2012 -FILMINA DIAGNOSTICO

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DIAGNOSTICO DE 
ENFERMEDADES
VIRUS y VIROIDES
POSTULADOS DE KOCH
El patógeno acompaña siempre a la 
enfermedad, la cual no se manifiesta 
en su ausencia
El microorganismo puede ser aislado 
en cultivo puro y/o estudiarse en sus 
características
La inoculación del microorganismo en 
el hospedante susceptible debe 
reproducir los síntomas
El patógeno reaislado de la planta 
infectada debe tener idénticas 
características al aislado anteriormente
1
2
3
4
Observar
SIGNO
Aislar
Estudiar 
características
Inocular
Reaislar
Identificar
Cámara húmeda (previa desinfección superficial)
Inducción de la aparición del signo (cuando no se observa el desarrollo 
del patógeno)
Estructuras fúngicas
Zoogleas
Signo no presente
Bacteriosis
Virus, viroides y Mollicutes
Enfermedad
no parasitaria
Eflorescencias,
Estructuras 
sexuales o asexuales
(hongos necrótrofos)
Inclusiones celulares
POTYVIRUS: molinete o espina de pescado
CLOSTEROVIRUS: alargadas en floema
VIRUS
Transmisibilidad
Mecánica 
o por jugos 
Insectos
Injerto
Polen
Propiedades in vitro
Agámica
Semilla
Diagnóstico
•Punto de inactivación termal
•Punto final de dilución
•Longevidad in vitro
•Acción de compuestos químicos
•Desecamiento
Cuscuta
Plantas Indicadoras
Exocortis Tristeza
Indicador: Lima Mejicana o lima 
Key (Citrus aurantifolia)
Síntomas a observar:
Abarquillados de hojas (cupping)
Indicador: Cidra Etrog Arizona 861 
S1 (Citrus medica) injertado sobre un 
portainjerto vigoroso. 
Síntomas a observar: Epinasía de 
hojas
SEROLOGIA
ANTIGENO ANTICUERPO
Savia infectada Suero animal
Positivos
Negativos
 Serología
ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)
TECNICAS MOLECULARES
Ventajas:
•Detección microorganismos en muy bajas concentraciones
•Identificación de microorganismos que no pueden cultivarse 
 o cuya identificación es difícil
•Detección de la enfermedad en estadíos iniciales
•Resultados rápidos
•Análisis de numerosas muestras
Desventajas
•Equipamiento costoso
•El microorganismo detectado 
puede no ser viable
En el diagnóstico de nuevas enfermedades
acompañar con pruebas de patogenicidad
TECNICAS MOLECULARES
3¨5¨
5¨3¨
DNA
target
primers
Taq
PCR : ETAPAS
Desnaturalización
ADN problema
Pegado de primers
Extensión cadena 
(polimerasa)
Formación cadenas largas
Pegado de primers
Extensión cadena 
(polimerasa)
Formación segmentos 
largo deseado
Tiras reactivas
Diagnóstico de enfermedades virósicas
Observación de síntomas
Sospecha de virus? Búsqueda bibliográfica
NO SI
Confirmo con técnicas 
específicas
Estudio de sus características
•Transmisibilidad
•Propiedades in vitro
•Microscopio electrónico
ELISA
ME PCR
Planta
Indicadora
http://www.biologie.uni-hamburg.de/b-online/fo35/1f.jpg
http://bakerlab.berkeley.edu/images/rotating_images/h_tmv_lg.gif
http://webpages.ull.es/users/fcorzo/electroforesis/Imagenes/gelneli.gif
Diagnóstico de enfermedades causadas por hongos
Observación directa Signo está 
presente?
SI
NO
Cámara húmeda NO
SI
Confirmo con:
•Pruebas de 
patogenicidad
•Técnicas 
moleculares
•Otros
•Aislamiento
•Estudio de sus características
•Pruebas de patogenicidad
•Reaislamiento
•Claves - Bibliografía
Puedo
reconocerlo?
Postulados 
de Koch
http://www.viarural.com.ar/viarural.com.ar/agricultura/aa-enfermedades/phomopsis-sojae.htm
Diagnóstico de enfermedades causadas por hongos
Aislamiento
•Siembra directa de tejido enfermo
•Suspensión de esporas
•Cultivo monosporico
Estudio de sus características morfológicas
Pruebas de Patogenicidad
Hospedante-Ambiente-Inóculo
Reaislamiento
Claves para identificación
http://images.google.com.ar/imgres?imgurl=http://www.otticamoreno.it/web2/images/Microscopio-400X_000.jpg&imgrefurl=http://www.otticamoreno.it/web2/MICROSCOPIRKS.htm&h=370&w=227&sz=32&hl=es&start=3&um=1&tbnid=AzbadxOuElvbtM:&tbnh=122&tbnw=75&prev=/images%3Fq%3Dmicroscopio%26ndsp%3D20%26svnum%3D10%26um%3D1%26hl%3Des%26sa%3DN
http://www.ipm.uiuc.edu/diseases/series600/rpd622/622_2_large.jpg
http://www.agri.gov.il/Units/Seeds/fd_pic7.jpg
Macerado en agua 
estéril
Purificación
Reacción de 
hipersensibilidad
Caracterización 
fisiológica y 
bioquímica
Prueba de 
patogenicidad
Serología PCR
Identificación
Diagnóstico de 
enfermedades bacterianas
Flujo bacteriano
Cortesía Dra. Ana Romero
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