CLASE 4 DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO - Viviana Lavid

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M É T O D O S D E 
E S T U D I O 
P A R A S I T O L O G Í A Y 
M I C O L O G Í A
D R A . G I O V A N N A A L B Á N 
J A C O M E 
IMPORTANCIA
Diagnosticar patologías 
propiciando su prevención y/o 
detección precoz 
(enteroparasitosis).
Promover el diagnóstico 
diferencial entre posibles 
patologías, dando oportunidad 
de tratamiento específico 
(infecciones: parasitarias, 
micóticas, bacterianas).
Evaluación de una enfermedad 
ya instalada contribuyendo a 
escoger la mejor conducta 
terapéutica (hidatodisis).
Estimar actividad o recurrencia 
de una patología 
(toxoplasmosis).
FASES DEL PROCESO DE 
LABORATORIO
PREANALITICA: es la que insume mayor tiempo, solicitud, 
obtención, almacenamiento, transporte, recepción y la que está sujeta a 
mayor porcentaje de errores.
ANALITICA: corresponde a la realización del procedimiento 
diagnóstico. Incluye validación de las técnicas, calibración de equipos, 
ejecución de controles de calidad, etc.
POSANALITICA: Cálculos, interpretación de resultados, validación, 
emisión del informe.
METODOS
DIRECTOS
• Son aquellos que ponen en 
evidencia el agente o sus 
formas evolutivas, 
fragmentos, antígenos, ADN,
etc.
MÉTODOS DIRECTOS O 
PARASITOLÓGICOS
Son los que permiten 
visualizar directamente 
parásitos u hongos en un 
material patológico, o 
aislarlos del mismo.
Los parásitos y hongos 
pueden ser vistos 
estudiando el material “en 
fresco” o mediante 
coloraciones u otros 
artificios.
MÉTODOS 
DIRECTOS
• Los materiales pueden ser tratados 
previamente, para concentrar y/o 
mejorar la visualización de parásitos y 
hongos en ellos.
• EJEMPLOS
• Coproparasitario: incluye “limpieza” de 
lasuspensión de materias fecales y 
enriquecimiento por centrifugación.
• Tratamiento de 
expectoraciones con
soluciones cáusticas 
(reblandece el mucus y 
“aclara” las preparaciones).
MÉTODOS DIRECTOS
EXAMEN EN FRESCO
•El material se coloca sobre una lámina
portaobjetos, montado en algún medio líquido o no,
cubierto con una laminilla, para su observación al 
microscopio.
Los líquidos de montaje (solución salina fisiológica, hidróxido de
sodio o potasio 10-20%, lactofenol-azul algodón, lugol, glicerina
tamponada) facilitan la observación microscópica evitando
distorsiones de la luz, reblandeciendo el material y/o aumentando el
contraste de los objetos buscados.
EXAMEN EN FRESCO
Quistes de E.histolytica/dispar
LarvaS.stercoralisC. neoformans
Huevo deA.aegypti
COLORACIONES
COLORACIONES PANÓPTICAS:
Giemsa, May Grunwald- Giemsa, hematoxilina eosina, 
otras coloraciones hematológicas (frotis o cortes
histológicos).
Quiste tisular deT.gondii Corte histológico. Candidaspp.
Frotis. Pseudoquiste T. gondii.Frotis. H. capsulatum Corte histológico. Gránuloactinomicótico.
GIEMSAHE
COLORACIONES ESPECÍFICAS
⚫Ziehl-Neelsen, Kinyoun 
(ácido-alcohol resistencia)
⚫Tricrómica (protozoarios 
entéricos, microsporidios).
⚫Gomori, methenamino plata 
(pared de los hongos)
●Hematoxilina férrica 
(membrana,
núcleos y otros 
componentes de
protozoarios).
CULTIVOS I
MEDIOS GENERALES
⚫ Sirven para el aislamiento primario de una 
variedad de agentes
⚫ Pueden ser modificados con el agregado o cambio 
de algún componente para darle mayor 
especificidad
EJEMPLOS
⚫ Sabouraud, para hongos
⚫ NNN, para protozoarios hemoflagelados
CULTIVOS II
MEDIOS 
SELECTIVOS
Sirven para el 
aislamiento de un 
agente o grupo de 
agentes 
determinados
Tienen una 
formulación muy 
bien definida
EJEMPLOS
DTM, para 
dermatofitos
LIT: para 
tripanosomas
TÉCNICAS DE
AISLAM
IENTO
POR
INOCU
LACIÓ
N
• En animales de experimentación.
• Excepcional (aunque es necesario
frente a determinados agentes de 
difícil identificación o aislamiento por 
otros medios, ej: Toxoplasma gondii 
en líquido amniótico)
• Exige seguir rigurosas normas
de bioética, bioseguridad y 
calidad operacional.
