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• UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE QUfMICA 1 nteracci6n efe{ formaúíenúfo con fas proteínas efe {a {ecne y su efecto en {a efa6oraci6n efe queso fresco T E s 1 s QUE PARA OBTENER EL TITULO DE: QUfMICA DE ALIMENTOS P R E S E N T A: MELIBEA ARENAS CASTAÑEDA MÉXICO, D. F. 2006 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. .. JURADO ASIGNADO: PRESIDENTE VOCAL SECRETARIO ler_ SUPLENTE 2do. SUPLENTE Prof MARIA ELENA CAÑIZO DE GARCÍA Prof ZOILA NIETO VILLALOBOS Prof. JUDITH JlMimEZ GUZMÁN Prof. AMELIA MARIA GUADA F ARRES Prof. MARIA TERESA PLATA .JIM:ENEZ UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA IZTAPALAPA DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA DEDICATORIAS Cuanáo nací mi paáre me «amó :M.eli6ea. 1,[ y mi maáre me a6razaron y desáe ese momento comenzaron a guiar mi camino, siempre con fa tarea en mente de hacer de mi una mujer integra. Como jrnto de su dedicación, apoyo y entrega, hay además de gozar de fa cu[minación de mi carrera prefesiona( gozo de ser una mujer con 'Vafores, costum6res e ináepenáencia. qracias a mi padre aprendí e[ 'Vafor de fa honestidad, fa [ucfza y fa pafa6ra. :M.i maáre me enseñó e[ 'Vafor efe{ amor, fa dedi"cación y fa entrega incondicional Vstedes mis padres, Pemanáo y Louráes; siempre fueron mi más grande inspiración, siempre siendo para mi un ejempfo a seguir. CEs por eso que hay fes dedico mi triunfo, triunfo que sin ustedes no fzu6iera sido posi6fe, y fes reitero mi más grande aámiración y respeto. qracias a ustedes, papá y mamá; soy una mujer integra y fe{iz. LOS QVIP.CJ?J) 9rf.VCJ{O _ ... )I ti Javier, gracias por {a comprensión y apoyo incondicional qracias por compartir conmigo, no sofo Ca rea{ización áe esta meta¡ sino tus sueflos, tristezas y afegrlas. )Igraáezco e{ compartir tu viáa conmigo. 'Te amo. Con cariño y respeto para mi tia !Mayo, mi mamá)Idelfa y mi nennano <Pavd por sus consejos y apoyo inva{ua6{es, Los quiero mucho. '1'am6ién dedico esta tesis a{ a !:Má:{jma Casa áe 'Estudios, mt Vniversidaá :Naciona{ )Iutónoma de !Méxjco y a mi Pacu{tad áe Química, pues me nan enseñaáo e{ camino dd conocimiento para poáer ser úti{ a mi país. Soy orguUosamente ... ''"" * * * ÍNDICE Contenido Página ~ RESUMEN l. INTRODUCCIÓN 3 2. OBJETIVOS 6 2.1. Objetivo General 6 2.2. Objetivos Particulares 6 3. HIPÓTESIS 7 4. ANTECEDENTES 8 4.1. Composición de la leche 8 4.1.2. Protelnas 9 4.1.2.1. Caseínas 9 4.1.2.2. Protelnas del lactosuero 12 4.1.2.3. ~-lagtoglobulina 12 4. 1.2.4. u-lactoalbumina 13 4.1.2.3. Grasa 13 4.1.2.4. Sales Minerales 14 4.1.2.5. Carbohidratos. Lactosa 15 4.2. Queso 16 4.2.1. Historia del queso 16 4.2.2. Definición y composición 17 4.2.3. Queso fresco 19 4.3. Elaboración del queso 20 4.3.1. Coagulación de la leche 20 4.3.2. Formación de la cuajada enzimática 4.3.3. Factores que inciden en la coagulación enzimática y el desuerado 4.3.3.1. Cantidad de cuajo 4.3.3.2. Temperatura 4.3.3.3. pH 4.3.3.4. Contenido de grasa 4.3.3.5. Tamaflo del corte de la cuajada (troceado) 4.3.3.6. Tiempo 4.4. Efecto de los diferentes componentes de la leche en el rendimiento quesero 4.4. l. Agua 4.4.2. Proteínas 4.4.3. Grasa 4.4.4. Sales Minerales 4.5. Formaldehído 4.5.1. Caracter[sticas 4.5.2. Reactividad 4.5.3. Toxicidad S. METODOLOGiA 5.1. Elaboración de quesos 5.2. Análisis 5.2.1. Determinación del rendimiento 5.2.2. Determinación de grasa 5.2.3. Determinación de humedad 5.2.4. Extracción de proteína del lactosucro 5.2.5. Extracción de caselnas Página 21 27 27 28 28 29 29 30 30 31 31 32 32 33 33 34 35 36 37 37 37 39 39 43 43 11 Página 5.2.6. Determinación de la proteína presente en el queso fresco y el lactosuero 44 5.2.7. Determinación de acidez 46 5.2.8. Electroforesis 47 5.2.8.1. Corrida de las muestras 48 6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 49 6.1. Pruebas de cuajado 49 6.2. Efecto del formaldehldo sobre el rendimiento del queso fresco 51 6.3. Efecto del formaldehído sobre el contenido de humedad y sólidos totales en el queso fresco 6.4. Efecto del formaldehldo sobre la cantidad de proteína del lactosuero en el queso fresco 6.5. Efecto del formaldehído sobre la cantidad de caselna 53 57 en el queso fresco 60 6.6. Efecto del formaldehído sobre el contenido de grasa en el queso fresco 61 6.7. Efecto del formaldeh[do sobre el contenido de grasa en base seca, sólidos no grasos y sólidos no grasos en base seca en el queso fresco 63 7. CONCLUSIONES 66 8. BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA 68 9. LECTURAS ADICIONALES 71 iii ... 1 nteracción áe[ fonnafáeliiáo con fas proteínas áe [a feclie y su efecto en [a efa6oración áe queso fresco RESUMEN El queso es el producto obtenido do la coagulación de la leche y constituido principalmente por una mezcla de proteínas y grasa, así como de otros componentes de la leche. El consumo de queso fresco ha tomado importancia cada vez mayor en nuestro país, lo que ha llevado a algunos productores a la utilización empírica de formaldehfdo para aumentar el rendimiento, mejorando de esta manera su rentabilidad. Cabe mencionar, que el uso de este reactivo como aditivo para aumentar el rendimiento quesero, no se encuentra registrado por la Secretaria de Salud, sin embargo su uso dentro de la industria quesera, principalmente por productores de la zona de Iztapalapa; es importante. Esta tesis se enfocó a determinar la influencia del formaldehído en las proteínas de la leche para con base en esto, explicar el efecto sobre el incremento del rendimiento de queso fresco . Durante el estudio, se trabajó con diferentes concentraciones de formaldehldo (O.O, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04 y 0.05 %) durante la elaboración del queso, comprobando que el uso de este reactivo aumenta el rendimiento hasta en un 10 %. Del mismo modo, la concentración de proteína del lactosuero y el contenido de humedad se incrementan en un 15 % y 3. 13 % respectivamente. En cuanto al contenido de grasa presente en el queso se observó que éste diminuye conforme se incrementa la concentración de formaldehído presente en el queso fresco, probablemente por la hidrofilicidad del medio, debido al aumento en la cantidad de proteínas del lactosuero, altamente hidrifllica. Por otro lado se sabe que la reacción del formaldehído con las proteínas es la Adición Nucleofllica de Aminas, por lo que es probable que el aumento de la retención de proteína del lactosuero en el queso fresco se lleve a cabo mediante este mecanismo, debido al acomplejamiento del formaldehído con estas proteínas. Más aún, estas proteínas a su vez tienen gran capacidad de retención de agua, lo que podría explicar el incremento en el peso del queso y por consecuencia del rendimiento. También se demostró que la concentración de formaldehído ideal para obtener una mayor incremento en el rendimiento quesero es de 0.01 %, notando, además, que la textura del queso se mejora con el uso de este reactivo, pues se presenta menor sinéresis (perdida de lactosuero del queso); contribuyendo de esta manera a una mayor firmeza en el queso fresco. 2 1 . INTRODUCCIÓN El queso es seguramente la fonna másantigua del procesamiento de la leche. Es un alimento extraordinariamente valioso y económico para el consumidor, contribuyendo notablemente a cubrir las deficiencias proteicas de la dieta del ser humano. Durante el proceso de elaboración del queso, los sólidos de la leche se concentran selectivamente constituyendo un delicioso sedimento o cuajada, compuesta principalmente de caseína. Este sedimento se obtiene por coagulación ácida o bien mediante coagulación enzimática. Ésta última se lleva a cabo mediante la quimosina o cuajo: enzima obtenida del estómago de temeros jóvenes y recientemente, por vía microbiana. Una vez obtenida la cuajada, se prensa para eliminar el suero, se moldea, se sala y dependiendo del tipo de queso se madura: Así se obtiene lo que conocemos como queso. Como consecuencia de esto, el queso se puede definir como el producto obtenido de la concentración de la materia seca de la leche por medio de la coagulación. El queso fresco se elabora con leche fresca pasteurizada o parcialmente descremada de vaca; no se madura y tiene un gran contenido de humedad que varia entre el 58 % y 78 %, según Madrid A, 1999 y Esquive! T. A, 1995. Debido a su humedad, este tipo de quesos no se almacena por mucho tiempo, ya que tienden a perder gran parte del agua contenida (sinéresis). 3 El alto valor nutritivo del queso y las grandes innovaciones en los productos son dos factores importantes que han contribuido a la expansión del mercado quesero en los últimos af'ios, dando grandes ganancias a los industriales dedicados a esta tarea. Aunado a esto, la importancia de aumentar el rendimiento quesero ha llevado a la utilización de métodos totalmente empíricos dentro de Ja industria quesera. Uno de estos métodos es la utilización de formaldehído, que se lleva a cabo en algunas queserías de Iztapalapa D.F. La caseína, es la principal protelna retenida naturalmente dentro de la matriz del queso por medio del cuajado, mientras que las proteínas solubles (proteínas del lactosuero) se pierden durante el desuerado de la cuajada. Al utilizar formaldehído durante la elaboración del queso fresco, las proteínas del lactosuero son retenidas por este reactivo, probablemente, mediante la reacción de Adición Nuclcofilica de Aminas, en Ja cual las aminas primarias RNH2 se af'iaden a los aldehídos dando como producto una imina. Lo mismo sucede para las caseínas que pueden perderse en el desuerado, sin embargo, debido al mecanismo propuesto es esta tesis, se piensa que esta reacción no se concluye, es decir, no se llega a la formación de la imina, pues al haber un "exceso de grupos amino'', éstos reaccionan nuevamente con el complejo ya formado entre el formaldehído y el grupo amino de las proteínas, de tal fonna que el hidroxilo (-OH) presente en el complejo se protona con el hidrógeno del grupo amino, liberándose agua en el mismo momento en que se forma el nuevo enlace C - N (fig. 1 ). De esta manera, al polimerizarse mayor cantidad de casefnas y proteínas del lactosuero, la red tridimensional formada retiene mayor cantidad de agua. 4 OH H-C-NH-R1 + NH2-R2 H Intermediario Carblnolamlna Amino -!