2 Antígenos y Anticuerpos

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ANTÍGENOS 
Es cualquier molécula que se puede unir específicamente a un anticuerpo. A diferencia de un inmunógeno, un antígeno no siempre desencadena una respuesta inmune adaptativa, por lo que es correcto decir que todo INMUNÓGENO es un antígeno, pero NO todo ANTÍGENO es un inmunógeno. 
Las sustancias químicas pequeñas pueden unirse a anticuerpos y son, por tanto, antígenos, pero no pueden activar a los linfocitos B por si mismos (no son inmunógenos). En estos casos definimos estas sustancias como Haptenos, los cuales son moléculas pequeñas (PM <1 kDa) que presentan un único determinante antigénico y que poseen propiedades antigénicas, pero NO inmunogénicas debido a su tamaño tan pequeño, lo que les impediría en principio ser reconocido por las células del sistema inmune y, en segundo lugar, no puede generar el entrecruzamiento de receptores para activar a los LB. Ejemplos de estos antígenos son la penicilina, progesterona y aspirina. Los haptenos se pueden volver inmunogénicos si, por ejemplo los conjugamos covalentemente a carriers proteicos, lo que aumentaría su tamaño facilitando su reconocimiento por las células del sistema inmune. 
EPITOPES O DETERMINANTES ANTIGÉNICOS
Es la región del antígeno que es reconocida específicamente por los receptores linfocitarios (BCR y/o TCR). Esta zona restringida determina la especificidad del antígeno en donde uno de un millón de linfocitos será capaz de reconocerla. Si el antígeno es de origen proteico esta región está integrada por un número reducido de aminoácidos.
Los determinantes antigénicos lineales son secuencias de aminoácidos que se encuentran ubicados de forma secuencial. En cambio, en los epitopes conformacionales los aminoácidos están próximos, pero dada su conformación y no porque estén seguidos por su secuencia. 
Por ejemplo si nosotros desnaturalizamos un antígeno, vamos a ver que para un epitope lineal, el reconocimiento por parte del anticuerpo es normal, ya que no se ve alterado el sitio antigénico de reconocimiento. No sucede los mismo al desnaturalizar un antígeno cuyo determinante antigénico es conformacional, ya que el calor altera esta estructura tridimensional lo que altera el epitope y por consiguiente el reconocimiento bioespecífico del anticuerpo.
VALENCIA DEL ANTÍGENO
Representa la cantidad de epitopes que puede presentar un antígeno determinado. 
· Valencia total: número epitopes expuestos y ocultos.
· Valencia funcional: número de epitopes expuestos capaces de interactuar con el anticuerpo.
Esta característica nos permite clasificar a los antígenos en:
1. Monovalentes
2. Polivalentes
2.1 Monoespecíficos
2.2 Poliespecíficos 
EJEMPLOS DE ANTÍGENOS
1. Antígenos bacterianos
Presentes en las bacterias Gram (+) y en las bacterias Gram (-). Con respecto a las primeras, las moléculas antigénicas que presentan son los acidos teicóicos, lipoteicóicos y la matriz de peptidoglicano. En las otras, el factor antigénico más relevante es el Lipopolisacárido (LPS) de la membrana externa, el cual representa una endotoxina bacteriana. Este LPS es un glucolípido complejo, compuesto por una región lipídica anclada a la membrana conocido como Lípido A y una región glucídica, antigénica, denominada Polisacárido O. El LPS es pirógeno, lo que quiere decir que estimula la respuesta inmune innata de la producción de fiebre. 
Otras toxinas bacterianas son las exotoxinas, las cuales son secretadas por ciertas bacterias, como son la toxina tetánica o la toxina botulínica. Otras moléculas asociadas a las toxinas son los toxoides, las cuales son exotoxinas a las cuales se les ha destruido su acción tóxica (ya sea por calor o químicamente), pero que mantiene sus propiedades inmunogénicas. 
2. Antígenos virales
Se pueden desarrollar anticuerpos contra los ácidos nucleicos, proteínas funcionales, proteínas de la cápside y en los virus con envoltura se pueden producir anticuerpos contra las glicoproteínas de la envoltura. 
3. Antígenos de parásitos
Existen antígenos tanto para parásitos unicelulares como pluricelulares. 
