1 RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS

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RECONOCIMIENTO DE BIOMOLÉCULAS ORGÁNICAS Y PRUEBAS DE SOLUBILIDAD
RECONOCIMIENTO DE BIOMOLÉCULAS ORGÁNICAS Y PRUEBAS DE SOLUBILIDAD
RECOGNITION OF ORGANIC BIOMOLECULES AND SOLUBILITY TESTS
Gian Carlos Naranjo, Michael Andres Velásquez, Brayan Jiménez Lemus
 
 Programa: Quimica Facultad: Ciencias básicas y tecnologías. Universidad del Quindío 
gcnaranjor_1@uqvirtual.edu.co, mavelasquezl_2@uqvirtual.edu.co,bsjimenezl@uqvirtual.edu.co
Enviado: 02 – septiembre -2018
Universidad del Quindío. Armenia Quindío, Colombia
Email: cmmejia@uniquindio.co
RESUMEN
En el siguiente informe se encuentra la información de la primera practica en donde se realizó el reconocimiento de biomoléculas como los glícidos (Glucosa, fructosa, sacarosa, almidon, lactosa); lípidos (Aceite mineral); proteinas (hemoglobina, cisteína); aminoacidos (glicina 98%, glicina 99%); también se llevaron a cabo pruebas de solubilidad utilizando glicerina, aceite mineral en agua, etanol y cloroformo. El análisis de dichas pruebas se hace a nivel cualitativo, con determinación colorimétrica y como principal herramienta la observación.
Palabras claves: Glícidos, lípidos, proteínas, aminoácidos, identificación 
ABSTRACT
In the following report is the information of the first practice where the recognition of biomolecules as glycides (Glucose, fructose, sucrose, starch, lactose) was performed; lipids (mineral oil); proteins (hemoglobin, cysteine); amino acids (glycine 98%, glycine 99%); solubility tests were also carried out using glycerin, mineral oil in water, ethanol and chloroform. The analysis of these tests is done qualitatively, with colorimetric determination and observation as the main tool.
Keywords: Glycides, lipids, proteins, amino acids
INTRODUCCIÓN 
Las biomoléculas o moléculas biológicas son las moléculas que están presentes únicamente en los organismos vivos. La mayoría de las biomoléculas están compuestas de átomos de oxígeno, hidrógeno, nitrógeno y/o carbono. Estos átomos o elementos se llaman bioelementos, ya que son los elementos principales que forman los seres vivos [1].De esta simple definición radica la importancia de esta práctica, cuyo objetivo principal es reconocer e identificar mediante pruebas colorímetros las biomoléculas anteriormente mencionadas. 
Actividades
Test para la detección de almidón.
El almidón es un polisacárido, fuente importante de energía en toda dieta bien balanceada. Para su reconocimiento cualitativo se usa el reactivó lugol: La coloración producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molécula de almidón. 
No es, por tanto, una verdadera reacción química, sino que se forma un compuesto de inclusión que modifica las propiedades físicas de esta molécula, apareciendo la coloración azul violeta. [2]
Test para la deteccion de glícidos
Una de las propiedades más destacadas de los monosacáridos en general (glucosa, fructosa, etc.) y de algunos disacáridos (lactosa, etc.) es el poder reductor que les confiere el grupo aldehído o cetona de sus moléculas. Esta propiedad de los azúcares se pone de manifiesto frente a sales de cobre II. 
