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JUAN DAVID PIEDRAHITA COLORADO BIOQUÍMICA Juan Piedrahita 1 ¿QUÉ ES BIOQUÍMICA? Es la disciplina científica que trata de explicar la vida a nivel molecular. Utiliza las herramientas y la terminología de la química para describir las diversas características de los seres vivos. ¿De qué estamos hechos? ¿Cómo funcionamos? La bioquímica estudia la vida, las moléculas que la componen, las células y los tejidos y como son implementados y controlados los grupos de reacciones acopladas que subyacen procesos como la digestión, la fotosíntesis, la inmunidad, entre otros. Un metal actúa en un sitio activo como mediador de reacciones. La vida se está desarrollando en un ambiente físico químico. Los procesos bioquímicos dan lugar al sorprendente fenómeno de la vida. La bioquímica se hace interrogantes tales como: 1. ¿Cómo surgen las notables propiedades de los seres vivos a partir de la unión e interacción de miles de biomoléculas inanimadas diferentes? 2. ¿Cómo extrae la materia viva de su entorno la energía necesaria para permanecer? La bioquímica describe en términos moleculares las estructuras, mecanismos, y procesos químicos compartidos por seres vivos y descubre los “principios organizacionales” alrededor de los cuales está construida la vida en su diversidad de formas. ÁREAS PRINCIPALES DE LA BIOQUÍMICA 1. Bioquímica estructural: Componentes de la materia viva y relaciones de las funciones biológicas con las estructuras químicas. 2. Metabolismo: Reacciones químicas que ocurren en la materia viva. 3. Bioquímica genética: Química de los procesos y las moléculas que almacenan y trasmiten la información genética. Juan Piedrahita 2 HISTORIA La biotecnología es la utilización de las características de los seres vivos para satisfacer la necesidad humana. • Sus raíces datan de finales del siglo 18. • Término “bioquímica” (Neumberg, 1903). • Relación con otras ciencias. Disciplinas contribuyentes y beneficiarias tales como la química orgánica, fisicoquímica, biología general, microbiología, de estas salen la farmacología, farmacogenómica, fisiología, nutrigenómica. La bioquímica ha cumplido la función destacada en la comprensión de las causas moleculares de numerosas enfermedades, desarrollo de técnicas diagnósticas y descubrimiento diseño de agentes farmacéuticos para tratamiento. Fecha Autor Descubrimiento Siglo XVIII Karle Scheele Aislamiento de algunos compuestos como: Glicerina, caseína, ácidos cítrico, láctico, málico, tartárico y úrico. Siglo XVIII Lazaro Spallanzani La digestión de las proteínas en el estómago puede ser producida in vitro usando ciertas sustancias gástricas. 1780 - 1789 Lavoisier Reconoció que la respiración era oxidación. 1828 Wohler Sintetizó el primer compuesto orgánico, urea de componentes inorgánicos. 1837 Berzelius Postuló la naturalidad catalítica de la fermentación, identificó el ácido láctico como un producto de la actividad muscular. 1838 Scheleiden y Schawann Enunció la teoría celular. 1854 - 1864 Louis Pasteur Probó que la fermentación es provocada por microorganismos. 1866 Mendel Reportó los principios de la segregación de genes. 1869 Miescher Descubrió el ADN. 1877 Kuhne Propuso el término enzima. 1894 Emil Fischer Demostró la especificidad de la enzima y la estrecha relación entre enzima y sustrato. 1897 Buckner Descubrió la fermentación alcohólica en el extracto de levadura. 1902 Emil Fischer Demostró que las proteínas son polipéptidos. 1903 Neuberg Usó por primera vez el termino bioquímica. 1905 Harden y Young Mostró el requerimiento de fosfato en la fermentación alcohólica. 1913 Michaelis y Menten Desarrolló la teoría cinética de la acción enzimática. 1926 Sumner Cristalizó por primera vez una enzima, probó que era una proteína. 1933 Embden Meyerhof y Parnas Demostró intermediarios cruciales en la ruta química de la glucólisis y la fermentación. 1937 Krebs Descubrió el ciclo del ácido cítrico. 1940 Lipmann Rol del ATP en los sistemas biológicos. La bioquímica, la biología celular y la genética (ciencias inicialmente consideradas como no relacionadas) han pasado de estar entrelazadas para dar origen a un campo nuevo, la biología molecular, que es el objeto de la química actual. Juan Piedrahita 3 PROPIEDADES DE LOS SERES VIVOS Existe un programa, improvisación, compartimentalización, control energético, regeneración, adaptabilidad, seclusión. Entre ellas también se encuentran crecimiento, movimiento, metabolismo, respuesta a estímulos, auto replicantes. Su constitución molecular puede ser descrita y entendida, su química se ciñe a las propiedades orgánicas de las reacciones orgánicas. PROPIEDADES DISTINTIVAS Para que un organismo sea considerado ser vivo, este debe tener: • Alta complejidad molecular. • Capacidad de reproducción por sí mismo. • Ser capaz de transformar energía. Se hace énfasis en la capacidad de reproducción por sí mismo ya que por esta misma razón los virus no son considerados seres vivos. Estos microorganismos tienen alta complejidad molecular y son capaces de transformar energía, pero no se pueden reproducir por si solos, sino que recurren al “secuestro” de los mecanismos de replicación de una célula huésped para poder reproducirse y hacer virones nuevos (progenie). PIRÁMIDE ALIMENTICIA También llamada “pirámide trófica” y “pirámide alimentaria”, es la representación gráfica por medio de rectángulos encimados de toda la biomasa de una red alimentaria. La base de la pirámide está ocupada por los productores, es decir, por las plantas en ecosistemas terrestres y por el fitoplancton (algas microscópicas) y algas macroscópicas en medios acuáticos. En el segundo escalón superior están los consumidores primarios, o sea animales herbívoros como vacas, ovejas, orugas, llamas, jirafas, conejos, etc. El tercer nivel lo ocupan los consumidores secundarios y así sucesivamente, hasta llegar al escalón más alto donde se ubican los carroñeros y grandes predadores, como el cóndor y el humano, entre otros. Organismo Humano • Sistema metabólico integrado, estrechamente regulado. • Sistema abierto en constante comunicación con el ambiente. • Capaz de mantener condiciones homeostáticas por décadas. Estudiamos bioquímica para entender las interacciones entre la nutrición, el metabolismo y la genética en la salud y la enfermedad. Juan Piedrahita 4 CLASIFICACIÓN DE LOS SERES VIVOS Los organismos pueden clasificarse de acuerdo con la fuente de carbono para la síntesis del material celular. ALGUNOS PRINCIPIOS GENERALES • Las células utilizan un planteamiento modular para la elaboración de moléculas grandes. • Los principales componentes estructurales del cuerpo son los ácidos nucleicos, las proteínas, los carbohidratos y los lípidos. (Polímeros). • La sangre es el principal medio para el intercambio de gases, combustibles, metabolitos. • El Oxígeno es esencial para la supervivencia, pero también puede ser un potente tóxico (requerimos defensas antioxidantes). • Las vías centrales del metabolismo de carbohidratos y lípidos son rutas de acceso para otros procesos. • La alimentación y el ayuno generan la alternancia metabólica del cuerpo entre las etapas de catabolismo y anabolismo. • Cada tejido adquiere características específicas que les permiten desarrollar funciones especializadas. • El genoma y las vías de señalización celular son instancias que subyacen todos los procesos. • Para la supervivencia son también son vitales la correcta regulación del crecimiento, la comunicación intercelular, y los mecanismos de reparación. • La pérdida de control en ellos conduce al envejecimiento y al desarrollo de enfermedades (cáncer). Juan Piedrahita5 COMPUESTOS ENERGÉTICAMENTE IMPORTANTES Los biocompuestos son los compuestos que forman parte de los organismos vivos. También conocidos como biomoléculas, resultan imprescindibles para el adecuado funcionamiento de un organismo. Hidratos de carbono También llamados glúcidos o carbohidratos, estos biocompuestos contienen oxígeno, hidrógeno y carbono, en una proporción de dos a uno en los primeros dos elementos. Los hidratos de carbono son una fuente energética primordial para los seres vivos. Gracias a estos biocompuestos, presentes en múltiples alimentos, el organismo puede desarrollar sus procesos vitales. Grasas También llamados lípidos, estos son un grupo de sustancias insolubles en agua, pero solubles en solventes orgánicos, que incluyen los triglicéridos (comúnmente llamados grasas), fosfolípidos y esteroles. Existen los ácidos grasos saturados y los insaturados. Proteínas En cuanto a las proteínas, estos biocompuestos se generan con cadenas de aminoácidos en línea. Calificadas como macromoléculas, las proteínas son claves para la vida de las células, participando en el transporte de oxígeno, el mantenimiento de la homeostasis y la protección del organismo, entre otras cuestiones. Si bien todos los biocompuestos de este tipo llevan a cabo funciones de gran importancia, hay algunas que realizan más de una. Por ejemplo, podemos hablar de la catálisis, un proceso que acelera las reacciones químicas con ayuda de una sustancia denominada catalizador (mencionada más adelante). En una dieta, los biocompuestos de mayor contenido calórico son las grasas. Las proteínas y los carbohidratos tienen el mismo nivel de contenido calórico. SELECCIÓN NATURAL La teoría de la “evolución por selección natural” de Darwin se basa en la variación entre animales o plantas de la misma especie. Los ejemplares mejor adaptados sobrevivirán la “lucha por la vida” y transmitirán sus características exitosas a sus descendientes. La