4. Otros antígenos
4.1 Venenos vegetales: abrina, ricina, robina
4.2 Venenos de origen animal: veneno de ofidios, insectos, arácnidos. 
4.3 Aloantígenos: Son antígenos capaces de estimular la producción de Ac en otros miembros de su misma especie, pero de un individuo de distinto genotipo. Ej.: Antígenos de los grupos sanguíneos, moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad CMH. 
4.4 Isoantígenos: son antígenos específicos de especies y órganos. Por ejemplo la tiroglobulina, una hormona, que es idéntica en todos los individuos de una misma especie. 
4.5 Antígenos heterófilos: son antígenos universales, es decir, que son compartidos por muchas especies. Ej.: Antígeno de Forssman.
4.6 Superantígenos: son antígenos capaces de producir una hiperactivación del sistema inmune, activando en forma policlonal a una fracción grande de células T. Ejemplos de superantígenos incluyen enterotoxinas de estafilococos, que causan envenenamiento por alimentos, y las endotoxinas pirógenas de los estreptococos, causante de un shock inmunológico. 
La activación mediada por estos superantígenos es independiente de la especificidad de reconocimiento del linfocito. Estos antígenos se unen a la porción no variable de los receptores de las células T y lo entrecruzan con la parte externa de las células presentadoras del antígeno, por fuera del surco donde normalmente sirve para exponer y presentar el antígeno. De esta forma, activan de modo inespecífico a los linfocitos T causando como resultado un gran número de clones que secretan grandes niveles de citoquinas, lo que puede llevar al shock y a la muerte. 
4.7 Mitógenos: son agentes capaces de inducir la proliferación por mitosis, mediante alteraciones metabólicas, de una gran cantidad de clones de linfocitos T y/o B de modo inespecífico (activación policlonal). Como ejemplos tenemos a las LECTINAS y el LPS de las bacterias Gram (-), un mitógeno del linfocito B.
ANTÍGENOS T-DEPENDIENTES
Son aquellos que no pueden estimular directamente la producción de anticuerpos, sin la ayuda de las células T. Todas las proteínas son antígenos T-dependiente y estructuralmente estos antígenos presentan pocas copias de muchos epitopes diferentes. 
ANTÍGENOS T-INDEPENDIENTES
Pueden estimular directamente a los linfocitos B para producir anticuerpos sin requerir la presencia de linfocitos T cooperadores (LTh). Ejemplo de estos antígenos son los LPS. Se caracterizan por presentar estructura polimérica con el mismo epitope repetido, además pueden desencadenar una activación policlonal de los linfocitos B y son por lo general más resistentes a la degradación por lo que persisten por periodos largos de tiempo estimulando continuamente al sistema inmune. 
El mecanismo de activación de los linfocitos B es lo que difiere entre estos tipos de antígenos. En primer lugar, se genera una primera señal para activar a los LB a través de la unión del antígeno al receptor, este paso es común para ambos tipos de antígenos. En el segundo paso, en los antígenos T-dependientes se genera una segunda señal donde el linfocito T cooperador reconoce fragmentos del antígeno degradado como péptidos unidos al receptor del LB. En el caso de los antígenos T-independientes se produce un entrecruzamiento de los receptores del LB por la unión con los epitopes repetidos que presentan estos antígenos
	FACTORES QUE INFLUYEN EN LA INMUNOGENICIDAD
	El factor más importante es que la molécula sea “extraña”, es decir, ajena al individuo.
	Estructura química
	Proteínas > Carbohidratos > Lípidos > Ac. Nucleicos > Sustancias inorgánicas
	Tamaño (PM)
	↑ Tamaño implica ↑ Inmunogenicidad
	Complejidad del antígeno
	Heteropolímeros (más complejos) implica ↑ Inmunogenicidad
Homopolímeros (menos complejos) implica ↓ Inmunogenicidad
	Susceptibilidad a la degradación 
	Aquellos que sean más resistentes tienen elevada Inmunogenicidad. En otras palabras, aquellos antígenos con menor susceptibilidad a la degradación son mejores inmunógenos. 
	Dosis
	
	Víade administración
	Vía parenteral (subcutánea, intradérmica, intramuscular) > Vía oral > Vía intravenosa
	Factores dependientes del huésped
	El genotipo del individuo inmunizado influye en el tipo y grado de respuesta inmune. Ej.: cambios en las moléculas expresadas por el complejo mayor de histocompatibilidad (HLA). 
