TALLER DE INMUNOENSAYOS

Vista previa del material en texto

TALLER DE INMUNOENSAYOS
DANNA PATERNINA MAUSSA
VANESSA CALONGUE MARSILIA
RESPUESTA 1
La técnica del radioinmunoensayo (RIA) fue desarrollada para determinar la concentración de insulina en el plasma sanguíneo. Hoy en día, esta técnica se utiliza para detectar y cuantificar sustancias que se encuentran en cantidades muy pequeñas y mezcladas con muchas otras. Es por tanto una técnica muy sensible y muy específica. Utilizando anticuerpos de gran afinidad se pueden detectar hasta picogramos de antígeno.
RESPUESTA 2
No se utiliza ampliamente esta técnica debido a l necesidad de equipos especiales y el uso de isopos radioactivos, lo que implica la sujeción a múltiples normas para la utilización, conservación y desecho de estos productos, de acuerdo con las legislaciones de cada país y con las normativas internacionales.
RESPUESTA 3
El ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas. Se trata de una técnica de laboratorio que permite detectar pequeñas partículas llamadas antígenos, que habitualmente son fragmentos de proteínas. La identificación es específica, es decir, consigue que pequeños segmentos de proteínas destaquen y no puedan ser confundidas con otras.
Para poder identificar los antígenos se utilizan moléculas con dos componentes acoplados: un anticuerpo (que se une al antígeno de forma específica) y una enzima (que se activa y señala la unión al antígeno).
RESPUESTA 4
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
El procedimiento se realiza en un paso básico de reacción. La muestra clínica que presuntamente contiene antígenos del microorganismo bajo estudio es puesta en contacto con un anticuerpo monoclonal dirigido contra dicho microorganismo conjugado con fluoresceína. Si el antígeno esperado está presente se formará un complejo antígeno -anticuerpo. La reacción positiva en forma de fluorescencia verde manzana puede verse con la ayuda de un microscopio de fluorescencia. 
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
Es una técnica de doble capa en donde se aplica el anticuerpo sin marcar directamente sobre el sustrato de tejido y se visualiza por tratamiento con un suero anti -inmunoglobulina conjugado con fluorocromo.
El proceso consta de dos etapas:
· Primera etapa: se fijan sobre un portaobjetos los antígenos que constituyen el substrato conocido específico (células que contiene virus, T. gondii, T. pallidum, etc.) sobre él se coloca el suero de quien se sospecha la presencia de anticuerpos específicos, si la reacción es positiva se dará formación de complejo antígeno -anticuerpo no visible ya que el anticuerpo no estaba marcado.
· Segunda etapa: se agrega una anti -inmunoglobulina humana marcada, que reaccionar á con el anticuerpo del complejo producido en la primera etapa.
RESPUESTA 5
DAPI (emite luz azul) para marcar cromosomas, GFP (proteína verde fluorescente intracelular que emite luz verde) y rodamina (luz roja) para marcar microtúbulos.
RESPUESTA 6
La inmunofluorescencia directa se utiliza para diagnosticar enfermedades de tipo autoinmunitario, es decir, aquéllas en las cuales las defensas pierden el control y atacan algún órgano de nuestro propio organismo.
· presenta, frente al cultivo convencional, la ventaja de su mayor rapidez y especificidad diagnóstica.
· permiten detectar la presencia de un antígeno o anticuerpo en células o tejidos. 
RESPUESTA 7
La electroforesis es una técnica que se utiliza de forma generalizada en la que, fundamentalmente, se aplica corriente eléctrica a moléculas biológicas, ya sean ADN, proteínas o ARN..., y se separan en función de si son más grandes o más pequeñas. Se utiliza en una gran variedad de aplicaciones... como en medicina forense para determinar la identidad de las personas que puedan haber participado en un delito, mediante la vinculación de su patrón de ADN -su patrón de electroforesis- a uno que esté en una base de datos. El proyecto genoma humano se llevó a cabo con algo que se llama electroforesis capilar, mediante la separación de ADN en piezas más cortas y su separación en geles de electroforesis que permite a los patrones de A, C, T y G ser caracterizados. También son muy importantes en la investigación de proteínas, y en la investigación de mutaciones genéticas, porque cuando las proteínas o el ADN están mutados, son con frecuencia más o menos largos, y, por lo tanto, aparecen en un gel de electroforesis de manera diferente de lo normal. Las pruebas de diagnóstico para muchos casos todavía se realizan mediante electroforesis.
RESPUESTA 8
Western blot es una técnica de laboratorio utilizado para detectar una proteína específica en una muestra de sangre o tejido. El método implica el uso de electroforesis en gel para separar las proteínas de la muestra.
 La membrana se expone a un anticuerpo específico contra la proteína en estudio. La unión del anticuerpo se detecta usando un marcador radiactivo o químico. Un Western Blot se utiliza a veces para diagnosticar enfermedades.
RESPUESTA 9
●La prueba de Western blot es eficaz en la detección, simultanea de anticuerpos en pacientes con cisticercosis, hidatidosis y fascioliasis humana, y puede ser utilizada como prueba de descarte o confirmatoria en zonas endémicas.
● En el laboratorio si queremos medir si una proteína específica se expresa en una muestra. Podemos hacer esto tomando el material de la muestra y correrlo en un gel, y luego transferir las proteínas resueltas en una pieza especial de una membrana de papel, si se quiere y luego se expone el papel a una sonda que contiene un anticuerpo contra la proteína específica de interés. Debido a que el anticuerpo está marcado con una molécula que podremos visualizar, podemos preguntarnos si la proteína de interés se expresa en esta muestra y tener una idea de la concentración, así como la composición y el tamaño es la proteína.