TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

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“AÑO DEL BUEN SERVICIO AL CIUDADANO“
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA ACADÉMICA PROFESIONAL DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE MORFOLOGÍA HUMANA
SECCIÓN DE HISTOLOGÍA
TEMA: “TÉCNICAS HISTOLÓGICAS”
PROMOCIÓN LV
TRUJILLO-PERÚ
2017
INTRODUCCIÓN
La histología aborda el estudio microscópico de la morfología y características de los tejidos, por ello es necesario conocer a través de qué procesos pueden obtenerse las muestras necesarias para su estudio, por lo que es necesario el uso de las Técnicas Histológicas. En el presente informe se describirá el protocolo necesario para la obtención de láminas histológicas, abarcaremos la coloración Hematoxilina – Eosina y mencionaremos otros tipos de coloración utilizados. La importancia de este informe radica en que comprenderemos las diversas técnicas usadas en el laboratorio, así como también, permite informarnos sobre los materiales y equipos con los que nuestra Facultad cuenta para hacer uso correcto de estos en posteriores investigaciones a lo largo de nuestra carrera. 
OBJETIVOS
1. Detallar los materiales y el proceso para la elaboración de la coloración Hematoxilina – Eosina. 
2. Mencionar los tipos de coloración utilizados en el laboratorio
3. Describir lo instrumentos con los que cuenta el laboratorio para la obtención de preparados histológicos. 
4. Elaborar un cuadro sinóptico indicando los pasos a seguir desde la obtención hasta la coloración de una muestra, mencionando las tinciones y colorantes más utilizados. 
1. ¿Qué materiales se utiliza para la elaboración de la coloración Hematoxilina-Eosina y qué proceso realizan para su preparación?
HEMATOXILINA DE HARRIS:
MATERIALES:
· Sulfato de potasio y aluminio: 100g.
· Agua destilada: 1000ml.
· Hematoxilina en polvo: 5g.
· Oxido de mercurio: 2.5g.
· Alcohol etílico absoluto: 50ml.
· Ácido acético glacial: 40ml.
PREPARACIÓN:
1. En un frasco Erlenmeyer grande (de 2 a 3 litros) se pone el agua destilada y se disuelve el sulfato de potasio y aluminio, calentando y agitando.
2. Se lleva a 60°C; se añade la solución formada por la Hematoxilina en el alcohol absoluto y que ha sido preparada aparte al calor suave.
3. Llevar la solución a ebullición dejándola hervir por 3 minutos, retirar de la llama y llevar inmediatamente a una cubeta de agua fría a la vez que se añade el óxido de mercurio. Resulta conveniente para añadir esta sustancia envolverlo en un pequeño círculo de papel de filtro, evitando así que el óxido de mercurio se pegue al cuello del recipiente.
4. Mezclar por movimientos de rotación. Dejar en reposo y una vez fría la solución se añade el ácido acético glacial, se filtra antes de usar. 
EOSINA:
MATERIALES:
· Ácido clorhídrico concentrado: 0.5ml.
· Alcohol etílico al 80%: 99.5ml.
PREPARACIÓN:
La eosina más utilizada es la eosina Y (solubilidad: 44% en agua y 2% en alcohol etílico).La solución alcohólica se puede preparar al 0.5% o al 1%.
1. La eosina se disuelve en 20ml.de agua destilada y se añade 80ml.de alcohol etílico al 96%.
2. La coloración con eosina se vuelve más intensa y selectiva, añadiendo a la solución 0.2ml. de ácido acético glacial por cada 100 de solución alcohólica.
2. ¿Cuántos y qué tipos de coloración maneja el laboratorio?
En el laboratorio se utilizan 10 tipos de coloraciones:
· Hematoxilina-Eosina
· Tinta china
· Pollack
· Bielschowsky
· Aldehído fucsina de Ganori
· Hematoxilina férrica de Heidenhain 
· Wright: Tipo de tinción usada en histología para facilitar la diferenciación de los tipos de células de la sangre. Se usa principalmente para teñir frotis de sangre y punciones medulares. Está compuesta por azul de metileno y eosina. Las estructuras con carácter ácido tales como los ácidos nucleicos o las proteínas ácidas son afines por compuestos básicos como lo es el azul de metileno contenido en la tinción. Por el contrario las estructuras de carácter básico tales como la hemoglobina y otras proteínas básicas son afines a compuestos ácidos tales como la eosina contenida en la tinción por lo que a la vista estas estructuras tendrán un color rojo-rosado.
· Tricómica de Gomori
· Impregnación argéntica
· Luxol fast blue
· La única coloración que es elaborada en el laboratorio es Hematoxilina-Eosina; los 9 restantes son comprados debido a la falta de reactivos en el laboratorio.
3. ¿Qué tipos de láminas se utilizan en el laboratorio y para que tipos de muestra se utilizan?
· Se utilizan tres tamaños de láminas portaobjetos en el laboratorio:
· Las de medida estándar de 25,4 x 76,2 mm, estas son utilizadas en la mayoría de muestras.
· Las utilizadas para muestras más grandes, como las de cerebelo, de proporciones 3 x 2 pulgadas y las de 3 x 1.5 pulgadas.
