Actividad 1 práctica 7

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Las penicilinas constituyen uno de los grupos de antibióticos de mayor importancia, 
y, aunque han surgido otros antimicrobianos, las penicilinas siguen siendo de los 
más importantes y de mayor uso, y se siguen sintetizando nuevos derivados del 
núcleo penicilínico básico. 
Los antibióticos lactámicos son medicamentos de gran utilidad que se prescribe 
a menudo; comparten una estructura común y el mismo mecanismo de acción; 
inhiben la síntesis de la pared celular bacteriana formada por peptidoglucanos. 
Comprende las penicilinas G y V, que son altamente activas contra cocos Gram + 
sensibles. 
Existen diferentes métodos para determinar la penicilina G, dentro de los cuales se 
pueden encontrar los ensayos microbiológicos, titulaciones yodométricas y 
potenciométricas o bien ensayos cromatográficos; por otro lado, también se han 
implementado métodos por electroforesis capilar para la separación de 
bencilpenicilinas y sustancias relacionadas, o para monitorear los procesos de 
manufactura de penicilinas semisintéticas. 
La electroforesis hace referencia a la migración de especies eléctricamente 
cargadas en solución o suspensión en un electrolito cuando se les hace pasar una 
corriente eléctrica, de esta forma, los cationes migran hacia el electrodo cargado 
negativamente (ánodo) y los aniones son atraídos hacia el electrodo cargado 
positivamente (cátodo); y los solutos neutros no son atraídos a ninguno de los 
electrodos. Así, en la electroforesis capilar es importante el flujo electroosmótico 
que se origina por la presencia del campo eléctrico en una solución iónica, cuando 
entra en contacto con una superficie sólida cargada como son los capilares de sílice. 
La muestra se debe ingresar al capilar y generalmente debe ser por presión. La 
entrada y salida del capilar deben estar inmersas en el buffer que realiza la 
separación. Los electrodos (que se encuentran conectados a la fuente de poder), 
se encuentran en cada extremo del capilar. La corriente se establece de cátodo a 
ánodo. Cuando los analitos migran, pasan a través de una ventana dentro del mismo 
capilar y la señal se transforma para poder ser interpretada. 
Hay diferentes modalidades de electroforesis capilar, siendo las más comunes la 
electroforesis capilar de zona (CZE), la cual se basa en las diferencias de movilidad 
debidas al tamaño y a la carga de los analitos. 
Por otro lado, la electromatografía capilar micelar (MEKC) es un método de 
separación altamente eficiente utilizado para el análisis de pequeñas moléculas 
neutras, compuestos cargados con idénticas movilidades o mezclas de compuestos 
con carga o sin carga. 
Material y métodos 
Cepa 
Se estudió la cepa Penicillium chrysogenum ATCC 9840 perteneciente a la 
colección nacional de cepas microbianas y cultivos celulares del Centro de 
Investigación y de Estudios Avanzados del IPN. 
Medios de cultivo 
Se utilizó el medio de producción formulado con lactosa 3%, agua de cocimiento de 
maíz 5%, pharmamedia 1%, fosfato monobásico y dibásico de potasio 0.3% y 
cloruro de calcio 0.01% ajustando el pH a 5.0. 
Inóculo 
Se preparó una solución de esporas en solución salina que contenía 108 
esporas/mL. 
Fermentación líquida. 
Se trabajó a escala de laboratorio, inoculando el medio de producción al 1% con la 
suspensión de esporas; se incubó a 28°C y a las 72 h se añadió ácido fenilacético, 
durante los 7 días que duró la fermentación se realizaron determinaciones de pH, 
consumo de azúcares (DNS), biomasa (peso seco) y la concentración del antibiótico 
se determinó por medio de bioensayo en placa, y por electroforesis capilar. 
Sistema de electroforesis capilar. 
Las determinaciones de la concentración de penicilina se realizaron en un equipo 
de electroforesis capilar Beckman Coulter P / ACE MDQ con un detector UV y un 
capilar de sílice fundida de 50 cm de longitud y 75 mm de diámetro interno. Se utilizó 
un buffer de fosfatos 10 mM; pH 7.0; voltaje de 20 k V e inyección hidrodinámica 0.5 
psi por 5 s, y una longitud de onda de 200 nm.