ANTICUERPOS
Estructuralmente son glicoproteínas que el sistema inmune adaptativo elabora en respuesta a la exposición a distintos inmunógenos. Los anticuerpos, también conocidos como inmunoglobulinas (Ig), son producidos SOLAMENTE por los plasmocitos, células diferenciadas del sistema inmunitario que derivan de los Linfocitos B. Los LB naive expresan una forma integral de membrana de la molécula de anticuerpo (IgM e IgD) que actúa como receptor del antígeno. 
El reconocimiento del antígeno por los anticuerpos activa a esos linfocitos e inicia una respuesta inmunitaria humoral. Los linfocitos B estimulados por el antígeno también producen anticuerpos en una forma secretada, los cuales unen al antígeno y desencadenan varios mecanismos efectores para eliminarlos. Dichos mecanismos requieren la interacción del anticuerpo con otros componentes del sistema inmunitario, como las moléculas del sistema de complemento y algunas células como los fagocitos o los eosinófilos. 
Los anticuerpos son los principales mediadores de la inmunidad humoral contra todas las clases de microorganismos. La función de los anticuerpos es por lo tanto la de unirse específicamente a los antígenos, favoreciendo su eliminación mediante distintos mecanismos. Funciones efectoras de los anticuerpos
Los anticuerpos pueden existir en dos formas:
1. Anclados a la membrana: unidos a la superficie de los linfocitos B actúan como receptores para el antígeno. El extremo C-terminal presenta una región hidrofóbica seguido de un tramo intracelular con carga positiva.
2. En circulación, tejidos y mucosas: los anticuerpos secretados tienen la función de neutralizar las toxinas, impiden la entrada y propagación de los microorganismos patógenos y eliminan los microbios. La porción C-terminal es hidrófila
Los anticuerpos son:
· Específicos. Pueden distinguir entre dos determinantes antigénicos que difieran en un solo residuo de aminoácido. Este alto grado de especificidad asegura que estos anticuerpos no reaccionen con moléculas propias con una estructura parecida ni con antígenos de otros microbios. 
· Diversos. Implica la capacidad de los anticuerpos de unirse en forma específica a un gran número de antígenos. El grupo total de anticuerpos con diferentes especificidades representa el repertorio de anticuerpos. 
· Especializados. Se pueden generar anticuerpos en función de la activación por diferentes tipos de microorganismos, los cuales se especializan en reconocer a cada uno de ellos. 
ESTRUCTURA DEL ANTICUERPO
Todas las moléculas de anticuerpo comparten las mismas características estructurales básicas, pero muestran una variabilidad acentuada en las regiones que se unen a los antígenos. Tiene una estructura simétrica constituida por cuatro cadenas polipeptídicas unidas por puentes disulfuro intercatenarios, dos cadenas livianas (light chain) idénticas y dos cadenas pesadas (heavy chain) idénticas.
Las dos cadenas livianas y las dos cadenas pesadas contienen una serie de unidades repetidas homólogas que se pliegan formando una estructura globular conocidas como dominio Ig. 
Los anticuerpos tienen una región que le permite unirse a su antígeno correspondiente conocida como PARATOPE. 
Los dominios variables se llaman así porque contienen regiones variables en la secuencia de aminoácidos que distinguen los anticuerpos producidos por un clon de linfocitos B de los anticuerpos producidos por otros clones. Las cadenas pesadas y livianas tienen regiones constantes y regiones variables. La región variante liviana (VL) forma un loop amino-terminal y la región constante liviana (CL) se orienta hacia el carboxilo-terminal. La cadena pesada tiene una región variable (VH) y todas las demás constantes, las cuales se nombran desde el amino terminal como (CH1, CH2, CH3, etc.). Los loops que representan a las regiones VL y VH son los dominios de unión con el antígeno. Como la unidad nuclear estructural de cada molécula de anticuerpo contiene dos cadenas pesadas y dos cadenas livianas, cada molécula de anticuerpo tiene al menos dos zonas de unión al antígeno. Las regiones constantes de la cadena pesada (CH) son las responsables de interactuar con las demás moléculas efectoras y por lo tanto son las que intervienen en la mayoría de las funciones biológicas del anticuerpo. Por otro lado las regiones constantes de la cadena liviana (CL) no participan en las funciones efectoras ni se unen directamente a las membranas celulares. 
