimulan la producción de citoquinas en las células sanguíneas con lo que se incrementa la actividad de los macrófagos. Inhibición de la infección por Helicobacter pylori: Helicobacter pylori es una bacteria oportunista que causa ulceras pépticas y gastritis crónica, las bacterias probióticas reducen la colonización y la inflamación causada por este patógeno (Chandan, 2006). FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 14 3.4. Inulina 3.4.1. Definición La inulina es un polisacárido que funge como reserva energética en plantas, también llamado fructano. Es no digerible ya que está compuesto por moléculas de fructosa unidas por enlaces β-2,1 con un grado de polimerización de 2 a <60 (Figura 3.2) que tiene una molécula terminal de glucosa unida con un enlace -1,2 (Madrigal, 2007). Figura 3.2: Estructura química de la inulina Cuando la inulina es hidrolizada parcialmente se producen mezclas de oligosacáridos con grados de polimerización de 2 a 8. Éstos se llaman fructoligosacáridos, los cuales son calificados, junto con la inulina, como fibra soluble, debido a su alta solubilidad en agua (Salminen,1998). 3.4.2. Fuentes de inulina Los fructanos son los polisacáridos no estructurales más abundantes en la naturaleza, presentes en muchas plantas, en hongos del tipo Aspergillus sp. y en bacterias, de estos últimos prevalece el levano que tiene enlaces β-6,2 (Madrigal, 2007). FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 15 Entre las especies de plantas que producen inulina se identifican el ajo, la cebolla, el espárrago, la achicoria, la alcachofa, el agave, el plátano, el centeno, el trigo, etc. (Madrigal,2007). 3.4.3. Funcionalidad de la inulina en alimentos La inulina se ha empleado en la industria alimentaria, por sus beneficios tanto nutricionales como tecnológicos. Dentro de dichos beneficios está el hecho de que puede ser sustituto de grasa y de azúcar, tiene un bajo aporte calórico, es estabilizante y es un agente texturizante en productos bajos en grasa, por lo que puede emplearse en productos lácteos, panadería, confitería y bebidas (Kip, 2005). La inulina se emplea en la elaboración de yogurts bajos en grasa, impartiendo mayor cremosidad ya que es un sustituto de grasa, tiene la capacidad de formar geles, estabilizar la estructura formada durante la fermentación y potencializa el dulzor al mezclarla con edulcorantes (Madrigal, 2007). 3.4.4. Beneficios en la salud Ya que la inulina es prebiótico, ésta favorece el crecimiento de los probióticos, por lo cual, tiene los mismos beneficios ya mencionados. Ayuda en la digestión Disminuye la absorción de lípidos Ayuda a eliminar toxinas Incrementa la sensación de saciedad Disminuye los niveles de colesterol en sangre Estimula el sistema inmune Funciona en el tratamiento delestreñimiento Disminuye la incidencia de cáncer de colon Aumenta la biodisponibilidad de minerales (Ca, Mg, Fe) Estimula el crecimiento de probióticos Inhibe el crecimiento de bacterias patógenas en el tracto gastrointestinal Acelera el vaciado del intestino (Kayanush, 2007) FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 16 Adicionalmente, el proveedor asegura la inulina es de alta pureza y tiene certificado de producto orgánico y Kosher. 3.5. Descomposición de alimentos La descomposición de los alimentos, es consecuencia de la actividad de los microorganismos que los han contaminado, así como de reacciones químicas, ya que no en todos los casos la actividad microbiana implica un daño a las cualidades sensoriales del alimento (Fernández, 2000). 3.5.1. Mecanismos de descomposición de alimentos Conocer el mecanismo implicado en el deterioro de los alimentos permite identificar los factores que tienen mayor influencia en su caducidad. Los mecanismos de descomposición más conocidos son: Transferencia de humedad y/o vapor de agua: el contenido de agua en el alimento es el factor más crítico, ya que juega un papel importante en las propiedades sensoriales y microbiólógicas. Transferencia física de sustancias: esta transferencia puede presentarse desde el alimento al envase o viceversa. Este mecanismo tiene efectos en la seguridad o en la calidad del alimento. Pueden desarrollarse aromas extraños o perderse sustancias que aportan características especiales al alimento, dependiendo el envase empleado y del medio ambiente en el que se almacena. Cambios químicos o bioquímicos: los cambios más importantes son la oxidación de lípidos, pigmentos o vitaminas; hidrólisis de lípidos, proteínas y/o carbohidratos; pardeamiento no enzimático (Reacción de Maillard) y pardeamiento enzimático de frutos y vegetales, éste último es la oxidación causada por la enzima polifenoloxidasa. Cambios microbiológicos: el crecimiento de microorganismos se afecta por factores intrínsecos (materia prima, aw, pH, potencial redox), extrínsecos (temperatura, humedad relativa) del alimento, factores derivados de la elaboración (pasteurización, congelación, envasado), y factores implícitos (características