TECNICAS HISTOLOGICAS 2

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“AÑO DEL BUEN SERVICIO AL CIUDADANO “
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE MORFOLOGÍA HUMANA
SECCIÓN DE HISTOLOGÍA
TEMA: “TÉCNICAS HISTOLÓGICAS II”
PROMOCIÓN LV
TRUJILLO-PERÚ
2017
ÍNDICE
I. Introducción……………………………………………………………………...2
II. Desarrollo temático…………………………...…………………………………3
1. Técnica histológica………………………………………………………….3
2. Elaboración de la coloración de hematoxilina-eosina……………….…..5
3. Tipos de coloración presentes en el laboratorio…………………………6
4. Instrumentos del laboratorio para obtener preparados histológicos….7
5. Tamaños de láminas portaobjetos utilizados en laboratorio…………..10
6. Instrumentos para observación de láminas histológicas………………11
7. Capacidad intelectual del técnico de laboratorio adquirida a través de su experiencia…………………………………………………………..….14 
III. Conclusiones…………………………………………………………..……….14
IV. Bibliografía……………………………………………………………………..14 
I. INTRODUCCIÓN
La histología aborda el estudio microscópico de la morfología y características de los tejidos, por ello es necesario conocer a través de qué procesos pueden obtenerse las muestras necesarias para su estudio, por lo que es necesario el uso de las Técnicas Histológicas. En el presente informe se describirá el protocolo necesario para la obtención de láminas histológicas, abarcaremos la coloración Hematoxilina – Eosina y mencionaremos otros tipos de coloración utilizados. La importancia de este informe radica en que comprenderemos las diversas técnicas usadas en el laboratorio, así como también, permite informarnos sobre los materiales y equipos con los que nuestra Facultad cuenta para hacer uso correcto de estos en posteriores investigaciones a lo largo de nuestra carrera. 
OBJETIVOS
1. Elaborar un cuadro sinóptico indicando los pasos a seguir desde la obtención hasta la coloración de una muestra, mencionando las tinciones y colorantes más utilizados. 
2. Detallar los materiales y el proceso para la elaboración de la coloración Hematoxilina – Eosina. 
3. Mencionar los tipos de coloración utilizados en el laboratorio
4. Describir lo instrumentos con los que cuenta el laboratorio para la obtención de preparados histológicos. 
II. DESARROLLO TEMÁTICO
1. TÉCNICA HISTOLÓGICAIncisional: Retira un fragmento de tejido sano con tejido afectado
Excisional: Retira la totalidad de la lesión
OBTENCIÓN DEL MATERIAL
 TINCIÓN DE HEMATOXILINA Y EOSINA:
TINCIÓN
Son utilizados en ocasiones para distinguir una estructura en particular
COLORACIONES ESPECIALES
Son utilizados mayormente en las muestras de tejido de los laboratorios de histología.
COLORACIONES DE RUTINA
Hematoxilina 
· Tiene comportamiento básico
· Se obtiene de palo de Campeche 
· Tiñe los núcleos de color azul purpura(los ácidos nucleicos)
· Colorante sintético 
· Da una reacción acida
· Tiñe los citoplasmas de color rosa
· Se une a las proteínas plasmáticas
· Glucógeno
· Mucina
· Membrana basal
· Reticulina
· Colorante citoplasmático (Chromotropo 2R), Azul de Anilina y Acido Fosfotúngstico
· Tiñe citoplasma y fibras musculares de rojo, núcleo de azul
Gomori
· Hematoxilina férrica de weigert, fucsina ácida, azul de anilina
· Tiñen las fibras colágenas y elásticas
· Anilina azul, fucsina ácida y naranja G
· Tiñen el colágeno, citoplasma, eritrocitos
Masson
Mallory
 Tricrómicos
Contiene un colorante nuclear y almenos dos colorantes aniónicos
· Tinción de retículo (fibras reticulares) y membranas basales
· Tinción de lípidos (corte congelado)
· Usado para marcar triglicéridos lipoproteínas y lípidos.