+W - H10 formaldehldo-protelna Agua Figura l. Mecanismo de formación del complejo forrnaldehldo-protelna. R1 y R2 pueden ser diferente protelna. Este método meramente empírico, ha dado buenos resultados sobre la rentabilidad del producto a los queseros que han utilizado el formaldehfdo, sin embargo, falta estudiar más a fondo el caso para determinar a estos quesos frescos como seguros y en su caso, conseguir la aprobación de las normas correspondientes, para usar el formaldehfdo como estabilizador que aumenta el rendimiento quesero. 5 2. OBJETIVOS 2.1. Objetivo General • Evaluar la interacción del formaldehfdo con las proteínas de la leche, correlacionando el efecto que se presenta en la composición de la cuajada y rendimiento quesero. 2. 2. Objetivos Particulares • Comprobar si existe o no un incremento en el rendimiento de queso fresco elaborado con formaldehfdo. • Estudiar el efecto del formaldeWdo sobre la cantidad de proteína del lactosuero retenida en el queso fresco. • Estudiar el efecto del formaldehfdo sobre el contenido de humedad presente en el queso fresco. • Evaluar el efecto del formaldehfdo sobre el contenido de grasa presente en el queso fresco. 6 3. HIPÓTESIS El fonnaldehldo, utilizado en la manufactura de queso fresco; fonna un "complejo" entre las caseínas y las proteínas del lactosuero, uniéndose de esta manera a la matriz tridimensional del queso. El formaldehído se acompleja con las proteínas del lactosuero, mediante la unión de su grupo carbonilo y el grupo amino de las proteínas lácteas, evitando que éstas se pierdan durante el desuerado. o 11 NH2-R + H- C -H Amino Formaldeh[do formaldehldo-protelna (dlaminometil) Agua Como consecuencia de este acto, la retención agua se incrementa, puesto que las proteínas del lactosuero son altamente hidrofilicas, dando mayor peso al queso y como consecuencia mayor rendimiento, así como se evita el fenómeno de sinéresis durante su comercialización. Nota: R 1 y R2: cada una puede ser una protelna diferente. 7 4. ANTECEDENTES 4.1. Composición química de la leche La leche es un alimento con gran valor nutritivo, compuesta mayoritariamente por proteínas en estado de suspensión, grasa en estado de emulsión, carbohidratos (solución acuosa de lactosa), sales minerales y agua en equilibrio dinámico. Estos componentes se encuentran disueltos en diferente concentración en esta sistema coloidal (tabla 1).1•2• 4 Esta composición no es general ni exacta, pues varia en función de múltiples factores, como son la raza, la estación del afio, el periodo de lactancia, alimentación, hora de ordefio, etc. 1' 2' 3 Tabla l. Composición general de In leche para la elaboración de queso Componentes mayorltorlos Composición aproximado (/o) Grasa 3.9 Protl'-fnos 3.38 Corbohidratos ~ Soles minerales 0.9 Aquo 87 Componentes minoritarios Enzimas: lipasos, proteosa reductasas, lactoperoxido!a <'-te Vitaminas: . liposolubles: D, E, K y E . hidrosolubles: C y vit. Del grupo B Pigmentos: corotenos, rlboflovina, xontofilo ctlulos dlvusos: células <'-piteliales, bactl'-rios, levaduras y hongos Otro! ell'-mentos: CO,, O,, N, etc Sustancio extroPias 8 4. 1 . 2 . Proteínas Las proteínas son sustancias (proteicas y no proteicas) compuestas por carbono, hidrógeno y nitrógeno, con la presencia de algún otro elemento como el fósforo, hierro o azufre; constituyen la parte compleja de la leche6. Las sustancias no proteicas se encuentran en pequeftas cantidades (1.6 g/L), y tienen pesos moleculares menores a 500 KDa, son dializables y permanecen en solución cuando las proteínas floculan. Estas proteínas comprenden a los aminoácidos, urea, nucleótidos y vitaminas. Tnbln 2. Clasificación de las proteínas de la leche según sus características fisicoqulmicas y funcionales. 1• 4 Claslflcacl6n Caracterlstlca• fl1lcoqufmlc:at y func:lonalu Ca.'lelnas Precipitan a pH 4.6 (punto isoeléctrlco) Protelnas solubles No son solubles a pH (protelnas del 4.6, a menos que lactosuero) sufran una modlficacióri o desnaturalización por algún tratamiento, como el calor 4.1. 2.1. Caseínas Casi el 80% de las proteínas de la leche son caseínas3• Actualmente se sabe que la caseína se conforma de un grupo de aproximadamente 20 proteínas fosforiladas, de las cuales 4 son denominadas caseínas primarias (provenientes de un gen); estas caseínas son: 0<, 1 (40 %), 0<,2 (11 %), ~-caseína (30 %), K-caseina (11 %), cada una de ellas presenta diferencias en la estructura de su cadena polipeptídica. El resto de las caseínas se 9 denominan caseínas menores, originadas a partir de la hidrólisis de las caseínas primarias por la acción de algunas proteasas propias dela leche, como plasmita o proteasa alcalina de la leche (PAL). Estos polipéptidos son las y- caseínas (y1, y2, y\ derivadas de la~ caseína.4· 5• 10 La sensibilidad a los diferentes componentes del medio, no necesariamente es igual para todas las proteínas que se encuentran entre las caseínas. Esto se debe a que cada una tiene composición y estructura diferente, por ejemplo, las caseínas son sensibles al ión calcio (Ca2+), disminuyendo su solubilidad provocando su precipitación en presencia de éste. Por otro lado, las caseínas K y 'A no tienen esta sensibilidad frente al calcio, por tanto juegan un papel importante en la estabilización de las micelas de caselna en la leche. 4 La serina y treonina, son grupos prostéticos que forman parte de todas las caseínas y están presentes en ésta como ésteres fosfóricos 7. Cada caseína contiene un número diferente de grupos fosfatos en su molécula, razón por la cual presentan diferente sensibilidad frente al calcio. Las caseínas a,¡, a,2 y ~-caseína contienen un gran número de residuos de fosfoserina, por lo que tienden a unirse a cationes polivalentes, principalmente calcio, de este manera se neutralizan las cargas dando como resultado la agregación y precipitación de las caseínas. Por otro lado la K-caselna solo contiene un grupo fosfato, lo que la hace altamente estable frente al ión Cal+, y es por eso que se encuentra en la parte exterior de la micela de caseínas.2 Esta tipo de caseína es de suma importancia en las leches para quesería, debido a que estabilizan las caseínas u, y ~ frente a la coagulación. 10 En la leche, las caseínas se asocian con el calcio, los fosfatos y otros compuestos como resultado de su fosforilación y naturaleza anfifllica, interaccionando unas con otras para fonnar grandes complejos esféricos, denominados micelas, con diámetros que oscilan desde unos 30-50 nm a 300 nm 8. Estas micelas son altamente porosas y solvatadas. Consisten básicamente en proteínas (94 %) y algunos iones y sales (6 %); estos son principalmente fosfato de calcio, magnesio y citrato. Las cargas electricas y su grado de hidratación son las principales fuerzas que estabilizan a la micela. 1• 9 La K-caseína ocupa en estas micelas una porción muy especial al encontrarse predominantemente en la superficie de ésta. Esta fracción al contrario de las demás es insensible al calcio. Esta propiedad le confiere una actividad de coloide protector. La acción protectora, según Kirclumier21 , se debe fundamentalmente a que unas porciones de la K-caseína (las proteasas, es decir el nitrógeno no proteico NNP, que se conoce con el nombre de macropéptido ), penetra en la fase acuosa de la leche formando, por su carácter hidrófilo, una capa de hidratación. El resto de la K-caseína es sensible al calcio y se encuentra al igual que las demás fracciones de caseína, unidas al calcio. La capa de hidratación aloja además cargas eléctricas del mismo signo, lo que hace que las micela de caseína se repelan unas con otras. De esta forma queda impedida la precipitación de la caseína. 11 4 .1. 2. 2. Proteínas del lactosuero Las principales proteínas séricas en el suero de leche bovina son: a-lactoalbumina, P-lactoglobulina, albúmina sérica bovina, imnoglobulinas, lactoferrina y algunas enzimas que son propias de la leche. Estas proteínas generalmente se pierden durante el desuerado del queso, de tal modo que para coagularlas no solo se deben neutralizar sus cargas, sino que también es necesario disminuir su grado de hidratación, por medio de calor o alcohol 1• 4. La a-lactoalbumina y P-lactoglobulina son la más abundantes e importantes en el suero de leche. 4.1.2.2.1. j3-lactoglobulina Es la proteína del lactosuero más importante. Es insoluble en agua destilada, soluble en disoluciones diluidas de sales y agua pura. Precipita a temperatura de 85 - 90° C, así como por al adición de soluciones al 50 % de sulfato de magnesio o de amonio. Su peso molecular es de 18.362 KDa, aunque en la literatura se da a veces de 36 KDa, debido a que tiende a formar polímeros. Esta proteína es la más susceptible a la desnaturalización por calor, ya que puede haber un intercambio entre los grupos sulfhídrico libre y los que precipitan en el enlace disulfuro, desestabilizando a la molécula; esta es una de las razones por lo cual ha sido una de las más estudiadas con mayor detalle, pues ejerce una gran influencia en la estabilidad térmica de los productos lácteos. 