El reactivo de Fehling es utilizado para detectar la presencia de azúcares con capacidad reductora, tiene dos soluciones separadas (A y B), que se mezclan en partes iguales en el momento de utilizarlo. La mezcla de las soluciones A y B de Fehling es de color azul intenso. La formación de un precipitado rojo ladrillo de Cu2O con la solución de Fehling es el resultado positivo de la presencia de un azúcar reductor. La reacción que ocurre es de tipo oxido-reducción, en la cual el grupo funcional aldehído o cetona del azúcar reductor se oxida a ácido y el Cu II se reduce a Cu I. [3]
Test para la deteccion de proteinas y aminoacidos
Una de las reacciones más utilizadas para la identificación de proteínas es la de Biuret, característica de proteínas y péptidos, pero no de los aminoácidos libres, ya que indica específicamente la presencia de enlaces peptídicos. [3], en este caso se emplea el reactivo de ninhidrina, ya que reacciona con los complejos alfa-aminoacidos. La prueba de ninhidrina puede dar positivo en proteinas y aminoacidos, mientras que Biuret solo da positivo en proteinas. [2]
Test para la deteccion de lípidos 
Las grasas se colorean selectivamente de rojo anaranjado en presencia del colorante Sudán III o Sudán IV. El colorante es soluble en aceite y difundirá en gotas de aceite, tornándolas rosadas - anaranjadas. [3]
Test de solubilidad
Dependiendo de su estructura, se determina su polaridad [4], si el compuesto es polar será soluble en compuestos polares como el agua, si el compuesto es apolar será soluble en compuestos apolares como el éter, el cloroformo)
Materiales y método
10 tubos de ensayo – gradilla – 3 Barillas de agitación – plancha de calentamiento – estufa – 
Método para la identificación del almidón: en un tubo de ensayo se adiciona un poco de almidón, se adicionan de dos a tres gotas de Lugol (observar). 
Método para la identificación de glúcidos: adicionar carbohidratos en tubos por separado, agregar 10 gotas de agua y 1 ml de Fehling A y B. mezclar y poner a baño maría por treinta segundos(observar). 
Método para la identificación de proteínas y aminoácidos: 
Procedimiento a; tomar una cantidad de proteína y aminoácidos por separado, diluir en agua y agitar hasta homogeneidad, sacar un mililitro de cada solución en tubo de ensayo y adicionar cinco a siete gotas de Biuret. 
 Procedimiento b; ; tomar una cantidad de proteína y aminoácidos por separado adicionar un mililitro de ninhidrina y llevar a baño maría por 10 minutos. 
Método para la identificación de lípidos: Agregar dos mililitros de la muestra y agregar Sudan III(observar).
Prueba de solubilidad: se mezclan los compuestos como lo indica la Tabla 1. 
Resultados y discusión 
· Test para la detección de almidón.
 Figura 1. Prueba de lugol con almidon, 
En este tubo de ensayo se obtuvo positivo para almidón usando la prueba de Lugol; se observa que en el tubo se produce una coloración oscura y marrón, sin embargo en la teoría el color debe ser azul negruzco, (esto se debe a que en esta práctica se usaron menores cantidades y eso cohíbe la buena observación del color) el cambio de color se da ya que en esta reacción el yodo entra a la estructura helicoidal del almidón, es decir, que los átomos de yodo (Lugol) se introduce entre las espirales provocando la absorción o fijación de yodo en las moléculas del almidón (amilosa). [2]
· Test para la detección de glícidos
La reacción de Fehling se utiliza para la determinación de azucares reductores, la prueba positiva para la misma debe de dar como resultado un color rojizo, la tonalidad del rojo cambia según la concentración de azúcar en cada solución. La acción se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de los aldehídos el cual se oxida a ácido y se reduce la sal de cobre en medio alcalino a óxido de cobre, formando un precipitado de color rojo. [3]
Glucosa positiva:
Antes de calentamiento Después del calentamiento 
 Figura 2. Prueba de Fehling Figura 3. Prueba de Fehling con glucosa con glucosa
Fructuosa positiva:
 Figura 4. Prueba de Fehling Figura 5. Prueba de Fehling con fructuosa con fructuosa
Esta reaccion no presenta el cambio colorimetrico optimo, esto se puede producirpor contaminacion en el la fructuosa 
Lactosa positiva: 
 Figura 8. Prueba de Fehling Figura 9. Prueba de Fehling con lactosa con lactosa
Sacarosa negativa:
Como se puede observar la sacarosa no es un azúcar reductor y no presenta cambio en la coloración.
