Práctica 6 Extracción de pigmentos mediante cromatografía en papel - Diana Becerril (1)

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PRÁCTICA 6 
FARMACOGNOSIA 
LABORATORIO EN LÍNEA 
ENE-JUN-2021 
 
EXTRACCIÓN DE PIGMENTOS FOTOSINTÉTICOS MEDIANTE CROMATOGRAFÍA EN PAPEL 
OBJETIVO: Mediante la cromatografía en papel separar e identificar los pigmentos presentes en 
células vegetales y en el caso de los pigmentos fotosintéticos observar su propiedad de 
fluorescencia. Comparar la afinidad de diferentes extractantes y concluir cuál es el mejor. 
ANTECEDENTES: 
La clorofila y la fotosíntesis 
La clorofila es el pigmento responsable del color verde de las plantas, algas y algunos tipos de 
bacterias y absorbe entre 400 y 500 nm (tonos azules y rojos). La hojas y tallos de las plantas son de 
color verde porque del espectro de luz que el sol refleja, solo refleja las longitudes de onda que las 
hojas no están absorbiendo. 
La fotosíntesis se lleva a cabo en los cloroplastos, gracias a la clorofila que está presente en ellos, 
las células vegetales son capaces de transformar la energía lumínica en energía química a través de 
la fotosíntesis. 
En estos organelos se almacenan los pigmentos fotosintéticos de un vegetal: clorofila A (verde 
intenso), clorofila B (color amarillo-verde), xantofilas (amarillo claro), carotenos (amarillo-
anaranjado); cada pigmento posee un color en específico debido a su estructura química con dobles 
enlaces que determinan la absorción selectiva a determinadas longitudes de onda. 
 
Fig. 1. Cloroplastos 
Mediante la fotosíntesis los vegetales transforman el agua y el dióxido de carbono en oxígeno y 
carbohidratos de donde obtienen la energía para reproducirse. 
 
Tipos de clorofila 
Clorofila A: Está presente en los cloroplastos y propicia la conversión de energía lumínica en energía 
química. 
Clorofila B: Posee una coloración verde y está presente en algas y árboles, su función es aumentar 
la capacidad de absorción de la luz de la clorofila A. 
Clorofila C: Se encuentra en algunas algas, su función es ayudar a la absorción de la clorofila A a 
absorber la luz solar, solo se encuentra al inicio de la fotosíntesis. 
Clorofila D: Fue observada en un alga roja, más tarde se encontró en la cianobacteria Acalochloris 
marina que se desarrolla sujeta a estas algas. 
Clorofila F: Permite la absorción de la luz roja con mayor efectividad que cualquiera de los otros 
tipos, fue descubierta en estromatolitos en Australia. 
Antocianinas 
Las antocianinas son un grupo de pigmentos hidrosolubles que se hallan en las células de ciertos 
vegetales y que dan un color rojo, púrpura o azul a los flores y frutos. Se encuentran disueltas en el 
citoplasma y líquido vacuolar y cambian de color según el pH del medio. Cumplen diversas 
funciones: protegen al vegetal de los rayos UV, atraen insectos para el proceso de polinización. 
 
Figura 2. Célula vegetal Figura 3. Algunos alimentos ricos en antocianinas 
En la alimentación humana previenen el cáncer, protegen los vasos capilares de la retina 
favoreciendo el sentido de la vista, por ser antioxidantes protegen al corazón de enfermedades 
cardiovasculares. 
Cromatografía en papel (CP) 
La cromatografía en papel se aplica particularmente a productos polares como carbohidratos, 
aminoácidos, ácidos nucleicos, ácidos orgánicos y fenoles. Se trata de un método muy empleado, 
aunque ha sido paulatinamente sustituido por la cromatografía en capa fina. La separación se realiza 
sobre tiras de papel poroso, participando tanto fenómenos de partición como de adsorción. Los 
primeros predominan cuando se emplea como fase móvil una mezcla formada por agua u otro 
líquido orgánico inmiscible, por ejemplo, n-butanol. 
Por el contrario, las fuerzas de adsorción predominan cuando se emplea el agua pura o acidulada 
para separar fenoles y heterósidos. 
En la cromatografía en papel los compuestos separados se visualizan mediante el color de la mancha 
separada o de su fluorescencia a la luz UV tras su reacción con un agente cromogénico, previamente 
rociado o por inmersión de la tira de papel. 
Otra ventaja de la cromatografía en papel es que los valores de RF (valor de la distancia que un 
compuesto separado recorre en relación al frente del disolvente en unas condiciones dadas) son 
muy reproducibles. 
Los compuestos separados pueden ser eluidos del cromatograma, de modo individual, recortando 
las manchas y tratándolas con un disolvente apropiado, para luego proceder a la determinación 
cuantitativa a través de un método adecuado: fluorescencia, colorimetría, absorción UV. Así se 
pueden valorar drogas como digital, cornezuelo de centeno, cicuta, lobelia, nuez vómica, opio, 
rauwolfia y otras. 
 