10• 11 ' 12 12 4 .1 . 2. 2. 2. a- lactoalbúmina La a- lactoalbúmina representa el 23 % de las proteínas del lactosuero. Es una globulina casi esférica y compacta, de una sola cadena. Su peso molecular es de 62.5 KDa y punto isoeléctrico (pi) de 4.8. Contiene ácido glutámico y leucina en posiciones terminales, además es rica en lisina y cistina. 1º· 12 4 .1 . 2. 3. Grasa Las grasas son compuestos de carbono, hidrógeno y oxígeno, con predominio de hidrógeno.6 La grasa de la leche está compuesta sobre todo por grasas neutras (triglic6ridos). Se encuentra en una suspensión de pequefios glóbulos de dimensiones variables de 0.1 a más de 20 micras. Su diámetro medio es de 3 a 4 micras. Se cree que es favorable la presencia de glóbulos de diámetro pequefio en la leche cuando se usa para fabricar queso, ya que los glóbulos grandes se rompen con facilidad, acabando su contenido en el aumento de la grasa dol lactosuero (ácidos grasos libre), o bien, como ácidos grasos libros entre los granos de cuajada, dando un aspecto aceitoso.6 La grasa presente en la leche tiene un papel muy especial durante la elaboración de queso, ya que permite el desarrollo de aroma durante la maduración de este alimento láctico, ya que los ácidos grasos se liberan, siendo metabolizados para formar compuestos secundarios. De esta manera le dan una consistencia agradable, aroma y sabor al producto final, el queso. 11 • 29• 33 13 Aunque la firmeza del queso está determinada por las proteínas, cabe mencionar la influencia de la grasa en la elasticidad del mismo, debido a la interacción existente entre la membrana superficial del glóbulo de grasa y la matriz de proteínas. La influencia de la grasa en estas características depende, no solo de la variedad de queso elaborado sino también de la composición y propiedades de la leche (cantidad de grasa). 11 4. 1 . 2. 4. Sales Minerales Las sales de la leche se encuentran, en su mayor parte, disueltas o formando compuestos con la caseína, ocupando solo 1 % de la composición total. Las más abundantes son calcio, potasio, sodio y magnesio.6 Tabla 3. Composición en sales minerales de la leche de vaca6 Sales mln11ralu mg/100o l11c:h1 Calcio 120-140 Sodio 4!'.1-70 Potasio 140-17!5 Cloro 100-110 Fósforo 78-100 Magnesio 10-1!5 Como se muestra en la tabla 3, la concentración total de Ca2+ en la leche es de 120-140mg/l 00 g de leche, este valor es superior a la concentración de saturación en una solución acuosa, y el hecho de que no precipite la leche se debe a que no todo el calcio presente se encuentra en solución. 14 El calcio se encuentra presente en la leche en tres formas: coloidal, disolución verdadera y ligado a caseína. Este último es el responsable del comportamiento de la leche en la coagulación. 13 La mayor parte (67 % ) se encuentra ligada a las caseínas, formando fosfocaseinato de calcio, importante para la estabilidad de la micela de caseína. 10 El resto del Ca2+ se encuentra en la fracción ultrafiltrable de la leche, pero no todo está en forma iónica: el 2.5 % del Ca2+ total de la leche se encuentra disperso formando sales como citrato y fosfato calcico. Solo el 11.5 % se encuentra ionizado y disuelto en el \actosuero. 1 ~ 4.1.2.!5. Carbohidratos. Lactosa La lactosa es el azúcar principal presente en la leche (0.1 % ). Es un disacárido formado de a o ~ glucosa y ~ galactosa. 15 La lactosa es transformada en ácidoláctico durante los primeros dfas de elaboración del queso y desaparece casi en su totalidad durante la maduración, ya que es fermentada por las bacterias acidolácticas. En realidad la influencia de este azúcar en el rendimiento quesero no es notable. Sin embargo, un contenido demasiado alto puede causar defectos en el sabor del queso (sabor amargo), del mismo modo, su ausencia o niveles muy bajos puede reducir la fermentación, consecuentemente la baja de pH, afectando la textura y desarrollo de la maduración. 15 15 4.2.Queso 4. 2. 1 . Historia del queso No se conoce exactamente donde y cuando apareció el queso, lo que si es claro suponer es que el queso apareció cuando el hombre dejó de ser nómada y se hizo sedentario, criando animales y cultivando los campos. En esta época surgió seguramente el ordcfl.o de la leche de estos animales y la producción de queso 16• Se dispone de fiables pruebas históricas sobre el desarrollo de este producto en los países mediterráneos (Egipto y Mesopotámica) que datan de 8 000 afl.os A.C. Los pastores de aquellas tribus sedentarias, encargados de ordefl.ar y cuidar el ganado son probablemente los primeros queseros del mundo. Tenían tiempo para observar a los animales, observarían entonces, el fenómeno natural de la acidificación y es probable que entre los numerosos envases que utilizaban para guardar la leche, empleasen estómagos de rumiantes, donde está contenido el cuajo (quimosina). De ésta forma verían que la leche se cortaba y se cuajaba. 3 Esto sería el preciso momento en que se iniciaría la producción del queso moderno. Después, con el transcurso de los siglos, hasta llegar al nuestro se han ido perfeccionando las técnicas, pero el fundamento que aún perdura es el antes descrito. El queso llegó a México graCias a los monjes evangelizadores después de la conquista. Desde ese momento se implementó la fabricación de este producto lácteo a gran escala. Actualmente la producción es diversa, sin embargo uno de los quesos de mayor consumo es el queso frcsco.'7 16 4.2.2. Definición y Composición El Queso es el producto fresco o madurado obtenido por coagulación y separación del suero de cualquiera de los siguientes productos: leche, nata, leche desnatada (total o parcialmente), suero de mantequilla o de una mezcla de cualquiera de ellos. Es una mezcla de caseínas, grasa láctea y otros componentes de la leche que se separan de la materia prima por las técnicas adecuadas. Este proceso de separación se favorece añadiendo enzimas, acidificando y/o calentando. 16 Según la norma NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-121-SSAl-1994, BIENES Y SERVICIOS. QUESOS: FRESCOS, MADURADOS Y PROCESADOS. ESPECIFICACIONES SANITARIAS, define queso de la siguiente manera: "3.18. Quesos, productos elaborados con la cuajada de leche estandarizada y pasteurizada de vaca o de otras especies animales, con o sin adición de crema, obtenida por la coagulación de la caseína con cuajo, gérmenes lácticos, enzimas apropiadas, ácidos orgánicos comestibles y con o sin tratamiento ulterior por calentamiento, drenada, prensada o no, con o sin adición de fermentos de maduración, mohos especiales, sales fundentes e ingredientes comestibles opcionales, dando lugar a las diferentes variedades de quesos pudiendo por su proceso ser: fresco, madurado o procesado. " En cuanto a la composición del queso se encuentran los siguientes parámetros: La caseína es la principal proteína que se encuentra en el queso, mientras que las proteínas solubles se encuentran en el lactosuero. Sin embargo las que llegan a retenerse en la cuajada desempeñan un papel importante en el desarrollo del sabor y aroma durante el proceso de maduración. 11 17 El contenido de grasa oscila entre el 4 y 48 % en el queso. Siendo ésta la responsable del aroma, sabor, color, textura y rendimiento del queso. 6• 19• 29 La grasa es la portadora de vitaminas liposolubles como la vitamina A y D. además aporta lecitina, que es una sustancia muy importante para los tejidos nerviosos.6 El contenido de hidratos de carbono, están constituido por la lactosa o azúcar de leche, que la gran mayoría es arrastrada por el lactosuero, por lo que su presencia en el queso es mínima. Aun cuando su concentración es muy baja, es el sustrato principal de las bacterias ácidolácticas durante la fermentación. La lactosa se encuentra en el queso entre 1 y 3 %. 11 • 15 En cuanto a los minerales que se encuentran en este alimento, destacan: calcio, fosfato y hierro. Su concentración oscila entre el 2.1 y 4.5 %. 11 El agua que queda retenida en el queso desempeffo un papel importante. Ya que es esencial para el desarrollo de los microorganismos, determina la velocidad de fermentación y de maduración, el tiempo de conservación del producto, la textura y sobre todo del rendimiento del producto elaborado. Su contenido oscila entre el 50 y 79 %, dependiendo de la fuerza aplicada a la cuajada y el tipo de queso. 6•20 18 4. 2. 3. Queso fresco Los quesos frescos, como su nombre lo indica son aquellos que se con.sumen inmediatamente después de su elaboración, por lo que no sufren un proceso de maduración. Son quesos sin corteza o corteza muy fina, que apenas se prensa. El contenido de humedad de estos productos es muy elevado y varia entre 50 y 80 por ciento. Por lo general este producto llega al cliente en 10 o 12 días después de su fabricación. 6• 17· 18 Según la norma NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-121-SSAl-1994, BIENES Y SERVICIOS. QUESOS: FRESCOS, MADURADOS Y PROCESADOS. ESPECIFICACIONES SANITARIAS, define queso fresco como: "3.19 . . Quesos frescos, productos que cumplen en lo general con lo seflalado en el punto 3.18 y se caracterizan por ser productos de alto contenido de humedad, sabor suave y no tener corteza, pudiendo o no adicionarle ingredientes opcionales y tener un periodo de vida de anaquel corto, requiriendo condiciones de refrigeración" El queso fresco es una de los productos lácteos de mayor consumo en nuestro país, por lo que el consumidor demanda un producto de mayor calidad y sobre todo de bajo costo. Las variedades más comerciales de queso fresco son: queso Crema, Sierra, Cottage, Panela, Chihuahua y "Canasto". 17• 20 19 4.3. Elaboración de Queso 4. 