fisiológicas, velocidad de crecimiento). Interacciones con el envase: este mecanismo se presenta principalmente en alimentos enlatados, en los que las interacciones son reacciones electroquímicas entre el envase (electrodos) y el alimento (electrolitos). FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 17 Cambios inducidos por la luz: los cambios dependerán del alimento y de la longitud de onda de la luz, la intensidad, la duración de la exposición, la presencia de agentes sensibles, la temperatura ambiental y la cantidad de oxígeno presentes. (Man, 2004) 3.5.2. Factores que afectan la descomposición de alimentos El modo en el que los alimentos se descomponen y la duración de su vida de anaquel están influenciados por varios factores. Los factores que influyen en el deterioro son las características de la materia prima y del producto final. Así como de las condiciones de elaboración, almacenamiento, distribución y empleo (Man, 2004). Estos factores se dividen en 3 grupos: 1. Factores intrínsecos Materias primas: La calidad del producto final depende de la calidad de su materia prima. Composición y formulación del producto: contenido de sal, pH, acidez, aw, humedad, estabilizantes, conservadores, etc. Estructura del producto: el crecimiento microbiano se afecta si la estructura de los alimentos es sólida, semisólida, líquida, porque de ello depende la disponibilidad de nutrientes. Actividad de agua (aw): es un indicador de la estabilidad con respecto al potencial de crecimiento microbiano y cambios químicos y bioquímicos. pH y acidez total: el pH afecta los cambios químicos y bioquímicos y el crecimiento microbiano en el alimento. Potencial redox y disponibilidad de oxígeno: la disponibilidad de oxígeno afecta el potencial de oxido-reducción de un alimento, dicho potencial es clave para el crecimiento y supervivencia de los microorganismos y para las reacciones químicas y bioquímicas que requieren de oxígeno. (Man, 2004) 2. Factores extrínsecos Proceso de elaboración: tiene efecto en la carga microbiana y en las propiedades físicas, químicas, bioquímicas, sensoriales y sobre el deterioro del alimento. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 18 Higiene: si es inadecuada, puede dar lugar a la contaminación física, química o microbiológica con lo que se puede afectar la seguridad y la estabilidad del alimento. Material de envase: el envase constituye una barrera contra la luz, gases, vapor de agua, protegiendo los alimentos contra los cambios que pueden acelerar la descomposición del alimento. Almacenamiento y distribución: la descomposición de un alimento se ve afectada por la temperatura, humedad relativa y la exposición a la luz. (Man, 2004) Tanto los factores intrínsecos como los extrínsecos, pueden acelerar o no la descomposición de los alimentos de manera independiente o combinada. 3.5.3. Descomposición de yogurt La descomposición de un yogurt está caracterizada por cambios en sabor y olor (amargo, pútrido, rancio, etc.), debidos a reacciones de oxidación o de hidrólisis y/o a crecimiento microbiano. Este tipo de descomposición también ocasiona cambios en la textura y en la apariencia como puede ser la sinéresis, la disminución de la viscosidad, la pérdida de cremosidad, la pérdida de color, etc. (Charalambous, 1993). El desarrollo microbiano que puede tener lugar en el yogurt se debe a microorganismos ácido-tolerantes, como las levaduras (Kluyveromyces lactis, K. marxianus, Rhodotorula rubrum, Rh. glutinis, Rh. mucilaginosa, Pichia farinose) y los hongos que consumen el ácido láctico formado durante la fermentación, lo que ocasiona un aumento en el pH al grado que la actividad enzimática se favorece, lo que provoca lipólisis, proteólisis y deterioro del sabor (Charalambous, 1993; Blackburn, 2006) 3.6. Vida de anaquel 3.6.1. Definición de vida de anaquel Es el periodo en el que un alimento, almacenado bajo ciertas condiciones, conserva sus características químicas, físicas, microbiológicas, funcionales y sensoriales de tal forma que el alimento es aceptable por el consumidor y por la legislación vigente, y su consumo es considerado seguro (Man, 2004). FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 19 3.6.2. Factores que afectan la vida de anaquel La vida de anaquel de un alimento depende de 4 factores principalmente: Materias primas (Formulación) Procesado (Buenas prácticas de manufactura) Condiciones de empaque (Material y condiciones de llenado) Almacenamiento y distribución (Temperatura, humedad relativa, cantidad de luz, etc) (Man, 1994) 3.6.3. Tipo de estudios de vida de anaquel La vida de anaquel se evalúa para un producto cuando se requiere estudiar los efectos de algunos factores específicos como las condiciones de almacenamiento, de proceso, materiales de empaque y el efecto de algunos aditivos en el alimento. Existen varias metodologías y criterios para estudiar la vida de anaquel: Estudio bibliográfico: es la estimación de la vida de anaquel basándose en la vida de anaquel de un