herencia de características físicas capaces de hacer frente a “la lucha por la vida” se conoce como “selección natural”. TIPOS DE SELECCIÓN NATURAL Desde el punto de vista de su efecto sobre la distribución de las características dentro de una población, la selección natural puede ser descrita como normalizadora, disruptiva o direccional. Cuando la selección se encuentra influida por las proporciones relativas de diferentes fenotipos dentro de una población, se dice que es dependiente de la frecuencia. Juan Piedrahita 6 Selección disruptiva Al contrario que en la normalizadora, este tipo de selección favorece los extremos a expensas de los individuos con características intermedias, y terminara creando dos especies distintas. Si tenemos en cuenta el ejemplo anterior, en este caso los individuos seleccionados serán tanto los altos como los bajos, y los individuos medianos terminarán por desaparecer. Selección normalizadora En este caso, los individuos que poseen una característica que les permite adaptarse mejor al medio son los que tienen rasgos intermedios; y el ambiente desfavorece a los individuos con características extremas. Por ejemplo, en un ambiente en el que salieran desfavorecidos tanto los individuos altos como los bajos, la población tendería a quedarse únicamente con individuos de talla mediana. Una quinta categoría, la selección sexual, se define por lo que se seleccionan características de que se relacionan directamente con la posibilidad de obtener una pareja y reproducirse sexualmente. Selección direccional Este tipo de selección favorece el aumento de los individuos con una de las características extremas. Esto provocará que, con el paso del tiempo, todos los individuos cambien hacia el extremo favorable mientras que todos los demás dejaran de existir. Siguiendo con el ejemplo anterior, en un ambiente, lo más favorable puede ser una talla alta. Si esto ocurre, la población terminará por estar formada únicamente por individuos altos mientras que los bajos y medianos no existirían. EXTINCIÓN La extinción puede ocurrir como consecuencia de la selección natural. Los animales y plantas mal adaptados a su entorno pueden no sobrevivir y, por tanto, no reproducirse. La población de su especie disminuiría y podría eventualmente llegar a extinguirse y ser remplazada por otras especies mejor adaptadas al medio. Juan Piedrahita 7 BIOMOLÉCULAS Los seres vivos están formados por miles de moléculas diferentes, inorgánicas y orgánicas. El agua, una molécula inorgánica, supone entre el 50 y el 95% del peso de una célula, y iones como el sodio (Na+), potasio (K+), magnesio (Mg2+) y calcio (Ca2+) pueden representar otro 1%. Casi todas las demás clases de moléculas de los seres vivos son orgánicas. Las moléculas orgánicas están formadas principalmente por seis elementos: Carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno, fósforo (CHONP) y azufre, y contienen cantidades mínimas de determinados elementos metálicos y no metálicos. HIBRIDACIÓN SP3 La combinación de un orbital atómico s (rojo) y tres orbitales p (rojo/azul) forma cuatro orbitales sp3 (verde) orientados a los vértices de un tetraedro regular. Los orbitales híbridos tienen dos lóbulos asimétricos, lo cual les da direccionalidad permitiendo que formen enlaces fuertes cuando se traslapan con orbitales de otros átomos. Enlace C - C Cuando se aproximan dos átomos de carbono con hibridaciones sp3 puede haber un enlace, cuando se juntan se cambian levemente los ángulos, esto debido a que se repelen entre sí. Cuando se unen los dos átomos sus nubes electrónicas paralelas disminuyen sus ángulos entre sí. HIBRIDACIÓN SP2 En un Carbono con hibridación sp2, los tres orbitales sp2 equivalentes (verde) se ubican en un solo plano. El orbital p no hibridado se orienta perpendicular a dicho plano. Enlace C = C Una parte del doble enlace resulta de la sobreposición (σ) de un orbital sp2 de un carbono con otro igual del segundo carbono. La otra parte resulta de la sobreposición lateral (π) de dos orbitales p no hibridados, también uno de cada C. El enlace p exhibe regiones de densidad electrónica arriba y debajo de la línea que conecta los Cs. Entre más enlaces haya, más se va a acercar la distancia entre los carbonos enlazados y más se acortará la distancia entre ángulos de las nubes paralelas. Juan Piedrahita 8 HIBRIDACIÓN SP En un Carbono con hibridación sp, los tres orbitales sp híbridos (verde) se orientan a 180º uno del otro, perpendiculares a los mientras que los 2 orbitales p restantes. Enlaces C ≡ C Formación del doble enlace C ≡ C: Los Cs en este caso están unidos por un enlace σ entre dos orbitales sp y dos enlaces π entre dos pares de orbitales p no hibridados, dos de cada C Las moléculas de carbono tienen versatilidad. GRUPOS FUNCIONALES En el caso de los compuestos orgánicos hablamos de biomoléculas de carbono con una variedad de grupos funcionales. Se puede considerar que la gran mayoría de biomoléculas deriva de la clase más simple de moléculas orgánicas, los hidrocarburos. Estos hidrocarburos forman cadenas grandes, y anexas a este “esqueleto carbonatado” se unen átomos o grupos de átomos denominados grupos funcionales. La mayoría de las biomoléculas contiene más de un grupo funcional. Por ejemplo, muchos azúcares tienen numerosos grupos hidroxilo y un grupo aldehído. Los aminoácidos, que son los elementos fundamentales de las proteínas, tienen un grupo amino y un grupo carboxilo. Las distintas propiedades químicas de cada grupo funcional contribuyen al comportamiento de las moléculas que lo contienen. Juan Piedrahita 9 Acetil - CoA Es una molécula gigante de Coenzima A unida en su grupo sulfato final a un grupo Acetilo. La Acetil-coenzima A (Acetil-CoA) es un transportador de grupos acetilo en algunas reacciones enzimáticas. QUIRALIDAD Laquiralidad es la propiedad de un objeto de no ser superponible con su imagen especular. Como ejemplo sencillo, la mano izquierda humana no es superponible con su imagen especular (la mano derecha). Como contraejemplo, un cubo o una esfera sí son superponibles con sus respectivas imágenes especulares. Juan Piedrahita 10 POLIPÉPTIDOS Hay cientos de aminoácidos naturales, cada uno de los cuales contiene un grupo amino y un grupo carboxilo. Los aminoácidos se clasifican como alfa, beta o gamma de acuerdo con la posición del grupo amino respecto al grupo carboxilo. Todos los aminoácidos se diferencian unos de otros por su cadena lateral o grupo R. Aminoácidos alfa El grupo amino está unido al átomo de carbono (carbono alfa) adyacente al grupo carboxilo. En la imagen adjunta se muestran algunos de los aminoácidos alfa que existen. Aminoácidos beta y gamma En los aminoácidos beta y gamma el grupo amino está unido a los carbonos segundo y tercero, respectivamente, a partir del grupo carboxilo. Las moléculas de aminoácido se utilizan principalmente para la síntesis de polímeros largos y complejos denominados polipéptidos. Las moléculas cortas, con una longitud inferior a 50 aminoácidos, se denominan péptidos u oligopéptidos. Las proteínas están formadas por uno o más polipéptidos. Éstos desempeñan una gran variedad de funciones en los seres vivos. Entre los ejemplos se encuentran las proteínas transportadoras, las proteínas estructurales y las enzimas (proteínas catalíticas). Los aminoácidos individuales forman péptidos y polipéptidos al unirse mediante enlaces peptídicos. Estos enlaces amida resultan de una sustitución nucleofílica en que el nitrógeno del grupo amino de un aminoácido ataca al grupo carboxilo de otro a través de su carbono carbonílico. La estructura tridimensional final de los polipéptidos, y por lo tanto su función biológica, se debe en gran medida a las interacciones entre los grupos R. Juan Piedrahita 11 Estructura polipeptídica Al plegarse un polipéptido en su estructura tridimensional única, cuando menos 50% de los grupos R más hidrófobos (esferas amarillas) quedan enterrados en el interior lejos del agua. Los grupos hidrófilos en general se encuentran en la superficie. AZÚCARES Y CARBOHIDRATOS Los azúcares, los carbohidratos más pequeños, contienen grupos funcionales alcohol y carbonilo. Se describen normalmente según el número de carbonos y el tipo de grupo carbonilo que contienen. Los azúcares que poseen un grupo aldehído se denominan aldosas y aquellos que poseen un grupo cetona se denominan cetosas. Los azúcares son las unidades básicas de los carbohidratos, las moléculas orgánicas más abundantes de la naturaleza. Los carbohidratos van desde los azúcares sencillos o monosacáridos, como la glucosa y la fructosa, hasta los polisacáridos, polímeros que contienen miles de unidades azúcar. Un ejemplo de polímero puede ser el glucógeno, almidón o celulosa. Algunas biomoléculas incluyen carbohidratos entre sus componentes. Los nucleótidos, las subunidades estructurales de los ácidos nucleicos, contienen ribosa o desoxirribosa. Determinadas proteínas contienen también carbohidratos. Las glucoproteínas y glucolípidos se encuentran en la superficie externa de las membranas celulares de los organismos multicelulares, donde desempeñan funciones cruciales en las interacciones entre células. Piranosas y furanosas Cuando una aldohexosa forma una estructura cíclica de 6 miembros se conoce como piranosa, cuando el ciclo es de 5 miembros (independientemente de que la molécula cuente con 6 Carbonos), se denomina furanosa. Juan Piedrahita 12 LÍPIDOS Los ácidos grasos son ácidos mono-carboxílicos que en general contienen un número par de átomos de carbono. Los ácidos grasos están representados por la fórmula química