Impregmentación Argéntica
Sudan III
Ácido Peryódico de Shiff
 Es útil para teñir:
· Se coloca una sustancia hidrofóbica para lograr un preparado permanente
· Luego se cubre la muestra con un cubreobjetos 
MONTAJE
Se utiliza para observar la composición general de las células. El contraste es con dos colorantes: hematoxilina y eosina.
Eosina
2. ELABORACIÓN DE LA COLORACIÓN DE HEMATOXILINA-EOSINA
HEMATOXILINA DE HARRIS:
MATERIALES:
· Sulfato de potasio y aluminio: 100g.
· Agua destilada: 1000ml.
· Hematoxilina en polvo: 5g.
· Oxido de mercurio: 2.5g.
· Alcohol etílico absoluto: 50ml.
· Ácido acético glacial: 40ml.
PREPARACIÓN:
1. En un frasco Erlenmeyer grande (de 2 a 3 litros) se pone el agua destilada y se disuelve el sulfato de potasio y aluminio, calentando y agitando.
2. Se lleva a 60°C; se añade la solución formada por la Hematoxilina en el alcohol absoluto y que ha sido preparada aparte al calor suave.
3. Llevar la solución a ebullición dejándola hervir por 3 minutos, retirar de la llama y llevar inmediatamente a una cubeta de agua fría a la vez que se añade el óxido de mercurio. Resulta conveniente para añadir esta sustancia envolverlo en un pequeño círculo de papel de filtro, evitando así que el óxido de mercurio se pegue al cuello del recipiente.
4. Mezclar por movimientos de rotación. Dejar en reposo y una vez fría la solución se añade el ácido acético glacial, se filtra antes de usar. 
EOSINA:
MATERIALES:
· Ácido clorhídrico concentrado: 0.5ml.
· Alcohol etílico al 80%: 99.5ml.
PREPARACIÓN:
La eosina más utilizada es la eosina Y (solubilidad: 44% en agua y 2% en alcohol etílico). La solución alcohólica se puede preparar al 0.5% o al 1%.
1. La eosina se disuelve en 20ml.de agua destilada y se añade 80ml.de alcohol etílico al 96%.
2. La coloración con eosina se vuelve más intensa y selectiva, añadiendo a la solución 0.2ml. de ácido acético glacial por cada 100 de solución alcohólica.
3. TIPOS DE COLORACIÓN PRESENTES EN EL LABORATORIO
En el laboratorio se utilizan 10 tipos de coloraciones:
· Hematoxilina-Eosina
· Tinta china
· Pollack
· Bielschowsky
· Aldehído fucsina de Ganori
· Hematoxilina férrica de Heidenhain 
· Wright: Tipo de tinción usada en histología para facilitar la diferenciación de los tipos de células de la sangre. Se usa principalmente para teñir frotis de sangre y punciones medulares. Está compuesta por azul de metileno y eosina. Las estructuras con carácter ácido tales como los ácidos nucleicos o las proteínas ácidas son afines por compuestos básicos como lo es el azul de metileno contenido en la tinción. Por el contrario, las estructuras de carácter básico tales como la hemoglobina y otras proteínas básicas son afines a compuestos ácidos tales como la eosina contenida en la tinción por lo que a la vista estas estructuras tendrán un color rojo-rosado.
· Tricómica de Gomori
· Impregnación argéntica
· Luxol fast blue
La única coloración que es elaborada en el laboratorio es Hematoxilina-Eosina; los 9 restantes son comprados debido a la falta de reactivos en el laboratorio.
4. INSTRUMENTOS DEL LABORATORIO PARA OBTENER PREPARADOS HISTOLÓGICOS
UTENSILIOS:
· Frascos con tapa esmerilada: Recipiente muy utilizado antiguamente en los laboratorios para la conservación de reactivos químicos. La boca contiene una zona esmerilada que permite cerrar perfectamente el frasco.