producto similar ya reportado. Tiempo de recambio: Es el tiempo promedio que un producto permanece en los anaqueles. Se estima haciendo un registro de las ventas del producto en las tiendas. Estudio de punto final: se toman muestras al azar del producto que está almacenado en las condiciones óptimas para el mismo y se realizan pruebas para estimar la calidad,en diferentes días para poder determinar el momento en el que el producto ya no es aceptable o consumible. Pruebas de envejecimiento acelerado ASLT (Acelerated Shelf Life Test): se llevan a cabo en laboratorios en donde las condiciones de almacenamiento se controlan con el fin de producir un deterioro en el producto, que en condiciones normales se llevaría a cabo en un mayor tiempo (Man, 2004). 3.6.4. Vida de anaquel del yogurt. Si el equipo en donde se produce el yogurt está limpio y estéril, el personal que lo elabora tiene buenas prácticas de higiene y sanidad, y el producto es almacenado en condiciones adecuadas, es decir en refrigeración, entonces deberá tener una vida de anaquel de al menos, 30 días. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 20 El yogurt tiene mayor vida de anaquel que la leche, debido a su alta acidez y a la presencia de metabolitos microbianos los cuales tienen cualidades bacteriostácticas e inhiben el crecimiento de microorganismos de descomposición (Charalambous, 1993). 3.7. Reología 3.7.1. Definición de reología La reología es la ciencia del flujo que estudia la deformación de un cuerpo sometido a esfuerzos externos. Su estudio es esencial en muchas industrias, incluyendo las de plásticos, pinturas, alimentación, tintas de impresión, detergentes o aceites lubricantes (Melkin, 1994). 3.7.2. Aplicaciones de la reología La reología se utiliza en diferentes industrias para diversos fines, como los mencionados a continuación: Control de calidad de los alimentos: se realiza en la propia línea de producción. Es determinante para la aceptación de productos como patatas fritas, cereales, quesos, aperitivos, yogures, dulces, chocolates, cremas, etc. Estudio de la textura y consistencia de productos alimenticios: dichas propiedades son muy importantes en la aceptación del alimento por el consumidor. Producción de pegamentos: el estudio de su plasticidad, de la forma de fluir dentro del recipiente que lo contiene, etc. Producción de productos cosméticos y de higiene corporal: la duración de una laca sobre el pelo, la distribución de la pasta de dientes por toda la boca, la forma de cómo se esparce una crema, etc. (Melkin, 1994) 3.7.3. Reología del yogurt Los principales factores que determinan las propiedades reológicas de yogurt son: tratamiento térmico de la leche, la temperatura de incubación, la acidificación, el contenido de sólidos totales (proteínas y grasas) y el tipo y la concentración de los estabilizadores. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 21 El tratamiento térmico hace que se desnaturalicen las proteínas del suero y las cuales interactúan con las micelas de caseína. Esto se traduce en un pH más alto y la formación de un gel más rígido. La pérdida de fosfato de calcio coloidal de las partículas de caseína, que son parte de la red, aumenta la susceptibilidad de la red para reorganizarse, fenómeno conocido como tixotropía. El yogurt es un fluido tixotrópico por que se observa que al aplicar una fuerza de cizalla, la viscosidad disminuye, pero cuando se deja en reposo la viscosidad aumenta, debido a la recuperación de la estructura. El tiempo que se tarda en recuperarse es el porcentaje de histéresis. (Melkin,1994) FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 22 4. JUSTIFICACIÓN Desde el punto de vista nutricional y de la salud, las leches fermentadas aportan nutrimentos adicionales a los del producto fresco, como son vitaminas del complejo B y mayor cantidad de proteínas. Además las proteínas tienen mayor valor biológico debido a la hidrólisis que sufren por las proteasas producidas por las bacterias ácido lácticas. Las leches fermentadas son alimentos convenientes para las personas que sufren intolerancia a la lactosa, ya que la presencia de lactasas microbianas hidrolizan la lactosa en el producto fermentado y continúan actuando estas enzimas cuando las bacterias se implantan en el tracto gastrointestinal (Baqueiro, 2004). En años recientes se ha incrementado el interés en la salud a través de la prevención de enfermedades con la incorporación de bacterias probióticas a los alimentos para contrarrestar el efecto de las bacterias dañinas en el tracto intestinal. Adicionalmente una de las contribuciones más importantes de los cultivos iniciadores, es la de extender la durabilidad de los productos fermentados en comparación con el sustrato crudo. Estos alimentos fermentados, presentan además, menor riesgo de toxinfecciones que el producto fresco, debido a los distintos compuestos antimicrobianos producidos por las bacterias que intervienen en la fermentación, y que podrían inhibir el desarrollo de