· Las láminas histológicas presentes en el laboratorio son de las siguientes muestras:
	· MUESTRA
	· COLORACIÓN EMPLEADA
	· Hígado de rata
	· Tinta china
	· Piel (Talón)
	· Tricómica de Pollack
	· Bazo
	· Tinción de Bielschowsky
	· Cartílago elástico
	· Aldehído fucsina de Ganori
	· Músculo
	· Hematoxilina férrica de Heidenhain
	· Sangre
	· Wright
	· Riñón
	· Hematoxilina- eosina
	· Pie (Pulpejo de dedo)
	· Tricómica de Gomori
	· Ganglio raquídeo
	· Luxol fast blue
	· Nervio raquídeo
	· Impregnación argéntica
	· Médula espinal cervical
	· Luxol fast blue
	· Médula espinal dorsal
	· Luxol fast blue
	· Médula espinal lumbar- sacro
	· Luxol fast blue
	· Corteza cerebral
	· Hematoxilina- eosina
	· Cerebelo
	· Luxol fast blue
4. ¿Qué instrumentos tiene el laboratorio que permita obtener sus preparados histológicos?
UTENSILIOS:
· Frascos con tapa esmerilada: Recipiente muy utilizado antiguamente en los laboratorios para la conservación de reactivos químicos. La boca contiene una zona esmerilada que permite cerrar perfectamente el frasco.
· Frascos Koplin: se caracterizan por ser cuadrados con paredes rectangulares. Algunos están diseñados para ser utilizados en posición vertical y otros de forma horizontal, pero todos tienen, en dos de sus paredes inferiores que quedan frente a frente, 4 ó más salientes de vidrio de 1mm de grosor alineados a todo lo largo con una separación de 2 mm entre sí, lo que posibilita la inserción de varias láminas portaobjetos, de manera que quedan separados.
Están provistos de tapas de vidrio y se utilizan para fijar preparaciones sobre láminas portaobjetos y/o colorearlas.
· Tasas de porcelana: Utilizada en la recepción de parafina fundida en el proceso de preparados histológicos. 
· Láminas portaobjetos: Lamina de vidrio rectangular de color transparente utilizada para almacenar muestras y objetos con el fin de observarlas bajo el microscopio. Pueden estar hechos de vidrio, vidrio borosilicatado, y plástico.
· Láminas cubreobjetos: Un cubreobjetos es una fina hoja de material transparente de planta cuadrada o rectangular. Usualmente están manufacturados de vidrio, por ejemplo vidrio de silicato o de borosilicato (utilizadas en el laboratorio de la UNT), aunque además los hay hechos de plásticos especializados. Usualmente poseen un tamaño que encaja bien dentro de los límites del portaobjetos; el espesor del cubreobjetos es crucialmente importante para la microscopía de alta resolución. 
EQUIPOS:
· Estufa: Instrumento usado para aplicar calor a diferentes procesos en el caso de los preparados histológicos es usado en la fundición de la parafina.
· Cocina eléctrica: Empleado en procesos que requieran calor, se puede emplear para fundir la parafina en el proceso de inclusión. 
· Micrótomo de Minot: Instrumento de precisión con el que se obtienen series ininterrumpidas de cortes de un determinado grosor producidos por el movimiento de la manivela, estos son depositados en una superficie para ser examinados. 
· Flotador de tejidos o baño María (en el laboratorio una plancha secadora): instrumento empleado para la extensión de las muestras; en el caso de la plancha secadora se coloca una caja de Petri con agua hasta alcanzar 45° C, luego se procede a colocar la muestra para su extensión. 
REACTIVOS:
· Formolal 10%: Es el fijador más utilizado y se utiliza para preservar la morfología y la naturaleza química celular y tisular, reacciona con los grupos amino primarios y diversas regiones de las proteínas, pero tiene poca reactividad con los lípidos por lo que no es un buen fijador de membranas celulares. 
· Alcohol corriente y absoluto: Se utiliza para deshidratar la muestra para su posterior inclusión en parafina, el proceso es gradual en el que se pasa la muestra por 3 frascos de alcoholes corrientes (70º, 80º y 96º) y luego por tres alcoholes absolutos, se toma un tiempo de 1- 2 h por frasco.
· Xilol: Se usa como agente aclarante debido a su capacidad de mezclarse con alcohol y parafina, además es de rápida actividad. En el caso de que la muestra no esté completamente deshidratada, el Xilol se vuelve opaco o lechoso por lo que deberá pasarse, nuevamente, por el último frasco de alcohol utilizado en el caso que permanecer incoloro se mantendrá la muestra un tiempo d 30 minutos a 1 hora.
· Parafina: Es una mezcla de hidrocarburos que se utiliza en la inclusión debido a que permite aumentar la dureza y homogeneidad del bloque para una mejor obtención de cortes seriados.
· Las muestras de laboratorio se realizan con la extracción de tejidos de los órganos de perros, gatos y ratas. 
5. ¿Qué capacidad tiene nuestro técnico de laboratorio?
El técnico durante sus 20 años de servicio en el laboratorio de la UNT desarrollo el manejo de la preparación de tejidos.