D
ETECCI
ÓN DE 
OTROS 
COMPO
NENTE
S
PARASI
TARIOS
Mediante diversas técnicas 
también se puede evidenciar:
Antígenos.
Ácidos nucleicos.
Otras moléculas.
TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS 
DIRECTAS
DETECCIÓN DE ANTÍGENOS
ÁCIDOS NUCLEICOS
MÉTODOS INDIRECTOS 
INMUNOLÓGICOS
• Son los que permiten suponer la presencia de 
parásitos u hongos en el organismo,
• mediante el estudio de la respuesta del hospedero
(producción de Anticuerpos específicos, reacciones de 
hipersensibilidad tardía, producción de linfoquinas, etc.).
TÉCNICAS DE
PRECIPITACIÓN 
EN GEL DE AGAR
TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN
•Aglutinación directa:
Suspensiones de parásitos enteros 
son enfrentadas a sueros de pacientes. 
Los Ac (Y) presentes aglutinan los 
parásitos, formando acúmulos 
consistentes.
•Aglutinación de partículas
(látex, betonita, carbón,etc.):
Suspensiones de partículas inertes, con 
su superficie cubiertas de Ag 
parasitarios, son enfrentadas a sueros 
de pacientes. Los Ac presentes 
aglutinan estas partículas, formando 
acúmulos consistentes.
Y
Y
Y
Y
Y
TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN
TÉCNICAS DE 
MARCADO DE LA 
REACCIÓN Ag-Ac
TÉCNICAS DE 
MARCADO DE LA 
REACCIÓN Ag-Ac
SEGÚN LA FINALIDAD 
DEL
ESTUDIO
• Técnicas de
screening:
utilizadas para estudio de grandes
poblaciones.
• Técnicas confirmatorias: utilizadas 
para confirmar un diagnóstico en 
forma específica.
CLASIFICACIÓN
Técnicas Inmunológicas
1. CUALITATIVOS: positivos o negativos
2. CUANTITATIVOS: miden la concentración 
del Ac a estudiar.
CUANTITATIVOS
➢TÍTULOS: máxima dilución del suero problema qu 
arroja un resultado positivo (Ej: 1/16; 1/128;1/2048)
➢UNIDADES PREDETERMINADAS: cuando el valor 
obtenido como resultado es comparado a un patrón 
predeterminado de densidad óptica, fluorescencia , 
luminiscencia o concentración conocida de Ac 
específicos, que expresa el “punto de corte” de la 
técnica (cutoff o valor límite que diferencia positivos y 
negativos) (Ej: UI/ml; Index Value; MIU/ml; OD; etc.)
COMPORTAMIENTO 
DE LAS TÉCNICAS 
SEROLÓGICAS I
•DESDE EL PUNTO DE VISTA
ANALÍTICO
• SENSIBILIDAD: expresa la 
capacidad de la técnicapara detectar las 
menores concentraciones posibles de los 
anticuerpos (o antígenos) buscados.
• ESPECIFICIDAD: expresa la 
capacidad de esa técnica para diferenciar 
los anticuerpos específicos (oantígenos) 
buscados de otros presentes en el 
material enestudio.
COMPORTAMIENTO 
DE LAS TÉCNICAS 
SEROLÓGICAS II
•DESDE EL PUNTO DE VISTA
CLÍNICO
• SENSIBILIDAD: expresa la 
capacidad de la misma para 
diagnosticar casos positivos en el 
conjunto de personas estudiadas.
• ESPECIFICIDAD:
expresa, la capacidad de 
determinar resultados verdaderos.
AUTOMATIZACIÓN
Existen equipos electrónicos, que permiten la automatización de los 
procedimientos y el análisis computacional de los resultados.
La lectura y medida de la [ Acs-Ag ] se hace mediante colorímetros, 
fluorómetros, fotómetros, etc.,
Facilitando la padronización y reproducibilidad de las técnicas, mayor precisión 
y registro de resultados, mejor cuantificación y valoración de los mismos.
Disminuye los errores y permite un mejor control de calidad.
photodiodo
Tira
Cono fase sólida y pipeteo
Buffer lavado Substrato
Muestra Diluyente Conjugado
REACCION INMUNOLOGICA REACCION ENZIMATICA
EJEMPLO
CUIDADOS PARTICULARES
ETAPA PREANALÍTICA: registro de datos, 
recolección, preparación y conservación de la 
muestra...
ETAPA ANALÍTICA: manejo de la muestra, 
bioseguridad, calidad operacional, control de 
calidad interno y externo...
ETAPA POSTANALÍTICA: registro, interpretación 
y validación de los resultados, expresión de los 
resultados, expresión de los valores de referencia...