R — COOH, en la que R es un grupo alquilo que contiene átomos de carbono e hidrógeno. Existen dos tipos de ácidos grasos: los ácidos grasos saturados, que no contienen enlaces dobles carbono-carbono, y aquellos ácidos grasos insaturados, que poseen uno o varios enlaces de este tipo. En condiciones fisiológicas el grupo carboxilo de los ácidos grasos se encuentra en el estado ionizado, R — COO−. Por ejemplo, el ácido graso saturado de 16 carbonos, denominado ácido palmítico, se encuentra como palmitato, CH3(CH2)14COO−. Aunque el grupo carboxilo cargado tiene afinidad por el agua, las largas cadenas hidrocarbonadas apolares convierten a la mayoría de los ácidos grasos en insolubles en agua. Los ácidos grasos se encuentran raramente como moléculas independientes (libres) en los seres vivos. La mayor parte se encuentra integrada en la estructura de varias clases de moléculas lipídicas. Los lípidos son un grupo heterogéneo de sustancias miscibles en disolventes orgánicos, como el cloroformo o la acetona, e insolubles en agua. Juan Piedrahita 13 ÁCIDOS NUCLEICOS Cada nucleótido contiene tres componentes: Un azúcar de cinco carbonos (ribosa o desoxirribosa), una base nitrogenada y uno o varios grupos fosfato. Las bases de los nucleótidos son anillos aromáticos heterocíclicos con varios sustituyentes. Hay dos clases de bases: las purinas bicíclicas y las pirimidinas monocíclicas ADN En la siguiente imagen vemos una vista esquemática del DNA. Los esqueletos de azúcar-fosfato de la doble hélice están representados por cintas coloreadas. Las bases unidas al azúcar desoxirribosa están en el interior de la hélice. También una vista ampliada de dos pares de bases. Obsérvese que las dos cadenas de DNA van en direcciones opuestas definidas por los grupos 59 y 39 de la desoxirribosa. Las bases en las cadenas opuestas forman pares debido a los enlaces de hidrógeno. La citosina siempre se aparea con la guanina y la timina siempre se aparea con la adenina. Expresión génica La expresión génica controla cuándo y cómo se accede a la información codificada en un gen. El proceso se inicia con la transcripción, el mecanismo por el que la secuencia de bases de un determinado segmento de DNA se utiliza como molde para sintetizar un producto génico. Juan Piedrahita 14 PROPIEDADES Y FUNCIONES DE LAS BIOMOLÉCULAS • Las biomoléculas tienen direccionalidad (polaridad estructural). • La secuencia de unidades monoméricas tiene el potencial de contener información. • Tienen arquitecturas tridimensionales características. • Experimentan fuerzas débiles que mantienen las estructuras, restringen el rango de condiciones ambientales compatibles y determinan las interacciones con otras moléculas. • Experimentan fuerzas débiles que mantienen las estructuras, restringen el rango de condiciones ambientales compatibles y determinan las interacciones con otras moléculas. • La complementariedad estructural determina también el reconocimiento con otras moléculas. REACCIONES BIOQUÍMICAS A primera vista, las miles de reacciones que tienen lugar en las células, producen una impresión de gran complejidad. Sin embargo, algunas características del metabolismo permiten simplificar en gran medida esta percepción: 1. Aunque el número de reacciones es muy grande, la variedad de éstas es relativamente pequeña. 2. Las reacciones bioquímicas tienen mecanismos sencillos propios de las reacciones orgánicas. 3. Son relativamente pocas las reacciones que tienen una importancia central en bioquímica (p. ej., aquellas que se utilizan para producir energía, así como sintetizar y degradar los principales componentes celulares). Entre las clases de reacción más comunes en los procesos bioquímicos se encuentran la sustitución nucleofílica, la eliminación, la adición, la isomerización y la oxidación-reducción. ENERGÍA DE INTERACCIÓN El dipolo inducido (d, e) y las fuerzas de dispersión (f) dependen de una distorsión en la distribución electrónicade un átomo o molécula no polar. Los símbolos q–, q+ indican una fracción de la carga de un electrón o un protón. Energía de interacción no covalente de dos partículas que se aproximan Se representa gráficamente la energía de interacción de dos átomos, moléculas o iones frente a la distancia entre sus centros R. La energía total de interacción (U) a cualquier distancia es la suma de la energía de atracción y de la energía de repulsión. A medida que disminuye la distancia entre las partículas (de derecha a izquierda a lo largo del eje x), aumenta tanto la energía de atracción (–) como la de repulsión (+), pero a velocidades diferentes. En un principio predomina la atracción de largo alcance, pero luego la energía de repulsión aumenta tan rápidamente que actúa como una barrera, definiendo la distancia de máximo acercamiento (rv) y los radios de van der Waals (R). La posición de energía mínima (r0) normalmente está muy cercana a rv. Juan Piedrahita 15 TIPOS DE REACCIONES EN LOS SISTEMAS Ejemplo de sustitución nucleofílica En la reacción de la glucosa con el ATP, el oxígeno del hidroxilo de la glucosa es el nucleófilo. El átomo de fósforo (el electrófilo) es polarizado por el oxígeno enlazado, de forma que lleva una carga positiva parcial. Al producirse la reacción, el par de electrones sin compartir del CH2OH del azúcar ataca al fósforo, dando lugar a la expulsión del ADP, el grupo saliente. Reacción de hidrólisis La hidrólisis del ATP se utiliza para impulsar una sorprendente diversidad de reacciones bioquímicas que requieren energía. OTRAS REACCIONES Juan Piedrahita 16 ENERGÍA La energía se define como la capacidad para realizar un trabajo, es decir, mover materia. A diferencia de nuestras máquinas, que transforman y utilizan la energía en condiciones inhóspitas en cuanto a temperatura, presión y corriente eléctrica, las frágiles máquinas moleculares de los seres vivos deben operar en condiciones mucho más sutiles. En esta vía bioquímica de tres pasos la biomolécula A es convertida en la biomolécula D en tres reacciones sucesivas. Cada reacción es catalizada por una enzima específica (E). ANABOLISMO Y CATABOLISMO En los organismos que utilizan oxígeno para generar energía, las vías catabólicas transforman los nutrientes en moléculas pequeñas que son materiales de partida. La energía (ATP) y el poder reductor (NADPH) que impulsan las reacciones de biosíntesis se generan durante los procesos catabólicos al convertirse determinadas moléculas nutrientes en productos de desecho como el dióxido de carbono y el agua. MECANISMOS DE RETROALIMENTACIÓN Juan Piedrahita 17 AGUA El agua domina los procesos vitales. Sus propiedades físicas y químicas que son consecuencia de su estructura polar única y de su concentración elevada, la hacen un componente indispensable para los seres vivos. Entre las propiedades más importantes del agua está su capacidad para interactuar con un gran número de sustancias. Interacciones Moleculares Cada molécula está conectada con las demás conformando una red tridimensional fluida de puentes de H, en la cual, a nivel local existe una preferencia por la geometría tetraédrica. Propiedades como solvente Forma cubiertas de solvatación dinámicas alrededor de iones o moléculas cargadas. Constante dieléctrica alta La tendencia de las moléculas de agua a interactuar con iones es mucho mayor que la interacción electrostática entre iones con cargas opuestas. DISOLUCIÓN: AUMENTO DE ENTROPÍA El agua disuelve muchas sales cristalinas mediante la hidratación de sus iones componentes. La red cristalina del NaCl es distorsionada en la medida que las moléculas de H2O se aglutinan alrededor del Na+ y del Cl-. Las cargas iónicas son neutralizadas parcialmente y se debilitan las atracciones electrostáticas del cristal. PRESIÓN OSMÓTICA La presión osmótica puede definirse como la presión que se debe aplicar a una solución para detener el flujo neto de disolvente a través de una membrana semipermeable. La presión osmótica es una de las cuatro propiedades coligativas de las soluciones. Presión osmótica y células vegetales (a) Las soluciones isotónicas no modifican el volumen celular. (b) Las células vegetales en general se encuentran en un ambiente hipotónico. Cuando entra el agua, estas células se hinchan. Las paredes rígidas de la célula evitan que las células estallen. (c) En un ambiente hipertónico la membrana celular se separa de la pared celular debido a la pérdida de agua, y la planta se marchita. Efecto de las soluciones hipertónicas e hipotónicas sobre las células animales (a) Las soluciones isotónicas no modifican el volumen celular debido a que la cantidad de agua que entra y que sale de la célula es la misma; (b) las soluciones hipotónicas rompen las células; (c) las soluciones hipertónicas encogen las células (crenación). Juan Piedrahita 18 EFECTO HIDRÓFOBO Cuando se mezclan moléculas no polares y agua, se forma una jaula organizada de moléculas de agua con enlaces de hidrógeno, para minimizar la exposición a la sustancia hidrófoba. Las moléculas no polares, cuando se encuentran próximas, se atraen entre sí por las fuerzas de Van der Waals. No obstante, la fuerza impulsora de la formación de la jaula y la exclusión de la sustancia hidrófoba es la fuerte tendencia de las moléculas de agua a formar enlaces de hidrógeno entre sí. Las moléculas no polares son excluidas porque no pueden formar enlaces de hidrógeno. La liberación de la red ordenada favorece la formación de los complejos enzima sustrato. El aumento de entropía resultante provee un empuje termodinámico para la formación del complejo Enzima/Sustrato. TERMODINÁMICA Sin ignorar