microorganismos patógenos (Baqueiro, 2004). Para mejorar la viabilidad y la vitalidad de los probióticos, se puede agregar un prebiótico (Cruz, 2010). La inulina es un polímero de fructosa con enlaces β-2,1 con un residuo terminal de glucosa, que se ha empleado en la industria alimentaria, por sus beneficios tanto nutricionales como tecnológicos. Dentro de dichos beneficios está el hecho de que puede ser sustituto de grasa y de azúcar, tiene un bajo aporte calórico, es un agente texturizante y estabilizante. Además resiste el ácido gástrico y la digestión en el intestino delgado, es una fibra soluble y prebiótico, aumenta la síntesis de vitaminas y la absorción de minerales en el colon (Kip, 2006). FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 23 Como parte del desarrollo, los productos deben cumplir con la normatividad mexicana vigente (NOM-181-SCFI-2010, NOM-155-SCFI-2003, NOM-185-SSA1-2002, NOM-051-SCFI/SSA1- 2010, NOM-086-SSA1-1994, NMX-F-703-COFOCALEC-2004). Para ello se requiere conocer la fecha de caducidad, por lo que se deben evaluar las características fisicoquímicas, sensoriales y microbiológicas del producto para determinar el tiempo de vida de anaquel. Este proyecto se desarrolló para una compañía particular. A petición de ésta los productos desarrollados fueron bajos en grasa y calorías, con fibra soluble y probióticos, por lo que se encuentran en la clasificación de productos funcionales, por lo que existe el interés de que se protejan intelectualmente las formulaciones que se desarrollaron en esta tesis. Es por ésta razón que se han omitido datos en lo que respecta al proceso de elaboración y, sobre todo, a los ingredientes de las formulaciones. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 24 5. OBJETIVOS 5.1. Objetivos generales Desarrollar las formulaciones de yogurts funcionales bajos en calorías. Determinar la vida de anaquel de los yogurts desarrollados. 5.2. Objetivos particulares Estandarizar la fermentación: cantidad de inóculo, tiempo y temperatura de fermentación. Determinar el efecto de la relación de la leche en polvo y la fibra soluble sobre la consistencia del yogurt y estandarizar la relación ideal. Determinar el efecto de la adición de diferentes hidrocoloides sobre la sinéresis que se presenta en el yogurt y estandarizar la concentración ideal. Determinar con base a pruebas afectivas, la cantidad de edulcorante y de preparado de fruta que se debe agregar al yogurt. Analizar el comportamiento reológico del yogurt natural al inicio, a la mitad y al final de la vida de anaquel y compararlo con un yogurt similar comercial. Determinar la vida de anaquel del yogurt, midiendo parámetros fisicoquímicos, sensoriales y microbiológicos. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 25 6.ESTRATEGIA EXPERIMENTAL El presente estudio se realizó en dos partes. En la Figura 6.1 se muestra la primera parte del experimento en el que se realizó el desarrollo del yogurt funcional; el natural, el endulzado y con pulpa de fruta. Se probaron diferentes variantes como la cantidad de fibra soluble y de leche descremada en polvo, necesarios para tener el porcentaje de sólidos totales. Se probaron también diferentes hidrocoloides en diferentes concentraciones para encontrar la ideal, que debería retener el suero que pudiera liberarse. También se probó si la adición de los probióticos en polvo o en solución tenía algún efecto en el producto terminado. Se realizaron diversas pruebas sensoriales para saber qué cantidad de edulcorante y de preparado de fruta era el más aceptado por los consumidores. Figura 6.1. Diagrama para la formulación del yogurt funcional FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 26 En la Figura 6.2 se muestra la segunda parte en la que se determinó el tiempo de vida de anaquel a las formulaciones de yogurt funcional; natural, endulzado y con pulpa de fruta (las 2 muestras con pH más alto y más bajo). Se prepararon dos lotes de yogurt y se tomaron muestras por duplicado de cada lote, semanalmente durante 51 días. a las cuales se les midió pH, acidez, volumen de suero liberado (sinéresis), parámetros sensoriales (olor y color) y microbiológicos (mesófilos aerobios, bacterias ácido-lácticas, coliformes totales, hongos y levaduras). Además al yogurt natural se realizó un análisis reológico. Este análisis se realizó únicamente con el yogurt natural sin batir, ya que se requiere que la estructura no sufra deformación. Figura 6.2. Diagrama para la determinación del tiempo de vida de anaquel FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 27 7. MATERIALES Y METODOLOGÍA 7.1. Materias primas Leche semidescremada (1% grasa), pasteurizada y homogenizada Leche descremada en polvo, sin fibra Cultivos iniciadores: Lactobacillus bulgaricus y Streptococcus thermophylus Cultivos probióticos: Lactobacillus casei y Lactobacillus acidophilus Hidrocoloides Edulcorante Preparados de fruta: Fresa, Manzana, Durazno, Mango y Frutos del Bosque 7.2. Elaboración de yogurt Para la elaboración del yogurt se realizó el proceso descrito en la Figura 7.1. Figura 7.1. Proceso de elaboración de yogurt FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 28 7.2.1. Fermentación Se realizó el seguimiento de la fermentación, midiendo cada hora: pH y acidez y realizando diluciones primarias de la muestra para luego sembrar en medios MRS y LM17. 