3 .1. Coagulación de la leche En cuanto a la coagulación de la leche, existen tres métodos. Uno es mediante coagulación ácida de la leche (originados en los países mediterráneos del este), por coagulación enzimática (originada en los países cálidos) y por coagulación mixta (coagulación ácida y enzimatica). La más utilizada y común es la coagulación enzimática. 21 La coagulación ácida puede realizarse por acidificación directa, es decir, al agregar ácido láctico o acético hasta que coagulen las caseínas o al cultivar microorganismos que produzcan ácido láctico a partir de lactosa, principal azúcar de la leche. La coagulación se efectúa debido a la desmineralización que provoca el ácido sobre las micelas de caseína, lo que ocasiona una modificación electrostática y neutraliza las cargas hasta alcanzar el punto isoeléctrico ( 4,6). Debido a esta desmineralización, no se forma la red tridimensional como en el caso de coagulación con cuajo; por lo tanto este coágulo no es tan estable.23• 24 La coagulación enzimática es la práctica más común en la elaboración de quesos, las enzimas que se usan para cuajar la leche son el cuajo (quimosina), la pepsina, aislada del hongo Mucor miehei22 y otras que se obtienen de plantas, como la bromelina. 20 La quimosina es el componente activo del cuajo. Esta enzima es secretada por las animales lactantes de muchas especies de mamíferos; por ejemplo los cuajos de cordero y cabrito. También puede ser obtenida mediante cultivos microbianos modificados geneticamente (Cryphonectria parasitica, Rhizomucor puslllus y Rhizomucor miehei)3, siendo éstos los más utilizado.Durante esta coagulación, el cuajo tiene la capacidad de formar una red tridimensional con las caseínas, el conjunto de éstas adopta un aspecto esponjoso, haciendo que la leche coagule. El coagulo formado es compacto, flexible, elástico, impermeable y contráctil; características que son de gran importancias durante el desuerado. 12 En el presente trabajo se estudiará solamente la coagulación enzimática. 4.3.2. Formación de la cuajada enzimática Las partículas de caseína, que originalmente se mueven libremente, están en solución coloidal y se encuentran estables y homogéneamente dispersas, se han de aglomerar o flocular para que el estado sol se transforme en estado de gel (coágulo), más exactamente en un estado de lioge/21 • La formación de este gel se debe a la precipitación de las caseínas por efecto del cuajo, que tiene la propiedad de escindir la porción hidrófila de la K-caseína, formando una red tridimensional provocando la coagulación de la leche13 • 21 En los espacios huecos de esta red tridimensional hay agua, que lleva disueltos diversos componentes de la leche, como azúcares y sales minerales: también incluye grasa. Este es el lactosuero. El agua contenida en el lactosuero se encuentra en tres formas distintas21 : • Agua de relleno de las cavidades: es la mayor parte de agua que conforma al lactosuero y que se encuentra en los espacios o poros del gel formado. Ésta se expulsa fácilmente al trocear el coágulo. • Agua de capilaridad: es el agua que se encuentra ocupando los espacios capilares entre las partículas de caseína. • Agua de hidratación: es el resto del agua presente en el lactosuero. La leche recién coagulada tiende normalmente a compactarse por reducción de los espacios de unión entre las micelas de caseína y multiplicación de los puntos de unión, es decir, tiende a encogerse. Como los líquidos no pueden comprimirse, el lactosuero se expulsa de esta contracción. De acuerdo con la solidez de los puentes salinos o con la fuerza de estos enlaces, y bajo la influencia de la temperatura, tiempo y acidificación, se produce un desuerado mejor o peor. La constitución de los puentes salinos depende de la cantidad de calcio presente en la leche14; por su parte, la intensidad de la fuerza de contracción depende de la temperatura y de la acidificación. Cuando más elevada es la concentración de calcio, más alta la temperatura y más perfecta la acidificación, más cantidad de suero se expulsa. 22 La retracción de la estructura cálcica, y con ello el desuerado, se ve favorecida todavía más con la fragmentación del coágulo, agitación y calentamiento de la mezcla lactosuero - cuajada. La coagulación enzimática de las caseínas es una reacción que tiene lugar en dos fases: fase enzimática y fase de coagulación3• 23 . Fase enzimática. O fase proteolftica23 . Es la primera fase que ocurre y consiste en la desestabilización del la micela de caseína por hidrólisis de la K·casefna, para formar micelas de para- K-caseína (paracaseína). La hidrólisis de la K·casefna involucra la separación del enlace peptfdico entre Phe - Met, localizados entre los restos 105 y 106 de la cadena polipeptídica. Esta separación es realizada por la quimosina (cuajo). Con la hidrólisis de K-casefna se pierde la parte hidrófila (destrucción de la capa de hidratación), o sea la parte hídrica y con ello se pierden las cargas negativas, reduciéndose la carga superficial y las fuerzas de repulsión electrostática que mantenían separadas a las micelas. Llegando un momento en el que se alcanza un determinado grado de proteólisis, alrededor del 80%, la desestabilización de las micelas conduce a su agregación y origina la formación del coágulo (fig 2 y 3). También se pierde la capa protectora frente al calcio, y las proteínas sensibles a este elemento reaccionan con el mismo. 23 ENZIMA QUIMOSINA MICELA DESESTABILIZADA Figura l. Desestabilización de la micela de caseína por acción del cuajo (quimosina). Fuente Varnam (1994) Ca -Ca Ca ~ Ca - Ca ·ca - Figura 3. Ruptura de la K-caseina por la acción del cuajo (quimosina). Fuente Scholz ( 1997) 24 Fase de coagulación. También conocida como fase reticular13 • Consiste en la ruptura de la capa protectora frente al calcio, las proteínas sensibles a éste empiezan a reaccionar dando lugar a la formación de puentes salinos entre las micelas de paracasefna, provocando su agregación (fig. 4). El complejo caseína-calcio es una red tridimensional de paracaseinato cálcico (gel o coágulo), y es el que realmente se va a convertir en la masa del queso (fig. 5). Esta segunda fase de la coagulación de las casefnas, requiere de condiciones de temperatura por encima de los 20 ° C. --Ca - K ® Ca -K Ca @ Ca - Figura 4. Fonnación de los puentes salinos entre moléculas de caselna. Fuente Scholz (1997) 25 - K- K Figura 5. Red tridimensional de parac11seinato. Fuente Scholz (1997) Hay autores que describen una tercera fase en la coagulación enzimática de las caselnas. Esta etapa es la fase de sinéresis, que consiste en la retracción de los puentes salinos y el consecuente desuerado del coágulo formado en las fases anteriores (fase ezimática y de coagulación). Esta fase comienza con el corte de la cuajada y se prolonga hasta el total desuerado del queso (Fig. 6). 13 En Ja práctica de la fabricación de queso, encontramos sin embargo con más frecuencia otras denominaciones de estas tres fases. As! la fase enzimática se denomina tiempo de floculac(ón, que es el lapso transcurrido entre la adición del cuajo y el inicio do la coagulación de la leche. A su vez, el tiempo contado desde Ja incorporación del cuajo hasta que la leche se coagula y se puede iniciar el trabajo de la cuajada (cortado de la masa coagulada en cubos), recibe el nombre de tiempo de coagulación, comprendiendo por consiguiente la fase enzimática y de coagulación o reticular. 14 26 Cada una de las "tres" fases mencionadas está sujeta a la influencia de diversos factores que determinaran el proceso y estado final del queso. /(- Figura 6. Retracción de la matriz tridimensional. Eliminación del lactosuero de la cuajada. Desucrado. Fuente Scholz (1997). 4. 3. 3 Factores que inciden en la coagulación enzimática y el desuerado 4.3. 3.1. Cantidad de cuajo Debido a que el cuajo es una enzima, su actividad depende, entre otros factores, de su concentración; entre mayor sea ésta, menor es el tiempo de coagulación. Si se deja actuar al cuajo durante más tiempo, sin hacer ningún trabajo a la cuajada, ésta es más firme. La actividad del cuajo se mide en lo que comúnmente se denomina "fuerza del cuajo", que es la cantidad de leche en gramos o mililitros a 35° C que un gramo o 1 mL de cuajo coagula en 40 minutos22 • Esta fuerza depende mucho del sustrato (la leche), por lo que debe verificarsc. 13• 25 27 4.3.3.2. Temperatura La temperatura óptima de actividad del cuajo es de 40 a 41 ° C, aunque la leche puede coagular débilmente a temperaturas superiores a los 10° C. Cuando más elevada es la temperatura (20 a 40" C), más cortos son las tiempos de floculación y de coagulación.22 En la práctica, la temperatura de coagulación de la leche se elige en función de la madurez y del contenido de grasa de Ja misma, así como el tipo de queso a elaborar. Por ejemplo, las leches muy maduras se trabajan a temperaturas más bajas, a mayor cantidad de grasa mayor temperatura. Las temperaturas de coagulación de la leche deben ser menores a la óptima del cuajo, ya que a temperaturas más altas las bacterias lácticas no se desarrollan. Si la temperatura supera los 40 oc, la enzima (cuajo) se inactiva.'3 La temperatura influye en la capacidad de ligar agua, la retracción del coágulo y la acidificación. Cada aumento de un grado térmico refuerza la capacidad de contracción de los puentes salinos, con lo que se favorece el desuerado.4.3.3.3. pH El contenido de ácido es otro de los factores de los que depende la coagulación enzimática. Éste determina la dosis de enzimas y con ello el tiempo de coagulación. 