3 TÉCNICAS Y MÉTODOS DE AISLAMIENTO, SELECCIÓN Y RECUENTO DE MICROORGANISMOS

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Presentado por:
Gian Carlos Naranjo Rojas
Michael Andrés Velasquez López
Juliana Andrea Martínez Flórez
Práctica de laboratorio III
Microbiología
Programa de Química
Facultad de Ciencias Básicas y Tecnologías
Universidad del Quindío
17/04/2019
TÉCNICAS Y MÉTODOS DE AISLAMIENTO, SELECCIÓN Y RECUENTO DE MICROORGANISMOS
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Objetivos
Introducción
Aislamiento
Siembra
Morfología
 
Recuento 
CONTENIDO
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Dar a conocer y realizar las técnicas de análisis de ambientes. 
Tener en cuenta las técnicas de muestreo para realizar las técnicas de análisis. 
Determinar la calidad microbiológica de ambientes y superficies de un lugar determinado. 
OBJETIVOS
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 MICROORGANISMOS
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Tiene mucho texto, trate de resumir lo mas importante-------- Puede poner Beneficios y poner imagenes asi relacionadas para hacerlo mas dinamico y ya usted habla todo lo que tenga que decir............ el titulo es que es la arracacha asi como esta e la de contenidos, pongalo centrado en tamaño 25 como estan los demas, recuerde que el subtitulo no lleva signos de puntuacion y la letra del demas contenido 18 (sugerencias)
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UTENSILIOS
HISOPO
PIPETA PASTEUR
MECHERO
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AJUGAS DE INOCULACIÓN
ASAS DE INOCULACIÓN
ASA DE DIGRALSKY
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 MEDIOS DE CULTIVO 
agar papa dextrosa (PDA)
agar plate count (PCA)
caldo bilis verde brillante (BRILA)
 agua peptonada
Este medio es recomendado para realizar el recuento colonial. También puede ser utilizado para promover el crecimiento de hongos y levaduras de importancia clínica.
Es un medio de crecimiento microbiológico comúnmente utilizado para evaluar o monitorear el crecimiento bacteriano "total" o viable de una muestra.
Es un medio de crecimiento mínimo. La formulación del agua peptonada permite el cultivo de organismos no fastidiosos.
 Se utiliza para la detección de bacterias coliformes en agua, alimentos y productos lácteos en un entorno de laboratorio. 
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TÉCNICAS DE AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
AISLAMIENTO POR EXTENSIÓN EN SUPERFICIE
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AISLAMIENTO POR AGOTAMIENTO O POR ESTRÍA MÚLTIPLE
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AISLAMIENTO POR DILUCIÓN EN MASA.
VERTIDO EN PLACA
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solución salina
peptonada (NaCl al 1.8% - Peptona al 0.2% ).
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TÉCNICA DE LOS CUATRO CUADRANTES
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TÉCNICA DE LOS TRES GIROS
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Materiales para la siembra 
Asa:
En argolla o anillos, no calibrada.
 
