flascard ac - Murialdo Brenda

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GENERALIDADES DE ACIDOS NUCLEICOS 
· C, H, O, N, P, S. 
· Carácter acido. 
· Macromoléculas formado por polimerización de nucleótidos en cadenas lineales. 
FUNCIONES 
a) Depositarios de la informacion genética y responsables de su transmisión. 
b) papel fundamental en la síntesis de proteínas y dirigen el correcto ensamble de aminoácidos en secuencias. 
c) Transporte de energía química en las células. 
d) Los nucleótidos de adenina forman parte de muchos cofactores enzimáticos. 
e) Moléculas reguladoras (segundos mensajeros). AMPc 
	
	
ACIDOS NUCLEICOS 
· Enlace N-B-glucosidico entre la base nitrogenada y la pentosa.
· Enlace ESTER entre la pentosa y el fosfato.
· Enlace fosfodiester entre nucleótidos. 
· Las bases se unen entre sí por puentes hidrógenos. 
NUCLEOTIDOS Un nucleótido se forma por esterificación con ácido ortofosfórico del hidroxilo de carbono 5 de la ribosa o desoxirribosa de un NUCLEOSIDO. 
Formados por: 
· Una base nitrogenada. 
· Un monosacárido de cinco carbonos ALDOPENTOSA.
· Ácido fosfórico. 
BASES NITROGENADAS 
Por hidrolisis de nucleótidos se obtienen sustancias derivadas de los núcleos heterocíclicos: PIRIMIDINA Y PURINA.
· Purina deriva de pirimidina por fusión de esta de un núcleo imidazol.
· Bases púricas: adenina y guanina. 
· Bases pirimidicas: timina, citosina y uracilo.
· Fórmulas de las bases púricas y pirimidínicas corresponden a la forma cetónica o lactama.
· Ambas bases tienen la propiedad de absorber radiaciones y esto es por la característica aromática.
AZUCAR 
El monosacárido puede ser D-ribosa o D-2-desoxirribosa. Adoptan la forma furanosa.
· Según esta pentosa tengo ARN o ADN. 
· Ribosa o desoxirribosa se unen al nitrógeno 9 de bases púricas o al nitrógeno 1 de bases pirimídicas mediante ENLACE GLUCOSIDICO BETA (N-B-glucosidico). 
· Esta unión permite libre rotación. La disposición espacial relativa de la base nitrogenada y del monosacárido pueden variar entre los dos extremos correspondientes a las formas sin y anti.
Nucleósido compuesto formado por:
1. una base nitrogenada púrica o pirimídica.
2. Aldopentosa.
· 1869: Friederich Miescher: descubrimiento del ADN.
· 1944: Avery, Mc Leod y Mc Cartey ( ADN es material hereditario).
· 1950: estudios de Chargaff, propone que las cantidades relativas de las 4 bases de los nucleótidos del ADN variaban y análisis mediante rayos x por Franklin y Wilkins. 
· 1953: Watson y Crick elaboraron el modelo de doble hélice para el ADN. 
1960 jacob descubre el ARN y describe los 3 r, m y t. luego se descubren los demás.
REGLAS DE CHARGAFF PARA ADN DE DOBLE HÉLICE – 1950
· La proporción de A es igual a la de T- La relación entre Adenina y Timina es igual a la unidad (A/T = 1).
· La proporción de G es igual a la de C. La relación entre Guanina y Citosina es igual a la unidad ( G/C=1).
· La proporción de bases púricas (A+G) es igual a la de las bases pirimidínicas (T+C). La relación entre (A+G) y (T+C) es igual a la unidad (A+G)/(T+C)=1.
· GENOMICA: ESTUDIO DEL GENOMA COMPLETO: determinación de la secuencia completa del ADN y la ubicación de los genes secuenciados en los diferentes cromosomas.
· PROTEOMICA: Estudio y caracterización de todo el conjunto de proteínas expresadas de un genoma (proteoma). 