7.2.2. Análisis sensorial Pruebas afectivas Prueba de preferencia: Tiene como objetivo ordenar según el grado de preferencia una serie de muestras de acuerdo con un aprecio personal. Se realiza con consumidores habituales del producto en estudio. Es una prueba sencilla pero se requiere de un gran número de evaluaciones (Pedrero, 1989). Prueba de nivel de agrado: Tiene como objetivo localizar el nivel de agrado o desagrado que provoca una muestra específica. Se puede utilizar una escala que debe contar con un indicador del punto medio a fin de dar al juez un punto de indiferencia a la muestra. Este tipo de prueba se realiza con consumidores habituales del producto. Como se muestra en la Figura 7.2, dicha escala puede ser estructurada o no estructurada (Pedrero, 1989). Estructurada No estructurada _____Gusta muchísimo Gusta _ Neutral _ Disgusta _ _____Gusta mucho _____Gusta un poco _____Me es indiferente _____Disgusta un poco _____Disgusta mucho _____Disgusta muchísimo Figura 7.2. Tipo de escalas utilizadas en pruebas de nivel de agrado. Para escoger la concentración ideal de edulcorante y de preparado de fruta, que se adicionaría a las formulaciones de yogurt endulzado y con fruta, se realizaron pruebas afectivas de nivel de agrado y de grado de preferencia que se tiene por las muestras. Se presentaron ante 100 consumidores habituales de yogurt, 50 hombres y 50 mujeres aproximadamente, de entre 18 y 60 años de edad; tres muestras de yogurt a tres FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 29 concentraciones diferentes en un rango de 2 al 15% y de 5 a 50%, para el edulcorante y el preparado de fruta respectivamente, para que seleccionaran el de su preferencia. Finalmente se realizaron pruebas de nivel de agrado, presentando los productos desarrollados frente a uno similar comercial, con el fin de comparar ambas muestras y conocer cuál de las dos era de mayor agrado de los consumidores. En el Anexo I se muestran los cuestionaros aplicados para todas las pruebas afectivas (Figuras AI.1, AI.2 y AI.3). 7.3. Vida de anaquel Se analizaron dos lotes de cada tipo de yogurt: natural, endulzado y con preparado de fruta. Éstos se produjeron de manera independiente el mismo día. El yogurt se almacenó en porciones de 25 g, en vasos de plástico transparentes con tapa semi-hermética, en condiciones de refrigeración. Cada porción se analizó por duplicado en intervalos de 7 días. 7.3.1. pH Se midió directamente utilizando un potenciómetro calibrado (Modelo Hanna HI 4211) mediante el empleo de un electrodo de vidrio en combinación con un electrodo de referencia de calomel (Beckman Lot No. 5310ª Mod 511064). (NMX-F-317-S-1978) 7.3.2. Acidez La acidez se determinó con base a una titulación alcalimétrica con NaOH 0.1N, utilizando fenolftaleína como indicador. El resultado se expresó como % de ácido láctico que se calculó de la siguiente forma: En donde: N = Normalidad de la solución de NaOH (0.1N) 0.09 meq = Miliequivalentes de ácido láctico (NOM-185-SSA1-2002; NMX-F-206-1986) FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 30 7.3.3. Microbiológicos Las muestras se prepararon haciendo diluciones de acuerdo a lo establecido en la NOM-110- SSA1-1994, a fin de que se obtuviera una distribución más uniforme de los microorganismos presentes en la muestra. Métodos tradicionales Consisten en la preparación de medios de cultivo, la inoculación con la muestra, incubación y el recuento en placa de las colonias desarrolladas. 7.3.3.1. Mesófilos aerobios Agar cuenta estándar Medio que se empleado para cuantificar los microorganismos viables en el yogurt. La variedad de especies, las necesidades nutricionales, la temperatura óptima de crecimiento y los requerimientos de oxígeno hacen que las colonias contadas constituyan una estimación de la cifra real. Se realizó la incubación a 37°C durante 48 hrs (NOM-092-SSA1-1994). En la siguiente tabla se presenta la formulación del medio de cultivo. Tabla 7.1. Formulación Agar Cuenta Estándar Formulación Ingrediente Cantidad Peptona de caseína 5 g Extracto de levadura 2.5 g Glucosa 1 g Agar 14 g Agua destilada 1L 7.3.3.2. Bacterias ácido lácticas (BAL) Agar MRS (Man, Rogosa y Sharpe) Es un medio que se emplea para la cuantificación de lactobacilos. Promueve el crecimiento de bacterias ácido lácticas en general, proporciona un crecimiento más abundante de todas las cepas de lactobacilos, especialmente de L. brevis y L. fermenti. Se obtiene un mejor FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 31 crecimiento en condiciones de microaerofilia. Los lactobacilos son microaerófilos y generalmente requieren de una sobrecapa de