28 Si la coagulación de la leche se verifica a un pH cercano a la neutralidad, la micela forma una red tridimensional más fuerte por que no está desmineralizada, aunque tarda más tiempo en hacerlo. La cuajada que se obtiene es flexible, elástica, compacta, impermeable, contráctil y contiene poco agua. Si se adiciona cuajo a una leche ácida, la coagulación se efectuará en menos tiempo. En estas condiciones las micelas se encuentran en poco desmineralizadas, formando una red tridimensional muy débil (por falta de calcio), siendo todo lo contrario a las micelas que no están desmineralizadas.El pH óptimo de acción del cuajo sobre la caseína es de 5.5.25 Cuando más intensa sea la acidez, con mayor rapidez discurren los procesos de coagulación de la leche y, mejor es el desuerado. 4. 3. 3. 4. Contenido de grasa Cuando mas alta es la proporción de grasa existente en la leche, peores son las condiciones para el desuerado. Así la cuajada para queso obtenida de leche descremada cede el suero con más facilidad que la cuajada de la leche entera, supuesta la misma temperatura. El contenido graso no ejerce ninguna influencia sobre los tiempos de coagulación y espesamiento de la leche. 13 4.3.3.5. Tamaño del corte de la cuajada (troceado) En la fabricación de la mayoría de los quesos, para favorecer la expulsión del suero se corta en trozos la leche coagulada. El tamafio de éstos es decisivo para la salida del lactosuero y por lo tanto para la consistencia del queso. Cuando menor son los fragmentos de cuajada, mejor es el desuerado. 29 La operación del troceado se ha de comenzar cuidadosamente para no destruir el gel aún poco consistente, circunstancia que provocarla mayores pérdidas de caseína en el lactosuero (formación de polvos de caseína•).21 4.3.3.6. Tiempo La cuajada es tanto más consistente cuando más se tarda en cortarla; y la expulsión del lactosuero es más abundante cuando más prolongado sea el tiempo de desuerado. Para que la cuajada expulse más lactosuero, se debe elevar la temperatura. 13 4.4. Efecto de los diferentes componentes de la leche en el rendimiento quesero En la producción de queso un aspecto importante es el rendimiento, que en términos generales, se describe como la cantidad de leche que se requiere para producir un kilogramo de queso. 38 Este parámetro es el que ha llevado a los productores a la utilización de ciertos estabilizantes que aumenta el rendimiento en el queso, tal es caso del formaldehfdo. Dentro de los componentes de la leche que tienen un papel de suma importancia en el rendimiento quesero se encuentran: agua, proteínas, grasa y sales minerales: siendo la grasa y proteínas las que se aprovechan al máximo. • El polvo de caseína esta formado por pequeflas partfculas de caseína que se evacuan y se pierden junto con el lactosuero. 30 4.4.1. Agua El agua presente en la leche se encuentra en dos formas: ligada y libre. La primera no interviene en ningún proceso enzimático, forma parte de los tejidos y es muy dificil de extraer. La segunda, es de suma importancia en la elaboración de queso, debido a que muchos de los procesos fisicoquímicos y microbiológicos dependen de ésta. El grado de hidratación de las proteínas se puede determinar conociendo la cantidad de agua libre presente. La disponibilidad de agua en un queso condiciona la actividad microbiana y enzimática y, en consecuencia, el proceso de afinado del queso. Mientras más cantidad de agua sea retenida dentro de la matriz del queso (cuajada), mayor será su peso, consecuentemente el rendimiento se incrementara, sobre todo por el peso del agua.15 4.4.2. Proteínas Las caseínas son las proteínas principales que intervienen en el rendimiento quesero, mientras que las proteínas del lactosuero, generalmente, se pierden durante el desuerado. Dicho de esta manera, un queso elaborado con leche con alto contenido de caseínas, tendrá mayor rendimiento. Sin embargo si además de retener las caseínas, se retiene la proteínas del lactosuero, pues el rendimiento se mejorará, debido a que éstas son altamente hidrofilitas, lo que retendrán mayor cantidad de agua, por tanto el peso del queso se incrementará. 30• 29• 34 31 4.4.3. Grasa El principal papel de la grasa en el queso es como aporte nutricional, por su influencia en las características estructurales y reológicas del queso, y por su participación en el desarrollo del aroma, color y sabor19• También confiere adhesividad y cremosidad, además de tener un papel importante en las transformaciones durante la maduración de cada tipo de queso.25 Sin embargo el rendimiento se puede incrementar cuanto mayor cantidad de grasa se retenga en el queso, ya que dentro de la matriz de este alimento existe un ambiente sumamente hidrofübico. Por la que al formarse la red tridimensional de caseínas, los glóbulos de grasa quedan atrapados en el interior, aumentando de esta manera el peso del queso y por consiguiente el rendimiento. 4.4.4. Sales Minerales La importancia de las sales minerales durante la elaboración de queso es grande. El calcio es una de las sales más abundantes dentro de la leche, además es necesario para el normal desarrollo de la coagulación enzimática, ya que sin él no pueden formarse los puentes salinos, los cuales unen a las moléculas de caseína entre si para formar la red tridimensional que dará lugar a la gelificación de la leche. Esto significa que no habrá mucha materia sólida que conforme el cuerpo del queso, por tanto el rendimiento disminuirá notablemente. Si la leche se calienta (pasteurizada como máximo a 70° C), el calcio presente en ella ligado a caseína se transforma en otras formas solubles, no estando disponible para la coagulación ni para construir los puentes salinos. Esto obliga a agregar calcio en forma de cloruro de calcio. La dosis suficiente es de 1 g de cloruro de calcio puro a 1 O litros de leche13 . 32 4.!5. Forma 1 de h í do Los aldehídos de encuentran entre uno de los compuestos más comunes en la naturaleza y la industria química. Están presentes en una gran variedad de reacciones químicas, así como en el mecanismo de los seres vivos. En la industria química se producen una gran variedad de estos compuestos que son utilizados como disolventes y como materia prima para producir nuevos com puestos26 . La síntesis de estos compuestos se basa en la oxidación de alcoholes 26 , siendo un método muy económico de obtención. 27 4. 5 .1. Caracteristicas26 • Masa molecular relativa: 30.03 gr • Densidad: 0,8153 g/mc3 (líquido a -20° C) • Densidad relativa del gas: 1.07 - 1.09 (37,7%) • p.eb.-19,2°C • p.f. -92 - -118 º e • Punto de inflamación: 32 - 61 ° C (solución acuosa) • Temp. Ignición: 300 - 430 ° C (solución acuosa) • DLso : 2.4 g/kg 33 Además de los usos en la elaboración de resinas, como antiséptico, en medicamentos; también es usado como conservador de alimentos.27 A temperatura ambiente, el formaldehído es un gas incoloro de olor penetrante. También se le conoce como metano!, óxido de metileno, metaldehído y oxometano. Las disoluciones acuosas comerciales contienen 35 y 55 % de formaldehfdo, generalmente mezclado con metano!, pues éste evita la polimerización del mismo, estabilizando la disolución. 4. !5. 2 , Reactividad La reactividad de los aldehídos se debe a factores estéricos y electrónicos, estos es, el oxigeno enlazado con el carbono, por ser más electronegativo que el carbono; tiende a "jalar" los electrones hacia si mismo, dejando desprotegido al átomo de carbono, y es aquí donde puede ocurrir un ataque de un nucleófilo (especie dadora de electrones). Entre las reacciones que sufren los aldehfdos se encuentran (no siendolas únicas): 1. Oxidación. Formación de ácidos carboxflicos 2. Adición nucleof!lica 3. Hidratación. Formación de 1,1- dioles 4. Adición Nucleofilica de HCN. Formación de cianohidrinas 5. Adición nuclcofilica de aminas. Formación de imina y enamina La reacción más común de los aldehídos es la Adición Nucleofllica, en la cual, un nucleofllo (: Nu) ataca al átomo de carbono electrofilico C=:O, al mismo tiempo hay una rehibridación del carbono carbon!lico que pasa de hibridación sp2 a hibridación sp3, un 34 par de elctrones del doble enlace carbono-oxígeno se mueve hacia el átomo de oxígeno negativo, produciendo unión alcóxido tetraédrico intermediario.26 La Adición nucleofllica de aminas sobre el aldehído, es la posible situación que experimenta el formaldehldo con las proteínas de la leche {proteínas del lactosuero), en la elaboración de quesos. Esta reacción se basa en el ataque de una amina primara a un aldehído, produciendo una imina R2C-NR. Las iminas se forman en un proceso reversible, catalizados por ácidos.26 El formaldehldo, al igual que otros aldehídos, coagula las proteínas, aprisionando dentro de la matriz tridimensional, carbohidratos y material graso. Este reactivo es utilizado en medicina para fijación (endurecimiento) de tejidos conocido como formalina. 35 Además de su papel coagulante de proteínas, el formaldehldo, es un buen antiséptico, por lo que también se utiliza como conservador de alimentos pues destruye bacterias y otros agentes patógenos que pudieran causar daf\o a los alimentos.28• 37 4.5.3. Toxiddad27 El formaldeh!do es una sustancia altamente irritante para las mucosas, la piel, las vías respiratorias superiores. La principal patología, experimentalmente hablando, sobre animales expuestos directamente a vapores de aldehídos es sobre el tracto respiratorio. En general, la toxicidad de los aldehídos, es menor con forme baja el peso molecular de éstos, y quizás, sólo se presenten pequeftas irritaciones. Cabe mencionar, que el formaldeh!do esta presente de forma natural en el metabolismo y su mecanismo de degradación es similar al de los ácidos orgánicos. 