Practica 4 Determinación de grasas

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PRACTICA # 04 
DETERMINACIÓN DE GRASAS (EXTRACTO ETEREO) 
MÉTODO SOXHLET 
 
INTRODUCCIÓN: 
Los lípidos se definen como un grupo heterogéneo de compuestos que son insolubles en agua, 
pero solubles en disolventes orgánicos tales como éter, cloroformo, benceno o acetona. Todos 
los lípidos contienen carbón, hidrógeno y oxígeno, y algunos también contienen fósforo y 
nitrógeno. En el método de Soxhlet, el componente de interés son las grasas, y su solubilidad 
es la propiedad en la que se basa. Sabemos que las grasas se disuelven en disolventes no 
polares, como el cloroformo, el hexano y el éter de petróleo. Cuando un alimento está en 
contacto con este tipo de disolventes, las grasas muestran tal afinidad que al disolverse se 
separan del resto de los componentes, a este principio se le conoce como extracción sólido-
líquido. 
La AOAC (Association of Analytical Communities) es una asociación sin ánimo de lucro 
reconocida a nivel mundial, que se encarga de desarrollar normas de consenso tanto químicas 
como microbiológicas que aporten soluciones analíticas reconocidas por la comunidad 
científica. De esta forma, sus normas se utilizan a nivel mundial para promover el comercio y 
velar por la salud y la seguridad públicas. Cuando una institución obtiene la acreditación por la 
AOAC para un método analítico, significa que es robusto, de calidad y aporta una confianza 
global en los resultados obtenidos. En 1879, el químico alemán Franz Ritter Von Soxhlet 
propuso un método para la determinación de grasa en alimentos, el cual permanece vigente 
casi catorce décadas después. 
Es un método clásico, pues con base en la propiedad de la sustancia que nos interesa (grasas), 
permite cuantificar de forma indirecta su presencia en los alimentos. A este análisis también se 
le conoce como gravimétrico, denominación que proviene del latín gravis = con peso, y del 
griego antiguo metria= medir. De esta manera, el método registra el peso de la muestra de 
alimento en dos momentos clave: al inicio, cuando el alimento aún contiene a la sustancia que 
nos interesa; y al final, cuando ha perdido parte de su composición, que bien puede ser el 
componente que queremos cuantificar o, por el contrario, toda la materia que no lo contenga. 
 
MUESTRA: (5 gramos, libre de humedad)
Leche en polvo, Huevo en polvo (no claras) 
Almendras, nueces, cacahuates (triturados) 
Semillas girasol, soja, ajonjolí o chía (triturados) 
_______________________ 
Aceite de origen vegetal (50 ml) 
Leche fresca (20 ml) 
 
A) DETERMINACIÓN DE EXTRACTO ETÉREO POR MÉTODO SOXHLET 
Material:
Aparato de Soxhlet (matraz, extractor y 
refrigerante) 
Mangueras para refrigerante 
Pinza para refrigerante y matraz 
Soporte universal 
Espátula 
Papel filtro 10x10 cm 
Algodón y gasa 
Base de porcelana (base de asbesto) 
Vaso pp 150 ml 
Tapón de hule para el matraz 
Clip para matraz 
Parilla de calentamiento (manta calefactora) 
Baño maría 
Balanza analítica 
Estufa calentamiento 
Desecador 
Pinzas para crisol 
Crisol 
Vidrio de reloj 
espátula 
(Crisol para desecar, 3-4 g de muestra) 
Reactivos: 
• Éter etílico 200 ml (en su defecto hexano o cloroformo) 
• Sulfato sódico anhidro 10g 
Metodología (A): 
Atención: El éter etílico es un disolvente muy volátil e inflamable; además tiene efecto narcótico, por lo 
que se debe manejar obligatoriamente debajo de la campana. De preferencia el montaje completo se 
ubicará en la campana. El Soxhlet es una pieza delicada por lo que se manipulará con especial cuidado, 
sin hacer fuerza en los tubos finos de vidrio. 
1.- Pesar 2- 3 g de muestra (de la determinación de humedad) homogeneizada y anotarlo 
2.- Fabricar un cartucho de extracción con el papel filtro cortando un cuadrado de 
aproximadamente 10 cm (plegarlo hasta formar el pequeño cartucho) 
3.- Colocar el pequeño cartucho en la pieza media del dispositivo de extracción Soxhlet o 
compartimiento de muestra (ver figura 1) 
4.- El matraz fondo plano debe estar completamente seco y pesado (junto a un soporte de 
corcho o porcelana, ya que se pesará siempre con el mismo soporte) 
 