su complejidad, los seres vivos pueden considerarse como sistemas fisicoquímicos que interactúan con sus alrededores. Universo termodinámico Un universo está formado por un sistema (la porción del universo que tomamos como objeto de estudio) y su entorno. Termodinámica Es una teoría que describe la energética de la materia con una visión macroscópica. El comportamiento de la materia sujeta a cambios de temperatura y presión. Bioenergética (Termodinámica bioquímica) El estudio de los cambios de energía asociados a las reacciones bioquímicas. • La Energía del Universo es constante • La Entropía del Universo siempre está en aumento. CONCEPTOS BÁSICOS Representación de una célula viva en forma de sistema termodinámico a) Las moléculas de la célula y su entorno se encuentran en un estado relativamente desordenado. b) La célula libera calor como consecuencia de las reacciones que crean orden entre las moléculas del interior de la célula. Esta energía aumenta el movimiento aleatorio y, por lo tanto, el desorden de las moléculas fuera de la célula. El proceso produce una variación neta de entropía positiva. El descenso de entropía de la célula se compensa con creces por un aumento de la entropía del entorno. Juan Piedrahita 19 ESTADO DE UN SISTEMA Es el conjunto de propiedades que permiten definirlo. • Temperatura. • Presión. • Volumen. • Energía interna (U). • Entalpía. • Energía libre de Gibbs. FUNCIONES DE ESTADO Propiedades relacionadas con cambios en un sistema que solo dependen de los estados inicial y final de este durante un proceso. Con el conocimiento de la termodinámica podemos determinar si es posible que ocurra un proceso físico. • ¿Por qué se pliegan las macromoléculas a sus conformaciones nativas? • ¿Cómo están diseñadas las rutas metabólicas? • ¿Cómo ciertas moléculas pueden travesar las membranas biológicas? • ¿Cómo generan los músculos fuerza mecánica? La termodinámica no indica las velocidades a las cuales los procesos ocurren. Solo si existe energía suficiente para que ocurran.Con referencia a la bioquímica la termodinámica describe bajo cuáles condiciones los procesos pueden tener lugar espontáneamente. PRIMERA LEY La energía total de un sistema y sus alrededores es constante. • Si durante un proceso un sistema intercambia calor con sus alrededores ejecuta un trabajo sobre ellos. ΔU = Uf – U0 = Δq + w Δw = Trabajo ejercido por el sistema sobre sus alrededores. Δq = Cantidad de calor absorbido por el sistema desde el entorno. • Procesos endotérmicos (Δq > 0). • Procesos exotérmicos (Δq < 0). Intercambio de calor y trabajo en reacciones a volumen constante y a presión constante Una misma reacción, la oxidación de 1 mol de un ácido graso, se realiza en dos tipos de condiciones. a) La reacción se produce en un recipiente sellado o bomba”. El calor (q) se transfiere al baño acuoso circundante y se mide por el pequeño aumento de temperatura del agua. No se realiza trabajo alguno, puesto que el sistema tiene un volumen constante. b) El recipiente de reacción lleva acoplado un pistón que se mantiene a una presión de 1 atm. Durante la reacción, el calentamiento del gas en el recipiente empuja el pistón. Sin embargo, la reacción da lugar a una disminución del número de moles de gas, por lo que una vez enfriado el recipiente y el gas a la temperatura del agua, el volumen de gas es inferior al volumen inicial. Así pues, se realiza un trabajo neto sobre el sistema, y la cantidad total de calor comunicada al baño es ligeramente superior a la que se produce en (a). Juan Piedrahita 20 ENTALPÍA (H) Magnitud termodinámica de un cuerpo físico o material equivalente a la suma de su energía interna más el producto de su volumen por la presión exterior Es el contenido de calor de un sistema, en julios. El cambio de entalpía durante un proceso se relaciona con el cambio de energía interna así: ∆𝐻 = ∆𝑈 A volumen y presión constantes. ∆𝐻 = ∆𝑈 + 𝑃. ∆𝑉 SEGUNDA LEY. La entropía total de un sistema y sus alrededores siempre se incrementa para los procesos espontáneos. La entropía (S) es un índice del desorden o aleatoriedad en un sistema. Puesto que el universo tiende al incremento de “S”, este aumento durante un proceso se refleja en una mayor espontaneidad de este. 𝛥𝑆𝑠𝑖𝑠𝑡𝑒𝑚𝑎 + 𝛥𝑆𝑒𝑛𝑡𝑜𝑟𝑛𝑜 = 𝛥𝑆𝑢𝑛𝑖𝑣𝑒𝑟𝑠𝑜 > 0 Juan Piedrahita 21 ESPONTANEIDAD Las funciones termodinámicas incluyen la entalpía, la entropía y la energía libre. El conocimiento de esas funciones permite a los bioquímicos pronosticar si un proceso será espontáneo (termodinámicamente favorable). La espontaneidad no indica por sí misma que ocurrirá una reacción, únicamente indica que puede suceder si se presentan las condiciones adecuadas. Las reacciones ocurren sólo si hay suficiente energía para el sistema. Tales reacciones se describen como cinéticamente favorables. Si bien los procesos que involucran ΔH < 0 tiende a ser espontáneos, al igual que aquellos que involucran ΔS > 0, existen procesos que ocurren espontáneamente aun cuando involucran un ΔS < 0, como el plegamiento de ciertas proteínas. En otros procesos puede haber un aumento de entropía (ΔS > 0) que ocurre con la concomitante absorción de calor desde los alrededores. ENERGÍA LIBRE DE GIBBS 𝐺 = 𝐻 − 𝑇. 𝑆 ∆𝐺 = ∆𝐻 − 𝑇 ∆𝑆 Un proceso espontaneo si: ∆𝐺 < 0 La energía libre de Gibbs (ΔG) denota el trabajo máximo disponible cuando ocurre un proceso, descontando el trabajo que el sistema hace en relación con cambios de presión y de volumen. Procesos endergónicos (∆𝐺 > 0). Procesos exergónicos (∆𝐺 < 0). VARIACIÓN DE LA ESPONTANEIDAD DE LA REACCIÓN Juan Piedrahita 22 PROTEÍNAS Las proteínas son herramientas moleculares que realizan una sorprendente variedad de funciones. Las proteínas están compuestas de uno o más polipéptidos, polímeros no ramificados de 20 aminoácidos distintos. Los genomas de la mayoría de los organismos especifican las secuencias de aminoácidos de miles o decenas de miles de proteínas. FUNCIONES DE ALGUNAS PROTEÍNAS Las proteínas tienen una gran diversidad morfológica, pueden servir en procesos de: Catálisis ✓ Enzimas: Catalizan reacciones a una velocidad increíble, miles y hasta millones de veces más rápido de lo que ocurrirían normalmente. Estructural ✓ Colágeno: Hay proteínas que se pueden agregar con otras y no necesariamente deben ser de estructura cuaternaria, un ejemplo de este son las actinas, que al polimerizarse forman largas cadenas o filamentos de actinas, a este tipo de estructuras les podemos decir super secundaria. ✓ Histonas: Unión de ADN, las histonas sirven para la empaquetación del ADN y le dan firmeza y fuerza a la estructura. Movimiento ✓ Contráctil: Un ejemplo de estos son los músculos, ya que la acción de los filamentos de actina y miosina que se encuentran en estos producirán contracción. ✓ Transporte: Tenemos de ejemplo a la hemoglobina, que transporta oxígeno y dióxido de carbono de los pulmones al resto del cuerpo, y del resto del cuerpo a los pulmones, respectivamente. También encontramos a las dineínas y cinesinas, que son proteínas encargadas de transportar ciertos nutrientes y residuos desde el interior hacia el exterior (cinesina) y del exterior hacia el interior (dineínas), su trabajo es “caminar” sobre los microtúbulos de extremo negativo a positivo (cinesina) y de positivo a negativo (dineínas). ✓ Transporte de electrones: Encontramos a los citocromos. Juan Piedrahita 23 Almacenamiento ✓ Reserva de nitrógeno: Encontramos a la ovoalbúmina y la caseína. ✓ Reserva de oxígeno: Encontramos mioglobina, el oxígeno no puede estar libre por ahí en el citosol, así que tiene formas de almacenamiento donde no se encontrarán libres. Regulación ✓ Hormonas: Como la insulina. ✓ Factores de crecimiento: Como el EGF. Respuesta al estrés ✓ Control de sustancias tóxicas: Tenemos citocromos encargados de esto. Muchas moléculas son toxicas ya que son insolubles, los citocromos las vuelven más solubles y de esta forma ya serán más fácilmente filtradas y eliminadas por el riñón. Secuestro de metales pesados Metales como el plomo y la plata. No hay ninguna exposición al plomo en la que una persona no tenga algún tipo de afección. Resistencia a altas temperaturas ✓ Proteínas de choque térmico: Cuando nos quemamos, hay inflamación y ahí hay proteínas de choque térmico, que evitan que se degraden las proteínas. En el caso donde el daño sea irreparable hay mecanismos de succión y reemplazo. Juan Piedrahita 24 Protección contra radiación UV ✓ Proteínas reparadoras de ADN: El ADN se conserva de una generación a otra de una manera casi perfecta, esto no es porque el ADN se dañe y se mantenga conservado a la perfección, esto es por la acción de proteínas altamente eficientes que reparan el ADN para que el genoma no se afecte ni se pierda. Defensa ✓ Protección de daños químicos o mecánicos: Queratina, su función es evitar que las cosas del exterior entren y lleguen a afectar por dentro nuestro cuerpo. ✓ Factor de coagulación: Son mecanismo de defensa contra la pérdida de sangre (hemorragia). ✓ Inmunoglobulinas: Mecanismo de defensa contra infecciones y agentes externos. ✓ Toxinas y venenos: No es un mecanismo de defensa, es una agresión, pero para el animal que nos inyectó este veneno si es un mecanismo de defensa efectivo. Funciones especiales ✓ Visión: Opsinas, que son capaces de mediar la generación de impulsos nerviosos. DEFINICIÓN Una proteína fundamentalmente es una secuencia de aminoácidos. Se organizan en plegamiento para poder cumplir con su función, sin su “vital” plegamiento es imposible que cumpla con una función biológica. PROTEÍNA DE REPLICACIÓN Proteína de replicación que se ubica alrededor