Asa recta o en hilo.
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Asa de platino en anillo.
Asa espatulada.
Asa de alambre grueso en “L”
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Aguja de disección con punta aguda.
Hilos de platino:
Asas de Driglasky
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Hisopos o escobilla:
Inoculaciones y siembras: Son aquellas técnicas cuya finalidad es depositar una parte de la muestra objeto de estudio sobre el medio de cultivo para obtener un crecimiento visible en forma de colonias. 
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JUSTIFICACIÓN 
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TÉCNICAS DE SIEMBRA.
Puede realizarse en:
Medio liquido: 
En tubo: 
• Con asa de platino: a partir de una colonia de una suspensión bacteriana o a partir de una muestra biológica. 
• Con torunda o escobillón: a partir de una muestra biológicas o de una suspensión bacteriana. 
• Con pipeta: a partir de una suspensión bacteriana. 
o Medio solido:
En placa:
•  Inoculación parcial: con asa de platino o con torunda. 
•  Inoculación total: con asa de platino, con torunda por inundación, por inmersión con asa de Driglasky, en profundidad o por contacto. 
En tubo: 
•  Inclinado: por picadura en profundidad o por estría en superficie inclinada. 
•  Recto: por picadura en profundidad. 
medio semisólido:
En tubo: 
• Por picadura en profundidad.
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MORFOLOGÍA Y CRECIMIENTO DE LAS COLONIAS
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Ejemplos:
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MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO BACTERIANO
Métodos para el conteo de organismos viables
CONTEO EN CAJA
Número de microorganismos en relación UFC.
Diluciones concentradas
Bacterias y  levaduras
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VACIADO Y EXTENDIDO EN PLACA
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MÉTODO DE MILES Y MISRA
Las placas  se dividen en sectores separados y se inocula una gota en cada sector.
Incubación de 18 a 24 horas.
Menos de 20 UFC.
Media de los contajes para cada dilución.
ASA CALIBRADA
Pequeños volumenes que son inocuculados en la superficie.
Número de colonias por el factor de dilución del asa.
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https://www.google.com/search?q=conteo+de+bacterias+por+filtracion&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0ahUKEwjvwuXN0NPhAhWnTt8KHWEACEwQ_AUIDigB&biw=1366&bih=608#imgrc=9TLSfZhDyUZ3SM:
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Membrana de celulosa que retinene microorganismos, luego se llevan a incubar para el crecimiento de las colonias.
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NÚMERO MÁS PROBABLE
Estimación estadística de la densidad microbiana usando tubos en los cuales mientras menor es el crecimiento menos es el volumen inoculado.
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Ponen en evidencia microorganismos vivos y muertos.
Son rápidos aunque en algunos se necesita la curva de calibración.
MÉTODO PARA EL CONTEO DE MICROORGANISMOS TOTALES
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RECUENTO MICROSCÓPICO
En esta técnica un volumen definido se coloca en un portaobjetos para luego ser observado al microscopio.
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CÁMARAS DE PETROFF-HAUSSER Y DE NEUBAUER
No es práctico para un gran número de muestras. 
 Se necesitan al menos 106 bacterias/mL para que sean observadas al microscopio. 
No distinguen células vivas de muertas.
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La muestra, una vez dispensada entre el porta y el cubre, se deja reposar sobre la plataforma del microscopio durante unos minutos, y se cuenta el número de células en varias celdillas (normalmente en 16, equivalentes a uno de los cuadros grandes). Se anota el número n de células observadas en esas 16 celdillas. 
Consiste en un portaobjetos especial con una graduación en superficie y unas medidas muy concretas:
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MÉTODO DE BREED
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Deben realizarse extendidos de 0,01 mL y de 1 cm2 sobre portaobjetos exentos de grasa (los cuales se limpian con xilol).
Luego de dejar secar, se colorea y efectúa el recuento. Para ello se realiza el promedio de células existentes en el campo del microscopio, dividiendo el total de células somáticas entre el factor microscópico (FM) que corresponde al número de campos en 1 centímetro, es decir en 100 milímetros, obteniéndose de esa manera el número de células somáticaspor mililitro de leche
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NEFELOMETRÍA (TURBIDIMETRÍA)
 La muestras a determinar son generalmente translúcidas cuando no presentan crecimiento microbiano.
Longitud de onda:
•Bacterias 540nm 
•Protozoarios 580nm
 •Levaduras 600nm
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La turbidez producida por el crecimiento microbiano de microorganismos unicelulares
 puede ser medida de acuerdo a la capacidad de absorber la luz.
La nefelometría es un procedimiento analítico que se basa en la dispersión de la radiación que atraviesan las partículas de materia. Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión de partículas sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia.
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TURBIDEZ 
La turbidez se determina por la densidad óptica (DO) que puede ser expresada como Absorbancia, % de Transmitancia o Unidades Klett (UK).
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PESO SECO Y DETERMINACIÓN DE PROTEÍNA
Es útil para grandes volúmenes.
 La desventaja de este método es que componentes volátiles de la célula pueden perderse por el secado y puede existir alguna degradación. 
La muestra seca puede recobrar humedad durante el pesado, principalmente si el ambiente tiene una humedad relativa alta. 
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•El peso seco (contenido de sólidos) de las células bacterianas que se encuentran en una suspensión se obtiene por el secado de un volumen en un horno a 105°C hasta peso constante.
La proteína se relaciona al crecimiento, por lo que un incremento en la cantidad de proteína en el paquete celular indica que hay mayo concentración de células.
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PROCEDIMIENTO 
Seleccionar un producto alimenticio líquido (no pasteurizado ni lácteo) para analizar.
. Realizar cada uno de los métodos de aislamiento y el recuento de cada uno de los microrganismos de acuerdo al tipo de cultivo.
Aislamiento por extensión en superficie.
Aislamiento por agotamiento o por estría múltiple.
Aislamiento por dilución en masa.
Siembra en cultivo líquido con asa y pipeta.
Siembra entubo con agar inclinado y no inclinado semisólido
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BIBLIOGRAFÍA 
conalepfelixtovar. (26 de septiembre de 2012). Tecnicas y metodos de aislamiento y selección de microorganismos. Obtenido de https://conalepfelixtovar.wordpress.com/2012/09/26/tecnicas-y-metodos-de-aislamiento-y-seleccion-de-microorganismos/?fbclid=IwAR2B8c5pUa4H2ZFSyRmsoneUZarqwoFT8Cmez68xzgo4xzjGayuN6mIOFMk
Gerrero, C. (2018). Técnicas de Aislamiento y Estriado de Medios de Cultivo . Obtenido de https://www.slideshare.net/chuckwarrior/tcnicas-de-aislamiento-y-estriado?fbclid=IwAR1G5p7VZUr6H4lPXs8uWoJbzQ3hj5tUWvRfXaZMWQo5poD12pSod8WhPyU
Toro, S. V. (s.f.). Medios de cultivo y técnicas de aislamiento. Obtenido de https://slideplayer.es/slide/13060868/release/release/woothee?fbclid=IwAR1Al5q7I2UO0iKDCt-NUDAPq5ocxAMCdiAo7RF5F5doE616VX1g_zQqNm0
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