Gracias a los puentes disulfuro establecidos entre las cadenas pesadas por residuos de cisteína, la molécula tiene flexibilidad, esta zona se conoce como región bisagra y le permite al anticuerpo unirse a los determinantes antigénicos ya sea que estos esten próximos uno de otro o muy separados. En las IgG, estos enlaces se forman entre las regiones CH2 de ambas cadenas pesadas. La union de las cadenas livianas con las cadenas pesadas también se forman por enlaces covalentes, de puentes disulfuro entre residuos de cisteínas, entre la region CL y el dominio CH1. La presencia de la region bisagra le permite a los anticuerpos adoptar distintas dispociciones para interactuar de manera más eficaz con cada antígeno. 
Si se trata una Ig con la enzima papaína en condiciones de proteólisis limitada, la enzima actúa sobre la región bisagra y escinde la Ig en tres piezas separadas. Dos de las piezas son idénticas entre si y consisten en la cadena ligera completa (VL y CL) asociada a un fragmento VH-CH1 de cadena pesada. Estos fragmentos conservan la capacidad de universo al antígeno, ya que cada uno tiene los dominios de unión por lo que se conoce como Fab (antigen binding fragment). La tercera pieza está compuesta de dos fragmentos idénticos unidos por enlaces disulfuro que contienen los dominios CH2 y CH3. Esta pieza tiene tendencia a asociarse a si misma y a cristalizar en un enrejado, y se llama, por tanto, Fc (Fragmento cristalizable).
Cuando se usa pepsina (en lugar de papaína) para escindir la Ig en condiciones limitantes, la hidrólisis se produce distal a la región bisagra, lo que genera un fragmento de unión al antígeno, conocido como Fab’2 , que posee la bisagra y los enlaces disulfuros intercatenarios intactos. 
SITIO DE COMBINACIÓN CON EL ANTÍGENO - CARACTERÍSTICAS ESTRUCTURALES DE LAS REGIONES VARIABLES DEL ANTICUERPO
Repasando un poco, vimos que una molécula de anticuerpo es una glicoproteína heterodimérica formado por dos cadenas pesadas idénticas unidas por puente disulfuro gracias a los residuos de cisteína en la zona de la bisagra y dos cadenas livianas idénticas que se unen cada una con una cadena pesada mediante puentes disulfuro, formando una estructura totalmente simétrica con el eje vertical. Cada cadena presenta dominios constantes, que forman la región Fc en donde también se ubican los hidratos de carbono; y dominios variables, que son los que forman parte de la región Fab. 
Dentro de la región de reconocimiento del antígeno, tanto en VL como en CL, existen regiones hipervariables o Regiones Determinantes de la Complementariedad (CDR), las cuales son responsables de la especificidad de unión con el epitope. En otras palabras, son secuencias de aminoácidos dentro de la región variable, que son hipervariables y determinan la especificidad del anticuerpo. 
El gráfico anterior representa la variabilidad de los residuos de aminoácidos en las regiones variables para la cadena liviana y pesada. Podemos ver que para cada cadena existen tres secuencias cortas de aminoácidos, que representan la región hipervariable. Se nombran desde el amino-terminal como CDR1, CDR2 y CDR3, de los cuales, los CDR3 de los segmentos VH y VL son los más variables. A nivel estructural se observan como“dedos” que sobresalen, tres para cada cadena que se entrelazan para formar la zona de unión con el antígeno. Por lo contrario, las regiones con mayor grado de conservación se conocen como regiones framework (FR). 
En definitiva podemos decir que, la mayoría de las diferencias en la secuencia y la variabilidad entre diferentes anticuerpos se limitan a tres secuencias cortas en la región variables de la cadena pesada y a tres secuencias en la región variable de la cadena liviana.
INTEREACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO
La interacción que se establece entre el antígeno y el anticuerpo es bioespecífica, lo que implica una complementariedad estructural tridimensional mediante fuerzas no covalentes. Dicha unión es REVERSIBLE y la sumatoria de todas las fuerzas repulsivas y atractivas de la interacción determina la AFINIDAD del anticuerpo. Esta afinidad se representa con la constante de disociación Kd, la cual es inversamente proporcional con la fuerza de unión. 
VALENCIA DEL ANTICUERPO
Como la región bisagra de los anticuerpos les aporta flexibilidad, un solo anticuerpo puede unirse a un solo antígeno multivalente a través de más de un lugar de unión. La IgE e IgG presentan dos lugares de unión, mientras que la IgM e IgA son polivalentes. Para la IgM pentamérica, un solo anticuerpo puede unirse hasta a 10 sitios diferentes. 