· Frascos Koplin: se caracterizan por ser cuadrados con paredes rectangulares. Algunos están diseñados para ser utilizados en posición vertical y otros de forma horizontal, pero todos tienen, en dos de sus paredes inferiores que quedan frente a frente, 4 ó más salientes de vidrio de 1mm de grosor alineados a todo lo largo con una separación de 2 mm entre sí, lo que posibilita la inserción de varias láminas portaobjetos, de manera que quedan separados.
Están provistos de tapas de vidrio y se utilizan para fijar preparaciones sobre láminas portaobjetos y/o colorearlas.
· Tasas de porcelana: Utilizada en la recepción de parafina fundida en el proceso de preparados histológicos. 
· Láminas portaobjetos: Lamina de vidrio rectangular de color transparente utilizada para almacenar muestras y objetos con el fin de observarlas bajo el microscopio. Pueden estar hechos de vidrio, vidrio borosilicatado, y plástico.
· Láminas cubreobjetos: Un cubreobjetos es una fina hoja de material transparente de planta cuadrada o rectangular. Usualmenteestán manufacturados de vidrio, por ejemplo, vidrio de silicato o de borosilicato (utilizadas en el laboratorio de la UNT), aunque además los hay hechos de plásticos especializados. Usualmente poseen un tamaño que encaja bien dentro de los límites del portaobjetos; el espesor del cubreobjetos es crucialmente importante para la microscopía de alta resolución. 
EQUIPOS:
· Estufa: Instrumento usado para aplicar calor a diferentes procesos en el caso de los preparados histológicos es usado en la fundición de la parafina.
· Cocina eléctrica: Empleado en procesos que requieran calor, se puede emplear para fundir la parafina en el proceso de inclusión. 
· Micrótomo de Minot: Instrumento de precisión con el que se obtienen series ininterrumpidas de cortes de un determinado grosor producidos por el movimiento de la manivela, estos son depositados en una superficie para ser examinados. 
· Flotador de tejidos o baño María (en el laboratorio una plancha secadora): instrumento empleado para la extensión de las muestras; en el caso de la plancha secadora se coloca una caja de Petri con agua hasta alcanzar 45° C, luego se procede a colocar la muestra para su extensión. 
REACTIVOS:
· Formol al 10%: Es el fijador más utilizado y se utiliza para preservar la morfología y la naturaleza química celular y tisular, reacciona con los grupos amino primarios y diversas regiones de las proteínas, pero tiene poca reactividad con los lípidos por lo que no es un buen fijador de membranas celulares. 
· Alcohol corriente y absoluto: Se utiliza para deshidratar la muestra para su posterior inclusión en parafina, el proceso es gradual en el que se pasa la muestra por 3 frascos de alcoholes corrientes (70º, 80º y 96º) y luego por tres alcoholes absolutos, se toma un tiempo de 1- 2 h por frasco.
· Xilol: Se usa como agente aclarante debido a su capacidad de mezclarse con alcohol y parafina, además es de rápida actividad. En el caso de que la muestra no esté completamente deshidratada, el Xilol se vuelve opaco o lechoso por lo que deberá pasarse, nuevamente, por el último frasco de alcohol utilizado en el caso que permanecer incoloro se mantendrá la muestra un tiempo d 30 minutos a 1 hora.
· Parafina: Es una mezcla de hidrocarburos que se utiliza en la inclusión debido a que permite aumentar la dureza y homogeneidad del bloque para una mejor obtención de cortes seriados.
· Las muestras de laboratorio se realizan con la extracción de tejidos de los órganos de perros, gatos y ratas. 
5. TAMAÑOS DE LAMINAS PORTAOBJETOS UTILIZADOS EN LABORATORIO
Se utilizan tres tamaños de láminas portaobjetos en el laboratorio:
· Las de medida estándar de 25,4 x 76,2 mm, estas son utilizadas en la mayoría de muestras.
· Las utilizadas para muestras más grandes, como las de cerebelo, de proporciones 3 x 2 pulgadas y las de 3 x 1.5 pulgadas.