· En los organismos pluricelulares el genoma de todas sus células es idéntico pero su proteoma es característico de cada tipo celular.
· La variación en la expresión de las proteínas del genoma permite la existencia de más de 200 tipos celulares diferentes en el organismo humano.
· La dilucidación completa del proteoma de un organismo es una tarea más difícil y compleja que la dilucidación de su genoma. 
· Para conocer realmente la función de los genes hay que conocer todas las características químicas, bioquímicas y biológicas de las proteínas que codifican. 
METODOLOGIAS QUE EMPLEA LA PROTEOMICA 
· 1964- ELECTROFORESIS EN GELES DE POLIACRILAMIDA
· 1970- SDS-PAGE (separación de las proteínas por su PM)
· 1970 – 2D-PAGE (electroforesis bidimensional)
Mediados del siglo XX: Espectrometría de masas: técnica micro analítica usada para identificar compuestos desconocidos, también para cuantificar compuestos conocidos, y para elucidar la estructura y propiedades químicas de moléculas. 
ESPECTROMETRIA DE MASA (EM)
Hallazgos de iones dentro de una mezcla, a su vez estos se ponen en un medio gaseoso y luego son detectados mediante un espectrómetro de masa. TECNICA EXACTA. 
· Análisis de ADN, péptidos, proteínas. MALBI
· La Cromatografía Líquida- EM es el patrón de referencia actual de la proteómica. 
APLICACIONES D ELA PROTEOMICA 
Estudio de biomarcadores en el cáncer. 
Estudio de proteínas que se expresan en diabetes II
 Marcadores en la enfermedad cardiovascular
 Desarrollo de nuevos fármacos
 Aplicación en células madres embrionarias
 Aplicación en biotecnología
 Aplicación en industria alimentaria y nutrición, se tiende a llegar a una nutrición personalizada. Las técnicas de proteomica pueden identificar hasta 5000 proteínas en una muestra biológica/clínica compleja. 
METABOLOMICA: Estudio del perfil de los metabolismos de una célula, tejido, órgano u organismos que son productos de los procesos celulares. 
· Objetivo de la Metabolómica: caracterizar el complemento de moléculas pequeñas de una muestra determinada e interrogar a las redes metabólicas en condiciones normales y patológicas, de manera cualitativa y cuantitativa. 
APLICACIONES: Estudios de toxicidad de drogas, enfermedades metabólicas, estudios de impacto ambiental y controles de calidad en alimentos 
TECNOLOGIAS: EM y Espectroscopía por Resonancia Magnética. 
Ejemplo excepcionalmente innovador desarrollado a partir de la metabolómica: bisturí i-knife, que acoplado a un sistema de espectrometría de masas permite a los cirujanos identificar tejidos cancerosos en tiempo real durante una cirugía.
· EL PROTEOMA Y EL METABOLOMA SON DINAMICOS A DIFERENCIA DEL GENOMA, Y ESTAN MAS PROXIMOS AL FEOTIPO DE LA ENFERMEDAD. 
· LA METABOLOMICA ES LA CIENCIA OMICA MAS MULTIDISCIPLINARIA. 
TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) Polymerase Chain Reaction
Es una reacción enzimática in vitro que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN durante varios ciclos repetidos en los que la secuencia blanca es copiada fielmente.
❑ Obtención y tipo de muestra:
- Sangre entera con anticoagulante
- Sangre seca
- Plasma/suero
- Líquidos de punción (LCR, LP, etc)
- Biopsias
❑ Conservación:
- Dentro de las 24 hs: 2 a 8°C
- Más de 24 hs: congelar a -20°C o -70°C
❑ Extracción de los ácidos nucleicos
Se requiere un termociclador, permite realizar los ciclos de temperatura. Las personas que realizan esta metodología deben realizar una capacitación. 
REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR). 