 Figura 6. Prueba de Fehling Figura 7. Prueba de Fehling con sacarosa con sacarosa
· Test para la deteccion de proteinas y aminoacidos
Prueba biuret Prueba ninhidrina
 Figura 10. Hemoglobina, positivo Figura 11. Hemoglobina, positivo 
 Figura 12. Caseina, positivo Figura 13. Caseina, positivo 
 Figura 14. Glicina al 99% y 98%, Figura 15. Glicina al 99% y 98%, negativo positivo
En el caso de la Hemoglobina y la caseina dan positivo con biuret porque existen enlaces pedtidicos que se cordinan al Cu+2 que esta en disolucion formando un complejo quelato, lo hacen por medio de los electrones del nitrogeno que estan disponibles. La intensidad del color es proporcional a la concentracion de proteinas, el limite menor es 0, 25 mg de proteina. En el caso de los aminoacidos(Glicina) ésta prueba no funciona porque no aislan el Cu+2, debido a que la coordinación no es estable como la producida por el efecto quelato.
La prueba con ninhidrina funciona tanto para enlaces peptidicos como para aminoacidos, es un oxidande fuerte en un pH de 4 a 8, la ninhidrina reacciona con el grupo amino, lo oxida y libera amonio el cual condensa con la ninhidrina reducida y posteriormente esta reaccionará con una ninhiidrina libre. Por eso es positivo para proteinas, peptidos y aminoacidos. 
· Test para la detección de lípidos 
Reactivo Sudan III
 Figura 16. Aceite, positivo Figura 17. Glicerina, negativo
 Figura 18. Etanol, negativo Figura 19. Agua, negativo 
El sudan III es lipofilico por eso cuando existe la presencia de un lipido lo colorea, su baja polaridad lo hace miscible con estos. Es muy util porque la gran mayoria de colorantes son polares.
El aceite es totalmente misible por su afinidad apolar y estructural, en cambio la glicerina a pesar de ser neutra su estructura no permite la afinidad con el sudan III.
Desconocemos el fenomeno que se da con el etanol.[4]
Test de solubilidad
La estructura molecular de las sustancias a emplear definen la solubilidad de la misma [4], es decir, si la muestra tiene una estructura molecular que presente polaridad, pues será disuelta en sustancias igualmente poles, de la misma manera sucede con las sustancias apolares, se diluirán en sustancias igualmente apolares.
De esta manera con solo saber la polaridad de la sustancia teoricamente se puede proponer el resultado:
	polares
	Agua 
	etanol
	glicerina
	cisteina
	apolares
	aceite
	cloroformo
	
	
La pureza del reactivo y la intencidad de la polaridad tambien son influyentes en el resultado practico:
	Muestra
	Observaciones
	Aceite + cloroformo
	No soluble
	Aceite + agua
	No soluble, forma miscelas
	Aceite + etanol
	No soluble, el aceite forma burbujas
	Glicerina + cloroformo
	No soluble
	Glicerina + agua
	Soluble en cualquier proporcion
	Glicerina + etanol
	Parcialmente soluble, se disuelve
	Cisteina + cloroformo
	No soluble
	Cisteina + agua
	Soluble
	Cisteina + etanol
	Parcialmente soluble
	Glicina + cloroformo 
	No soluble
	Glicina + agua
	Soluble
	Glicina + etanol
	Parcialmente soluble
Tabla 1. Test de solubilidad
CONCLUSIONES 
· Es posible la identificación de las diferentes biomoléculas por medio de reacciones, colorantes y solubilidad. nos indica que tipo de biomolécula es.
· El sudan III no identifica todos los lípidos, porque es una prueba de solubilidad y algunos lípidos no solubilizan con este. 
· . podemos diferenciar fácilmente un aminoácido de un proteína con Biuret ya que los aminoácidos no pueden formar complejos con el Cu+2
BIBLIOGRAFÍAS
[1] Martinez, R. (18 de Septiembre de 2015). Area ciencias. Obtenido de http://www.areaciencias.com/biologia/biomoleculas.html
[2] Villegas, C. (s.f.). Escuela bioquímica. Obtenido de https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-i/prueba-del-almidon
[3] Velurtas, S. M. (31 de Agosto de 2018). Estudio y reconocimiento de biomoleculas. Obtenido de https://www.researchgate.net/publication/267689885_ESTUDIO_Y_RECONOCIMIENTO_DE_LAS_BIOMOLECULAS_QUE_FORMAN_PARTE_DE_LOS_ORGANISMOS_VIVIENTES
[4] Mckee, T. (2003). Las bases moleculares de la vida. Oxford university press: the MC-GRAW - HILL COMPANIES, INC.