Las láminas histológicas presentes en el laboratorio son de las siguientes muestras:
	MUESTRA
	COLORACIÓN EMPLEADA
	Hígado de rata
	Tinta china
	Piel (Talón)
	Tricómica de Pollack
	Bazo
	Tinción de Bielschowsky
	Cartílago elástico
	Aldehído fucsina de Ganori
	Músculo
	Hematoxilina férrica de Heidenhain
	Sangre
	Wright
	Riñón
	Hematoxilina- eosina
	Pie (Pulpejo de dedo)
	Tricómica de Gomori
	Ganglio raquídeo
	Luxol fast blue
	Nervio raquídeo
	Impregnación argéntica
	Médula espinal cervical
	Luxol fast blue
	Médula espinal dorsal
	Luxol fast blue
	Médula espinal lumbar- sacro
	Luxol fast blue
	Corteza cerebral
	Hematoxilina- eosina
	Cerebelo
	Luxol fast blue
6. INSTRUMENTOS PARA OBSERVACIÓN DE LÁMINAS HISTOLÓGICAS:
Los microscopios son instrumentos que nos permiten observar objetos muy pequeños o detalles que nos son imposibles de ver a simple vista, en el laboratorio poseemos tres tipos de microscopios óptico:
· MICROSCOPIO SIMPLE (LUPA O MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO)
· Consta de una sola lente o de un solo sistema de lentes convergentes biconvexas (Parte óptica). 
· Sostenidas por un soporte de tornillos de enfoque (Parte mecánica).
· Distancia focal pequeña (5-10 cm.
· Produce una imagen virtual, derecha, aumentada entre 2 y 20-30 veces.
· Puede poseer un sistema de iluminación integrado y adaptarse a ellos una cámara fotográfica o de vídeo. 
· MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO O CONVENCIONAL
· Presenta tres sistemas de lentes:
· En el condensador, enfoca el rayo de luz sobre la imagen.
· En los objetivos para magnificar la imagen.
· En los oculares para dar mayor aumento y visualizar la imagen.
· La parte mecánica consta de pie, columna, tubo, platina y tornillos para el enfoque.
· El sistema de iluminación se encuentra debajo de la platina y consta de una fuente de luz, natural o artificial, espejo, filtros y diafragma.
En el laboratorio contamos con dos tipos de microscopios ópticos compuestos: 
MICROSCOPIO MONOCULAR SIN LUZ INCORPORADA
· Presenta una sola lente ocular.
· La luz es reflejada por un espejo hacia la muestra.
· La fuente de luz puede ser natural o artificial, pero es recomendable la natural.
MICROSCOPIO BINOCULAR CON LUZ INCORPORADA
· Presenta dos lentes oculares, cuya distancia entre estos puede ser regulada.
· Posee un sistema de luz incorporado y un doble aumento. 
7.	CAPACIDAD INTELECTUAL DEL TÉCNICO DE LABORATORIO ADQUIRIDA A TRAVÉS DE SU EXPERIENCIA
El técnico Pita durante sus 20 años de servicio en el laboratorio de la UNT desarrolló el manejo de la preparación de tejidos, gracias a los estudios realizados en el estudio en el instituto superior tecnológico de chanchan. 
III CONCLUSIONES
1. La única coloración que es elaborada en el laboratorio de la UNT es Hematoxilina-Eosina debido al bajo costo de los reactivos para su preparación, los 9 restantes son comprados debido a la falta de reactivos en el laboratorio.
2. Se utilizan diversos tipos de coloración para poder identificar en la muestras distintas estructuras ya sea citoplasma, núcleo, membrana celular, etc.
3. E l tamaño de la lámina portaobjetos es utilizada dependiendo el tamaño de extensión de la muestra histológica.
4. Muchos de los utensilios en el laboratorio de histología permiten obtener preparados histológicos, pero no se encuentran en óptimas condiciones, por ende no se elaboran muestras adecuadas.
IV BIBLIOGRAFÍA
1. Montuenga B, Esteban R, Calvo G. Téncicas en histología y biología celular.2 ed.España:Elsevier;2009.
2. Cormack D.Histología de Ham.9 ed.México: Harla; 2001
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