35 5. METODOLOGÍA 1 > 1 > 36 5.1. Elaboración de quesos Para el estudio se utilizó leche comercial pasteurizada (Lala). Se calentó a 37 ° C y se agregó un extracto comercial de quimosina (Cuamex) 550 µL I 550 mi. de leche. Se dejo actuar durante 45 minutos aproximadamente (fonnación de la cuajada). Una vez formada la cuajada se cortó con una espátula en trozos de tamafto regular (2 cm aproximadamente). se dejo reposar 5 minutos y enseguida se sometió a un batido suave durante 1 O minutos. p&Slldo este tiempo se dejó reposar 5 minutos. Después se sometió n un segundo batido, esta vez más fuerte, durante 5 minutos formando un pelmazo con la cuajada, dejando reposar l O minutos. El cortado y batido se realizó con el fin de facilitar la separación del suero. Una vez separado el suero se colocó a través de un lienzo (manta de cielo) para recolectar la cuajada y moldarla. De esta manera se obtuvo el queso fresco. Durante el experimento, se realizaron tres series, cada una con 6 quesos. Las concentraciones de fonnaldetúdo utilizadas en el estudio fueron las siguientes: O.O %, 0.01 %, 0.02 %, 0.03 %. 0.04 % y 0.05 %. 5.2. Análisis 5 . 2 .1 . Determinación del rendimiento Para comprobar el efecto del fonnaldehído sobre el rendimiento, se determinó este parámetro en los quesos elaborados con diferentes concentraciones. También se determinó el porcentaje de Sólidos '.rotales (S'I), Sólidos No Grasos (SNG). Grasa en Base Seca (GBS) y Sólidos No Grasos en Base Seca (SNGBS). 37 El rendimiento se determinó de la siguiente manera Donde: • R -rendimiento • P1 -tpeso en gramos del queso • P2 -peso en gramo de la leche a cuaja Los cambios de rendimiento de los quesos se calcularon en base a la siguiente fónnula: R1-R1 % cambto:.. X 100 Donde: • R! - rendimiento de Los quesos elaborados con foanaldehído • R1 - rendimiento del queso control (sin fonnaldehído) 38 5 .2.2. Determinación de grasa El porcentaje de grasa en el queso :fresco se realizó mediante el método Gerber, según Van Gulik.36· 31 Para la preparación de la muestra se tomaron muestras representativas de los quesos, las cuales se mezclaron y molieron con el fin de obtener una masa homogénea. Técnica: En un butir6metro para queso se agregaron 1 O mi de I~S04 al 80 %, l mi de alcohol isoamilico seguidos de una capa de agua tibia (30 a 40° C) y 3 g de muestra. Se tapó y se colocó en baño maria a 65° C, retirándolo y agitándolo vigorosamente hasta la completa disolución de las proteínas. Se colocó en bai'lo maria durante 1 O minutos y se centrifugó a 110 rpm por 5 minutos en una centrifuga Gerber K. SCHNEIDER & CO AG (HS 44.A) Zurcí (Suiza). Se procedió n leer el porcentaje de grasa en la escala del butirómetro. Las determinaciones se realizaron por triplicado. 5. 2 .3 . Determinación de h umedad El porcentaje de humedad se realizó por el método gravimétrico. Las detenninaciones se realizan por diferencia de peso mediante la evaporación de agua en wm estufa de desecación a 100 ºc. 39 Preparación de la muestra: se tomaron muestras representativas de los quesos, se molieron y mezclaron, obteniéndose una mezcla homogénea, evitando la pérdida de humedad. Técnica: Se colocó en e la estufa de desecación charolas de aluminio, las cuales se llevaron a peso constante por 24 horas a 100 ºc. - En las charolas se colocaron 3 g de muestra preparada, se introdujeron en la estufa durante 2 horas a 100 ºc. Una vez transcurrido el tiempo se retiraron de la estufa y se dejaron enfriar en un desecador con silica-gel durante 45 minutos. - Se pesaron en una balanza de precisión, registrando el peso. - Una vez pesadas las muestras, se colocaron nuevamente en la estufa durante hora más. Posteriormente se dejaron enfriar y se registró el peso. - El peso anterior se realizó hasta que la diferencias en peso de dos pesadas sucesivas no fuera mayor a 0.5 mg. Se registro el peso final más bajo. Las detenninaciones se realizaron por duplicado. También se determinó % ST, % SNG, % GBS y% SNGBS. a) Sólidos Totales Donde: • ST -+ sólidos totales • M1-+ peso de la charola+ mues1.ra de queso (g) • M2 -+ peso de la charola con muestra sin agua (g) • Mo -+ peso de la charola 40 b) Humedad Donde: • H- humedad • ST -+ sólidos totales Los cambios en el contenido de humedad en los quesos se calcularon de la siguiente manera: .,,, cambio~ X 100 Donde: • R1 -+ humedad de los quesos elaborados con formaldehído • R1-+ humedad del queso control (sin formaldehido) e) Sólidos No Grasos Donde: • SNG __,, sólidos no grasos • ST - sólidos totales • G - grasa 41 d) Grasa Base Seca •/o GBS=- ~ff~ o/o ST)x 100 Donde: • GBS-+ grasa base seca • ST -+ sólidos totales • O -+grasa e) Sólidos No Grasos Base Seca %SNGBS= Donde: • SNGBS -+ sólidos no grasos base seca • SNG -+ sólidos no grasos • ST -+sólidos totales 42 5. 2. 4. Extracción de proteína del lactosuero Con base a que el formaldehido forma un complejo con las proteínas del lactosuero, reteniéndolas en la cuajada, se hizo la extracción de estas proteínas en el queso fresco. Los quesos fresco se disolvieron en solución amortiguadora de fosfatos 0.1 M pl l 7 (5 g /25 mi), ajustando el pH final de la disolución a 4.4 - 4.6 con HCI 1.41 M (JT Baker, Xalostoc, México). La clisolución se filtró a través de un filtro Whattnan # 42. el extracto se matuvo en refrigeración hasta la realización de los análisis. 5. 2. 5 . Extracción de casein a Se utilizó una solución de urea 8 M pH 8 (IT Baker, Xalostoc, México), en la cual se disolvió 0.6 g de queso fresco. Después de homogenizar dos minutos, se sometió la solución en un baño de agua a 37 ° C durante 2 horas, para solubilizarlas caseínas del queso. Posteriormente se centrifugó a 10,000 rpm a 4 ºC por 3 minutos (centrifuga Bcckman modelo J2-Ml). Se prosiguió a Ja remoción de grasas y sólidos insolubles mediante filtmci6n en papel Whatman # 42. El material filtrado se dializó en solución amortiguadora de fosfatos 0.1 M pH 7 a 4 ºe, durante 3 días. A esta solución se le determinó la proteína presente, mediante In tecnica de LO\\Ty,10 Finalmente, el dializado so concentró mediante liofilizaoión (liotilizadora LABCONCO Freeze dry System/Freczone 4.5 y congelador LABCONCO Shell freezer), para obtener la muestra para electroforesis. 43 5.2.6. Determinación de la proteína presente en el queso fresco y el lactosuero Para la determinación de la proteína presente en el queso fresco y en el lactosucro, se utilizó La técnica de Lowry. 30 La concentración de proteina se calculó comparando las absorbancias contra una curva patrón se seroalbumina (SA) con un intervalo de O a 500 µg_~A/ml. P (Jlg/mL == (Ab!IA5M - 0.2395)/ l.5196Xl0. 1 ftf.lt Curva Patrón La curva patrón que se utilizó para calcular la concentración de proteína presente en los quesos, se presenta en la figura 7. ··--------------------------.. " .. u - -SA 1 u;/rlil) Figura 7. Curva patrón de <>eroalbtimina. (0. 50 iL&sA/ml. (Abs¡, 590 - 0.2395) Curva patrón de Seroalbúmina: SA (µg/mL) = ---------- 0.00252 R=0.9969 Tabla 5. Absorbacias de las diferentes concentraciones de seroalbumina, para realii.ación de la curva patrón. Ser oalbúmina Abs A.= 590 íue/mL) nm 100 0.4596 200 0.7553 300 1.0363 400 l.2574 500 l.4684 Los cambios en la concentración de protelnas retenida en el queso, tanto proteina del lactosucro como caseína: se calcuJaron siguiendo la fórmula siguiente: Donde: • M2 --> concentración de proteína retenida en los quesos elaborados con formaldehldo • M1 -+ concentración de proteína retenida en el queso control (sin formaldehído) 45 5. 2. 7. Determinación de acide.z Se detenninó la acidez total, expresada como ácido láctico, titulando con NaOH 0.1 N, utilizando fenolftaleina como indicador (ambos JT Baker, Xalostoc, México). Preparación de la muestra: se tomaron muestras representativas de los quesos, las cuales se molieron. Técnica: Se pesaron 1 O g de muestra preparada. Se agregó agua a 40 ºe hasta alcanzar un volumen de 105 ml. Se agitó vigorosamente y se filtró la solución por gravedad utilizando papel Whatman # 42. - En un matraz Erlenmeyer de 125 mi se colocaron 25 mi de la muestra ya filtrada y dos gotas de fenolftalelna. Se tituló con NaOH 0.1 N hasta que la muestra tomó un color rasado. La acidez total se calculó de la siguiente manera: % ácido láctko = 46 6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 6.1. Pruebas de cuajado Para visualizar el efecto del fonnaldehido en el proceso de coagulación de la leche, se realizaron pruebas de cuajado, de esta manera se pudo establecer las concentraciones de fonnaldehfdo utilizados a los largo del estudio. Para estas pruebas se empleó 1 O mL de leche y diferentes concentraciones de fonnaldehfdo. Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 6. Tabla 6. Efecto de las diferentes concentraciones de fonnaldehfdo utilizadas durante las pruebas de cuajado de la leche Observaciones Queso % Formaldehldo suero/queso 1 O.O Muy turbio/ sin firmeza. Sinéresis 2 0.01 Muy turbio/ poca firmeza Sinéresis 3 0.02 Muy turbio/poca firmeza. Slniresis 4 0.03 Turbio/firme. Poca slnéruis 5 0.04 Poco turbiedad/ firme. Sin slniresls 6 o.o~ Sin turbiedad/muy firme. Sin sinéresis 7 >O.O~ La leche no cuaj6 a estas concentraciones 49 Una vez establecidas las concentraciones de formaldehfdo a utilizar, se prosiguió a la elaboración del queso fresco. Se realizaron tres series, cada una con 6 quesos; para cada queso se emplearon 550 mL de leche comercial pasteurizada (Lala), y las concentraciones de formaldehfdo seleccionadas se indican en la tabla 7. Cabe mencionar, que se empezó a trabajar con estas concentraciones gracias a la información proporcionada por el quesero que emplea este reactivo para aumentar el rendimiento quesero. De hecho, se probaron concentraciones mayores a 0.05 % de formaldehfdo, sin embargo, la leche no cuajó, como se indica en la tabla 6. Tabla 7. Concentraciones de fonnaldehido empleadas durante la elaboración de queso fresco a lo largo del estudio. Quuo Formaldehldo [formaldchldo] '· uL 1 o o 2 0.01 68 3 0.02 13!5 4 0.03 203 !5 0.04 270 6 0.05 337 Los quesos elaborados con formaldehldo, presentaron mayor firmeza que el queso control (sin formaldehldo), sin llegar al extremo de ser duros. Del mismo modo, se registró menor sinéresis y un mejor manejo en la cuajada, es decir, ésta no se pegaba en el lienzo en que se llevo a cabo el desuerado, de igual forma, no hubo problema al momento de desmoldar los quesos, ya que éstos no se desmoronaban. 