Cabe destacar que, como un anticuerpo es una proteína, también puede comportarse como antígeno.
Aunque la afinidad de cualquier lugar de unión al antígeno será la misma para cada epitope de un antígeno polivalente, la fuerza global de unión del anticuerpo multivalente es mayor. Esta fuerza global se conoce como AVIDEZ, y es mucho mayor que la afinidad de cualquier lugar de unión al antígeno aislado. 
Las interacciones polivalentes tienen una importancia fundamental en la activación de linfocitos B y en la activación óptima de muchas funciones efectoras.
CAMBIAR LA DEFINICION DE AVIDEZ
CARACTERÍSTICAS DE LAS REGIONES CONSTANTES DEL ANTICUERPO – Igs HUMANAS
PRINCIPALES INMUNOGLOBULINAS PRESENTES EN EL SER HUMANO
UBICACIÓN ANATÓMICA DE LAS INMUNOGLOBULINAS
	CONCEPTOS CLAVE
	Isotipos: Determinantes antigénicos de una Ig comunes a todos los miembros de una misma especie. Son secuencias de aminoácidos ubicadas en los dominios constantes de la cadena H, fundamentalmente sobre la región Fc.
Por su estructura es capaz de inducir una respuesta inmune al ser inoculados en especies distintas.
	
	Alotipos: Secuencias de aminoácidos que presentan un patrón de herencia mendeliana, son distintos para dos individuos de la misma especie que presenten diferente genotipo. Están ubicados en las regiones constantes de la cadena H.
La secuencia alotípica puede ser reconocida como un antígeno por un miembro de su misma especie. 
	
	Idiotipos: Determinante antigénico que diferencia una molécula de anticuerpo, de otro anticuerpo con diferente especificidad antigénica. El idiotipo de un anticuerpo reside en el sitio de unión para el antígeno, es decir, en la región variable de la cadena liviana y pesada. 
	
Las moléculas de anticuerpo pueden dividirse en distintas clases y subclases en función de diferencias en la estructura de las regiones constantes de su cadena pesada. 
Las cadenas pesadas pueden ser α, γ, μ, δ y ε, y los anticuerpos que forman se conocen como IgA, IgG, IgM, IgD e IgE respectivamente. En los seres humanos, los anticuerpos IgA e IgG pueden subdividirse en subtipos llamados IgA1 e IgA2 e IgG1, 2, 3 y 4. Las regiones constantes de la cadena pesada de todas las moléculas de anticuerpo de un tipo o subtipo tienen prácticamente la misma secuencia de aminoácidos. Esta secuencia es diferente en los anticuerpos de diferentes tipos o subtipos. 
Como los distintos anticuerpos varían en su región constante de la cadena pesada, la cual es la encargada de las funciones efectoras, por esto es que también para cada tipo de anticuerpo va a ser distintas las funciones efectoras que realicen. 
Con respecto a las cadenas livianas, hay dos clases, llamadas κ y λ, que se distinguen por sus regiones constantes carboxilo terminales. En los seres humanos, alrededor del 60% de las moléculas de anticuerpo tienen cadenas livianas κ y sólo el 40% cadenas livianas tipo λ. Al contrario de los tipos de cadenas pesadas, no hay diferencia funcionales conocidas entre los anticuerpos que contienen uno u otra tipo de cadena.
La IgG y la IgE secretadas y todas las Ig de membrana, independientemente del isotipo, son monoméricas con respecto a la unidad estructural básica del anticuerpo. Por el contrario, las formas secretadas de IgM e IgA forman complejos multiméricos en los que están unidos mediante enlaces covalentes dos o más de las unidades estructurales centrales de anticuerpo. La IgM forma pentámeros o hexámeros mientras que la IgA se secreta a menudo como un dímero. Estas formas multiméricas se unen a los antígenos con mayor avidez que las monoméricas, incluso aunque los dos tipos contengan fragmentos Fab, que individualmente se unan con igual fuerza al antígeno. 