del ADN. En los extremos donde se juntan el color amarilloy el violeta es necesario que haya disposición de cargas donde sean compatibles. Juan Piedrahita 25 En este ejemplo, es necesario que esta proteína de un lado se abra y se cierre, esto porque cuando se va a hacer un proceso de replicación de ADN es necesaria la intervención de múltiples enzimas que ayudan en el proceso. Así que esta proteína tiene que dar lugar a estas y no “estorbar”. Esto debe ser muy controlada. Cambio conformacional Los cambios conformacionales tienen como objetivo producir más afinidad en ciertas regiones de las proteínas, esto con el fin de desempeñar alguna actividad biológica. Las proteínas también deben tener unas estructuras muy rígidas, si así se necesita, lo mismo del caso contrario, en donde se necesite más flexibilidad. NIVELES DE ESTRUCTURACIÓN Las proteínas tienen niveles de estructuración, los cuales son: Estructura primaria Enlaces covalentes. Secuencia de aminoácidos que componen un polipéptido, extremo amino sería el primer aminoácido y el extremo carboxilo sería el último. Estructura secundaria Enlaces de hidrógeno. Conformaciones de la cadena peptídica derivadas de la rotación alrededor de los Cs-a, e.g. a-hélices y hojas-b, etc. Estructura terciaria Enlaces covalentes y no covalentes. Formas tridimensionales de la cadena polipeptídica totalmente plegada. Estructura cuaternaria Enlaces no covalentes. Arreglos de dos o más cadenas proteicas en complejos multisubunitarios, solo hay uniones débiles manteniendo la integridad de esta estructura. Cuando hay un enlace covalente deja de llamarse subunidad, y empieza a llamarse cadenas, ej. Cadenas plegadas alfa, beta, etc. Juan Piedrahita 26 AMINOÁCIDOS Los más 20 comunes aminoácidos son aquellos que son usados por los ribosomas para sintetizar proteínas. Estos se llaman alfa aminoácidos pues cada uno tiene un grupo carboxilo y uno amino unidos a un carbono alfa. Difieren en la estructura de la cadena lateral o grupo alquilo (R´). CLASIFICACIÓN DE LOS AAS La clasificación se hace usando la estructura de la cadena lateral (R). No polares: • Alifáticos: Glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina y metionina. • Alicíclicos: Prolina (Pro). Aromáticos: Fenilalanina, tirosina y triptófano. Polares no cargados: Serina, treonina, asparagina y glutamina. Tioles: Cisteína. Polares con Carga: Ácido aspártico, ácido glutámico, lisina, histidina y arginina. Se subrayan en rojo los aminoácidos esenciales. La metionina, así como todos los aminoácidos, tienen proceso de degradación, en el proceso de degradación de la metionina se pierde su grupo metilo más distal (aquel que está unido al azufre). El resultado es denominado homocisteína, ya que es, en cierta forma, muy parecida a la estructura de la cisteína (otro aminoácido). La cisteína es la que forma los enlaces disulfuro, enlace que es muy importante a la hora de conformar grandes proteínas, por lo tanto, necesita una rigurosa revisión ya que hay muchos de estos enlaces que no deberían formarse. La encargada de hacer esta revisión son las chaperonas. Enantiómeros IONIZACIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS Cada alfa aminoácido tiene 2 valores de pKa, uno para el grupo carboxilo y otro para el grupo amino, unidos al carbono alfa. El pKa es la tendencia que tiene una molécula para disolverse en una solución +NH3 − CH2 − COOH ↔ +NH3 − CH2 − COO − + H + Proceso de desprotonación (pH ácido). +NH3 − CH2 − COO − ↔ NH2 − CH2 − COO − + H + Proceso de desprotonación (pH básico). 7 de estos 20 aminoácidos tiene cadenas laterales ionizables. Esto les confiere un tercer valor de pKa. Juan Piedrahita 27 ESTADO DE IONIZACIÓN Cuando un aminoácido se encuentra en pH neutro, tiene una forma zwitterion, en donde tiene carga neutra. Cuando estamos en un ambiente muy protonado (ácido), vamos a encontrar que el aminoácido también lo estará, tanto en su amino como en su carboxilo. Y cuando estamos en un ambiente desprotonado (básico), el aminoácido tenderá a desprotonarse. FORMACIÓN DE UN PÉPTIDO Dos aminoácidos se unen para formar un enlace peptídico (tipo amida) con la pérdida de una molécula de H2O. Los polipéptidos son polímeros lineales formados por aminoácidos unidos por enlaces peptídicos. Los enlaces peptídicos son enlaces tipo amida que se forman cuando el par de electrones sin compartir del átomo de nitrógeno del grupo amino de un aminoácido ataca al carbono carboxilo de otro en una reacción de sustitución de acilo nucleófila. ESTRUCTURA PRIMARIA Cuando un aminoácido empieza a ser parte de una cadena ya no se le denomina aminoácido, se le empieza a denominar residuo de aminoácido (porque un aminoácido tiene sus cargas completas, al hacer el enlace con otros aminoácidos, estas cargas se pierden). ESTRUCTURA SECUNDARIA Las dos estructuras secundarias más comunes son la hélice alfa (por puentes intramoleculares) y la hoja plegada beta (por puentes intermoleculares), cada una es especifica en cuanto a los ángulos y Juan Piedrahita 28 Los demás ángulos rotacionales representan estructuras secundarias “aleatorias”. Las estructuras secundarias son mantenidas por enlaces de hidrógeno. Hélices alfa Los contactos por puente de hidrógeno en las hélices alfa se dan cada 3,6 aminoácidos (matemáticamente). Hojas plegadas beta La conformación beta es extendida y también se logra ver la direccionalidad amino carboxilo. No es tan compacta como la hélice alfa. Tenemos casos especiales en donde estas hojas pueden ser paralelas y antiparalelas. Es importante destacar que aquí los puentes de hidrogeno se dan cada x aminoácidos, no es posible establecer un número exacto, el aminoácido 34 puede hacer puente con el 171, y a su vez el 36 puede hacer puente con el 169. Por lo que no es un requisito saber cada cuanto se dan estos enlaces. Hoja antiparalela Es cuando dos hebras vecinas son antiparalelas, o sea que no fluyen en la misma dirección. Juan Piedrahita 29 Hoja paralela Se da cuando dos hebras vecinas son paralelas, o sea que fluyen en la misma dirección. Los giros beta se dan como mínimo por 4 – 5 residuos de aminoácidos, no por menos porque el giro no alcanza para unirse y general un enlace. Los lazos beta normalmente son más largos que los giros: >5 residuos. La alfa queratina es una proteína fibrosa que forma una hélice alfa helicoidal. Cada cadena es una hélice alfa modificada, hélices dextrógiras de 3,5 por vuelta forman una super hélice levógira. ESTRUCTURA TERCIARIA El plegamiento tridimensional de un polipéptido es su estructura terciaria. Tanto hélices alfa como hojas plegadas beta coexisten en este nivel estructural. En las proteínas globulares las cadenas R´ de AAs no polares se localizan en el interior de la molécula mientras que las AAs polares se localizan en la superficie. La integridad de la estructura terciaria es mantenida por interacciones no covalentes y enlaces disulfuro. Estructuras supersecundarias Son combinaciones de estructuras secundarias observadas en diferentes proteínas. Sus tipos son: Hélice-lazo-hélice, hélice helicoidal, hélices en racimo, bab, b- hairpin, meandro-b, llave griega, barril-b, Sándwich-b Dominios En una proteína coexisten múltiples dominios. Cuando una proteína tiene enlaces covalentes con otra se dice que son una misma proteína, ya que la unión de estas se basa en enlaces covalentes. Juan Piedrahita 30 Los motivos que encontramos en estas estructuras son: ESTRUCTURA CUATERNARIA Ensamblaje de estructuras terciarias. Formación de complejos de dos o más subunidades. Hemoglobina La estructura cuaternaria es mantenía por interacciones no covalentes. La hemoglobina tiene esa composición multimérica ya que necesita cambiar su composición con frecuencia. Desnaturalización de proteínas Hayagentes que pueden desnaturalizar proteínas, cuando esto pasa no se dañan enlaces covalentes (estos últimos se pueden cuando la proteína se degrada). Los agentes que pueden desnaturalizar las proteínas pueden ser como: El calor, pH extremo, detergentes, agitación mecánica, mercaptoetanol (rompe enlaces S-S), 6M guanidina HCl o urea 10M (estos agentes caotrópicos rompen interacciones no covalentes). Reducción de enlaces disulfuro El mercaptoetanol puede entrar a colocarse encima de los sulfidrilos de alguna proteína, esto hace que estos azufres no se vuelvan a unir, ya que están siendo ocupados. Juan Piedrahita 31 RIBONUCLEASA Esta proteína tiene enlaces disulfuro, esta proteína tiene memoria, entonces en caso donde haya aumento de temperatura los enlaces disulfuro se van a romper, pero cuando la temperatura baja, los enlaces volverán a reencontrarse haciendo que la proteína vuelva a su forma activa. RECEPTOR DE INSULINA Es una proteína que tiene 3 dominios (citoplasmático, transmembrana y extracelular). En cada dominio hay un tipo de plegamiento (pueden ser alfa o beta, pero nunca combinadas). Los trasportadores de glucosa son inducibles, ya que la célula no siempre está absorbiendo, así que la acción de la insulina será inducir estos canales, para que se presenten en la membrana celular y producir el transporte de glucosa. En el hígado, por ejemplo, estos canales no son inducibles, así que los canales siempre estarán dispuestos en la membrana. Juan Piedrahita 32 ENZIMAS Son típicas proteínas que sirven como catalizadores para reacciones bioquímicas. Algunos ARNs (ribozimas) y anticuerpos (abzimas) han demostrado capacidad como catalizadores. podemos hablar de seclusión, esto hace referencia a la afinidad de cierta enzima por determinado sustrato. Se caracteriza por: ✓ Catálisis: Sobre la tasa de las