50 El suero obtenido de Jos quesos con formaldehído, presentaron menor turbidez y una menor presencia de partículas suspendidas. Los quesos elaborados se ilustran en la figura 8. Figura 8. Queso fresco elaborado con diferentes concentraciones de forrnaldehfdo. Queso 1: O % forrnaldehfdo, queso 2: 0.01% forrnaldehfdo, queso 3: 0.02 % forrnaldohfdo, queso 4: 0.03 % formaldehfdo, quesos: 0.04 % formaldehldo, queso 6: 0.05 % forrnaldehldo. Para comprobar los efectos del fonnaldehído en la cuajada, se realizaron diferentes análisis a los quesos y se reportan continuación. 6.2. Efecto del formaldehido sobre el rendimiento del queso fresco El rendimiento quesero es la cantidad de queso obtenido a partir de una determinada cantidad de leche. En la industria láctea entre mayor sea el valor de este parámetro, mayor es la utilidad y mayor el interés sobre el reactivo que incrementa éste valor. 51 En promedio, el incremento del rendimiento al utilizar formaldehido es 1 O % (tabla 8). Esta tendencia se ilustra en la figura 9, en la cual se observa que el valor máximo de rendimiento se presenta a una concentración de 0.01 % de formaldehído, y a medida que se incrementa la concentración de este reactivo, el rendimiento disminuye, es decir, la relación formaldehído-rendimiento es inversamente proporcional, sin embargo, aún en la concentración más alta de formaldehido, el rendimiento sigue siendo mayor al que presenta el queso control (sin fonnaldehfdo). Con estos datos graficados, se comprueba claramente el efecto positivo que tiene el fonnaldehfdo sobre el rendimiento quesero. % Rendimiento % Formeldehldo + Figura 9. Efecto del las diferentes concentraciones de formaldehido sobre el rendimiento de queso fresco, Los cambios en el incremento del rendimiento de los quesos elaborados con fonnaldehído con respecto al queso control (sin formaldehfdo), se calcularon con base en lo descrito en el punto 5.2.1. Determinación del rendimiento. Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 8. 52 Tabla 8. Incremento del rendimiento en los quesos elaborados con diferentes concentraciones de formaldehído con respecto al queso control (sin formaldeh!do). "º formald11hldo Incremento del Iner11m11nto rendimiento en % promedio 0.01 12.6 0.02 11.2 0.03 10.6 10 % mas que 111 control 0.04 !U 0.05 8.9 6.3. Efecto del formaldehido sobre el contenido de Humedad y Sólidos Totales en el queso fresco Ahora bien, si se analiza cuales son los factores que intervienen en el incremento del rendimiento quesero, nos encontramos con dos parámetros importantes que son, la cantidad de proteína en el queso y la cantidad de agua atrapada en las redes tridimensionales de la éste. Entre mayor sea la concentración de proteína en el queso, mayor será el rendimiento, del mismo modo, si la humedad del queso es mayor (mayor cantidad de agua), el rendimiento quesero también se ve favorecido. Razón por la cual se analizaron algunas características fisicoqufmicasde los quesos obtenidos, como son: humedad, cantidad de proteína, grasa, etc. El contenido de agua retenida en la cuajada (%humedad), es un factor determinante para el rendimiento quesero, a mayor % humedad mayor peso del queso, por tanto mayor rendimiento, sin embargo, si no existe un buen mecanismo de ligamiento de agua dentro de la matriz del queso, la pérdida de agua será mayor, por lo que se presentará el fenómeno de sinéresis. 53 En la figura 1 O, se relacionan Jos mililitros de lactosuero expulsado con respecto a la concentración de formaldehído contenida en los diferentes quesos. En esta gráfica se observa que en efecto, lo quesos con mayor cantidad de formaldehfdo, retienen mayor agua, pues el suero expulsado es menor que el queso control. Estos datos se relacionan con el contenido de humedad que se muestran en la figura 11 . .. .. "' mi de suero .., expluudo "' rro "º .. 00 % Forrnaldehldo • Figura JO. Efecto de la concentración de fonnaldeh!do utilizada en la elaboración de queso, sobre la cantidad de suero expulsado del producto. (mi suero/% formaldehido) En la figura 11, se observa que el contenido de humedad es mayor en los quesos con formaldehfdo que en d queso control. El queso con 0.01 o/o de formaldehído tiene 5 % más de humedad que el control. Esta es una de las razones por la cual, este queso presenta mayor rendimiento, pues la gran cantidad de agua retenida dentro de su matriz es muy alta, proporcionándole mayor peso. Este resultado también se puede observar con la grafica anterior (figura 1 O); pues a mayor humedad, mayor cantidad de agua retenida, por tanto menor lactosuero expulsado. 54 "'·' .... .... % Humedad ., "·' ., .• . ,, + Figura 11. Efecto de la humedad con respecto a la concentración de formaldehldo presente en el queso fresco. Al aumentar el por ciento de humedad, por consecuencia los sólidos totales serán menores, por esta razón, se realizó el análisis de éstos, presentándose los resultados obtenidos en la gráfica 12, donde se presenta la relación de sólidos totales y Ja concentración de formaldehfdo empleada. En efecto, al observar la figura 12, se muestra que una relación inversamente proporcional al por ciento de humedad registrado en la gráfica 11. Si la humedad aumenta los sólidos totales disminuye. Al evaporarse el agua contenida en el queso los sólidos totales se concentran, dando así su valor correspondiente. Con estos resultados se ilustra que el fonnaldehfdo retiene agua, pero no de una fonna directa, sino quizás utilizando un vehlculo captador de ésta. Este vehículo podría ser las proteínas del lactosuero. 55 ºlo Pormaldehldo + Figura 12. Efecto del fonnaldehldo en el porcentaje se sólido totales presentes en el queso fresco. En promedio la humedad aumenta un 3. 13 % cuando se utiliza fonnaldehldo para la elaboración de queso fresco (tabla 9). Tabla 9. Aumento en el contenido de humedad de los quesos elaborados con diferentes concentraciones de formaldehfdo con respecto al queso control. % Formoldehido Aumento en el Incremento promedio contenido de humcdod "· O.O! 5 0.02 2.4 0.03 3.~ 3.13 ~º más que el control 0.04 2.4 0.05 2.4 56 6.4. Efecto del formaldehido sobre la cantidad de proteina del lactosuero en el queso fresco Cuando se elabora un queso, las principales proteínas involucradas en el cuerpo de este alimento, son las caseínas, siendo las proteínas del lactosuero las que se pierden al aplicar una fuerza a la cuajada, en el llamado desuerado, esto por ser proteínas altamente hidrifilicas; sin embargo, también algunas caseínas se llegan a perder, pero en cantidad menor, pues son proteínas hidrofübicas, por lo que no es tan fácil que se encentren en un ambiente hidrofllico como lo es el lactosuero. La pérdida más que nada, se puede deber a la fuerza que se aplica a la cuajada al momento del desuerado o por una mala coagulación de la leche (temperatura, cantidad de cuajo, pH, etc.) Al utilizar formaldehído, hay una variable muy interesante, ya que al parecer, este reactivo retiene en la red tridimensional del queso, tanto a las caseínas que se pueden perder en el desuerado como a las proteínas del lactosuero. En la figura 13, se muestra la relación que guarda la cantidad de proteína soluble con respecto a la concentración de formaldehfdo. En esta gráfica, se puede apreciar que hay mayor concentración de proteína del lactosuero en los quesos elaborados con 0.01, 0.02 y 0.03 % de formaldehldo que en el queso control, sin embargo esta tendencia disminuye en los quesos con mayor concentración de este reactivo (0.04 y 0.05 %); aún así, al comparar con la grafica de rendimiento (figura 9), este parámetro sigue siendo mayor que el control. 57 Prot1lna del lactoauero µg/mL O.O DOI º"' .,, ... nDI % Formaldehldo + Figura 13. Efecto del formaldehído sobre la concentración de proteína soluble retenida en el queso fresco. Lo que podría explicar este comportamiento, es que a estas concentraciones de formaldehído, probablemente, la actividad de la enzima coagulante (cuajo) de la leche se esta viendo afectada por este reactivo, lo que provoca una menor retención de estas proteínas en la matriz del alimento; o bien, a que la extracción de estas proteínas no es adecuada, por lo que al hacer su cuantificación su concentración disminuye, sin embargo, siguen presentes dentro de la matriz del queso, incrementando de esta manera el rendimiento. En cuanto al aumento de proteína del lactosuero en los quesos con O.O 1, 0.02 y 0.03 % de formaldehfdo, se puede decir que en efecto, el formaldehído tiene una interacción con el grupo amino (NH2) de estas proteínas, mediante su grupo carbonilo (-C=O), evitando que éstas se pierdan en el lactosuero, incrementando de esta forma el rendimiento quesero. 