SINTESIS, ENSAMBLAJE Y EXPRESIÓN DE INMUNOGLOBULINAS
Las Igs, como la mayoría de proteínas secretadas y de membrana, se sintetizan en los ribosomas asociados al RER. La proteína una vez sintetizada se posiciona en el lumen del retículo donde es N-glucosilada en sus cadenas pesadas y es plegada mediante chaperonas. La formación de los enlaces covalentes entre las cadenas también forma parte del proceso de plegado por lo cual también ocurre en el lumen del RER. Tras su ensamblaje, las moléculas de Ig se transportan a las cisternas del complejo de Golgi, donde se modifican glúcidos, y después se dirigen a la membrana en vesículas. Los anticuerpos de membrana formados se van a anclar a la membrana plasmática, y la forma secretada se transporta al exterior de la célula. 
La maduración de los linfocitos B a partir de los progenitores de la médula ósea se acompaña de un cambio específico en la expresión del gen de las inmunoglobulinas, lo que da lugar a la producción de moléculas de Ig en diferentes formas. Los LB maduros expresan formas membranarias de IgM e IgD. Estas Ig receptoras sirven de receptores que reconocen antígenos e inician el proceso de activación. 
Cuando los LB se activan, las células se diferencian en células secretoras de anticuerpos. La estimulación antigénica genera cambios en la expresión de las Ig; uno de los cuales es la mayor producción de la forma secretada respecto a la de membrana (modificación post transcripcional). El segundo cambio es la expresión de distintos isotipos que IgM e IgD (cambio de isotipo), en donde las regiones constantes de la cadena pesada cambian, sin modificarse la región de reconocimiento del antígeno. En muchos casos el cambio de isotipo, por ejemplo de IgM a IgG, es fundamental para combatir ciertos antígenos, debido a la mayor vida media de la IgG.
Por último los anticuerpos durante el desarrollo de una respuesta inmune humoral experimentan una maduración en su afinidad. Un proceso que genera cambios sutiles en las regiones variables del anticuerpo cuando se exponen a antígenos proteicos. 
RESUMEN ISOTIPOS DE INMUNOGLOBULINAS
	Isotipo
	Subtipo
	Semivida en suero (Días)
	Forma secretada
	Estructura
	Función
	PM
(kDa)
	Ubicación
	Mecanismo efector de inmunidad humoral
	Otras propiedades
	IgA
	IgA1, 2
	6
	IgA dímero en secreciones y monomérica en circulación 
	
	Inmunidad de mucosas
	160
	Compartimiento vascular; en secreciones de las mucosas; en saliva y en lágrimas. 
	Neutralización
	Constituye el 50% de la proteína en el calostro. Isotipo que más se produce en el organismo.
	IgD
	Ninguna
	3
	Desconocida
	
	Receptor de LB naive
	184
	Se expresa junto con la IgM en la superficie de los LB maduros.
	Desconocido
	Representa el 0,2% de las Igs totales.
	IgE
	Ninguna
	2
	IgE monómero
	
	Defensa contra parásitos helmínticos por unión a receptores de eosinófilos (FCRεII).
	188
	Piel
	Hipersensibilidad inmediata
ADCC
	Se une con alta afinidad a receptores de los mastocitos (FCRεI).Isotipo de menor concentración plasmática. 
	IgG
	IgG1-4
	23
	IgG1 monómero
	
	Inmunidad neonatal
	146
	Sangre y compartimientos extravasculares. 
	Neutralización.
ADCC por NK.
Activador de C (excepto IgG4).
Opsonización.
	Es el único anticuerpo que atraviesa la placenta.
Es la Ig que se encuentra en mayor concentración plasmática.
	IgM
	Ninguna
	5
	IgM pentamérica
	
	Receptor de LB naive
	970
	Compartimiento intravascular. 
	Neutralizante
Activa el Complemento por vía clásica. 
	El primer anticuerpo producido en la respuesta inmunitaria. 
ANTICUERPOS MONOCLONALES Y POLICLONALES
Monoclonal
Policlonal
Como ya vimos, un antígeno puede presentar diferentes determinantes antigénicos, lo que daría lugar a la producción de diferentes anticuerpos específicos. Los anticuerpos monoclonales son anticuerpos dirigidos contra un único determinante antigénico de un antígeno particular. Por otro lado un anticuerpo policlonal es aquel que es específico para distintos determinantes antigénicos de un mismo antígeno. 
	Ac Monoclonal
	Ac Policlonal
	· Químicamente homogéneos
· Mono específicos
· Se produce un único isotipo
· Menos estables
· Se pueden producir de forma indefinida (Calidad reproducible)
· Mayor tiempo y costo de producción
· Afinidad constantes
	· Químicamente heterogéneos
· Poli específicos
· Se producen varios isotipos
· Mayor estabilidad
· Su producción es limitada (Calidad irreproducible). Cuando el suero policlonal se termina, no es posible obtener otro idéntico. 