reacciones; está comprobado que una reacción puede durar cientos de millones de años, pero gracias a las enzimas, estas ocurren en milisegundos. ✓ Especificidad: Aquello que define la seclusión, hay casos en donde las enzimas tienen que ser específicas, para una sola molécula (sustrato). Es un asunto que la célula maneja según su conveniencia. ✓ Regulación: De las reacciones o las vías, cuando por ejemplo ya se necesita parar la producción de un producto determinado. ✓ Cofactores: Algunas reacciones usan cofactores y otras no. PERFIL DE LAS REACCIONES Las enzimas proveen una ruta diferente para hacer una reacción química (una más rápida). Así que podemos comparar el perfil de las reacciones enzimáticas vs las no enzimáticas. La enzima cuando se une al sustrato forma el complejo enzima sustrato. En este momento procedemos a un estado de transición en donde hay activación energética. Es destacable que la energía de activación es muy reducida comparada a una reacción no enzimática, esto es resultado de la intervención de una enzima específica. CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS Las enzimas se clasifican en 7 clases, estas con base en los tipos de reacción que hace cada una. Juan Piedrahita 33 INCREMENTOS EN LA TASA DE REACCIÓN POR ALGUNAS ENZIMAS Sin las enzimas no existe metabolismo, o por lo menos no existiría en la vida tal como la conocemos. EJEMPLOS DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA Los ejemplos más comunes que tenemos de actividad enzimática serían: Catálisis. En el rompimiento de un enlace peptídico, que ocurre cuando una proteasa actúa sobre agua y dos aminoácidos para romper el enlace peptídico y separarlos. Actividad esterasa. Muchas proteasas manifiestan actividad esterasa, que es básicamente la capacidad de romper enlaces ester. ROMPIMIENTO DE UN ENLACE PEPTÍDICO Puede ser catalizada por diferentes enzimas, en la imagen nos muestran en donde cierta enzima se va a ubicar. La tripsina es un tipo de enzima (endopeptidasa) que no cortan en los extremos de las cadenas, así que tiene especificidad. La tripsina corta donde se encuentra una lisina y una arginina, si estas se encuentran en las puntas de la cadena peptídica no la va a poder cortar (por la especificidad anteriormente mencionada). COFACTORES Las enzimas necesitan cofactores, se pueden reconocer varias como vitaminas de tipo B. En la siguiente reacción ambos compuestos (sustrato y producto) tienen el mismo peso molecular, esta reacción esta catalizada por la triosa fosfato isomerasa. ∆𝐺𝑜 ′ = − 𝑅𝑇 ln 𝑲𝒆𝒒′ = −8.314(298) ln 𝟎. 𝟎𝟒𝟕𝟓 ∆𝐺𝑜 ′ = − 2478 (−3.05) = 7550 𝐽/𝑚𝑜𝑙 = 7.55 𝑘𝐽/𝑚𝑜𝑙 Juan Piedrahita 34 MODELO DE FORMACIÓN DEL COMPLEJO ES a) No hay presencia de enzima. b) La formación de este complejo enzima sustrato (ES) es un evento exergónico y estabiliza el sustrato mucho más de lo que estaba antes (lo aleja de su estado de transición). c) Esta enzima tiene mayor afinidad por el estado de transición, acercando el sustrato al estado de transición. TASA DE REACCIÓN VS [S] Es la velocidad de la reacción en función de la concentración de sustrato con la que inicia la reacción. La asociación de enzima y sustrato forma el ES (k1), este complejo ES forma la enzima y el producto. Juan Piedrahita 35 MODELOS DE UNIÓN DE SUSTRATO Nos lo muestran como una llave y una cerradura, pero es como una superficie en donde una ficha de rompecabezas entra y cabe perfectamente. Cuando se une, por ejemplo, una glucosa o un ATP a una enzima específica, cuando se unen se cierra (como un pacman), esto es por el sitio activo; El ATP se une a la glucosa y luego queda el producto libre (la enzima también). ESTRATEGIAS CATALÍTICAS Las enzimas tienen diferentes estrategias para hacer sus procesos. ✓ Catálisis covalente: El sitio activo contiene un grupo reactivo, usualmente el nucleófilo fuerte que temporalmente es modificado covalentemente durante la catálisis. Por ejemplo, el aminoácido serina de la quimotripsina. ✓ Catálisis ácido – base: Cuando la enzima intercambia hidrógenos con el sustrato. Por ejemplo, el aminoácido histidina de la quimotripsina. ✓ Catálisis con ion metálica: Ocurre de varias maneras, un ion metálico como catalizador electrofílico para estabilizar la carga negativa en un intermediario de la reacción. ✓ Catálisis por aproximación: En reacciones que implican dos sustratos, la tasa se incremente cuando la enzima provee una superficie que permite la orientación correcta de los mismos. CLASES DE PROTEASAS PROTEASAS SERINA La quimotripsina y tripsina pertenecen a este grupo de proteasas (la diferencia es en donde cortan). Estas enzimas son iguales en sus sitios activos, en el sitio activo de estas enzimas podemos encontrar la ácido aspártico, la histidina y la serina. Cuando el ácido aspártico le hala el hidrogeno a la histidina, esta se lo jala a la serina (ver imagen), un grupo OH no es un grupo fácilmente ionizable, aun así, la histidina puede quitarle el hidrogeno del grupo OH de la serina, esto se da porque la histidina transforma su pKa a casi 11 (mucha fuerza) y se lo quita. Juan Piedrahita 36 PATRONES DENSIMÉTRICOS DE LAS ISOENZIMAS DE LA LDH DE USO DIAGNÓSTICO En una persona puede encontrar en su plasma diferentes moléculas provenientes de restos de células que se han roto. Si un paciente llega con un dolor en el pecho y en el brazo izquierdo se puede hacer un examen de lactato deshidrogenasa (LDH) donde nos revelara ciertos marcadores que son adecuados para ser utilizados en las primeras 4 o 5 horas. A este tiempo este marcador se pudo haber normalizado ya que pues, como no se murió la persona, su evento ya tuvo que haberse normalizado. Cuando un paciente tiene muchas rupturas de células cardiacas o hepáticas, se encuentra un alto porcentaje de LDH en el plasma sanguíneo. Para saber en qué órgano fue la ruptura solo basta con mirar el tipo de LDH, ya que cada tipo tieneuna localización abundante en cada tejido. CINÉTICA Para describir la cinética de las enzimas recurrimos a esta ecuación, donde la enzima se encuentra con su sustrato, se forma el complejo ES, y finalmente se disocia un producto y la enzima libre. 𝐸 + 𝑆 → 𝑘1 ← 𝑘 − 1 𝐸𝑆 → 𝑘2 𝐸 + 𝑃 [E]= Concentración enzimática. [S]= Concentración de sustrato. [ES]= Concentración de complejo enzima sustrato. [P]= Concentración de producto. k1= Constante de formación de ES. k-1= Constante de descomposición de ES. k2= Constante de descomposición de ES. GRÁFICA DE MICHAELIS-MENTEN Relación gráfica entre la velocidad de reacción y concentración de sustrato. 𝑉𝑜 = 𝑉𝑚𝑎𝑥 [𝑆] 𝐾𝑚 + [𝑆] La velocidad inicial es la tasa al comienzo de una reacción catalizada por una enzima. CINÉTICA ENZIMÁTICA Complejo enzima sustrato (ES) – Complejo no covalente formado cuando sustratos específicos se juntan en el sitio activo de una enzima. Juan Piedrahita 37 𝑬 + 𝑺 → 𝒌𝟏 ← 𝒌 − 𝟏 𝑬𝑺 → 𝒌𝟐 𝑬 + 𝑷 Cuando [S] >> [E], todas las moléculas de enzima se unen a sustrato (la enzima está saturada con sustrato). Bajo estas condiciones, La tasa de reacción depende de solo la [E], y la reacción es pseudo-first order. La velocidad general de reacción es dada por la tasa de conversión de ES en E + P. 𝒗 = 𝒌𝟐 [𝑬𝑺] = 𝒌𝒄𝒂𝒕[𝑬𝑺] GRÁFICO DE LINEWEAVER - BURKE La ecuación de Michaelis y hacer el inverso en ambos lados de la ecuación, esto para mantener la igualdad, pero con una reorganización sencilla, para tener la ecuación de una recta. La parte real de la gráfica se encuentra a la derecha del eje de las ordenadas = 0 CONSTANTE CATALÍTICA Es una reacción catalizada por enzima, la tasa general de información de producto es: 𝒗 = 𝒌𝟐 [𝑬𝑺] Si todas las moléculas de la enzima están en complejo con el sustrato (exceso de S), la reacción ocurre a su máxima velocidad. 𝑽𝒎𝒂𝒙 = 𝑲𝒄𝒂𝒕 . 𝑬𝒕 EFICIENCIA CATALÍTICA Cuando podemos la quimotripsina a varios sustratos, podemos determinar con cuál de estos actúa más rápido (es más eficiente) Y cuando k2 es grande, el denominador se convierte en k2 y kcat/KM estará limitada por el valor de k1, es decir, la formación del complejo ES. Su formación está a su vez limitada por la tasa de difusión de Sustrato al sitio activo de la enzima. REACCIONES MULTI-SUSTRATO La transformación enzimática en la naturaleza no solo es la conversión de un solo sustrato en un solo producto, en los sistemas biológicos también podemos encontrar reacciones que implican más de un sustrato, transformándolos en varios productos (estas son las más frecuentes). 