58 Ahora bien, las proteínas del lactosuero tiene una gran capacidad de retención de agua, lo que explica el alto valor de la humedad en los quesos con formaldehído y no en el control, pues al haber mayor concentración de estas proteínas hidratadas en el queso, la cantidad de agua presente en este alimento es mayor, por consecuencia el rendimiento también es mayor. Para comprobar esta teoría se realizó una electroforesis al lactosuero de los quesos elaborados; los resultados obtenidos se muestran en la figura 14. En ella se observa que la concentración de proteína en el lactosuero disminuye conforme se aumenta la concentración de formaldehído. Por tanto, con estos resultados se puede decir que en efecto, no se esta llevan a cabo una completa extracción de las proteínas del lactosuero. 62.5 KDa SA 18.3KDa--- p-lg - ·-· •. ., ····~~- ;~· ' ~ 1 1 , f,, , , ,'• ' 2 3 4 5 6 7 8 + Figura U. Electroforesis de extracto de proteína soluble retenida en los quesos elaborados con diferente concentración de formaldehído. 1: P-lactoblubulina (P-lg), 2: Seroalbumina (SA), 3: O.O%, O.O! %, 0.02 %, 0.03 %, 0.04 % y 0.05 % de forrnaldehldo. 59 6.!5. Efecto del formaldehtdo sobre la cantidad caseína en el queso fresco Como se menciona con anterioridad, la principal proteína retenida en la matriz del queso, son las caseínas, sin embargo, algunas se llegan a perder durante el desuerado de la cuajada. La figura 15, muestra el comportamiento de la concentración de caseína, extraída del queso con urea; con respecto a la concentración de formaldehído. Se observa que hay una mayor cantidad de caseína retenida en los quesos con 0.01 y 0.02 % de formaldehído que en el control. Si se comparamos la figura 13 (proteína del lactosuero en queso) y la figura 15 (caseína en queso), notaremos que la relación es la misma, es decir, a mayor concentración de formaldehído, menor cantidad de proteína, incluso a partir de 0.03 % de formaldehído, la disminución en la cantidad de proteína de lactosuero es menor que la pérdida de caseína. Esta tendencia,quizás se deba a la misma razón que la disminución en cantidad de proteína del lactosuero en el queso, es decir, que a estas concentraciones de formaldehído, la actividad coagulante de la enzima se esta afectando. 2~00 2000 1600 CaHlna ug/mL 1000 o o.o 0.01 0.02 0.03 0.04 o.o~ % Form•ldehldo • Figura 15. Efecto del forrnaldehido sobre la caselna contenida en el queso fresco 60 Generalmente la concentración de caseína en el queso, podría representarse con los datos de control, sin embargo vemos un aumento en los quesos con concentración de 0.01 y 0.02 % de fonnaldehído, respectivamente. Este aumento se puede deber al acomplejamiento del fonnaldehído con las caseínas, evitando que estás se pierdan en el desuerado, o bien a que las proteínas del lactosuero se unen a las caseínas, de tal forma que al cuantificar las caseínas, también se está cuantificando a las proteínas del lactosuero, ya que nuestro método de cuantificación no es específico, pues el método de Lowry, se base solamente en la formación del complejo cobre-proteína, no diferenciando el tipo de proteína de que se trate. 6. 6. Efecto del formaldehfdo sobre el contenido de grasa en el queso fresco La estructura del queso es una red tridimensional muy compleja, donde se engloban, muchos de los componentes de la leche, uno de estos componentes es la grasa, que más que ser un factor determinante en el rendimiento quesero, tiene un papel meramente sensorial. Sin embargo, las proteínas al formar esta red tridimensional, atrapan a la grasa, evitando que ésta se pierda. Por tal motivo se estudió el contenido de grasa en los quesos elaborados, esperando con estos resultados, que a mayor cantidad de proteína retenida en el queso, también habría mayor cantidad de grasa, pero los resultados obtenidos no fueron los esperados. En la figura 16, se ilustra el comportamiento del contenido graso en el queso y la concentración de formaldehído. Se observa una tendencia inversamente proporcional, a mayor concentración de formaldehído menor porcentaje de grasa en el queso. Esto se explica posiblemente a que al haber mayor proteína, la red tridimensional es más compacta y rígida, de tal manera que los glóbulos de grasa son expulsados de la matriz del queso, en el momento del desuerado, ya que se aplica una fuerza y siendo estos 61 glóbulos grandes, pues es dificil retenerlos dentro de la matriz. Otra razón seria que el ambiente hidrofübico que en un principio existía se modifica por la presencia de la proteínas del lactosuero que son altamente hidrofilicas, por tanto al retener más agua en el queso, el ambiente se vuelve hidrofilico y la grasa al ser hodrofübica no puede retenerse en la matriz, por tanto tiende a salir. Aunque no se realizaron pruebas sensoriales dentro de este estudio, la disminución del contenido graso en el queso, modifica las características sensoriales como son palatabilidad, olor, color y consistencia del queso, lo cual seria un detrimento en la calidad del producto. % Grasa O.O 0.01 0.02 0.03 % Formald•hldo •Figura 16. Efecto del formaldehldo sobre el contenido graso presente en el queso fresco. 62 6. 7. Efecto del formaldehido sobre el contenido de Grasa en Base Seca, Sólidos No Grasos y Sólidos No Grasos en Base Seca en el queso fresco Para evitar el enmascaramiento de agua por la grasa, se realizó el análisis de los sólidos no grasos en base seca. Los resultados obtenidos se ilustran en la figura 17. En esta gráfica se observa que la grasa en base seca disminuye conforme a se aumenta la concentración de formaldehído. Estos resultados eran esperados, pues al haber menor cantidad de grasa en el queso, los resultados en base seca tendrían la misma tendencia; por tanto la relación es directamente proporcional al contenido de grasa. %GBS" " º"' 00• % Formald11hldo + Figura 17. Comportamiento del porcentaje de grasa base seca respecto a la concentración de formaldehldo y contenido de grasa. 63 En cuanto a los sólidos no grasos y sólidos no grasos en base seca, era de esperarse que hubiera mayor concentración de éstos cuando se aumentaba la concentración de formaldehldo, pues el contenido de grasa disminuyó, aumentando la cantidad de proteína retenida. Estos resultados se ilustran en la figura 18 y 19 respectivamente. %Form•lll•Plldo + Figura 18. Relación re los SNO presentes en queso fresco respecto a la concentración de formaldehfdo % Form•ldahldo + Figura 19. Relación de los SNGBS, respecto a la concentración de formaldehldo y grasa presentes en ol queso fresco. 64 Finalmente, el formaldehído aumentó el rendimiento de los quesos por medio de una mayor retención de agua y proteína tanto del lactsuero como caseínas que se pudieran perder durante el desuerado. Los niveles de grasa se disminuyeron, pues la modificación del medio inicialmente hidrofübico a hidrifilico, debido a la concentración de proteínas del lactosuero; no permitieron la concentración de la grasa dentro de la matriz del queso. De la misma forma, los sólidos grasos en base seca también disminuyeron. Por otro lado, se aumentó el contenido de sólidos no grasos debido al aumento de las proteínas retenidas en el queso, así como los sólidos no grasos en base seca. Los resultados generales obtenidos durante todo el estudio se engloban en la siguiente tabla 1 O. Tabla 10. Resultados generales de los análisis estudiados a los quesos elaborados durante el transcurso de esta tes is. "· formald11hldo affadldo Queso O.O O.O! 0.02 0.03 0.04 0.05 Peto g 100.5 113.13 111,7 111.4 105.4 109,9 R11ndlml11nto 18.26 20.!l7 20.31 20.21 19.2 19.9 "· Acld11z "· 0.045 0.04!'.i 0.045 0.04!'.i 0.045 0.045 Grasa % 14.83 12.7!'.i 11.33 10.92 9.42 9.25 Humedad 'Y. 62.5 65.56 64 64.71 64 64 Proteína solubl11 607.24 776.84 665.71 652.83 600.55 492.17 uo/mL -- Castina uo/mL 1591.6 2284.1 1905.04 1033.88 751 82 480,63 ST "· 37.81 34.64 36 35.29 36.87 36.13 SNG "• 23 21.89 24.84 24.37 27 27 GBS % 39.5 31.81 31.61 30.94 26.26 25.63 SNGBS 'Y. 60.!l6 63.19 68.4 69.1 73.86 74.4 65 7. CONCLUSIONES • Los quesos elaborados con las diferentes concentraciones de fonnaldehído presentan mayor rendimiento que el queso control (sin fonnaldehfdo). En promedio, este parámetro se incrementa en un 10 %. • Se determinó que la concentración de formaldehído que presenta un mejor efecto en el rendimiento en queso fresco es de 0.01 %. A esta concentración también se presenta una mayor concertación de proteína soluble, caseína y humedad, resultados que hacen que se incremente el rendimiento quesero. • La concentración de proteína soluble retenida en el queso con mayor rendimiento aumentó un 28 % con respecto al queso control. En los quesos con 0.02 y 0.03 % de formaldehfdo, el aumento en la retención de esta proteína es de 9.6 y 7.5 % respectivamente. En general, el aumento en la concentración de proteína soluble en los quesos con 0.01, 0.02 y 0.03 % de fonnaldehfdo, fue de 15 % más que el control. • Se determinó que el fonnaldehfdo si fonna un complejo con las proteínas de la leche, por lo que hay una mayor retención de éstas en la matriz del queso. • El fonnaldehfdo se acompleja tanto con las proteínas del lactosuero como con las caseínas, mediante la interacción del grupo amino de éstas (NH2) y el grupo carbonilo (-C=O) de este reactivo. 66 • Las proteínas solubles tienen una gran capacidad de retención de agua, por tal motivo el porcentaje de humedad es mayor, y por consecuencia el rendimiento se incrementa considerablemente. El aumento en el contenido de humedad en todos los quesos elaborados con formaldehído fue de 3 % más que el queso control. • La caseína retenida en el queso con 0.01 % de formaldehído aumentó 43.51 % más que en el queso control. En el queso con 0.02 % de formaldehfdo el aumento en la cantidad de caseína fue de 20 %. En promedio, en estos dos quesos
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