Determinación de proteínas por laboratorio

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Proteínas
Universidad Autónoma de Querétaro
Facultad de Ciencias Naturales
Licenciatura en Nutrición
Método Kjeldahl
Este método se usa para la determinación de nitrógeneno en muestras orgánicas 
En esta técnica se digieren las proteínas y otros compuestos orgánicos de los alimentos en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores. El nitrógeno orgánico total se convierte en sulfato de amonio mediante la digestión. La mezcla resultante se neutraliza con una base y se destila. El destilado se recoge en una solución de ácido bórico. Los aniones de borato así formado se titulan con H2SO4 estandarizado para determinar el nitrógeno contenido en la muestra.
Digestión
Digestión: conversión del Nitrógeno (proveniente de las proteínas) en ion amonio mediante calentamiento a una temperatura de 420º C aproximadamente, en bloque de digestión con adición previa de ácido sulfúrico y catalizador (sulfato de cobre (II) ), que desencadenan la conversión del nitrógeno de la muestra en amonio. 
Así salen los tubos después de la digestión
Destilación
Destilación: separación por arrastre con vapor del amoníaco y posterior solubilización en una solución ácida de concentración conocida. En esta etapa se adiciona NaOH a la disolución de amonio obtenida previamente, generándose NH3 y vapor de agua, que arrastra al mismo. La solubilización posterior en la solución ácida permite la conversión de NH3 a catión amonio, el cual se encuentra junto con el exceso de solución ácida añadido.
Destilación: Colocación del tubo y matraz en el equipo antes de iniciar.
Destilación: después de 5 minutos hay un cambio de color en el matraz y cambia a un color verde.
Titulación
La titulación: es un método de análisis químico cuantitativo en el laboratorio que se utiliza para determinar la concentración desconocida de un reactivo a partir de un reactivo (H2SO4 o HCl) con concentración conocida.
Titulación
La titulación: es un método de análisis químico cuantitativo en el laboratorio que se utiliza para determinar la concentración desconocida de un reactivo a partir de un reactivo (H2SO4 o HCl) con concentración conocida.
Se agrega H2SO4 valorado para titular la solucion que sale de la destilación , se busca que cambie de color verde a rosa.
Color final de la titulación
Ecuaciones
%N=(ml H2SO4 muestra- ml H2SO4 blanco)(N del H2SO4)(14)(100)/peso de la muestra en mg
%proteína= (%N)(6.25)
El  peso de nitrógeno en los aminoácidos……
EJEMPLO 
%N= (13.8 ml-0.1 ml)(0.077 N)(14)(100)/505.7mg
%N= 2.92%
%Proteína=(2.92%)(6.25)= 18.2526%
(215g de ST/dieta)(18.2526)/100= 39.24g
39.24g*4kcal=156.96kcal
EJEMPLO 2
Ml de H2SO4 gastados en titulación 9.32
Ml de H2SO4 gastados del blanco= 0.0
Normalidad del H2SO4 = 0.35
Peso en mg de la muestra 498.7
%N= 9.1574 %
%Proteína=(9.15 %)(6.25)= 57.2338 %
(350g de ST/dieta)( 57.2338 )/100= 200.31g
200.31 g*4kcal=801.24 kcal