𝑨 + 𝑩 = 𝑷 + 𝑸 La vía de fermentación lo mantiene todo ser vivo, con la glucolisis ya tenemos una parte del metabolismo energético hecho (falta el ciclo del ácido cítrico y la cadena trasportadora de electrones). Juan Piedrahita 38 NOMENCLATURA • Las flechas verticales indican la dirección de entrada o de salida de la reacción. • La E hace referencia a la enzima. MECANISMO SECUENCIAL Los dos sustratos se tienen que unir al centro activo antes que se libere cualquiera de los dos productos. Los complejos enzima sustrato tienen que estar formados como requisito indispensable para que pueda ocurrir la formación de productos Reacciones secuenciales ordenadas La formación del complejo enzima sustrato debe producirse en un orden determinado para que el complejo sea productivo desde el punto de vista catalítico. Reacciones secuenciales aleatorias La formación del complejo enzima sustrato es independiente del orden de unión de los sustratos. MECANISMO PING PONG Este tipo de mecanismo, tras la unión del primer sustrato se libera uno de los productos, en una reacción parcial en la que se genera una forma modificada de la enzima. Esta forma une al siguiente sustrato, catalizando la formación del segundo producto con regeneración de la forma nativa de la enzima. Juan Piedrahita 39 INTERACCIÓN ALOSTÉRICA Las enzimas trabajan en multímeros también, estas pueden ser porque las subunidades están juntas pero cada una trabaja independiente a las otras. Estas enzimas pueden tener pedazos estáticos, pero a medida que se aumenta la concentración de sustrato, cada subunidad se va activando, hasta que todas quedan activas. INHIBICIÓN DE LA ACTIVIDAD La actividad enzimática se puede controlar con inhibiciones. Unión no covalente del inhibidor: • Competitiva. (I se une solo a E). • Incompetitiva. (I se une solo a ES). • No competitiva. (I se une a E o a ES). Unión covalente del inhibidor – irreversible: • Grupo específica. • Análogos del estado de transición. • Suicidas. INHIBICIÓN COMPETITIVA Los inhibidores competitivos se unen de forma reversible a la enzima libre, y no al complejo ES, para formar un complejo enzima – inhibidor. El sustrato y el inhibidor compiten por el mismo sitio activo de la enzima, tan pronto como esto ocurre, el acceso del sustrato al sitio activo queda bloqueado. Juan Piedrahita 40 INHIBICIÓN NO COMPETITIVA En algunas reacciones catalizadas por enzimas el inhibidor puede unirse tanto a la enzima libre como al complejo enzima-sustrato. La inhibición no competitiva hace referencia a cuando el inhibidor se une a un lugar diferente del sitio activo. Estos inhibidores tienen escasa o casi nula semejanza estructural con los sustratos, pero pueden influir en la unión del sustrato si su sitio de unión está en estrecha cercanía con el sitio activo. INHIBICIÓN INCOMPETITIVA Es un tipo infrecuente de inhibición no competitiva, el inhibidor solo se une al complejo ES, y no a la enzima libre. En consecuencia, el inhibidor es ineficaz a bajas concentraciones de sustrato, porque hay muy poco complejo ES presente. INHIBICIÓN IRREVERSIBLE En la inhibición reversible, el inhibidor puede disociarse de la enzima debido a que se una mediante enlaces no covalentes. Los inhibidores irreversibles se unen usualmente de forma covalente a la enzima, con frecuencia a la cadena lateral de un residuo de aminoácido del sitio activo. ABZIMAS Son anticuerpos con actividad enzimática. La inserción de un ion metálico en una porfirina (enzima ferroquelatasa) procede a través de un estado de transición en el que su estructura es doblada. La N-Metilmesoporfirina es análogo de dicho estado que puede usarse para generar Abs capaces de catalizar la inserción de un ion metálico a la porfirina. Juan Piedrahita 41 METABOLISMO En su definición puede tener muchos aspectos, básicamente, es un conjunto de todos los procesos de Inter conversión de compuestos químicos en el cuerpo, sus interrelaciones y el flujo de metabolitos por las vías. Se puede dividir en: Metabolismo anabólico, catabólico y anfibólico. NECESIDADES ENERGÉTICAS Un humano adulto de 70kg necesita aproximadamente 8 – 12 MJ / día. ✓ Carbohidratos: 40 a 60 % ✓ Lípidos: 30 a 40 % ✓ Proteínas: 15 % CATABOLISMO Usa como nutrientes energéticos los carbohidratos, las grasas y las proteínas y los productos finales son energía en: CO2, H2O, NH3 Como combustible para hacer energía podemos coger a los carbohidratos, proteínas y lípidos. Las principales son los carbohidratos y grasas. La Coenzima A es una molécula extremadamente grande a la cual será acoplada el grupo acetilo producto de la glucolisis, este grupo transportador se encarga de introducir este producto al grupo de Krebs. METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS La acción de la insulina en las membranas de las células desencadenará una vía en la cual las proteínas transportadoras de glucosa se disponen en las membranas, listas para permitirle la entrada a la glucosa. La fermentación se ha mantenido en nuestra evolución ya que es una vía compensatoria en caso de quela glucólisis por alguna razón se detenga. Juan Piedrahita 42 Análisis El músculo recibe glucosa del hígado, con el que puede hacer su propio glucógeno. A una persona le dan calambres porque el músculo está expuesto a un bajo nivel de oxígeno, entonces la solución sería respirar profundo, para que la entrada de oxígeno produzca ATP y se pueda relajar el músculo. GLUCÓLISIS La glucólisis consta de dos momentos (Fase preparatoria, fase de rendimiento energético). En este tipo de reacciones en cadena los productos de una reacción son los sustratos de otro. Es importante destacar que estas reacciones constan de direccionalidad que está establecida por una misma enzima, a grosso modo una reacción puede tener dos direccionalidades, la directa (1 dirección) y la reversible (2 direcciones) esta última obligatoriamente para cumplirse debe ser catalizada por la misma enzima. BALANCE ENERGÉTICO ACTIVIDADES ENZIMÁTICAS IMPLICADAS Estas reacciones se catalizan con la intervención de enzimas, entre las que destacan: ✓ Las quinasas: Mueven el grupo fosfato de una molécula a otra. ✓ Las isomerasas: Convierten un sustrato en un isómero de este. Isomerizan moléculas. • Catalizan reacciones reversibles. ✓ Las oxidorreductasas o deshidrogenasas: Catalizan reacciones de Oxidorreducción (Redox). ✓ Aldolasas: Cataliza una condensación aldólica. ✓ Mutasa: Transferencia de grupos. Usualmente mueve fosfatos a diferentes posiciones en azúcares. ✓ Enolasa: Convierte grupos C = C en alcohol. No hay cambio en el estado de oxidación. ✓ Sintasa: Combina dos precursores en un nuevo compuesto. ✓ ATPasa: Hidroliza ATP a ADP y Pi. Esta reacción ocurre en reversa para generar ATP usando la E libre de un gradiente de protones. TRANSPORTADORES DE MONOSACÁRIDOS Tenemos diversos transportadores que me permiten el transporte de monosacáridos de un lugar a otro, ya sean por transporte activo o difusión facilitada. Juan Piedrahita 43 PROCESAMIENTO Y ABSORCIÓN DE AZUCARES EN LA DIETA La amilopectina es aquel polisacárido que tiene enlaces 1-6 y 1-4, la amilosa es aquel polisacárido que solo tiene enlaces alfa 1-4; Estos dos enlaces son hidrolizadas por amilasas, las cuales van a separar a los polisacáridos en di o tri sacárido. FASE PREPARATORIA En esta fase (1) se hace la fosforilación y conversión de glucosa en gliceraldehído-3-p, precursor de la fase de rendimiento energético (2). Se pierden (2 moléculas de ATP); Ganancia neta -2 ATP. La fructosa-1,6-difosfato tendrá 2 reacciones para dar lugar a 2 productos diferentes (dihidroxiacetona y gliceraldehído – 3-P), dos productos que pueden ser convertidos el uno en el otro por medio de la triosa-p-isomerasa. FASE DE RENDIMIENTO ENERGÉTICO A partir de esta fase TODOS los productos deben ser multiplicados por dos (2). Es la conversión de gliceraldehído a piruvato. Se ganan (2 moléculas de ATP) x2; Ganancia neta +2 ATP. Juan Piedrahita 44 REGULACIÓN DE LA PIRUVATO QUINASA Esta enzima es inhibida alostéricamente por el ATP, la Acetil-CoA y por ácidos grasos de cadena larga y la acumulación de Ala; mientras que la acumulación de Fructosa 1,6-bisfosfato la activa. La isoenzima hepática (forma L) es regulada también por el glucagón el cual, a través de su efector la PKA (su efector interno), induce su fosforilación inactivándola. Esto evita el consumo hepático de Glucosa cuando su concentración plasmática es baja. REACCIONES DE LA GLUCÓLISIS Glucólisis en eritrocitos Nuestro plasma es naturalmente oxidante, por lo que un eritrocito puede ser oxidado por el plasma. RUTAS DE INCORPORACIÓN DE OTROS MONOSACÁRIDOS A LA GLUCÓLISIS Se pueden agregar otros monosacáridos a la glucólisis, pero no van a tener el mismo control que tiene la glucosa, es debido a eso que la gran ingesta de estos puede generar producción de grasas. Juan Piedrahita 45 PROPIEDADES CINÉTICAS Y REGULACIÓN DE LA HEXOQUINASA 1 Nosotros en todo el cuerpo tenemos hexoquinasa 1 (menos en el hígado), en el hígado es la hexoquinasa 4, que se diferencia en la afinidad relativa por el sustrato. Dicho esto, la hexoquinasa 1 puede coger la más mínima cantidad de glucosa y empezar la glucolisis, en cambio la hexoquinasa 4 necesita muchas más concentración de glucosa para activarse por la naturalidad ahorradora del hígado. Cuando no hay necesidad de glucólisis secuestramos a la hexoquinasa 4 en el núcleo. La proteína inhibidora de la Hexoquinasa IV es una proteína de unión y secuestro nuclear para la Hex IV. Ella es capaz de arrastrarla al núcleo cuando la [Fruct 6-P] es alta, y la libera al citosol cuando la [Glucosa] se incrementa. Juan Piedrahita 46 GLUCONEOGÉNESIS Es la generación de glucosa. Solo el hígado y los riñones hacen gluconeogénesis a partir del piruvato y de compuestos de 3 o 4 carbonos. Siete pasos son catalizados por las mismas enzimas de la glucólisis (son reacciones reversibles), tres pasos de estos son irreversibles por lo que tienen que ser catalizados por enzimas propias de la gluconeogénesis. La formación de una glucosa requiere 4 ATPs, 2 GTPs, 2 NADHs. La glucolisis y la gluconeogénesis son reguladas recíprocamente para evitar un círculo de reacciones improductivo. SÍNTESIS DE CARBOHIDRATOS A PARTIR DE PRECURSORES SIMPLES Síntesis de carbohidratos a partir de precursores simples La vía de: PEP a Glucosa 6-P es común para la conversión biosintética de muchos diferentes precursores de carbohidratos en plantas y mamíferos. Solo las plantas y las bacterias fotosintetizadores son capaces de convertir CO2 en carbohidratos. La glucólisis y la gluconeogénesis tienen vías en sentido contrario muy parecidas. Para devolver la acción de la piruvato quinasa (hacer fosfoenolpiruvato en piruvato) se necesita el oxaloacetato. CICLO DE CORI Cooperación metabólica entre el