agar para obtener condiciones anaeróbicas en medio sólido. Se incuban a 44°C durante 48-72 hrs. En la Tabla 7.2 se presenta la formulación del medio de cultivo. Tabla 7.2. FormulaciónAgar MRS Formulación Ingrediente Cantidad Peptona 10 g Extracto de levadura 4 g Glucosa 20 g Tween 80 1 mL Fosfato ácido de magnesio 2 g Acetato de sodio 5 g Citrato de amonio 2 g Sulfato de sodio 0.2 g Sulfato de magnesio 0.5 g Agar 15 g Agua destilada 1 L Agar LM17 (Lactose + Medium 17) El empleo de éste medio de cultivo favorece el crecimiento de bacterias del género Streptococcus, ya que son homofermentativos, productores de acidez, por lo que requieren que el medio se mantenga amortiguado para que el pH del cultivo se mantenga por arriba de 5.7 durante el crecimiento activo. El agar contiene glicerofosfato disódico como amortiguador. Se incuban a 37°C durante 24 - 48 hrs. En la Tabla 7.3. se presenta la formulación del medio de cultivo. Métodos rápidos (Petrifilm®) Es un método que permite reducir el tiempo de ensayo para cuantificar o detectar microorganismos o sus toxinas, puede ser manual o automatizado (NMX-F-717-COFOCALEC- FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 32 2006). Las muestras se preparan haciendo diluciones de acuerdo a lo establecido en la NOM-110-SSA1-1994 y se neutralizan utilizando NaOH 0.01N estéril, para evitar que el pH de la muestra afecte el vire del indicador presente en el medio deshidratado. Tabla 7.3. Formulación Agar LM17 Formulación Ingrediente Cantidad Triptona 5 g Peptona de soya 5 g Digerido de carne 5 g Extracto de levadura 2.5 g Ácido ascórbico 0.5 g Sulfato de magnesio 0.25 g Glicerofosfato disódico 19 g Agar 11 g Agua destilada 950 mL Solución de lactosa al 10% estéril 50 mL 7.3.3.3. Coliformes totales Las placas Petrifilm® de 3M® para recuento de E. coli/Coliformes son un medio de cultivo listo cuyo sistema contiene nutrientes, Rojo Bilis Violeta, un agente gelificante soluble en agua fría, un indicador de la actividad glucuronidasa, 5-bromo-4-cloro-3-indoil-b-D- Glucuronido y el indicador tetrazolio que facilita el conteo de las colonias. La mayoría de las E.coli producen β-glucuronidasa, la que a su vez produce una precipitación azul asociada con la colonia. La película superior atrapa el gas producido por E. coli y los coliformes fermentadores de lactosa (Figura 7.3. a)). Se obtienen resultados cuantitativos, después de incubar las placas a 37°C durante 48 h. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 33 7.3.3.4. Hongos y levaduras La placa Petrifilm® de 3M® para recuento selectivo de levaduras y mohos es un medio de cultivo listo para usar que contiene nutrientes con suplemento de antibióticos, un agente gelificante soluble en agua fría y un indicador que facilita el conteo de las levaduras y los hongos (Figura 7.3. b)). Se obtienen resultados cuantitativos, después de incubar las placas a 29°C de 5 a 7 días. a) b) Figura 7.3. Placas Petrifilm ® de 3M ® a) E.coli /Coliformes, b) Hongos y levaduras. 7.3.4. Sensoriales 7.3.4.1 Color Se hizo la comparación del color que se observó a lo largo del tiempo en el yogurt, con el Catálogo Pantone® 2010 (Figura 7.4. a) y b)). a) b) Figura 7.4. Catálogo Pantone ®. a) Coated, b) Uncoated FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 34 7.3.4.2. Olor El análisis del olor del yogurt se realizó buscando que el aroma característico se mantuviera y con el fin de detectar aromas extraños durante el tiempo de estudio. 7.4. Reología Se realizaron pruebas reológicas en un reómetro de deformación controlada (TA Instruments modelo ARES-RFSIII, EUA) utilizando una geometría superior de paleta con seis aspas de 18 mm de diámetro y 34 mm de longitud. Las muestras de yogurt se colocaron en la geometría inferior del reómetro a 4 ± 0.1°C y se dejaron en reposo durante 10 min antes de empezar las pruebas. Se ejecutó un ciclo de velocidad de deformación ascendente y descendente en un intervalo de 0 a 120s-1 con una duración total de 240s (120s de ascenso y 120s de descenso). El procedimiento técnico utilizado fue Determinación de viscosidad de fluidos (PT-USAI-FQ-RE-001) El porcentaje de histéresis se evaluó calculando el área entre la curva ascendente y la descendente. Para las formulaciones desarrolladas se considero el tiempo inicial, correspondiente al yogurt recién elaborado. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 35 8. RESULTADOS Y ANÁLISIS Para la formulación de un yogurt funcional se requiere estandarizar diversos parámetros como son, la fermentación en cuanto a tiempo, temperatura y cantidad de inóculo que se emplean para lograr la acidificación de la leche; el % de sólidos totales (cantidad de sólidos de leche y fibra soluble) y el tipo y cantidad de aditivos que se agregarán para obtener un producto con características sensoriales óptimas. 