· Menor tiempo y costo de producción 
· Afinidad variable
FACTORES CRÍTICOS EN LA PRODUCCIÓN 
1. SELECCIÓN DE LA ESPECIE ANIMAL: dependerá de la cantidad de anticuerpo que se quiera producir. 
Ac policlonales 🡪 Conejos
Ac monoclonales 🡪 Ratones BALB/c
Además deberán ser animales jóvenes inmunológicamente adultos, hembras (más dóciles), sanos y con capacidad de reaccionar frente a un inmunógeno determinado.
2. PREPARACIÓN DEL ANTÍGENO: calidad (elevada pureza) y cantidad (dependerá del animal seleccionado). Se debe preparar con diluyentes libre de endotoxinas y a pH fisiológicos, en condiciones de absoluta esterilidad. 
3. SELECCIÓN DE ADYUVANTE: un adyuvante son aquellas sustancias que se asocian con el antígeno para mejorar o aumentar su Inmunogenicidad. Además, el adyuvante protege al antígeno de su degradación. Un buen adyuvante debe ser biodegradable, de larga vida útil y no debe producir respuesta inmune contra ellos mismos. Ejemplos: Adyuvante de Freud completo, Adyuvante de Freud incompleto, Sales de aluminio. En la preparación de adyuvantes deben formarse emulsiones estables en el tiempo entra el antígeno y el adyuvante.
4. VÍAS, VOLÚMENES Y NÚMEROS DE INYECCIÓN: por lo general se busca inyectar cerca de los paquetes ganglionares de forma subcutánea, intradérmica o intraperitoneal. El número de inyecciones debe ser la menor posible al igual que el volumen de inyección.
5. OBSERVACIONES POS INYECCIÓN: se deben evaluar diariamente a los animales para evidenciar la presencia de efectos secundarios. 
6. RECOLECCIÓN DE LOS ANTICUERPOS: el último paso de la producción de anticuerpos policlonales consiste en analizar la muestra de suero de un animal, determinando el título y la afinidad de los anticuerpos. 
Para la obtención de anticuerpos monoclonales hacen falta pasos adicionales:
7. RE ESTÍMULO Y OBTENCION DE ESPLENOCITOS: Luego de haber evaluado el título de anticuerpos y si la respuesta inmune es correcta (título de 1/1.000.000), se inocula el animal otra vez sin usar adyuvante para disparar la producción de anticuerpos, luego de 3-4 días se los sacrifica y se recuperan las células B del bazo (esplenocitos). 
8. PRODUCCIÓN DE HIBRIDOMAS: el fundamento de la técnica consiste en fusionar células plasmáticas cancerígenas de un ratón (mielomas) con los linfocitos B provenientes del ratón inmunizado con el antígeno de interés. Los híbridos resultantes (Hibridomas) presentan dos propiedades: proliferan indefinidamente y secretan anticuerpos monoclonales hacia el antígeno empleado en la inmunización. 
Su producción se realiza en condiciones donde ni las células B ni los mielomas pueden sobrevivir, solo los hibridomas lo hacen. La fusión de las células se realiza en placas o pocillos con un medio selectivo de crecimiento, en el cual solo crecen hibridomas. Una vez que se fusionan las células B y los mielomas que no expresen Igs, se dejan que los híbridos crezcan. Cada hibridoma expresará anticuerpos distintos ya que en la mezcla de los esplenocitos existen varias células B que producen diferentes anticuerpos. Por lo tanto el paso siguiente es el estudio de cada clon de hibridoma para en busca del anticuerpo específico y la expansión de dichos clones. 
APLICACIONES DE LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES
· Identificación de marcadores fenotípicos de tipos celulares particulares. 
· Inmunodiagnóstico. El uso de anticuerpos monoclonales para determinar cierta patología minimiza la posibilidad de reacción cruzada aumentando la especificidad del resultado. 
· Detección de tumores.
· Tratamiento. Por ejemplo el uso de AcMo contra la citosina TNF usado en el tratamiento de artritis reumatoide y otras enfermedades inflamatorias. También el uso de estos anticuerpos contra células del cáncer de mama (AcMo anti receptor EGF-2) 
· Análisis funcional de la superficie células y de las moléculas secretadas.