músculo esquelético y el hígado En músculos extremadamente activos, el glucógeno es la fuente energética, generando lactato por vía glucolítica. Durante la recuperación, algo del lactato es transportado al hígado y convertido en glucosa vía gluconeogénesis. Esta glucosa es liberada a la sangre y regresada a los músculos para restituir su almacén de glucógeno. La vía completa (glucosa → lactato → glucosa) Constituye el ciclo de Cori. Juan Piedrahita 47 FBPASA-1-FOSFOFRUCTOQUINASA La fructosa 1,6-bifosfatasa es inhibida por el AMP, pero es activada por citrato y 3-fosfoglicerato. Así, en un estado de alta energía, un incremento del citrato y una reducción de AMP se combinan para activar la fructosa 1,6-bifosfatasa y para inhibir la fosfofructoquinasa. Esto promueve la hidrólisis de fructosa 1,6-bifosfato a fructosa 6-fosfato. GLUCOSA 6 – FOSFATASA Es una enzima única en riñones y en hígado, es la enzima encargada de liberar la glucosa del fosfato, por lo que estos serán los únicos órganos capaces de generar glucosa libre al torrente sanguíneo, ya que transportadores que saquen glucosa-6- fosfato no existen en el ser humano. Una ruta metabólica alternativa para la glucosa 6-fosfato es su almacenamiento como glucógeno en el hígado y los músculos. VÍAS DE LA PENTOSA FOSFATO • Tiene dos fases básicas: Oxidativa y NO oxidativa • La fase oxidativa conlleva la oxidación y descarboxilación en el C-1 de la glucosa 6-P, reduciendo NADP a NADPH y produciendo pentosas fosfato. • El NADPH provee el poder reductor para reacciones biosintéticas, y la ribosa 5-P es precursor de la síntesis de ácidos nucleicos. • Su tasa es más alta en tejidos de crecimiento rápido o en síntesis activa de ácidos nucleicos, colesterol u hormonas esteroidales. Juan Piedrahita 48 El NADPH formado en la fase oxidativa es usado para reducir el glutatión, GSSG y para sustentar las biosíntesis reductivas.El otro producto, la Ribosa 5-fosfato, es precursor de nucleótidos, coenzimas y ácidos nucleicos. En células que no están usando ribosa 5-fosfato para biosíntesis, la fase no oxidativa recicla 6 moléculas de pentosa a 5 de la hexosa Glucosa 6-P, permitiendo que continúe la producción de NADPH y convirtiendo la Glucosa-6-fosfato (en 6 ciclos) en CO2. SÍNDROME DE WERNICKE - KORSAKOFF Hay personas que tienen una modificación genética de la transcetolasa, lo que hace que esta tenga 10 veces menos afinidad por su cofactor. Las deficiencias de la vitamina tiamina disminuye la disponibilidad de TPP. Frecuente detección entre alcohólicos pues el alcohol inhibe absorción de algunas vitaminas. VÍA DEL ÁCIDO URÓNICO La D-glucosa tendrá varios procesos de transformación en esta vía metabólica; Ocurre en el hígado. METABOLISMO DE LA GALACTOSA La asimilación de la galactosa depende de tres enzimas diferentes: Galactoquinasa, Glactosa-1-fosfato uridil transferasa y la uridina difosfogalactosa-4-epimerasa. Cuando uno toma leche puede aumentar la galactosa. La galactoquinasa es hermana de la hexoquinasa, pero no sitúa el grupo fosfato en el sexto carbono, esta lo sitúa en el primero. Juan Piedrahita 49 Tenemos 3 tipos de galactosemias, enfermedades causadas por la ausencia genética de 3 de las enzimas en el metabolismo de la galactosa. ✓ Galactosemia tipo 1: Hay deficiencia de Galactosa-1-fosfato uridil transferasa, por lo tanto, la galactosa-1-fosfato. ✓ Galactosemia tipo 2: Hay una deficiencia de galactoquinasa, por lo tanto, se acumulará galactosa. ✓ Galactosemia tipo 3: Hay deficiencia de la epimerasa, por lo que se acumulará Glucosa UDP galactosa. Cuando hay deficiencia se produce acumulación de los precursores de las enzimas afectadas, pero también se acumularán todos los metabolitos anteriores que iban en la vía. METABOLISMO DE GLUCÓGENO El responsable de la textura del hígado son los gránulos de glucógeno, ya que son demasiados. En el glucógeno solo hay 2 extremos reductores, así que todas las ramas convergerán en 2 únicas que se conectarán a la proteína central (glucogenina). El carbono 4 de la glucosa es el extremo no reductor, y como la polimerización de la glucosa se da en la parte izquierda de la molécula de glucosa entonces cada vez habrá más extremos no reductores. Todos estos extremos se irán hacia la periferia, y los extremos reductores quedarán proyectándose hacia la glucogenina. CARACTERÍSTICAS: Un solo gránulo de glucógeno puede tener hasta 55000 moléculas de glucosa, 2000 extremos no reductores. Los gránulos contienen las enzimas necesarias para la síntesis y degradación, así como los factores reguladores de las mismas. Provee una fuente rápida de glucosa para el metabolismo aerobio y anaerobio. GLUCOGÉNESIS La glucosa tendrá una transformación específica en la que será convertida en la UDP-glucosa (Uridina difosfato [UDP]-glucosa) es la forma activada de la glucosa para la síntesis de glucógeno y también para la síntesis de otros hidratos de carbono complejos. La glucógeno sintasa es la enzima encargada de elongar las cadenas de glucógeno. La enzima transfiere el residuo de glucosa del azúcar nucleótido UDP-glucosa a un extremo no reductor de una rama del polímero generando un nuevo enlace glucosídico α1-4. Juan Piedrahita 50 ANABOLISMO [GLUCOGÉNESIS] Formación de un azúcar nucleótido Entre un nucleósido trifosfato (NTP) y el azúcar fosfato ocurre una reacción de condensación. El oxígeno con carga negativa sobre el azúcar provee un nucleófilo, que ataca el fosfato α del NTP desplazando pirofosfato (PPi). La reacción es empujada por la hidrólisis adicional de PPi por parte de la piro fosfatasa inorgánica. Síntesis de la ramas del glucógeno La enzima ramificadora de glucógeno (llamada tambien la amilo (α1-4) a (α1-6) transglicosilasa or glucosil-(α4-6)- transferasa) forma un nuevo punto de ramificación durante la síntesis del glucógeno. CATABOLISMO [GLUCOGENÓLISIS] Es la degradación de glucógeno, para esto deben haber enzimas que hagan lo contrario a la glucogénesis. ✓ Glucógeno sintaza es revertida por: Glucógeno Fosforilasa. Requiere un fosfato y la eliminacion es por un mecanismo de pirólisis ✓ Enzima rafimicadora es revertida por: Enzima desramificadora. Rompimiento del Glucógeno cerca de un punto de ramificación (α1-6) Luego de la remoción secuencial de residuos de glucosa terminales por la glucógeno fosforilasa los residuos de glucosa cercanos a un punto de ramificación son removidos en un proceso de dos pasos que requiere la enzima bifuncional llamada “enzima desramificadora”. Primero, la actividad transferasa de la enzima traslada un bloque de tres residuos de glucosa de la rama a un extremo no reductor cercano, al cual lo une mediante enlace (α1-4). El residuo de glucosa restante en el puno de ramificación, unido por enlace (α1-6), es entonces liberado como por la actividad (α1-6) glucosidasa de la misma enzima. Juan Piedrahita 51 VARIACIONES DIARIAS DE LAS RESERVAS DE GLUCÓGENO Cambios en los depósitos de glucógeno del hígado durante el transcurso de un día. El metabolismo del glucógeno en el hígado regula la concentración de glucosa sanguínea a corto plazo, y la gluconeogénesis es importante para la regulación a largo plazo después de más de 12-24 horas de ayuno. Cuando una persona está en ayunos, los niveles de insulina están bajos y los de glucagón altos, lo que me producirá glucogenólisis ya sea por vía hepática o por la grasa. REACCIÓN CATALIZADA POR LA FOSFOGLUCOMUTASA La reacción comienza con la enzima fosforilada en un residuo de Serina. En el paso 1, la enzima dona su grupo fosforilo (verde) a la glucosa 1- fosfato produciendo glucosa 1,6-bisphosphate. En el paso 2, el grupo fosforilo en C-1 de la glucosa 1,6-bifosfato (rojo) es transferido de regreso a la enzima, restaurándola como fosfoenzima y liberando glucosa 6-fosfato. REGULACIÓN Regulación de la glucógeno sintasa y fosforilasa mediante modificación covalente y efectores alostéricos. Obsérvese que la fosforilación simultánea de las dos enzimas lleva a la degradación del glucógeno, y su desfosforilación lleva a su síntesis. Flechas verdes indican activación alostérica. Flechas rojas indicas inhibición alostérica. CADENA DE REACCIONES Y ENFERMEDADES POR ALMACENAMIENTO DE GLUCÓGENO Juan Piedrahita 52 RESPIRACIÓN CELULAR Toda la respiración se divide en 2 fases, la fase de donación de electrones y la fase de aceptación de electrones. ✓ Primera: Moléculas combustibles son oxidadas para producir fragmentos de 2 carbonos en la forma de Acetil-CoA. ✓ Segunda: Entrada de grupos acetilo al ciclo del ácido cítrico (oxidación hasta CO2 y producción de NADH y FADH2. ✓ Tercera: Las coenzimas reducidas son oxidadas, generando protones y electrones. ACETIL COA COMPLEJO PIRUVATO DESHIDROGENASA La conversión de piruvato a acetil Coa está dada por la acción del complejo piruvato deshidrogenasa. Este complejo está formado por demasiadas subunidades que me darán 3 enzimas: E1, E2 y E3. ✓ E1: Piruvato deshidrogenasa ✓ E2: Dihidrolipoil transacetilasa ✓ E3: Dihidrolipoil deshidrogenasa Las E2 humanas están asociadas a 2 moléculas de lipoato. Juan Piedrahita 53 REACCIONES CATALIZADAS BERIBERI • Las manifestaciones tempranas de la carencia de tiamina están caracterizadas por anorexia, calambres musculares, parestesias e irritabilidad. • Las manifestaciones crónicas en cuanto a la cardiopatía del beriberi, son vasodilatación periférica notable, que origina insuficiencia cardiaca clásica de gasto alto con disnea, taquicardia, cardiomegalia y edema pulmonar y periférico. • La afección del sistema nervioso puede incluir tanto al periférico como al central.
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