8.1. Elaboración de yogurt 8.1.1. Fermentación Se empleó un inóculo liofilizado de los microorganismos iniciadores especificados por la NOM-181-SCFI-2010 [Streptococcus thermofilus y Lactobacillus delbuekii subesp. bulgaricus, (relación 4:1)] para preparar 1L de yogurt batido. Ya que el pH y la acidez de un yogurt dependen de la cantidad de ácido láctico producido por los microorganismos iniciadores, se realizó el seguimiento de la fermentación 5 h, midiendo pH, acidez y las UFC/g, cada hora. Los resultados se presentan en las Figuras 8.1. y 8.2. Figura 8.1. Cinética de crecimiento de cultivos iniciadores de yogurt. Figura 8.2. Seguimiento de los parámetros fisicoquímicos durante la fermentación de yogurt. 1.E+06 1.E+07 1.E+08 1.E+09 1.E+10 1.E+11 1.E+12 0 1 2 3 4 5 6 U FC /m L Tiempo (h) 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 0 1 2 3 4 5 6 % Á ci d o L ác ti co p H Tiempo (h) pH Acidez FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 36 En las Figuras 8.1 y 8.2, se observa que el crecimiento de los microorganismos está directamente relacionado con el pH y la cantidad de ácido láctico presente en el yogurt, debido a que para su desarrollo los microorganismos metabolizan la lactosa presente en la leche liberando ácido láctico (metabolito primario) con lo cual disminuye el pH (Farnworth, 2003). Mientras la fermentación avanza, la acidificación aumenta, lo que causa la desnaturalización de las micelas de caseína en unidades más pequeñas que se precipitan. Finalmente estas unidades forman una malla estructurada de forma similar a una colmena con celdas de aproximadamente 3 µm, en donde queda atrapada el agua y los glóbulos de grasa del yogurt. Durante el proceso de desnaturalización las proteínas del suero interactúan con la κ-caseína, la cual también queda atrapada en la estructura del coágulo. Si no se llega al pH de desnaturalización de la caseína, la malla que se forma para dar la estructura del yogurt es menos estable (Prentice, 1992). 8.1.2. Ajuste del porcentaje de sólidos totales La viscosidad de un yogurt depende del porcentaje de sólidos totales (%ST). Usualmente este porcentaje se ajusta con leche en polvo descremada, en este caso, se intentó realizar el ajuste sólo con fibra soluble, pero se observó que al terminar la fermentación se liberó suero. La cantidad de suero liberado era mayor a mayor cantidad de fibra soluble agregada. Por lo anterior, se decidió hacer el ajuste del %ST con una mezcla de leche en polvo descremada y fibra soluble a una concentración que cumple con lo establecido con la normatividad vigente (NOM-181-SCFI-2010). En la Tabla 8.1 se presentan los resultados obtenidos de las formulaciones analizadas. Tabla 8.1. Ajuste del % ST Formulación % Sinéresis Leche descremada en polvo 2.4 Fibra soluble 6.0 Leche descremada en polvo:Fibra soluble(2:1) 1.2 FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 37 El comportamiento en cada caso se debe a que cuando el ajuste de %ST se hace únicamente con leche descremada en polvo el coágulo es más estable, debido a que la interacción de las proteínas es más fuerte, dicha interacción es más débil cuando el ajuste se hace sólo con fibra soluble. En el caso de la mezcla, se observó que ambos componentes interaccionan de tal forma que se hace un coágulo estable, sin afectar la consistencia. 8.1.3. Estabilizantes A pesar del ajuste del %ST con la mezcla de fibra soluble y leche en polvo, se observó que al almacenarse algunos días en refrigeración (ver apartado 8.2) se producía sinéresis y el volumen de suero liberado llegó a ser de cerca del 10% (v/v). Por lo anterior se tomó la decisión de agregar un estabilizante para evitar el desprendimiento de líquido durante el almacenamiento. Para ello se realizaron diversas pruebas con diferentes estabilizantes (A, B, C, D y E), en dos concentraciones menores al 0.5% (m/v). Los resultados obtenidos se presentan en la Tabla 8.2 y en la Figura 8.1. Tabla 8.2. Prueba de estabilizantes. Estabilizante Concentración % Sinéresis pH Acidez Consistencia Blanco ------ 1.2 4.52 1.12% Espesa pero fluida y sin grumos A Cbaja 3.6 4.34 1.07% Fluida y sin grumos Calta 0.8 4.41 1.05% Espesa pero fluida y sin grumos B Cbaja 3.6 4.32 1.06% Muy fluida y grumosa Calta 2.0 4.33 1.03% Fluida y muy grumosa C Cbaja 9.6 4.38 1.05% Espesa y poco grumosa Calta 27.6 4.49 0.90% Espesa y grumosa D Cbaja 1.2 4.33 0.99% Espesa y poco grumosa Calta 3.2 4.35 1.03% Espesa y grumosa E Cbaja 1.2 4.50 0.91% Gelatinosa Calta 0.4 4.61 0.73% Muy gelatinosa FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 38 Cbaja Calta Figura 8.1. Prueba de estabilizantes Se encontró que el estabilizante ideal fue la A en la mayor concentración probada, ya que con ella se evitó la pérdida de suero y no se presentaron defectos de textura, como la apariencia gelatinosa y grumosidad que se observaron con E y B, respectivamente. Se diseñó una formulación de yogurt endulzado, debido a que la alta acidez del yogurt natural no agrada al consumidor nacional. Para mantener las características de yogurt bajo en calorías se endulzó con jarabe de agave, que como se muestra en la Tabla 8.3, es un edulcorante natural, con mayor