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Diagnóstico Histopatológico ISSN 2469-2123 ¿Qué es la histopatología? el estudio del tejido La histopatología es el estudio de los tejidos, que se utiliza para obtener ….. …. datos sobre: • estructura tisular • composición celular • características citológicas • índice mitótico • distribución celular • vascularización • áreas de necrosis • presencia de agentes etiológicos • límites de la lesión estructura detalle morfología celular mitosis necrosis vascularizació n límites metástasis ¿En qué casos solicitaría una histopatología? Para ver distribución y componentes celulares de la lesión: Ej: - piogranulomas en PIF seco - atrofia de nódulos linfoideos en Enfermedad de Gumboro - granulomas en tuberculosis - diferenciar Enfermedad de Marek (visceral) de Leucosis aviar Para ver agentes etiológicos: Ej: - bacilos ácido alcohol resistentes en TBC - hifas y esporas en focos necróticos en aspergilosis - bacilos intracelulares en brucelosis Para ver cuerpos de inclusión: Ej: - hepatitis infecciosa canina - laringotraqueítis aviar - viruela • ayuda a definir una entidad patológica • confirma o descarta una enfermedad • puede evidenciar la presencia de agentes etiológicos que, junto a la descripción macroscópica del órgano, Distribución y componentes celulares de un granuloma tuberculoso célula gigante linfocitos tejido conectivo Célula epiteloide cuerpo de inclusión bacilos AAR (coloración Ziehl Neelsen) ¿Qué materiales necesita para tomar una muestra? Envases de plástico, cierre hermético, con tapa a rosca Pinza y bisturí; o cuchillo bien afilado Fijador (formol 10%) Guantes Papel, lápiz o etiquetas para rotular los frascos ¿Cómo tomaría la muestra? • Cortar la muestra abarcando la lesión y tejido sano • Tamaño: 0,5 cm x 0,5 cm x 1 cm Enjuagar la muestra con agua corriente, para quitar restos de sangre, y colocarla dentro de un frasco de boca ancha, con tapa a rosca y que contenga fijador. Relación muestra/fijador: 1/9 para que el fijador pueda penetrar por todos los lados de la muestra. Pueden colocarse varias muestras en el mismo frasco, respetando las proporciones del fijador. Formol Rotular colocando una etiqueta en el cuerpo del frasco. Se puede introducir un papel, escrito con lápiz, dentro del frasco con los mismos datos que la etiqueta. muestra Fijadores Formol 10% : 1 parte de formol puro (formaldehido al 40%) 9 partes de agua Tiempo de fijación: 8 hs a 24 hs dependiendo del tamaño de la muestra. Formol bufferado: formol puro……………………………………… 100 ml fosfato sódico monobásico……............ 4 g fosfato sódico dibásico (anhidro) ……. 6,5 g agua destilada …………………………………. 900 ml pH: 7-7,2 Tiempo de fijación: 3 hs Fijación es la interrupción del proceso de degradación celular conservando intacta la estructura tisular. Un defecto en esta etapa no puede ser corregido. • Una vez rotulados los frascos, envolverlos en papel absorbente y colocarlos dentro de bolsas plásticas bien cerradas (para evitar derranes de líquidos). • ubicarlos dentro de una caja de telgopor, agregando bollos de papel para evitar que se desplacen o vuelquen. • El protocolo y la planilla oficial (en casos de muestras para diagnóstico de tuberculosis, brucelosis, etc) se colocarán dentro de una bolsa plástica bien cerrada, en la misma caja. • Cerrar bien la caja y rotular. • Si debe ser transportado a distancia, avisar al laboratorio destinatario: día y hora de llegada, empresa de trasporte y número de envío. ¿Cómo remite la muestra? Datos del profesional que remite: apellido, nombre. TE, e-mail Datos del propietario: apellido y nombre Datos del establecimiento: RENSPA. Tipo de explotación. Datos del animal: N° de caravana u otro tipo de identificación, especie, raza, sexo, edad, pelaje. Descripción de la muestra: ubicación, tamaño, forma, bordes, color, consistencia, aspecto al corte, tiempo de evolución, compromiso de linfonódulos, método de obtención y fijación. Diagnóstico presuntivo y tratamiento recibido. Firma, lugar y fecha. Protocolo de remisión Protocolo Frascos rotulados con muestras Caja de telgopor • Una vez finalizada la tarea, deberá eliminar el material sobrante y desinfectar el lugar, según normas de bioseguridad. • Desinfectar adecuadamente el material utilizado (con amonio cuaternario, hipoclorito de sodio, alcohol etílico 70°-96°) • Descartar en bolsas rojas todos los residuos patológicos incluyendo guantes, delantales descartables, etc • Los materiales punzantes (hojas de bisturí, agujas) deberán introducirse en frascos descartadores plásticos. • Si las muestras se toman a campo será importante quemar o enterrar todo el material biológico no utilizado, según normas de bioseguridad. ¿Cómo elimina el material sobrante? • Las muestras son incluidas en parafina para darle firmeza al tejido y mantener su estructura. • Se hacen cortes de 5 µ de espesor con un micrótomo. • Se colorea y se observa al microscopio. Una vez en el laboratorio …. micrótomo taco de parafina corte coloreado Hematoxilina / eosina: ofrece distintas tonalidades (azules y rosadas) para reconocer estructura y detalles celulares. Puede indicar presencia de algún agente etiológico que requerirá coloraciones especiales para una mejor visualización. Gram: (+) las bacterias se ven de color azul/negro (-) las bacterias se ven color rojo Ziehl Neelsen: para bacterias ácido alcohol resistentes Estas bacterias y los ceroides se verán de color fucsia o rojo Coloraciones Datos del profesional que remite: apellido, nombre. TE, e-mail Datos del propietario: apellido y nombre o Datos del establecimiento: RENSPA. Tipo de explotación. Datos del animal: N° de caravana u otro tipo de identificación, nombre. Descripción macroscópica: breve descripción de la lesión descripta por el veterinario remitente. Puede agregarse algún dato observado por el paólogo al cortar o procesar la muestra. Descripción microscópica: estructura, componentes y detalles celulares, distribución de las células, límites de la lesión, índice mitótico, vascularización, metástasis. Presencia de bacterias, hongos, cuerpos de inclusión. Coloraciones: indicar qué coloraciones se utilizaron. Diagnóstico: el que corresponda a la observación e interpretación microscópica. Firma, lugar y fecha. Protocolo de remisión • Mc Gavin M. Donald; Zachary, James F. (2007). Pathologic basis of veterinary disease. Mosby, St Louis, Missouri, USA. •Quse, V. y Falzoni, E. (2008). Patología en fauna silvestre. Manual y Atlas. Vázqez Mazzini Editores 1° ed. (2008). ISBN 978-987-98602-4-3 • Jubb K.V.F., Kennedy P.C.; Palmer, N. (1993). Pathology of domestic animals. 4° Edition. Academic Press, USA. • Jubb K.V.F., Kennedy P.C.; Palmer, N. (1991). Patología de los animales domésticos. 3° Edición. Agropecuaria Hemisferio Sur. Bibliografía
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