-Se requiere una molécula de ADN molde. 
-Un cebador o primer
- El Mg++, un sistema buffer y un medio acuoso (H20)
-Desoxinucleotidos dNTPs (A, G, C, T).
-ADN polimerasa termoestables
Se colocan todos juntos en una mezcla en un master mix. 
La PCR cumple 3 pasos fundamentales; 
· Desnaturalización; separación de las cadenas de ADN molde, 1min 94 grados. 
· Hibridación; se da la unión de los primeros primer a sus secuencias complementarias en la molécula y se realiza durante 45 seg a 54 grados. 
· Elongación; se da durante 2min a 72 grados, óptima para que trabaje la tac polimerasa y realiza la copia de la cadena molde produciendo la unión de los desoxi nucleótidos con las bases complementarias. 
· Amplificación; al repetir muchos ciclo, más o menos unos 30 realizo muchas copias. 
Detección del producto amplificado: por electroforesis. Se aplica voltaje, esta muestra que tiene carga negativa migra hacia el cátodo y una vez que se separa la muestra con los fragmentos de ADN se añade cloroformo que se una al ADN bicentenario, se coloca el gel sobre un trance iluminador, se aplica UV y se observanlas distintas bandas. 
Aplicaciones de las técnicas de biología molecular 
· Diagnostico; enfermedad infeccionsa, genéticas, cáncer
· Seguimiento; carga viral, carga tumoral
· Otros; genoma humano, identificación de individuos forense o paternidad. 
· Farmacogenica
· Terapia génica
· Nutrigenica. 
Reactivo GENEXPERT MTB/RIF
Detección microbacterium tuberculosis así como mutaciones que confieren resistencia a la rifampicina. 
Se aplica en la muestra de esputo. 
Gol estándar, resultado en 100minutos. 
PCR MULTIFLEX
· Farmacogenetica; ciencia que permite identificar las bases genéticas de las diferentes interindividuales en las resupuestas a drogas. 
Grupo de pacientes en donde el medico decide dar un medicamento para una enfermedad y de acuerdo al grupo actuara de diferente manera. Las diferentes respuestas que muestran los organismos anta la misma enfermedad e idénticos tratamientos con drogas causa disminución o pérdida del efecto terapéutico. 
· Intrínsecamente con el fármaco; calidad, características físico o química y vías de administración 
· Ambiente; dietas, alcohol, fumador
· Con el paciente; si es mujer o hombre, estado del hígado, embarazada
· Genéticos; pueden decidir como será la acción del medicamento. 
Estudio de gener que codifican enzimas metabolizadoras de drogas: 
· Citocromo p450
· N-acetil transferasas tipo I y II 
· Tiopurin metiltransferasa. 
Las variaciones en las secuencias de los genes- Polimorfismo genético- producen cambios funcionales n la proteína codificada que pueden afectar algún proceso que es realizado por la droga en el organismo. 
· Absorción 
· Transporte
· Metabolismo
· Degradación 
· Excreción 
Detección de HLA B 5701, 5702,5703 
NASBA 
Utilizad para la detección de carga viral en pacientes con vih.
-familia; retrovirus
- Subfamilia; lentivirus
- Contienen enzimas envoltura lipídica con proteínas. 2 copias de genoma. 
Nucleid acid sequence based amplification 
Captura de ARN de virus o bacterias mediante partículas de sílice. Se eluyen los ARN captados, se amplifican y detectan. 
Detección cuantitatica 
Detección cualitativa 
LMPA
Trabaja de forma isotérmica. 
Enfermedades infecciosas y detección de covid. 
· Síntesis de ADNc a partir del genoma del SARS-coV (ARN).
· Amplificacion espeficia del fragmento a temperatura constante utilizando primers y polimerasa. 
· En una etapa de la amplificación la estructura de ADN alquiere forma de bucle
· Colorante indicador: azul posit y violeta negat.