5.- Se monta la parte inferior del dispositivo (manta de calefacción, el 
matraz y el soxhlet, pero sin el reflujo). Es conveniente que la manta 
calefactora repose sobre un soporte estable pero removible para que 
al finalizar el enfriamiento sea más rápido. 
6.- Se agrega por la parte de arriba del Soxhlet con una cantidad 
suficiente de disolvente, aproximadamente 200 ml (es necesario una 
cantidad tal que llene el asa de la parte intermedia para que durante 
el proceso de extracción sifonee y recircule, más las pérdidas 
eventuales); observar cómo sifonea el disolvente 
7.- Se procede a completar el montaje del dispositivo de extracción. 
La parte superior del reflujo se tapona (de preferencias con sulfato 
sódico anhidro envuelto en gasa y algodón) para evitar la entrada y 
condensación de vapor de agua. 
8.- Tras el montaje se pone en marcha la manta calefactora y se 
regula el caudal de agua del reflujo; una vez que se alcanza la 
temperatura de ebullición, el solvente se evapora y llega al 
refrigerante condensándose y cayendo en el compartimento del 
cartucho de muestra. 
9.- Calentar el matraz hasta que la extracción de grasa sea completa (aproximadamente 3 a 6 
h dependiendo de la cantidad de lípido que contenga la muestra), teniendo cuidado de ir 
agregando más disolvente conforme este vaya disminuyendo su volumen 
Atención: Un reflujo no se deja nunca solo, debido a la peligrosidad de disolventes. También puede 
ocurrir, subidas de presión del agua de la red y que se suelten tos tubos. Por tanto, tendrá que haber 
siempre una persona a cargo del reflujo 
10.- Durante la extracción, se observará como se vacía regularmente el espacio de extracción 
(compartimento de muestra); es decir, la pieza media del dispositivo, a través del conducto 
ascendente (asa) donde el disolvente va recirculando completamente; a lo que llamamos ciclos 
de extracción. En nuestro caso, daremos por finalizada la extracción una vez que se hayan 
completado 4 ciclos (aproximadamente 1.5 h) 
11.- Al finalizar el ciclo, se quita el calentamiento. Cuando el disolvente deja de hervir, se quita 
el soxhlet con cuidado y se extrae el cartucho 
Figura 1 Sistema Soxhlet para extracción 
12.- Colocar en un vaso y ponerlo en baño maría hasta que ya no se perciba el olor del 
disolvente 
13.- Colocar el cartucho en un crisol en la estufa a 80°C y secar hasta peso constante, pesar y 
anotar 
NOTA: Se vuelve a colocar el dispositivo para calentar el matraz y cuando este el soxhlet bastante lleno, 
pero antes de que sifone, se procede a recolectar el disolvente de la parte intermedia del recipiente. Se 
considera de pureza suficiente para extracciones ulteriores. Repetir este proceso una segunda vez hasta 
que la cantidad de disolvente en el matraz sea muy poca. 
Cálculos: 
• Determine peso de la grasa: 
Peso de la grasa= (peso del cartucho con muestra – peso del cartucho con muestra 
desengrasada) 
• Determine % de grasa: 
% de grasa= 
 
B) DETERMINACIÓN DE MATERIA GRASA POR MÉTODO DE GERBER 
Material: 
Butirómetro Gerber con tapón 
Pipeta graduada 10 ml 
Pipeta volumétrica 10 ml (para leche*) 
Pipeta volumétrica 1 ml 
Baño maría 
Centrifuga Gerber 
Papel Parafilm 
Tela para envolver butirómetro* 
Reactivos: 
10 ml de H2SO4 90-91% 
1 ml de alcohol amílico (o isoamílico) puro 
Metodología (B): 
1.- Agregar 10 ml de H2SO en el butirómetro evitando mojar las paredes internas del cuello (si 
el butirómetro es muy grande agregar 17.5 ml de ácido) 
2.- Agregar 11 ml de leche con una pipeta lentamente por las paredes para evitar una reacción 
directa con el ácido, agregar 1 ml de alcohol amílico (butirómetro grande 17.6 ml) 
Peso de la grasa 
Peso de la muestra 
X 100 
3.- Tapar el butirómetro con el tapón correspondiente y agitar lentamente y concuidado hasta 
homogeneizar (lentamente primero y finalmente más fuerte), tener en cuenta que se produce 
una fuerte elevación de la temperatura, es necesario envolver el butirómetro en una tela 
4.- Poner el butirómetro en un baño de agua a 65-70°C por 15 min, con el tapón hacia abajo 
5.- Retirarlo del baño y secarlo exteriormente. Posteriormente centrifugar 10 min a 1000 -1200 
rpm 
6.- Llevar a baño maría por 4-5 minutos hasta que la separación de grasa quede bien nítida y 
leer inmediatamente el espesor de la capa de grasa acumulada en la parte superior calibrada 
del butirómetro 
Cálculos: 
• La lectura debe realizar a una temperatura de 60-65°C y siempre con el butirómetro en 
posición vertical 
• Para un ajuste adecuado del tapón de cierre, se puede hacer coincidir la base de la 
columna de grasa con el cero de la escala. Leyendo a la altura del menisco de la columna 
de grasa (se lee directamente el % de w/v (peso/volumen) de la grasa de la leche. 
• Si no es posible ajustar la superficie inferior de la columna de grasa a cero, se ajusta a 
la marca del % completo más próxima y se tiene en cuenta al efectuar la lectura del 
menisco superior. 
• La lectura obtenida del butirómetro Gerber, expresa el contenido en materia grasa de la 
leche en porcentaje de volumen, es decir, % de materia grasa en 100 ml de leche 
 