 Fig. 4 Digitalis purpurea Fig. 5 Conium maculatum 
Digital Cicuta 
 
 Fig. 6. Lobelia erinus Fig. 7. Papaver somniferum 
Lobelia Adormidera (se extrae opio) 
 
Tabla 1. Polaridad de solventes 
Los pigmentos vegetales presentan un grado diferente de solubilidad en disolventes apolares, lo 
que permite su separación, cuando una solución de las mismas asciende por capilaridad a través de 
una tira de papel filtro, expuesta verticalmente sobre una película de un disolvente orgánico, ya que 
las más solubles se desplazarán a mayor velocidad, acompañarán fácilmente al disolvente a medida 
que éste asciende, las menos solubles avanzarán menos en la tira de papel filtro. 
Los pigmentos clorofílicos son insolubles en agua, pero sí son solubles en solventes orgánicos como 
alcohol etílico o acetona. 
MATERIALES: 
1. Mortero 
2.Tijeras o 
cuchillo 
3.Embudo 
4. Filtro de 
café (para 
filtrar) 
5. Papel filtro o 
filtro de café 
(para correr la 
cromatografía) 
6.Cajas Petri o 
vasos 
transparentes 
7. Alcohol 
etílico 96° o 
acetona 
8.Detergente 
líquido 
 
9.Agua 
10.Hojas rojas 
o moradas 
(frescas) 
11.Hojas 
verdes 
(frescas) 
12.Lámpara de 
luz UV 
 
NOTA: El procedimiento siguiente se llevará a cabo con hojas verdes y hojas rojas (por separado). 
Las hojas rojas pueden ser del árbol Prunus cerasifera (ciruelo rojo), hojas de betabel o cualquier 
hoja (no flor) de color rojo o morado. Las hojas verdes pueden ser espinaca, lechuga, perejil, menta, 
brócoli, etc. 
 
PROCEDIMIENTO: 
1. Separar los tallos y trocear las hojas con tijeras o con un cuchillo. 
2. Triturar los fragmentos vegetales en un mortero hasta formar una pasta. 
3. Agregar 30 ml alcohol y continuar triturando hasta lograr un líquido de color verde intenso. 
NOTA: Para comparar la afinidad del extractante por los compuestos a extraer, este experimento se 
realizará con estos 3 extractantes: agua, etanol 96° o acetona y detergente líquido (usando los 
mismos volúmenes). Comparar el aspecto de los 3 extractos obtenidos de clorofila. Incluir en una 
tabla estas observaciones en el reporte y fotos. 
4. Dejar reposar 25 min. 
5. Filtrar la solución utilizando el papel filtro y si es posible un embudo. Presionar contra el 
medio filtrante las hojas para asegurar que se extraen la mayor cantidad de pigmentos. 
NOTA: Para el extracto de las hojas rojas o moradas no filtrar, únicamente decantar. 
6. Pasar el filtrado a una caja petri o vaso transparente. 
7. Cortar el papel filtro en rectángulos, el tamaño dependerá del recipiente donde se coloque 
el papel (tamaños sugeridos: 3*6 cm, 6* 10 cm, 6*6 cm) de cualquiera de estas 2 formas. 
Incluir una foto del montaje de la cromatografía de cada estudiante. 
 
Figuras 8 y 9. Montaje de la cromatografía en papel 
8. Introducir la tira de papel de tal forma que el extremo quede empapado en la solución. 
9. Dejar en contacto con el alcohol hasta que todo el solvente suba por toda la tira de papel. 
10. Al cabo de 1 h aproximadamente, aparecen en la superficie del papel unas bandas de 
colores, que señalan a los distintos pigmentos: 
 
 Betalaínas Violeta 
Tabla 2. Pigmentos vegetales y sus coloraciones 
11. Dejar secar el papel. Los pigmentos se observan mejor cuando el papel está seco.12. Usar lámpara de UV si es posible para observar bajo la luz ultravioleta la tira de papel y el 
extracto del vaso de clorofila. Incluir sus observaciones en el reporte. 
13. Identificar los pigmentos separados, de acuerdo a las bandas que aparecieron en el papel 
de cada estudiante. Pueden tomar de referencia los siguientes esquemas: 
 
Figuras 10 y 11. Cromatografías en papel de pigmentos vegetales 
Lápiz o varita 
para sostener 
 
 
14. Incluir en su reporte las tiras de papel filtro de todos los integrantes. 
NOTA: La cromatografía solo se hace para el extracto de alcohol. 
CUESTIONARIO 
1. Investigar la fórmula de la clorofila A y B, los carotenos y las xantofilas y a qué longitudes de 
onda absorben luz. 
2. Investigar la importancia de la clorofila en el metabolismo de las plantas e incluirla en la 
investigación previa. 
3. Investigar cuáles son los beneficios de consumir clorofila. 
4. ¿Qué es lo que determina que sobre el papel filtro los pigmentos aparezcan a diferentes 
distancias? 
5. ¿A qué creen que se deba la diferencia de los aspectos en los extractos con los diferentes 
extractantes (en caso de ser diferentes)? 
 
BIBLIOGRAFÍA: 
 Diplomado en Herbolaria. Módulo II. Principios Herbolarios. La Fotosíntesis. 
https://elaesi.edu.mx/distancia/. Revisado el 28 de febrero 2021. 
 Villar del Fresno Ángel María (1999). Farmacognosia General. Control de calidad y pureza 
de drogas. Editorial Síntesis. 
 Atlas de histología vegetal y animal. La célula. Vacuolas. Disponible en: 
https://mmegias.webs.uvigo.es/5-celulas/5-vacuolas.php. Revisado el 28 de febrero 2021. 
 Garzón G.A. Universidad de Colombia. Departamento de Química. 2008. Las antocianinas 
como colorantes naturales y compuestos bioactivos: Revisión. Disponible en: 
http://www.scielo.org.co/pdf/abc/v13n3/v13n3a2.pdf. Revisado el 28 de febrero 2021. 
 
Reporte debe incluir: 
a) Antecedentes 
b) Diagrama de flujo de las actividades 
c) Resultados solicitados en cada experimento 
d) Cuestionario 
e) Conclusiones 
f) Bibliografía 
 
https://elaesi.edu.mx/distancia/
https://mmegias.webs.uvigo.es/5-celulas/5-vacuolas.php
http://www.scielo.org.co/pdf/abc/v13n3/v13n3a2.pdf