poder edulcorante que el azúcar y con bajo índice glucémico. A B C D E A B C D E FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 39 Tabla 8.3. Índice Glucémico y poder edulcorante de diferentes endulzantes. Endulzante Índice Glucémico Poder Edulcorante Azúcar (10 g) 60 1 Miel (10 g) 23 1 Glucosa 100 0.7 Fructosa 23 1.1-1.3 Jarabe de agave 19 1.5 (Glycemic Index Foundation, 2010) 8.1.4. Análisis sensorial 8.1.4.1. Cantidad de edulcorante Para elegir la cantidad de edulcorante que se adicionaría se realizó una prueba afectiva, presentando ante 100 consumidores habituales de yogurt, 3 muestras que tenían 3 concentraciones diferentes de edulcorante en un rango de 2 al 15%, para que seleccionaran el de su preferencia respondiendo un cuestionario como el mostrado en el Anexo I (Figura AI.1). Las claves de las muestras se eligieron al azar y su aparición en los cuestionarios se determinó aleatoriamente mediante las seis combinaciones posibles presentadas en la Tabla 8.4. Tabla 8.4. Aleatorización de las claves para aparición en los cuestionarios. 431 : 859 : 684 859 : 684 : 431 684 : 859 : 431 684 : 431 : 859 431 : 684 : 859 859 : 431 : 684 Con los datos obtenidos se realizó un análisis de varianza (ANOVA) (Tabla 8.5) para los resultados de la prueba de nivel de agrado y un ordenamiento por rangos (Tabla 8.6) con los datos de la prueba de grado de preferencia. Ya que la F calculada es mayor a la F de tablas tanto para las muestras y para los jueces, se concluye que las muestras si eran diferentes entre sí significativamente, y que los jueces notaron dicha diferencia. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 40 Tabla 8.5. Análisis de varianza, Prueba nivel de agrado de yogurt endulzado. Fuente de variación GL SC CM Fcal Comp. Ftab Decisión Muestras 2 168.3267 84.16333 82.630 > 3.087 Si hay Jueces 99 292.7867 2.957441 2.903 > 1.321 Si hay Error 198 201.6733 1.018552 Total 299 662.7867 Tabla 8.6. Suma de rangos, Prueba de grado de preferencia de yogurt endulzado Muestras 431 859 684 Suma 123a 213b 265c Muestras con superíndices distintos (a, b, c) indican diferencia significativa Con base en la suma de rangos mostrada en la Tabla 8.6, la muestra más preferida significativamente fue la 684, que correspondía a la mayor concentración de edulcorante analizada, adicionalmente se sabe que la calificación dada a esta misma muestra en la prueba de nivel de agrado fue “Me gusta demasiado”, la cual fue asignada por el 10% de los consumidores y corresponde a la calificación más alta; el 32% de los consumidores comentaron que les gustaría que la muestra fuera aún más dulce por lo que se hizo una prueba para igualar el dulzor con un yogurt comercial. Se probaron tres marcas de yogurt natural endulzado (Alpura®, Lala®, Yoplait®) y se elaboraron muestras con diferentes concentraciones de edulcorante, desde 2.5% hasta 20% en intervalos de 2.5 y se observó que la muestra que obtuvo el dulzor más similar a los productos comerciales fue la que tenía el mayor contenido de edulcorante. 8.1.4.2. Cantidad de preparado de fruta Para elegir la cantidad de preparado de fruta que se adicionaró se realizó una prueba afectiva, presentando ante 100 consumidores habituales de yogurt, 3 muestras que tuvieron 3 concentraciones diferentes de preparado de fruta en un rango entre 5 y 50%, que cumplen con la normatividad vigente (NOM-181-SCFI-2010), para que seleccionaran la de su preferencia contestando un cuestionario como el mostrado en el Anexo I, Figura AI.2. FORMULACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA VIDA DE ANAQUEL DE UN YOGURT FUNCIONAL 41 Las claves de las muestras se eligieron al azar y su aparición en los cuestionarios se determinó aleatoriamente mediante las 6 combinaciones posibles presentadas en la Tabla 8.7 Tabla 8.7: Aleatorización de las claves para aparición en los cuestionarios. 756 : 209 : 932 209 : 932 : 756 932 : 209 : 756 932 : 756 : 209 756 : 932 : 209 209 : 756 : 932 Con los datos obtenidos se realizó un ANOVA (Tabla 8.8) para los resultados de la prueba de nivel de agrado y un ordenamiento por rangos (Tabla 8.9) con los de la prueba de grado de preferencia. Tabla 8.8. Análisis de varianza, Prueba nivel de agrado de yogurt con preparado de fruta. Fuente de variación GL SC CM Fcal Comp Ftab Decisión Muestras 2 115.726 57.863 61.068 > 3.087 Si hay Jueces 99 226.463 2.287 2.414 > 1.321 Si hay Error 198 187.606 0.947 Total 299 529.796 Ya que la F calculada es mayor a la F de tablas tanto para las muestras y para los jueces, se concluye que las muestras si eran diferentes entre sí significativamente, y que los jueces notaron dicha diferencia. Tabla 8.9. Suma de rangos, Grado de preferencia de yogurt con preparado de fruta Muestras 756 209 932 Suma 137a 264b 199c Muestras con superíndices distintos (a, b, c) indican diferencia significativa Con base en la suma de rangos mostrada en la Tabla 8.9, la muestra más preferida significativamente fue la 209, que correspondía a la muestra con una concentración