C) DETERMINACIÓN DE LA DENISDAD EN ACEITES (METODO PICNOMETRO) 
Material: 
Picnómetro 
Balanza analítica 
Baño maría (20 °C) 
Papel filtro (cuadro 5x5cm) 
Papel absorbente* 
Reactivos: 
H2O destilada 
Metodología (C): 
El picnómetro debe ser lavado con una mezcla de dicromato de potasio y ácido sulfúrico 
concentrado, enjuagarlo meticulosamente con agua corriente y posteriormente destilada. Se 
seca en estufa y se enfría en desecador 
1.- Pesar el picnómetro limpio y seco 
2.- Llenar el picnómetro con el aceite a analizar 
3.- Colocar la tapa del picnómetro y colocarlo a baño maría a temperatura de 20°C 
4.- Parte del aceite saldrá por el capilar de la tapa, esto permite asegurar el llenado. Después 
de que el picnómetro y su contenido han alcanzado la temperatura del baño, el aceite que 
rebasa a través de la tapa debe ser limpiado rápidamente con el papel filtro, evitando que el 
papel absorba parte del aceite del picnómetro (importante) 
5.- Retirar el picnómetro del baño y secarlo con una toalla absorbente 
6.- Colocar la cubierta o capuchón sobre la tapa tan pronto se retire el picnómetro del baño para 
evitar la evaporación 
7.- Después que el exterior del picnómetro ha sido secado, pesarlo inmediatamente 
8.- Se procede de la misma forma con un blanco de agua: llenar el picnómetro con agua 
destilada (de preferencia previamente hervida y enfriada 2 a 3 grados por debajo de la 
temperatura a la cual se determina la gravedad especifica) 
 Cálculos: 
Determinar la densidad de casa una de las muestras empleadas con la siguiente formula 
Grav. Esp. = 
 
Donde: 
W1= Peso del picnómetro en gramos limpio y seco 
W2= Peso del picnómetro en gramos contenidos de agua destilada a una temperatura de 20°C 
W3= Peso del picnómetro en gramos conteniendo el aceite a una temperatura de 20°C 
 
PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 
Realizar el reporte de la práctica y los cálculos correspondientes. 
CUESTIONARIO: 
W3 - W1 
W2 – W1 
1.- ¿Cuál es el fundamento general y las etapas del proceso Soxhlet y cuál es la diferencia 
respecto a una destilación simple? 
2.- ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de usar este método? Y que alimentos no pueden 
ser procesados mediante este método 
3.- ¿A qué se refiere el extracto o fase etéreos? 
4.- ¿Cuáles son las características de los disolventes que se pueden usar en esta técnica y 
porque son usados exclusivamente para este método? 
5.- ¿Cuál es la normatividad mexicana respecto a la determinación del % de grasas en los 
alimentos y a la técnica usada? refiere las consideraciones pertinentes. 
REFERENCIAS 
Matissek y colaboradores, Análisis de los Alimentos. Fundamentos, Métodos y Aplicaciones, 
Ed. Acribia. 
R. Cela, R.A. Lorenzo, M. del Carmen Casais, Técnicas de Separación en Química Analítica, 
Ed. Síntesis, Madrid. 
D.L. Pavia, G.M. Lampman, G.S. Kriz, Química Orgánica Experimental, Ed. Universitaria de 
Barcelona Eunibar, 1978. 
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American Public Health 
Association, American Water Works Association, Water Pollution Control Federation. 21 ed., 
New York. 2005